Name: Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Keşfedin antijenik lipozomlar ile B hücre aktivasyonunu fare modellerinde in vitro ve in vivo olarak. Bu yöntem alerji immünoterapisi ve otoimmünite araştırmaları için güçlü antikor yanıtları sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma hibe (W81XWH-16-1-0302 ve W81XWH-16-1-0303) Savunma Bakanlığı tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Gupta, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence%2C+severity%2C+and+distribution+of+childhood+food+allergy+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">The prevalence, severity, and distribution of childhood food allergy in the United States.</a> Pediatrics. 128 (1), e9-e17 (2011).</li>
<li>Sicherer, S. H., Munoz-Furlong, A., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((US+prevalence+of+self-reported+peanut%2C+tree+nut%2C+and+sesame+allergy%3A+11-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">US prevalence of self-reported peanut, tree nut, and sesame allergy: 11-year follow-up.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (6), 1322-1326 (2010).</li>
<li>Kim, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunotherapy+for+peanut+allergy%3A+clinical+and+immunologic+evidence+of+desensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunotherapy for peanut allergy: clinical and immunologic evidence of desensitization.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 640-646 (2011).</li>
<li>Vickery, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+unresponsiveness+to+peanut+in+subjects+who+have+completed+peanut+oral+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Sustained unresponsiveness to peanut in subjects who have completed peanut oral immunotherapy.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 133 (2), 468(2014).</li>
<li>Jones, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicutaneous+immunotherapy+for+the+treatment+of+peanut+allergy+in+children+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epicutaneous immunotherapy for the treatment of peanut allergy in children and young adults.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (4), 1242(2017).</li>
<li>Varshney, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+controlled+study+of+peanut+oral+immunotherapy%3A+clinical+desensitization+and+modulation+of+the+allergic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">A randomized controlled study of peanut oral immunotherapy: clinical desensitization and modulation of the allergic response.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 127 (3), 654-660 (2011).</li>
<li>Anagnostou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+efficacy+of+oral+immunotherapy+for+the+desensitisation+of+peanut+allergy+in+children+%28STOP+II%29%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Assessing the efficacy of oral immunotherapy for the desensitisation of peanut allergy in children (STOP II): a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet. 383 (9925), 1297-1304 (2014).</li>
<li>Sampson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Varying+Doses+of+Epicutaneous+Immunotherapy+vs+Placebo+on+Reaction+to+Peanut+Protein+Exposure+Among+Patients+With+Peanut+Sensitivity%3A+A+Randomized+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Effect of Varying Doses of Epicutaneous Immunotherapy vs Placebo on Reaction to Peanut Protein Exposure Among Patients With Peanut Sensitivity: A Randomized Clinical Trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 318 (18), 1798-1809 (2017).</li>
<li>Bednar, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD22+Inhibits+Murine+B+Cell+Receptor+Activation+in+a+Human+CD22+Transgenic+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human CD22 Inhibits Murine B Cell Receptor Activation in a Human CD22 Transgenic Mouse Model.</a> Journal Immunology. 199 (9), 3116-3128 (2017).</li>
<li>Macauley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigenic+liposomes+displaying+CD22+ligands+induce+antigen-specific+B+cell+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Antigenic liposomes displaying CD22 ligands induce antigen-specific B cell apoptosis.</a> Journal Clinical Investigation. 123 (7), 3074-3083 (2013).</li>
<li>Orgel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+CD22+on+antigen-specific+B+cells+to+prevent+allergy+to+the+major+peanut+allergen+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Exploiting CD22 on antigen-specific B cells to prevent allergy to the major peanut allergen Ara h 2.</a> Journal Allergy Clinical Immunology. 139 (1), 366-369 (2017).</li>
<li>Smarr, C. B., Hsu, C. L., Byrne, A. J., Miller, S. D., Bryce, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-fixed+leukocytes+tolerize+Th2+responses+in+mouse+models+of+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-fixed leukocytes tolerize Th2 responses in mouse models of allergy.</a> Journal of Immunology. 187 (10), 5090-5098 (2011).</li>
<li>Kulis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2S+albumin+allergens+of+Arachis+hypogaea%2C+Ara+h+2+and+Ara+h+6%2C+are+the+major+elicitors+of+anaphylaxis+and+can+effectively+desensitize+peanut-allergic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">The 2S albumin allergens of Arachis hypogaea, Ara h 2 and Ara h 6, are the major elicitors of anaphylaxis and can effectively desensitize peanut-allergic mice.</a> Clinical and Experimental Allergy. 42 (2), 326-336 (2012).</li>
<li>Dang, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+accuracy+of+peanut+allergy+diagnosis+by+using+Ara+h+2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Increasing the accuracy of peanut allergy diagnosis by using Ara h 2.</a> Journal of Allergy Clinical Immunology. 129 (4), 1056-1063 (2012).</li>
<li>Loughrey, H. C., Choi, L. S., Cullis, P. R., Bally, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+the+coupling+of+proteins+to+liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for the coupling of proteins to liposomes.</a> Journal Immunological Methods. 132 (1), 25-35 (1990).</li>
<li>Sen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+structure+plays+a+critical+role+in+peanut+allergen+stability+and+may+determine+immunodominant+IgE-binding+epitopes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes.</a> Journal of Immunology. 169 (2), 882-887 (2002).</li>
<li>Krall, N., da Cruz, F. P., Boutureira, O., Bernardes, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-selective+protein-modification+chemistry+for+basic+biology+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Site-selective protein-modification chemistry for basic biology and drug development.</a> Nature Chemistry. 8 (2), 103-113 (2016).</li>
<li>Jimenez-Saiz, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifelong+memory+responses+perpetuate+humoral+TH2+immunity+and+anaphylaxis+in+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lifelong memory responses perpetuate humoral TH2 immunity and anaphylaxis in food allergy.</a> Journal Allergy and Clinical Immunology. 140 (6), 1604-1615 (2017).</li>
<li>Moutsoglou, D. M., Dreskin, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Treatment+of+Peanut-Allergic+Mice+with+Bortezomib+Significantly+Reduces+Serum+Anti-Peanut+IgE+but+Does+Not+Affect+Allergic+Symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Prolonged Treatment of Peanut-Allergic Mice with Bortezomib Significantly Reduces Serum Anti-Peanut IgE but Does Not Affect Allergic Symptoms.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 170 (4), 257-261 (2016).</li>
<li>LaMothe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerogenic+Nanoparticles+Induce+Antigen-Specific+Regulatory+T+Cells+and+Provide+Therapeutic+Efficacy+and+Transferrable+Tolerance+against+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Tolerogenic Nanoparticles Induce Antigen-Specific Regulatory T Cells and Provide Therapeutic Efficacy and Transferrable Tolerance against Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 281(2018).</li>
<li>Srivastava, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+peanut+oral+immunotherapy+with+CpG%2Fpeanut+nanoparticles+in+a+murine+model+of+peanut+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Investigation of peanut oral immunotherapy with CpG/peanut nanoparticles in a murine model of peanut allergy.</a> J Allergy Clin Immunol. 138 (2), 536-543 (2016).</li>
<li>Bellinghausen, I., Saloga, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+allergic+immune+responses+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Analysis of allergic immune responses in humanized mice.</a> Cellular Immunology. 308, 7-12 (2016).</li>
<li>Pillai, S., Mattoo, H., Cariappa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells and autoimmunity.</a> Curr Opin Immunol. 23 (6), 721-731 (2011).</li>
<li>Mantegazza, R., Cordiglieri, C., Consonni, A., Baggi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myasthenia+gravis%3A+utility+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+General+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of myasthenia gravis: utility and limitations.</a> International Journal of General Medicine. 9, 53-64 (2016).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myasthenia+gravis.+A+murine+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Experimental myasthenia gravis. A murine system.</a> J Exp Med. 151 (1), 204-223 (1980).</li>
<li>Berman, P. W., Patrick, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linkage+between+the+frequency+of+muscular+weakness+and+loci+that+regulate+immune+responsiveness+in+murine+experimental+myasthenia+gravis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Linkage between the frequency of muscular weakness and loci that regulate immune responsiveness in murine experimental myasthenia gravis.</a> J Exp Med. 152 (3), 507-520 (1980).</li>
<li>Derksen, V., Huizinga, T. W. J., van der Woude, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+autoantibodies+in+the+pathophysiology+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">The role of autoantibodies in the pathophysiology of rheumatoid arthritis.</a> Seminars in Immunopathology. 39 (4), 437-446 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada özetlenen bir protein için protein liposomal nano tanecikleri üzerinde görüntülenmesini sağlayan bir lipid konjugasyon için genel bir iletişim kuralı yöntemlerdir. Çok büyük çok alt birim proteinler için bu protokolü yardımcı programını sınırlı olabilir. İdeal Yöntem bir biorthogonal kimyasal bağlanma strateji kullanılmak üzere sağlayan bir siteye özgü etiket getirilmesi olacaktır. Protein recombinantly ifade, bu mevcut siteye özgü stratejileri17ve fonksiyonel grupların geniş bir dizi ticar...

Besin allerjisi ABD çocuklarda % 8'i etkiler ve yaygınlığı son artmıştır on yıl1. Fıstık alerjisi çocuk % 1'i etkiler ve genellikle geçmek2değil. Birkaç umut verici klinik çalışmalarda oral immünoterapi (OIT), sublingual immünoterapi (yırtık) ve epicutaneous immünoterapi (EPIT), dahil olmak üzere gıda alerji tedavisi için devam etmektedir rağmen orada şu anda yok FDA onaylı tedavi stratejileri Fıstık alerjisi bireyler3,4,5,6,7,8desensitizing için. Bu nedenle, Alerjik kişiler kesinlikle alerjenler anafilaksi önlemek için kaçınmak gerekir. Çok soru Sensitizasyonu yolları ile ilgili olarak ve mekanizmaları gıda Anti gelişiminin temel kalır.
Fare modelleri Anti mekanizmaları eğitim hem de yeni tolerogenic ve duyarsızlaştırma terapiler9,10,11,12geliştirmek için değerli bir araç vardır. Bu özellikle doğrudur çünkü büyük fıstık allerjen (Ara h 2; Ah2) insanlarda olduğunu da birkaç baskın alerjen açıklanan fare modelleri13,14. Fıstık alerjisi fare modelleri mekanizmaları Sensitizasyonu ve hoşgörü eğitim çok değerli olmakla birlikte, bir onlar değişken olabilir ve adjuvan kullanımını gerektiren dezavantajıdır. Daha güçlü immunogens modelleri gibi içsel değişkenliği en aza indirmek için bir yol olurdu. B-hücreleri şiddetle multivalent antijenleri tarafından etkinleştirilir beri antijenik lipozomlar alerjen görüntüleme yeteneklerini nedeniyle potansiyel olarak B-hücreleri de mülkiyeti verimli bir şekilde sahip iken B hücre reseptörü (BCR) etkinleştirmek için iyi bir seçenek vardır Özellikle antijen-sunarak alınan ile T-hücre bölmesi priming hücreleri.
Burada, protein antijenleri için facile ve modüler bir strateji kullanarak liposomal nano tanecikleri conjugating için detaylı bir protokol açıklayın. Kullanarak bir vekil antijen, anti-IgM Fab parçası, biz göstermek nasıl güçlü antijenik böyle lipozomlar uyarıcı B-hücre harekete geçirmek içinde olabilir. Antijenik lipozomlar toplam sayı Ah2 antijen bir yeni doğan duyarlılık fare modeli geliştirmek için kullanıldı. Bu modelde, splenocytes fıstık özel bellek B ve T hücreleri, içeren doğrulanmadı fıstık alerjisi fareler gelen saf congenic fareler aktarılır. Bellek antikor yanıt Ah2 karşı antikor ikna etmek için alıcı fareler Ah2 ile Birleşik lipozomlar enjeksiyon tarafından indüklenir. Ne zaman bu fareler daha sonra Ah2 ile meydan çözünür Ah2 ile tek bir artırmak ardından, Ah2 özel antikorlar neden bir güçlü anafilaktik yanıt-e doğru olmaktadır. Alerjik reaksiyon geçiren fareler son derece düzgün bir şekilde yanıt ve bir adjuvan almadım, bu yaklaşım bir arzu fıstık alerjisi modeldir ve sonuçları bu yardımcı programı diğer fare modelleri yönelik antijenleri ile tahrik olabilir öneririz alerjenler ve muhtemelen autoantigens.

<table><tbody><tr><td>Model 2110 Fraksiyon Toplayıcı</td><td>BioRad</td><td>7318122</td><td></td></tr><tr><td>Kolestrol</td><td>Sigma</td><td>C8667</td><td>Sigma sınıfı% 99</td></tr> <tr><td>SPDP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21857</td><td></td></tr><tr><td>DSPC</td><td>Avanti</td><td>850365</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG 18:0</td><td>Avanti</td><td>880120</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG Maleimid</td><td>Avanti</td><td>880126</td><td></td></tr><tr><td>Ekstruder</td><td>Avanti</td><td>610000</td><td>1 mL tutucu/ısıtma bloklu şırınga</td></tr><tr><td>Filtreler 0.1 ve mikro; m</td><td>Avanti</td><td>610005</td><td></td></tr><tr><td>Filtreler 0.8 & m</td><td>Avanti</td><td>610009 10</td><td></td></tr><tr><td>mm Filtre Destekleri</td><td>Avanti</td><td>6100014</td><td></td></tr><tr><td>Cam Yuvarlak Tabanlı Şişe</td><td>Sigma</td><td>Z100633</td><td></td></tr><tr><td>Ciro tıpaları</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-301398</td><td></td></tr><tr><td>Boru</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P-198194</td><td></td></tr><tr><td>Leur</td><td>Lock Thermo Fisher Scientific</td><td>k4201634503</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G50 Boncuklar</td><td>GE Yaşam Bilimleri</td><td>17004201</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex G100 Boncuklar</td><td>GE Yaşam Bilimleri</td><td>17006001</td><td></td></tr><tr><td>Isı İnaktive Fetal Buzağı Serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>1x RBC lizis Tamponu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>Hint-1</td><td>Invitrogen</td><td>I1203</td><td></td></tr><tr><td>CD5-PE</td><td>BioLegend</td><td>100608</td><td></td></tr><tr><td>B220-PE-CY7</td><td>BioLegend</td><td>103222</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Kalsiyum</td><td>ve magnezyum içermeyen</td>14170112</tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Fab anti-fare IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-007-020</td><td></td></tr><tr><td>F (ab') 2 anti-fare IgM</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-006-020</td><td></td></tr><tr><td>Fıstık unu</td><td>Altın Fıstık A.Ş.</td><td>521271</td><td>%12 yağlı hafif kavrulmuş, %50 protein</td></tr><tr><td>Hayvan besleme iğneleri</td><td>Cadence Science</td><td>7920 22g</td><td>x 1.5", 1.25 mm - düz</td></tr><tr><td>Mikroprob termometre</td><td>Physitemp</td><td>BAT-12</td><td></td></tr><tr><td>Fareler için rektal prob</td><td>Physitemp</td><td>Ret-3</td><td></td></tr><tr><td>Kolera toksini, Vibrio cholera</td><td>List Biological Laboratories, Inc.</td>'den<td>100B</td><td>Azide içermeyen</td></tr><tr><td>BCA Protein Test Kiti</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Karbonat-bikarbonat tamponu</td><td>Sigma</td><td>C3041</td><td></td></tr><tr><td>TMB Durdurma Çözeltisi</td><td>KPL</td><td>50-85-06</td><td></td></tr><tr><td>SureBlue TMB Microwell Peroksidaz Substrat</td><td>KPL</td><td>5120-0077</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu Immulon 4HBX plaka</td><td>Thermo Scientific</td><td>3855</td><td></td></tr><tr><td>Saflaştırılmış çözünür Ara h 2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>şu şekilde saflaştırılmış: Sen, et al., 2002, İmmünoloji Dergisi</td></tr><tr><td>HSA-DNP</td><td>Sigma</td><td>A-6661</td><td></td></tr><tr><td>Fare IgE anti-DNP</td><td>Doğru Kimyasal</td><td>BYA60251</td><td></td></tr><tr><td>Koyun anti-Fare IgE</td><td>Bağlanma Bölgesi</td><td>PC284</td><td></td></tr><tr><td>Biyotinile Eşek anti-Koyun IgG</td><td>Doğru Kimyasal</td><td>JNS065003</td><td></td></tr><tr><td>NeutrAvidin Proteini, HRP</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31001</td><td></td></tr><tr><td>Fare IgG1 anti-DNP</td><td>Doğru Kimyasal</td><td>MADNP105</td><td></td></tr><tr><td>HRP Keçi anti-fare IgG1</td><td>Southern Biotech</td><td>1070-05</td><td></td></tr><tr><td>1 mL İnsülin Şırıngaları</td><td>BD</td><td>329412</td><td>U-100 İnsülin, 0.40 mm (27 G) x 16.0 mm (5/8")</td></tr> <tr><td>Superfrost Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-14</td><td>25 mm x 75 mm x 1.0 mm</td></tr><tr><td>ACK Parçalama Tamponu</td><td>gibco by Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>70 & mu; m Naylon, Beyaz, Steril, Ayrı ayrı paketlenmiş</td></tr><tr><td>NuPAGE %4-12 Bis-Tris Protein Jelleri</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td>10 jel</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS tamponu, 4x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0008</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>SeeBlue Plus2 Önceden boyanmış standart</td><td>Invitrogen</td><td>LC5925</td><td>500 &mikro; L</td></tr><tr><td>NuPAGE MES/SDS çalışma tamponu, 20x</td><td>Invitrogen</td><td>NP0002</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>GelCode Blue Stain</td><td>Thermo Scientific</td><td>24590</td><td>500 mL</td></tr></tbody></table>

antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

Antikor yanıt patojenlerin geniş bir dizi kritik koruyucu bağışıklık sağlar. Aşılama nasıl patojen antikor yanıt-e doğru geliştirmek alerjileri ve otoimmün hastalığı anlamak yanı sıra güçlü antikor üreten bir yüksek ilgi kalır. Sağlam antijen spesifik antikor yanıt üreten her zaman önemsiz değildir. Fare modellerinde bu kez Aşı indüklenen antikor düzeyleri değişkenlik büyük bir yol açar adjuvan ile birden fazla mermi gerektirir. Fıstık alerjisi nerede fare numaraları ve adjuvan kullanımını en aza indirmek daha sağlam ve tekrarlanabilir modelleri faydalı olacağını fare modellerinde bir örnektir. Burada sunulan bir çok tekrarlanabilir fare fıstık alerjisi anafilaksi modeldir. Bu yeni model iki önemli faktöre dayanıyor: (1) antijen spesifik splenocytes adoptively aktarılır bir fıstık hassas fare fareler; büyük bir takım karşısında antijen spesifik bellek B ve T hücrelerinin sayısı normale saf alıcı fare içine ve (2) alıcı fareler daha sonra büyük fıstık allerjen (Ara h 2) görüntüleme liposomal nano tanecikleri şeklinde güçlü multivalent immunogen ile artırdı. Bu model büyük avantajı sonuçta birden çok adjuvan enjeksiyonlari alma hayvan sayısını en aza indirirken her çalışmada kullanılan hayvan sayısını düşürür, tekrarlanabilirlik olmasıdır. İmmunojenik Bu lipozomlar modüler montaj patojenik antikorlar içeren diğer alerjik ya da otoimmün modelleri için nispeten facile uyum sağlar.

Konjugasyon protein DSPE-PEG(2000) ile ilgi gösterilen moleküler ağırlık çekimsiz protein göre azalan bakiyeli bir artış çalıştırarak göstermiş olabilir. Şekil 1A Anti-fare IgM F(ab) parçası konjugasyon temsilcisi bir jel PEG-DSPE, 2-3 kDa bandshift denatüre protein için gösterir gösterir. Protein yaklaşık % 50'si değiştirilecek, verilen bu 1:1 stoichiometry ağır ve hafif zincir heterodimerdir olduğunu Fab parçası üzerinde elde hangi beklenen göründüğünü unut...

Açıklanan antijenik liposomal nano tanecikleri ve kullanımları uyarıcı B-hücre harekete geçirmek vitro ve in vivohazırlıktır. Tutarlı ve güçlü antikor yanıt-e doğru yeni bir fıstık alerjisi model gelişmesine yol açtı. Antijenik lipozomlar oluşturmak için protokol farklı antijenleri ve bağışıklama modeller için genişletilebilir.

Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...

Bu yöntem, beyaz kan hücreleri nasıl aktive edilir gibi immünoloji alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, ve nasıl bireysel alerjenlere alerji gelişir? Bu sağlam ve tekrarlanabilir alerji fare modelinin en büyük avantajı, deneysel bir popülasyonla daha az varyans elde etmek için daha az farenin kullanılabilmesidir. Bağışıklık yanıtlarını kontrol etmek için yeni immünoterapiler in vivo etkinliği test bir başlangıç aracı olarak sağlam fare modelleri gerektirir.Böylece, bu tekniğin etkileri alerji immünoterapi doğru uzanır. Bu yöntem alerjiler hakkında bilgi sağlasa da, istenmeyen antikor yanıtlarının hastalıkta önemli bir rol oynadığı otoimmünite gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni bireyler lipozomal nano tanecikleri veya fare çalışmalarında gerekli teknikler ile bir deneyim eksikliği nedeniyle mücadele edecek.Proteine heterobifonksiyonel crosslinker 2.5 molar eşdeğer ekleyerek ve yaklaşık bir saat boyunca oda sıcaklığında bir salınımlı shaker üzerinde reaksiyon yerleştirerek başlayın. SPDP ile bir saatlik kuluçkadan sonra, 100 milimolar sodyum asetat ile dengelendirilen bir sütundaki proteini tuzdan arındırın ve kesirleri toplayın. 280 n

antigenic-liposomes-for-generation-of-disease-specific-antibodies

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

LIPS (Lusiferaz Immunoprecipitation Sistemleri) yerine teknik yönleri anlatılmaktadır. Genel yaklaşım, memeli hücrelerinde Renilla lusiferaz (Ruc) erimiş antijenleri kodlayan kimerik genler ifade içerir. Ham Ruc antijen ekstreleri hazırlanmış ve daha sonra, arıtma olmadan, antikorlar ölçmek için immunoprecipitation deneyleri istihdam.

Antikor Profil Lusiferaz Immunoprecipitation Sistemleri (LIPS)

Kaynak: Heidbuechel, J. P., Engeland, C. E. Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, viral antigenomu ve temel yardımcı proteinleri kodlayan plazmidleri üretici hücrelere iletmek için lipozomlar kullanılarak rekombinant kızamık virüslerinin üretilmesini göstermektedir. Transkribe edilen ve replike olan RNA, immünostimülatör ve floresan raporlayıcı proteinler eksprese eden viral partiküllerin oluşumuna yol açar. Ardından,...

İmmünostimülatör Protein Kodlayan Rekombinant Kızamık Virüsünün Üretimi

Bu video, antijenik lipozomların kullanımı yoluyla B hücresi aktivasyonunun değerlendirmesini göstermektedir. Kalsiyuma duyarlı Hint-1 boyası ile muamele edilen B hücreleri, akış sitometrisi kullanılarak ayırt edilir ve mor-mavi floresan oranları analiz edilir. Hücreler antijenik lipozomlarla karşılaştıkça, kalsiyum akışı yoluyla B hücresi aktivasyonunu tetikler ve zamanla mor-mavi floresan sinyal oranını aşamalı olarak arttırır.

Kalsiyum Akı Testi Kullanılarak Antijenik Lipozomlarla B Hücresi Aktivasyonunun İzlenmesi

Bu protokolün amacı, siRNA'nın BBB'yi geçmesini sağlamak için bir CNS dağıtım sistemi olarak nöro-hedefleme peptitli katyonik/anyonik lipozomları kullanmaktır.  siRNA gibi tedaviler için bir dağıtım sisteminin optimizasyonu, prion ve diğer nörodejeneratif hastalıklar için daha fazla tedavi seçeneğine izin verecektir.

Katyonik ve Anyonik lipozomlar kullanılarak merkezi sinir sistemine Terapötik siRNA teslimi

Hidoma teknolojisine dayalı monoklonal antikorların üretilmesi için optimize edilmiş bir protokol sunulmuştur. Fareler bir immünokonjugat ile aşılandı. Dalak hücreleri, PEG ve ölümsüz miyelom hücreleri ile bir elektrik darbesi ile kaynaştırıldı. Antikor üreten hibridoma hücreleri HAT ve antijene özgü ELISA taraması ile seçildi.

Hibridoma teknolojisi ile murin monoklonal antikorlar üretilmesi

Biz insan kanında dolaşan nadir B hücreleri başlayarak insan antikorlar faiz, bir antijen için belirli üretim için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu doğal antikorlar nesil verimli ve hızlı ve elde edilen antikor arasında son derece ilgili antijenleri ayırt edebilirsiniz.

Kanda dolaşan nadir antijen spesifik B hücreleri Discriminative insan monoklonal antikorların üretimi

Bu makale hazırlanması ve doğal ürünler kullanmak üzere çeşitli uzun karşı Monoklonal antikor değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sağlar. Bu yordam bağışıklama, hücre füzyon, dolaylı rekabet ELISA olumlu klon eleme ve monoklonal Hibridoma hazırlık için içerir. Antikor karakterizasyonu MALDI-TOF-MS ve ELISA analizleri kullanarak spesifikasyonları da temin edilmektedir.

Doğal ürünler karşı monoklonal antikorların üretimi

Burada biz bir protokol üzerinde kuru-film yöntemini temel alır ve güvenli için kullanılan katyonik nanoliposomes, nesil için tarif ve in vitro verimli bir şekilde teslim mesajcı RNA transkripsiyonu.

Vitro verimli bir şekilde teslim için katyonik Nanoliposomes nesil mesajcı RNA transkripsiyonu

Bu protokol, buğday hücresiz sistem ve lipozomlar kullanılarak çift katmanlı diyaliz yöntemiyle yüksek kaliteli proteolipozom üretimi için etkili bir hücresiz yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, membran proteinlerinin fonksiyonel analizi, ilaç hedeflerinin taranması ve antikor gelişimi için uygun araçlar sağlar.

Membran Proteinlerini Hedefleyen Fonksiyonel Analiz ve Antikor Gelişimi için Proteolipozomların Hücresiz Üretimi

Burada, antijen gösteren virüs benzeri parçacıklar (VLP'ler) üzerindeki nötralizasyon epitoplarını tespit etmek için bir protokol sunuyoruz. İnsan immün yetmezlik virüsünün (HIV) türevli VLP'lerin immün özürlülüğü, protein G-konjuge manyetik boncuklarla birleştirilmiş zarf glikoproteinlere özgü monoklonal antikorlar kullanılarak gerçekleştirilir. Yakalanan VLP'ler daha sonra viral çekirdek protein Gag spesifik antikorlar kullanan SDS-PAGE ve Batı blot analizine tabi tutulur.

Virüs Benzeri Parçacık (VLP) Tabanlı Aşılarda Bir Yakalama Tahlili Kullanılarak Görüntülenen Antijenlerde Nötralizasyona Duyarlı Epitopların Tespiti

Keşfedin antijenik lipozomlar ile B hücre aktivasyonunu fare modellerinde in vitro ve in vivo olarak. Bu yöntem alerji immünoterapisi ve otoimmünite araştırmaları için güçlü antikor yanıtları sağlar.

Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Daha fazla video keşfet