Name: Kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Keşfedin plasenta hedefli ilaç dağıtımının etkinliğini ve güvenliğini in vivo görüntüleme, yüksek frekanslı ultrason ve HPLC kullanarak. Bu yöntem, gebelik komplikasyonlarının tedavisinde nanotıp araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser hibe Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81771617) ve doğal Bilim Vakfı, Guangdong için X.F. layık il (2016A030313178) tarafından desteklenen; bir hibe Shenzhen temel araştırma X.F için ödül fonu (JCYJ20170413165233512); Eunice Kennedy Shriver Ulusal Enstitüsü Çocuk Sağlığı ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Ödülü numarası R01HD088549 altında insan gelişimi (içeriği yalnızca yazarlar sorumludur ve mutlaka resmi temsil etmiyor Ulusal Sağlık Enstitüleri kez) için N.N.

Hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Shenzhen ileri teknoloji enstitüleri, Çin Bilimler Akademisi tarafından onaylanan tüm fare deneyleri kesinlikle takip protokolleri (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232).
1. plasental kondroitin sülfat A hedefli Lipid-polimer nano tanecikleri sentezi
<ol><li>MTX ve ICG yüklü lipid-polimer nano tanecikleri sentez (MNPs ve INPS sırasıyla) ve nano tanecikleri plCSA BP Birleşik (plCSA-MNPs ve plCSA-INPS) açıklandığı gibi detay başka bir yerde18.</li>
</ol>2. floresans in vivo görüntüleme
<ol><li>
Hamile fareler hazırlanması
	<ol>
<li>Büyük bir kafes içinde aynı yük verimli bir erkek ile kadın CD-1 fareler (8-12 hafta) yerleştirin (erkek: kadın = 1:2) öğleden sonra ve onay vajinal takılan şu sabah. Vajinal bir fiş görülmektedir, fare embriyonik gün 0,5 (E0.5) tanımlayın.</li>
		<li>Ev hamile yalnız fare ile karanlık bir 14 h ışık/10 h patojen ücretsiz hayvan bir odada döngüsü ve E14.5 kadar yiyecek ve su ücretsiz erişim sağlar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Nano tanecikleri İntravenöz enjeksiyon
	<ol>
<li>Önce yordamı, nano tanecikleri 0,22 mikron şırınga filtreden filtrasyon tarafından sterilize. Hamile fare E11.5 miktar ve birim nanopartikül enjeksiyon belirlemek için tartmak. Not: Nanopartikül enjeksiyon birim daha az % 1'den (birim/ağırlık) hamile fare vücut ağırlığının olması gerekir. Örneğin, nanopartikül enjeksiyon hacmi az 0.25 mL 25 g Mouse olmalıdır.</li>
		<li>Kuyruk ven genişletmek için kuyruk için 5-10 dk bir ısıtma yastığı ile sıcak.</li>
		<li>Enjeksiyon önce 28 g insülin enjektör INPS veya plCSA-INPS Aspire edin.</li>
		<li>Hamile fare fare kuyruğu ven erişimi kısıtlayan bir holding aygıt aktarın. Kuyruk bir alkol bez ile temizleyin. Sonra şırıngayı kuyruk damar içine ekleyin. Yavaş yavaş INPS veya plCSA-INPS (5 mg/kg ICG eşdeğeri) enjekte bile basınçla üzerinde 5-10 s. Not: Bu sonucu iğne damar içinde olduğunu gösterir çünkü bir blister kuyruk üzerinde görünüyorsa enjekte durdurmak. Şırınga hastalık iletim en aza indirmek için fare ve çapraz bulaşma arasında paylaştırılmamalıdır.</li>
		<li>Enjeksiyon zamanını kaydetmek. Bu arada, normalde 30-60 s alır enjeksiyon siteye kadar kanama durur, hafif basınç uygulayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vivo içinde görüntüleme
	<ol>
<li>30 dakika sonra enjeksiyon, görüntü görüntüleme sistemi içinde vivo floresans kullanarak hamile fareler.</li>
		<li>1.0 L/dak ve isoflurane anestezi biriminin ilişkili bir odasında % 2-4, bir oksijen akış hızı ile hamile fareler anestezi ve yavaş tarafından tam anestezi ve düzenli nefes doğrulayın. Ardından, görüntüleme odasına taşıyın. Hayvanlar sırtüstü pozisyonda tutmak görüntüleme odasına imzalat hamile fareler yer.</li>
		<li>Burun konisi % 1-2 isoflurane inhalasyon anestezi korumak için 1.0 L/dak bir oksijen akış hızı ile izin vermek için burnun ve ağzın üzerine getirin.</li>
		<li>ICG floresans sinyalleri görüntüye 2D-floresan ve fotografik parametreleri seçin. Otomatik poz ve uyarma/emisyon dalga boylarında ayarlamak 710/820 nm.</li>
		<li>Görüntüleme yordamının sonunda, anestezi durdurmak için isoflurane akını ve dikkatli bir şekilde hamile fareler için onların kafes dönmek.</li>
		<li>48 h nanopartikül enjeksiyon sonra isofluorane ile hamile fareler anestezi ve baraj tarafından servikal çıkığı kurban. Fetus ve Graefe forseps, Graefe doku forseps, kullanma ve makas dissekan plasenta toplamak.</li>
		<li>Plasenta ve fetusa görüntüleme odası ve 2.3.4. adımda açıklanan yöntemi kullanarak görüntü içine yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. HFUS değerlendirme embriyonik gelişim
<ol><li>
Hayvan modelleri
	<ol>
<li>Elde etmek ve hamile fareler 2.1. adımda açıklandığı şekilde hazırlayın.</li>
		<li>Görüntü hamile farelere E 6,5 (protokol 3.2 ve 3.3.3) adlı HFUS kullanın. İlk olarak, gün E6.5 embriyo görselleştirme tarafından gebelik onaylayın ve sonra rastgele hamile fareler üç gruba ayırmak: MNP grubu, plCSA-MNP grubu ve fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) grubu.</li>
		<li>PBS, MNPs veya plCSA-MNPs (1 mg/kg MTX eşdeğer) 2.2 adımda anlatıldığı gibi E6.5 başlayan her geçen gün hamile fareler kuyruk damar enjekte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Görüntüleme için hazırlık
	<ol>
<li>24 h nano tanecikleri, enjeksiyon sonra görüntü görüntüleme sistemi HFUS kullanarak hamile fareler.</li>
		<li>Hamile fareler 2.3.2. adımda açıklandığı gibi anestezi. Görüntüleme platformu entegre sıcaklık denetimleri açın ve platformu ile 37-42 ° c onceden Hamile fareler bant kullanarak platformda sırtüstü pozisyonda güvenli.</li>
		<li>Yer burun konisi burun üzerinde anestezi birimine bağlı. % 2 isoflurane oksijen akış oranı 1.0 L/dk sabit anestezi korumak için geçerlidir.</li>
		<li>Kimyasal saç depilatory bir krem kullanarak karından kaldırın. Kalan kremayı iyice suya batırılmış gazlı bezle silin ve sonra karın jel kaplin akustik ile ceket.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Yordam görüntüleme
	<ol>
<li>40 MHz transducer mekanik kol yerleştirin.</li>
		<li>Fetus ve plasenta boyuna görüntüleri ile ilgi odak bölgede bulunan bölge edinmek için dönüştürücü pozisyonunu ayarlayýn.</li>
		<li>
B-mod görüntüleme ve çözümleme Not: Film 1bakın.<ol>
<li>B-modu düğmesini tıklatın ve fetus ve plasenta görünüme gelene dönüştürücü karın üzerinde daha düşük. Tarama/donma Başlat/Durdur, Cine depolamak basın cine döngü depolamak ve basın kare görüntüleri depolamak için çerçeve depolamak için görüntüleme için tuşuna basın.</li>
			<li>Gebelik kesesi uzunluğu (GS), fetal taç kıç uzunluğu (CRL), biparietal çapı (BPD), karın çevresi (AC), plasenta çapı (PD) ve plasental kalınlığı (PT) çözümlemek için ölçü birimi düğmesini tıklatın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
PW-Doppler görüntüleme ve çözümleme Not: Film 1bakın.<ol>
<li>İstimal ayni projeksiyon inceden inceye gözden geçirmek, PW düğmesini tıklatın, örnekleme birimi kutusu umbilikal arter ortasına yerleştirin ve görüntüleme başlatmak için Tarama/donma tuşuna basın. Umbilikal arter görüntüleri toplamak için Cine depolamak tıklatın.</li>
			<li>Umbilikal arter en yüksek hız (UA) hesaplamak için ölçü birimi düğmesini tıklatın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Renkli Doppler modunu görüntüleme ve çözümleme
		<ol>
<li>İstimal ayni projeksiyon inceden inceye gözden geçirmek, renk düğmesini tıklatın ve fetal kalp görüntüleri elde etmek için dönüştürücü pozisyonunu ayarlayýn. Görüntüleme ve görüntüleri toplamak için Cine Mağaza başlatmak için tarama/donma tuşuna basın.</li>
			<li>Fetal kalp hızı (HR) hesaplamak için ölçü birimi düğmesini tıklatın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. HPLC analiz
<ol><li>
Doku hazırlık
	<ol>
<li>Hamile fareler geç gebelik MNPs veya plCSA-MNPs (1 mg/kg MTX eşdeğeri) tek bir doz enjekte (Örn., E14.5) 3.1.3 adımda anlatıldığı gibi.</li>
		<li>24 saat sonra farelerin 240 μg/vücut ağırlığı (g) avertin mayi bir iğne ile anestezi. Fareler tam anestezi doğrulamak için bir ayak çimdik yanıt sağlamak.</li>
		<li>Göğüs bölgesinde % 75 etanol ile sprey. (Sağ kulakçık kesme ve sol ventrikül sıvı) kardiyak perfüzyon gerçekleştirmek daha önce ayrıntılı19,20 ile 50 mL buz gibi % 0,9 serum ilişkisiz nano tanecikleri kaldırmak 10 dakika içinde açıklandığı gibi.</li>
		<li>Baraj ötenazi. Fetus ve plasenta Graefe pens, makas ve Graefe doku forseps, anatomi kullanarak toplamak için sezaryen gerçekleştirmek ve doku analizi önce-80 ° C'de depolayın.</li>
		<li>Homojenizasyon çözüm (% 10 perklorik asit) hazırlamak ve buz üzerinde tutun. Yaklaşık 200 mg doku toplamak ve her örnek için 500 μL homojenizasyon çözüm ekleyin. Bir homogenizer tam hızda 30 s ve tekrar kullanarak örnekleri homojenize bu yordamı iki kez.</li>
		<li>14.000 × g 4 ° C'de 20 dk için de örnekler santrifüj kapasitesi Süpernatant (yaklaşık 300 μL) 0,45 mikron şırınga filtre ile filtre ve elde edilen sıvı bir HPLC şişe aktarın. Örnek şişeleri enjeksiyon için Otomatik Örnekleyici tepsisini yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Standartların hazırlanması
	<ol>
<li>Ertesi gün eriyik için mobil faz hazırlamak: 40 mM potasyum fosfat dibasic (pH 4.5) ve Asetonitril (88:12, v/v). Çözüm 0,45 mikron gözenek boyutu şırınga filtre ile filtre ve elde edilen sıvı temiz HPLC rezervuar biberondan aktarın. Not: pH 0,1 M fosforik asit ile ayarlayın. Ultrasonik titreşim 15dk için kullanmak için mobil faz her zaman önceden degas için kullanın.</li>
		<li>MTX 10 mg içine bir 1,5 mL santrifüj tüpü tartın. 1 mL 1 M sodyum hidroksit ekleyin.</li>
		<li>Girdap MTX tamamen eriyene kadar yüksek hızda. Not: Bu birincil stok ve -20 ° C'de birkaç ay saklanabilir.</li>
		<li>İkincil MTX hisse senedi (500 μg/mL) oluşturmak için mobil faz 950 μL birincil stokunun 50 μL oranında seyreltin. Not: buzda kullanmak kadar saklamak ve taze günlük hazırlamak. Örnek enjeksiyon sonra farklı çözümler karıştırma kaynaklanan doruklarına önlemek için standartların hazırlanması için mobil faz kullanmak önemlidir.</li>
		<li>Başka dilutions standartları (Tablo 1) oluşturmak için yapmak. Standartları buza depolamak ve taze günlük hazırlamak. Standartları serisi deneysel örnekleri ile çalışır.</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Numarası</td>
			<td>Son konsantrasyonu (μg/mL)</td>
			<td>500 μg/mL standart, μL</td>
			<td>Telefon phase(μL)</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>0,5</td>
			<td>1</td>
			<td>999</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>998</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>2.5</td>
			<td>5</td>
			<td>995</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>10</td>
			<td>20</td>
			<td>980</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>25</td>
			<td>50</td>
			<td>950</td>
		</tr>
<tr>
<td>6</td>
			<td>50</td>
			<td>100</td>
			<td>900</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>100</td>
			<td>200</td>
			<td>800</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1. MTX için standart eğri hazırlayın. MTX standart çözüm son konsantrasyonu 0.5-100 olduğunu μg/mL.
<ol start="3"><li>
HPLC araçları ve çalışma parametreleri Not: Solvent pompa ile bir UV spektrofotometrik dedektörü donatılmış bir HPLC sistemi örnekleri analiz edildi (313 nm) ve bir C18 sütun (250 × 4.6 mm, 5 mikron partikül büyüklüğü).<ol>
<li>Hava sistemden kaldırmak için HPLC degasser açın. Sütun ile temel gürültüyü azaltmak 30 dk için mobil faz sıcaklığına akışını açın.</li>
		<li>Sütun sıcaklık 25 ° C'ye ayarlayın, 20 μL örnek birimleri 1 mL/dk akış hızında enjekte ve Yöntem çalıştırma Analizi başlatmak için tıklatın.</li>
		<li>El ile çalışan tamamlandığında, mobil faz HPLC sınıf Asetonitril için değiştirin. Sistemi korumak yaklaşık 15 dakika çalıştırın. Not: önerilen süre takip bu adımı gerçekleştirmek için başarısızlık için sütun zarar görmesine neden olabilir.</li>
		<li>Kantitatif analiz için faiz HPLC sistemi yazılımı kullanarak standart MTX doruklarına altında alanlarda hesaplayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Rodger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Association+of+Factor+V+Leiden+and+Prothrombin+Gene+Mutation+and+Placenta-Mediated+Pregnancy+Complications%3A+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis+of+Prospective+Cohort+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies.</a> PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).</li>
<li>Rodger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+thrombophilia+and+pregnancy+complications+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+%26+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Inherited thrombophilia and pregnancy complications revisited.</a> Obstetrics & Gynecology. 112 (2 Pt 1), 320-324 (2008).</li>
<li>Brenner, B., Aharon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombophilia+and+adverse+pregnancy+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Thrombophilia and adverse pregnancy outcome.</a> Clinics in Perinatology. 34 (4), 527-541 (2007).</li>
<li>Fisk, N. M., McKee, M., Atun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+and+absolute+addressability+of+global+disease+burden+in+maternal+and+perinatal+health+by+investment+in+R%26D%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Medicine+%26+International+Health%22%5BJournal%5D)">Relative and absolute addressability of global disease burden in maternal and perinatal health by investment in R&D.</a> Tropical Medicine & International Health. 16 (6), 662-668 (2011).</li>
<li>Fisk, N. M., Atun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Market+failure+and+the+poverty+of+new+drugs+in+maternal+health%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Market failure and the poverty of new drugs in maternal health.</a> PLOS Medicine. 5 (1), e22(2008).</li>
<li>Kaitu'u-Lino, T. uJ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticle+delivery+of+doxorubicin+into+placental+tissues+to+treat+ectopic+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticle delivery of doxorubicin into placental tissues to treat ectopic pregnancies.</a> Endocrinology. 154 (2), 911-919 (2013).</li>
<li>King, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-homing+peptides+as+tools+for+targeted+delivery+of+payloads+to+the+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Tumor-homing peptides as tools for targeted delivery of payloads to the placenta.</a> Science Advances. 2 (5), e1600349(2016).</li>
<li>Beards, F., Jones, L. E., Charnock, J., Forbes, K., Harris, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+Homing+Peptide-microRNA+Inhibitor+Conjugates+for+Targeted+Enhancement+of+Intrinsic+Placental+Growth+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placental Homing Peptide-microRNA Inhibitor Conjugates for Targeted Enhancement of Intrinsic Placental Growth Signaling.</a> Theranostics. 7 (11), 2940-2955 (2017).</li>
<li>Cureton, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Targeting+of+a+Novel+Vasodilator+to+the+Uterine+Vasculature+to+Treat+Impaired+Uteroplacental+Perfusion+in+Pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Selective Targeting of a Novel Vasodilator to the Uterine Vasculature to Treat Impaired Uteroplacental Perfusion in Pregnancy.</a> Theranostics. 7 (15), 3715-3731 (2017).</li>
<li>Paul, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+the+human+and+mouse+uterus+using+immunoliposomes+targeted+to+the+oxytocin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to the human and mouse uterus using immunoliposomes targeted to the oxytocin receptor.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (3), e281-e283 (2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 8 (10), 2765-2781 (2018).</li>
<li>Fan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+monitoring+of+placenta-specific+transgene+expression+by+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Noninvasive monitoring of placenta-specific transgene expression by bioluminescence imaging.</a> PloS One. 6 (1), e16348(2011).</li>
<li>Murata, M., Tahara, K., Takeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+in+vivo+imaging+of+surface-modified+liposomes+to+evaluate+their+behavior+after+pulmonary+administration%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Real-time in vivo imaging of surface-modified liposomes to evaluate their behavior after pulmonary administration.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 86 (1), 115-119 (2014).</li>
<li>Ito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+whole-body+multimodality+imaging+of+gastric+cancer+peritoneal+metastasis+combining+fluorescence+imaging+with+ICG-labeled+antibody+and+MRI+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastric+Cancer%22%5BJournal%5D)">New whole-body multimodality imaging of gastric cancer peritoneal metastasis combining fluorescence imaging with ICG-labeled antibody and MRI in mice.</a> Gastric Cancer. 17 (3), 497-507 (2014).</li>
<li>Mazza, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome-Indocyanine+Green+Nanoprobes+for+Optical+Labeling+and+Tracking+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+Post-Transplantation+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Liposome-Indocyanine Green Nanoprobes for Optical Labeling and Tracking of Human Mesenchymal Stem Cells Post-Transplantation In Vivo.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (21), (2017).</li>
<li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PloS One. 8 (10), e77205(2013).</li>
<li>Spurney, C. F., Leatherbury, L., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+ultrasound+database+profiling+growth%2C+development%2C+and+cardiovascular+function+in+C57BL%2F6J+mouse+fetuses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">High-frequency ultrasound database profiling growth, development, and cardiovascular function in C57BL/6J mouse fetuses.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 17 (8), 893-900 (2004).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.jove.com/video/58209/synthesis-characterization-placental-chondroitin-sulfate-plcsa">Synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate A (plCSA) -targeting lipid-polymer nanoparticles.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li>
<li>Devraj, K., Guerit, S., Macas, J., Reiss, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+In+Vivo+Blood-brain+Barrier+Permeability+Assay+in+Mice+Using+Fluorescently+Labeled+Tracers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), (2018).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mononuclear+cells+from+the+central+nervous+system+of+rats+with+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mononuclear cells from the central nervous system of rats with EAE.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 527(2007).</li>
<li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology. 20 (3), 180-193 (2005).</li>
<li>Frangioni, J. V. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1367593103001091">In vivo near-infrared fluorescence imaging.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 7 (5), 626-634 (2003).</li>
<li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kuhl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biology+and+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38(2014).</li>
<li>Khankin, E. V., Hacker, M. R., Zelop, C. M., Karumanchi, S. A., Rana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+high-frequency+ultrasonography+to+evaluate+cardiovascular+and+uteroplacental+blood+flow+in+mouse+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Pregnancy+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Intravital high-frequency ultrasonography to evaluate cardiovascular and uteroplacental blood flow in mouse pregnancy.</a> Pregnancy Hypertension. 2 (2), 84-92 (2012).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatric Research. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
<li>Pallares, P., Gonzalez-Bulnes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+ultrasonographic+characterization+of+phenotypic+changes+during+embryo+development+in+non-anesthetized+mice+of+different+genotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive ultrasonographic characterization of phenotypic changes during embryo development in non-anesthetized mice of different genotypes.</a> Theriogenology. 70 (1), 44-52 (2008).</li>
<li>Parvani, J. G., Gujrati, M. D., Mack, M. A., Schiemann, W. P., Lu, Z. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+%CE%B23+integrin+by+targeted+ECO%2FsiRNA+nanoparticles+inhibits+EMT+and+metastasis+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Silencing β3 integrin by targeted ECO/siRNA nanoparticles inhibits EMT and metastasis of triple-negative breast cancer.</a> Cancer Research. 75 (11), 2316-2325 (2015).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
<li>Jenkins, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+imaging+%28BLI%29+to+improve+and+refine+traditional+murine+models+of+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent imaging (BLI) to improve and refine traditional murine models of tumor growth and metastasis.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 20 (8), 733-744 (2003).</li>
<li>Keelan, J. A., Leong, J. W., Ho, D., Iyer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+safety+considerations+of+nanoparticle-mediated+drug+delivery+in+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and safety considerations of nanoparticle-mediated drug delivery in pregnancy.</a> Nanomedicine. 10 (14), 2229-2247 (2015).</li>
</ol>

X.F. ve B.Z. mucitler plasenta özgü ilaç teslim yöntemi kapsar SIAT tarafından patent başvurusu PCT/CN2017/108646 gönderilmiş ve uygulama vardır. Diğer yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Bu makale, plCSA-BP-güdümlü nano tanecikleri plasenta uyuşturucu teslimini hedefleme için verimli bir araç olup olmadığını belirlemenize için üç yöntem sistem anahat. Kızılötesi floresan ICG sinyal izlemek için Imaging vivo içinde kullanımı plCSA-BP. kullanma plasental hedefleme özgüllük teyit HFUS ve HPLC, biz gösterdi plCSA BP Birleşik nano tanecikleri etkili bir şekilde sadece MTX sunabilirsiniz Plasenta hücreleri, fetus için değil.
Deneyler Imaging vivo içinde floresans i...

Plasenta-aracılı gebelik komplikasyonları, ön eklampsi, gebelik kaybı, ablasyo plasenta ve küçük Gebelik yaşı (SGA), dahil olmak üzere yaygın ve önemli fetal ve maternal morbidite ve mortalite1,2kurşun, 3ve çok az ilaçlar gebelik tedavisi4,5bozuklukları için etkili olduğu kanıtlanmıştır. Daha seçici ve daha güvenli plasenta hedefli ilaç dağıtım stratejileri geliştirme gebelik sırasında modern ilaç tedavisi zor kalır.
Son yıllarda, çeşitli raporlar uteroplacental dokulara ilaçların teslim hedeflenen peptidler veya antikorlar ile kaplama Nano tanecikleri tarafından plasenta hedefli araçları olarak odaklı olması. Bu bir anti-epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR)6 antikor, tümör-posta peptidler (CGKRK ve iRGD)7, plasenta hedefli peptidler8, plasental damarlara hedefli peptidler9 ve karşı antikor içerir oksitosin reseptör10.
Burada, sentetik plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP) nano tanecikleri ve onların uyuşturucu payloads hedeflenen teslimatı plasenta11için kullanılabileceğini göstermektedir. PlCSA-BP-güdümlü nano tanecikleri plasental trofoblast hedef çünkü yöntemleri hedefleme bildirilen uteroplacental tamamlayıcı niteliktedir.
Non-invaziv bir yöntem olarak vivo içinde görüntüleme plasenta özel gen ekspresyonu fareler12izlemek için kullanılan ve indocyanine yeşil (ICG) yaygın görüntüleme sistemleri13floresan kullanarak nano tanecikleri izlemek için kullanılmıştır, 14,15. Böylece, intravenöz plCSA BP Birleşik nano tanecikleri ile floresan Imager hamile farelerde plCSA-INP dağılımını görselleştirmenizi ICG (plCSA-INPS) yüklü enjekte. Biz daha sonra metotreksat (MTX) intravenöz enjekte-hamile fareler plCSA-NPs yüklü. Yüksek frekanslı ultrason (HFUS), non-invaziv, başka bir gerçek zamanlı görüntüleme aracı16,17 fetal ve plasental geliştirme farelerde izlemek için kullanıldı. Son olarak, yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) plasenta ve fetusa MTX dağıtım ölçmek için kullanılır.
Bu protokol için plasenta hedefli ilaç dağıtım verimliliğini değerlendirmek için plCSA-BP-güdümlü nanocarriers tarafından kullanılan üç yöntem sistem biz ayrıntılı olarak tarif.

<table><tbody><tr><td>CD-1 fareler</td><td>Beijing Vital River</td><td>201</td><td>Dişi (8-12 hafta)</td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası</td><td>IV enjeksiyonu için</td><td>BD</td><td>328421</td></tr><tr><td>Nanopartikül sentezi için</td>etanol<td>mutlak</td><td>Sinopharm Chemical</td><td>10009218</td></tr><tr><td>Soya fasulyesi lesitini</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>nanopartikül sentezi için</td><td>441601</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>Nanopartikül</td><td>sentezi için 880125 Nanopartikül sentezi için</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td></td></tr><tr><td>Nanopartikül sentezi için</td><td>ultrasonik işlemci</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td></tr><tr><td>Nanopartikül sentezi için</td><td>metotreksat (MTX)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>V900324</td></tr><tr><td>İndosiyanin yeşili (ICG)</td> İn vivo için <td>Sigma-Aldrich</td><td>1340009</td><td> fosfat</td></tr><tr><td>tamponlu salin (PBS)</td> <td>görüntüleme Hiklon</td><td>SH30028.01</td><td></td></tr><tr><td>IVIS spektrum cihazı</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>in vivo görüntüleme için</td></tr><tr><td>Ultrason iletim jeli</td><td>Guanggong</td><td>ZC4252418</td> Anestezi <td>bakımı için</td></tr><tr><td>izofluran</td><td>Lunan İlaç</td><td>I0040</td><td></td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Nair</td><td>Kürk çıkarmak için</td> <td>TMG001</td></tr><tr><td>40 MHz dönüştürücü</td> Ultrason <td>görüntüleme için</td><td>VisualSonics</td><td>MS550S</td></tr><tr><td>Ultrason görüntüleme için yüksek frekanslı ultrason görüntüleme sistemi</td><td>Ultrason</td><td>görüntüleme için</td>Avertin <td>Vevo2100</td></tr><tr><td>Anestezi için</td><td>Avertin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td></tr><tr><td>Şırınga pompası</td><td>Mindray</td><td>SK-500III</td><td>içinkardiyak perfüzyon</td></tr><tr><td>Kardiyak perfüzyon için</td><td>% 0.9 tuzlu su çözeltisi</td><td>Meilunbio</td><td>MA0083</td></tr><tr><td>1.5 mL Polipropilen tüpler</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C-80</td><td></td></tr> <tr><td>&deg; C dondurucu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88600V</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Perklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>311421</td><td>protein</td></tr><tr><td>homojenizatörü için</td><td>SCIENTZ</td><td>SCIENTZ-48</td><td>dokuyu homojenleştirmek için</td></tr><tr><td>Şırınga filtresi (0.45 &mu; m)</td> <td>Milipore</td><td>SLHV033RS01</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>MTX</td>HPLC şişelerini çözmek için <td>Sinopharm Chemical</td><td>10019763</td></tr><tr><td></td><td>HPLC için</td><td>su</td><td>670650620</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat dibazik</td><td>Sinopharm Chemical</td><td>20032117</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>için Asetonitril</td><td>JKchemical</td><td>932537</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>C18 kolon</td><td>Suları için kimyasal</td><td>HPLC için</td> <td>186003966</td></tr><tr><td>HPLC sistemi</td><td>HPLC için</td> <td>Shimadzu</td><td></td></tr></tbody></table>

kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Hiçbir etkili tedaviler Şu anda plasenta ilişkili gebelik komplikasyonları için mevcut ve maternal ve fetal yan etkileri en aza indirerek uyuşturucu hedeflenen teslimat için plasenta stratejileri geliştirmek zor kalır. Hedeflenen nanopartikül taşıyıcıları plasental bozuklukları tedavisi için yeni fırsatlar sağlar. Biz son zamanlarda sentetik plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP) uyuşturucu için plasenta sunmak için nano tanecikleri rehberlik için kullanılan olabilir gösterdi. Bu protokol için biz birlikte kullanılan üç ayrı Yöntemler istihdam plCSA-BP tarafından ilaç dağıtım için plasenta verimliliğini değerlendirmek için bir sistem ayrıntılı olarak tarif: vivo içinde görüntüleme, yüksek frekanslı ultrason (HFUS) ve yüksek performans Sıvı Kromatografi (HPLC). HFUS ve HPLC plCSA BP Birleşik nano tanecikleri etkili bir şekilde ve özellikle metotreksat için plasenta teslim olduğunu gösterdi iken vivo içinde kullanarak canlı hayvan, plasenta içinde görüntüleme, plCSA-BP-güdümlü nano tanecikleri görüntülenir. Böylece, bu yöntemlerin bir bileşimini plasenta ilaçlara hedeflenen teslimat ve birkaç gebelik komplikasyonları için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için etkili bir araç kullanılabilir.

Bu makale, nano tanecikleri MTX (plCSA-MNPs) veya ICG (plCSA-INPS) ile yüklenen plCSA BP Birleşik intravenöz hamile fareler enjekte edildi. İn vivo görüntüleme plCSA-INP enjeksiyon sonra rahim 30 dk bölgesinde güçlü ICG sinyaller saptandı. INPS esas olarak karaciğer ve dalak bölgesi (Şekil 1A) için yerelleştirilmiş. PlCSA-INP enjeksiyon sonra 48 h hamile fareler, ICG sinyalleri sadece yok sinyallerle plasenta fetus (Şekil 1B</str...

Biz emanet ve plasenta hedefli ilaç dağıtım etkinliğini değerlendirmek için üç yöntem kullanır bir sistem tarif: nanopartikül birikimi, plasenta ve fetal gelişim izlemek için yüksek frekanslı ultrason izlemek için Imaging vivo içinde ve HPLC doku için ilaç dağıtım ölçmek için.

Kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Bu yöntem, nanotıp alanında, anneye ve fetüse verilen nanopartikül üzerine yüklenen ilacın etkinliği ve güvenliği hakkındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, plasentaya verilen ilaç miktarının doğru bir biyokimyasal ölçümünü kolaylaştırmasıdır. Bu tekniğin etkileri, plasenta aracılı gebelik komplikasyonlarının tedavisine kadar uzanır, çünkü plasentaya ilaç dağıtımının kesin olarak hedeflenmesini sağlamak önemlidir.Embriyonik gelişimin yüksek frekanslı ultrason değerlendirmesi, ustalaşmak için sabır ve deneyim gerektirdiğinden, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir. İntravenöz nanopartikül enjeksiyonu için, ısıyla genişlemiş kuyruk damarları olan bir Embryonic Day 14.5 hamile fareyi bir süzgecin içine aktarın ve kuyruğu bir alkollü çubukla temizleyin. Daha sonra 28 gauge insülin şırıngasının iğne ucunu genişlemiş bir kuyruk damarına sokun ve nanopartikülleri kuyruk damarına iletmek için pistonu beş ila 10 saniye boyunca eşit basınçla yavaşça bastırın.Enjeksiyondan 30 dakika sonra, anestezi uygulanmış hamile fareyi sırtüstü pozisyonda in vivo floresan görüntüleme sisteminin görüntüleme odasına yerleştirin. İndosiyanin ye

comprehensive-evaluation-effectiveness-safety-placenta-targeted-drug

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Ikizden ikize transfüzyon sendromu ve perinatal tıp ikiz anemi polisitemia dizisi iki potansiyel olarak yıkıcı sorunlar. Her iki bozukluk da sadece monokoryonik ikizlerde ve plasental vasküler anastomozlar yoluyla dengesiz kan akımı sonucu oluşur. Doğumdan sonra plasenta damarlarının renkli boya enjeksiyon kullanılarak vasküler anastomozlar varlığı doğru değerlendirmek için basit bir protokol sağlar.

Renkli Boya kullanarak Monokoryonik Plasenta vasküler anastomozlar doğru ve basit Değerlendirme

Plasenta karşısında Ksenobiyotik ve Nanomalzemelerin Ulaştırma Hızı belirlenmesi kullanarak<em&gt; Ex vivo</em&gt; İnsan Plasental Perfüzyon Modeli

Bu dönemde in vivo insan plasental fizyoloji çalışmak için ayrıntılı bir yöntem sunulmaktadır. Yöntem, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki gelen ve giden damarlardan alınan kan örneklerini, hacimsel kan akışı ve plasental doku örneklemesi ile ilgili ultrason ölçümleri ile birleştirir.

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı<emIn vivo</em

Bu çalışmada tersinir doku takas, immunostaining, 3D işleme ve analiz insan plasenta villus örneklerinde sırasına 1-2 mm3damar ağları için bir protokol sunar.

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Burada, plasental kondroitin sülfat A bağlama peptid (plCSA-BP) sentezi için bir iletişim kuralı mevcut-Birleşik lipid-polimer nano tanecikleri ile tek adım sonication ve bioconjugate teknikleri. Bu parçacıklar tedavi hedeflenen teslimat en insan tümörleri ve kanserleri ve plasental bozuklukları tedavisinde plasental trophoblasts için bir roman araç oluşturmaktadır.

Sentez ve karakterizasyonu plasental kondroitin sülfat (plCSA) - Lipid hedefleme - polimer nano tanecikleri

Burada, doğal katil hücrelerin sitotoksisik fonksiyonunu renkmetrik plaka tahlili ile plasenta satıyor 'dan izole etmek ve değerlendirmek için ayrıntılı bir metodoloji sağlıyoruz. Plasental iskemi azaltılmış uterus perfüzyon basınç sıçan modeli antikor aracılı yalıtım ve doğal katil hücrelerin sitotokleş fonksiyonunun değerlendirilmesi göstermek için seçildi.

Rat placental doğal katil hücre Cytolytic fonksiyon değerlendirilmesi için bir plaka tabanlı sitotoksisite assay

Burada, bir test makalesinin maternal damar içine uygulanmasını sağlamak ve ksenobiyotik partiküllerin veya farmakolojik ajanların plasental aktarımını değerlendirmek için ex vivo maternal-fetal vasküler perfüzyon Protokolü sunulmuştur. Plasental Fizyoloji.

Rodent placenta 'nın ex vivo perfüzyon

Burada, fare plasentasındaki kritik gelişim yollarını in vivo olarak etkili bir şekilde manipüle etmek için zamana özgü bir yöntem açıklıyoruz. Bu, embriyonik gün 12.5'te CRISPR plazmidlerinin hamile barajların plasentalarına enjeksiyonu ve elektroporasyonu yoluyla gerçekleştirilir.

Fare In Vivo Plasental Hedefli CRISPR Manipülasyonu

Hipoksik koşullar altında kültürlenen plasental eksplantlardan izole edilen küçük EV'lerin (sEV'ler) (preeklampsinin bir yönünü modelleme) hamile olmayan yetişkin dişi farelerde kan-beyin bariyerini bozup bozmadığını değerlendirmek için bir protokol sunulmaktadır.

Hipoksik İnsan Plasentalarından Küçük Hücre Dışı Veziküller Tarafından Fare Kan-Beyin Bariyerinin Bozulması

Biyo-uyumlu pH duyarlı sol-jel nanosensors poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) electrospun iskeleleri katılabilecektir. Üretilen kendi-rapor iskeleleri iskelesi üzerinde hücrelerin kültürlenmesi iken microenvironmental durumların in situ izlenmesi için de kullanılabilir. 3D hücresel yapı deneyi bozmadan gerçek zamanlı olarak izlenebilir edildiğinden bu durum yararlıdır.

3-Boyutlu Hücre Kültürü için Self-raporlama iskeleleri

Keşfedin plasenta hedefli ilaç dağıtımının etkinliğini ve güvenliğini in vivo görüntüleme, yüksek frekanslı ultrason ve HPLC kullanarak. Bu yöntem, gebelik komplikasyonlarının tedavisinde nanotıp araştırmalarına katkı sağlar.

Kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım

Daha fazla video keşfet