Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Bu yöntem, parafin kesitleme gibi morfolojik alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, kesme ve katlama prosedürünü tamamlaması ve geleneksel yöntemin gerektirdiği transfer işleminden kaçınmasıdır. Başlamak için, önceden üretilmiş tüm parçaları bir çeker ocakta toplayın.

Burada gösterildiği gibi yedi akrilik levhayı birleştirmek için kloroform kullanın. Son ürün, bir kesit kanalı ve bir su banyosu ile donatılmış bir tank olacaktır. Boru şeklindeki elektrikli ısıtma elemanını iki numaralı akrilik levhadaki delikten geçirin.

Elektrikli bir matkap kullanarak, yedi numaralı akrilik levhada küçük bir delik açın ve tankın üzerine dijital bir termostat takın, tankın üzerindeki siyah nokta ile gösterilen amaçlanan su yüzeyinin seviyesinin en az bir santimetre altında olduğundan emin olun. Ekipmanı açmadan önce voltajı 24 voltun altında olacak şekilde ayarlayın. Bölüm atık tepsisini mikrotomdan çıkarın.

Ardından, kesit kanalını mikrotom bıçak tutucusuna bağlamak için nötr silikon dolgu macunu kullanın ve bıçağın üst kısmının üzerine herhangi bir dolgu macunu almamaya dikkat edin. Kloroform ve nötr silikon dolgu macununun katılaşması için zaman tanımak için kurulumun gece boyunca kurumasını bekleyin. Ertesi gün, bıçağı bıçak tutucusuna takın.

Su banyosuna su ekleyin, su yüzeyinin bıçağın üst kısmına değdiğinden emin olun. Konvansiyonel parafin kesitleme işlemini gerçekleştirdikten sonra, gelişmiş parafin kesitlemeye başlamak için ekipmanı açın. Isıtıcıyı açmak için sıcaklık algılama anahtarını kullanın.

Suyu ısıtmak için hedeflenen sıcaklığı bir saat boyunca 38 santigrat derece ile 40 santigrat derece arasında ayarlayın. Parafin gömme ile elde edilen parafin bloğunu değiştirmek için bir bıçak kullanın. Ardından, bloğu mikrotomun kaset kelepçesine yerleştirin ve kilitleyin.

Numuneye hızlı bir şekilde yaklaşmak için daha kalın bölümleri kesin. Numuneler için uygun bir kesit kalınlığına ayarlayın. El çarkını çevirmek, bölümleri otomatik olarak bölümlere, kanala ve banyoya yükleyecektir.

Ardından, numuneyi yavaş ve düzgün bir kesme hareketiyle bölümlere ayırın. Bölümleri, bir çizgide yüzecek şekilde banyo odasına yönlendirin. Baş kısmı hazne duvarına yapışırsa, yüzer durumda tutmak için bir fırça kılavuzu kullanın.

Bölümler su banyosunda tamamen açıldıktan sonra, birkaçını ayırmak için cımbız kullanın ve ardından bunları bir mikroskop lamı üzerinde alın. Slaytları gece boyunca kuruması için 42 santigrat dereceye ayarlanmış bir fırına aktarın. Slaytlar daha sonra analiz edilmeye hazır olana kadar süresiz olarak oda sıcaklığında saklanabilir.

Analiz etmeye hazır olduğunuzda, geliştirilmiş yöntemi kullanarak bölümleri değerlendirmek için hematoksilen-eozin boyamayı kullanın. Bu çalışmada, erişkin fare hipokampal dokusu, erişkin fare böbrekleri, embriyonik fare beyinleri ve zebra balığı gözleri için parafin kesitleri hazırlamak için geliştirilmiş bir yöntem kullanılmıştır. Burada gösterildiği gibi, yeni yöntem kesit kaybını önler ve incelenen her doku tipindeki sağlam bölümlerin oranını artırır.

Tüm seri kesitleme yapılırken, bu yöntemin test edilen tüm numunelerde parafin kesitleme hızını hızlandırdığı görülmektedir. Başka bir deyişle, bu yöntem geleneksel yönteme göre daha kısa sürede daha kaliteli parafin kesitleme sağlar. Zebra balığı optik retinasının seri kesitleri daha sonra hematoksilen-eozin boyaması ile gözlenir.

Geliştirilmiş yöntemden hasat edilen bölümlerin, geleneksel parafin kesitleme yönteminden hasat edilenlerden daha iyi bir bütünlüğe sahip olduğu görülmektedir. Bu iki yöntem karşılaştırıldığında çoğu hasat edilen bölümün kalitesinde önemli bir fark bulunmazken, geleneksel yöntemden hasat edilen bazı bölümlerin nispeten düşük kaliteye sahip olduğu görülmektedir. Kloroform ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken çeker ocak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

Bu prosedürü denerken, hatırlamak, dikkatlice su eklemek ve aşırı doldurmayı önlemek önemlidir.