İnsanlaşmış NOD/SCID/IL2rγ^null (hu-NSG) fare modeli HIV çoğaltma ve gecikme süresi çalışmaları için

Bu konular, HIV/AIDS araştırmalarında, hiv enfeksiyonunun moleküler mekanizması ve prognozu ve gecikme rezervuarının nasıl ve nerede kurulduğu gibi temel soruların yanıtlatılanına yardımcı olabilir. Bu tekniğin avantajı non-invaziv olmasıdır, ve HIV enfeksiyonuna duyarlı ve cART duyarlı olan nakledilen insan kök hücreleri üzerinde bir çok soy gelişimi tedavi etmek gerekir bir hu-NSG fareler kurdu. Sindirilmiş, insan, fetal, karaciğer dokusu, bulamaç örneğini steril, 70 mikrometre, naylon, örgü süzgeç üzerinden filtreleyerek tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için başlayın ve üreticinin talimatlarına göre manyetik aktif hücre sıralaması ile CD34+HSC'ler için zenginleştirin.

Saydıktan sonra, hsc'yi buzdaki taze DPBS'de mililitre konsantrasyonu başına iki kez-on-yedinci canlı hücrelerde yeniden askıya alın. Sonraki yer steril içine bir bütün neonatal insan NOD / SCID / gama veya NSG fare çöp, pasta şeklinde, ışınlama kafesi, ve bir sezyum-137 radyasyon kaynağından gama ışını 200 ila 250 santigrat derece ile hayvanlar tedavi. Sonra özel yapım içine hücreleri yükleyin, Hamilton 80508 50-mikrolitre şırınga 30-gauge iğne ile donatılmış, ve beş-on-on-beşinci canlı insan CD34 + HSC ve DPBS 25 mikrolitre ile karaciğer doğrudan her yenidoğan hayvan enjekte.

On-on iki hafta enfeksiyon sonrası, retro-orbital aşağı spin, periferik, santrifüj ile her fareden kan örnekleri, ve deneysel olarak uygun olarak negatif 80 santigrat depolama için mikrosantrifüj tüpleriçin plazma supernates aktarın. HSC engraftment doğrulama için, kırmızı kan hücresi lisis tampon 200 mikrolitre ile pelet yeniden askıya almak ve oda sıcaklığında on dakikalık kuluçka için 1,5 milimetre mikrosantrifüj tüp hücre süspansiyonlar çekin. Daha sonra kalan beyaz kan hücrelerini, yıkama başına DPBS'de 0,5 mililitre taze, yüzde 0,01 büyükbaş hayvan serum albumini veya BSA'da iki yıkama için santrifüj ile toplayın.

İkinci yıkamadan sonra, 4 santigrat derece yirmi dakika boyunca engelleme kokteyl 100 mikrolitre ile hücreleri bloke ve bir kez-bir-bir-altıdan altıncı hücre konsantrasyonu başına anti-vücut 2 mikrolitre ilgi uygun anti-vücut kokteyl ile etiketleme izledi. 4 santigrat derecede 30 dakika sonra hücreleri taze DPBS artı BSA'da iki kez yıkayın ve numune başına insan CD45+CD3+CD14+veya CD19+hücrelerinin yüzdesini ölçmek için standart protokollere göre akış sitometrisi ile periferik kan örneklerini değerlendirin. Daha sonra CD4+-CD8+T hücrelerinin oranını hesaplayın ve plazma örneklerindeki viral yükü standart, nicel, ters transkriptaz, PCR protokollerine göre değerlendirin.

HIV enfeksiyonunun etkilerini değerlendirmek için, hiv balya virüsünü anestezi, insan, NSG farelere periferik kanlarında yüzde 20'den fazla insan CD45+hücre popülasyonu ile, intraperitoneal uygulama yoluyla fare konsantrasyonu başına 200 nanogram P24'te, her iki haftada bir retro-orbital kanama yoluyla kan örnekleri toplayarak ve hem CD4-TO-CD8 oranını hem de plazma yükünü analiz etmek için , gösterildiği gibi. Viral bastırma doğrulama kaynağı için taze, kombinatoryal, anti-retroviral tedavi veya cART ile enfekte, insan NSG hayvanlar, tatlı suda her hafta 4 hafta boyunca, retro-orbital kanama ile kan örnekleri toplama her iki haftada bir ve hem CD4-to-CD8 oranı ve plazma viral yük olarak gösterildiği gibi analiz. Plazma viral yükleri algılama limitinin altında olduğunda ve CD4-TO-CD8 oranı 1.5 ile 2.5 arasında geri yüklendiğinde viral rebound'u değerlendirmek için cART çekilmesinden sonra her 2 haftada bir retro-orbital kanama yoluyla periferik kan örnekleri toplanır ve örnekleri gösterildiği gibi değerlendirir.

İlk engraftment doğrulama sırasında, insan CD45 + hücre sayısı yüzde 20 ila 80 arasında olmalıdır, ve insan lökosit alt kümeleri akış sitometrik analiz ile ayrık popülasyonlar olarak görünmelidir. Sağlıklı bireylerde CD4+-CD8+hücrelerin inkişafı ise tipik olarak viral enfeksiyon da gözlenirken, cd4+-CD8+hücrelerin oranı 1.5 ile 2.5 arasında kalmaktadır. Özellikle cART tedavisine yanıt olarak sağlıklı oran geri kazanılır.

Enfeksiyon ve cART rejimi boyunca kantitatif RT PCR ile plazma viral yüklerin tespiti çizilebilir ve viral doğum ve anti-viral tedavi verimliliğini değerlendirmek için kullanılır, sırasıyla. Bu yöntem HIV / AIDS viroloji çalışmaları ve terapötik gelişimi içine fikir sağlayabilir rağmen, aynı zamanda kanser, diyabet gibi insan hastalığı ile ilgili diğer çalışmalara uygulanabilir, ve oto-immün hastalıklar. Hu-NSG fare modeli geliştirme immünoloji ve onkoloji araştırmacılar için insanlarda yeni bir disfonksiyon ve patoloji keşfetmek için yol açtı, hiv kronik enfeksiyon ve gecikme rezervuar hedefleyen özellikle mekanistik ve terapötik çalışmalar.