Name: Hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-14T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Keşfedin yeni doğan sıçanlarda ilk kolostrum besleme öncesi ve sonrası beyin çekirdeklerinin izolasyonunu. Bu yöntem, besin yetersizliği stresinin beyin sinyalleşmesine etkisini incelemek için geliştirilmiştir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Manon Ranger ve Alexandra Schulz bu protokolü hazırlarken kendi yardım için teşekkür ederiz.

Bu çalışmada kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komiteler Columbia Üniversitesi ve New York Eyalet psikiyatrik Enstitüsü tarafından kabul edildi.
1. doku hazırlık
<ol><li>Zamanlanmış gebe rats satıcıdan sipariş.</li>
	<li>İletim başlar kadar zamanlanmış gebe rats onların geldikten sonra hafta içinde onların büyüyen abdomens gözlemleyerek ve daha sonra yavrular için kafes inceleyerek üzerinde beklenen teslim tarihini bakarak her 2 h izleyin.</li>
	<li>Timeli içinde açıklandığı gibi onların ilk beslemek unprimed yavruları (hiçbir beyaz süt göbek karın görüntülerken açıkça görülür) veya ilk beslemek için astarlanmalıdır pups (Bu noktada beyaz mide onların karın üzerinde görünür olacaktır) önce onların kuyruk tarafından pups eldivenli bir el ile kaldırma ne (Şekil S1). Not: İlk kolostrum besleme yavru fok astar olarak adlandırılır; Böylece, bir yavru, sonra onlar kolostrum astarlanmalıdır ilk yem kadar unprimed.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde keskin, temiz cerrahi makas kullanarak unanesthetized yavru başını kesmek.</li>
	<li>Beyin için burun deri orta hat ve kafatasının üst yüzeyi aşağı kesim tarafından kaldırın. O zaman, forseps kullanarak, yavaşça uzakta beyin (Şekil 1A) ortaya çıkarmak ve bregma, (Şekil 1B) kemik plakaları kaldırılmış olarak bir kalemle işaretleme yerelleştirmek için kemik Gözetlemek.</li>
	<li>Hızla tüm beyin polimetil metakrilat beyin kalıp oda sıcaklığında (Şekil 1 c) Dilimleme koronal için oda sıcaklığında yerleştirin.</li>
	<li>Gecikme, 500 mm kalınlığında dilimler taze jilet kullanarak yapmak. Dilimleri için bölümler (Şekil 2) yönünü korumak için bir petri kaudal rostral yatıyordu.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde yapay serebrospinal sıvı (ACSF; 1.0 mM KH2PO4, 26 mM NaHCO3, 118.6 mM NaCl, 3.0 mM KCl, 203,3 mM MgCl2-6 H2O) glikoz olmadan ekleyin ve sürekli karıştırarak üzerinde 28-30 ° C'de 60 dk için dilimleri kuluçkaya bir orbital çalkalayıcı metabolik olarak ve differentially kolostrum astarlanmalıdır dokulara karşı unprimed meydan okumak için.</li>
	<li>Bir beyin atlas33 ve anatomik yapılar doku bölümüne kullanarak yumruk için gerekli beyin çekirdekleri tanımlayın. Petri kabına ilgi çekirdekleri ile bu dilim yerleştirin ve diseksiyon mikroskop hareket.</li>
	<li>Bir kez görüntülendi, 4 en iyi söz konusu çekirdeği yumruk boyutu seçerek bir ambara aracıyla 6 farklı çekirdekleri ve tutarlı bir şekilde örnek (Şekil 2) arasında hızlı bir şekilde yumruk at. Not: Kalan beyin dilim şimdi nerede beyin dokusu çıkarılmış bir delik gerekir. Bu çalışmada, biz kullanarak aşağıdaki çekirdek eksize aşağıda koordinatları. Tüm ön/arka (A / P) Koordinatlar (hariç NTS, Hint kamışı Scriptorius referansla olan) Bregma üzerinden. Tüm sırt/ventral (D/V) koordinatları (NTS, medulla yüzeyinden olan dışında) korteks yüzeyine gelmektedir. A aşağıdaki koordinatları içerir / P, medial/lateral (M/M) ve D/V mm: 1) Yalnız sistem çekirdeği (NTS, A / P, 0.4-0.8; L, ± 0.2; D/V, 0,3 (medulla yüzeyinden), 2) paraventricular çekirdeği (PVN,-0.8; ± 0.2; 0), 3) supra-optik çekirdeği (oğlu,-1.1; ± 1.4; 4,3), 4) korteks (CX, kısmi korteks alanı 1,-2.8; ± 1.5; 0,6), 5) striatum çekirdeği (STR,-0.0; ± 1,6; 1,8) ve 6) medial preoptic çekirdek (MPO,-0.6; ± 0.2; 4.2).</li>
	<li>Hızla proteaz inhibitörleri ve fosfataz inhibitörleri 60 dakika (bkz. Adım 2.3) içeren buz gibi protein ayıklama arabellek 0,06 ml delikli çekirdeklerin bırakın.</li>
</ol>2. protein çıkarma
<ol><li>Bir gün önce beklenen yavru teslim protein lizis kiti (Malzemeler tablo) kullanarak protein ekstraksiyon solüsyonu hazırlayın.</li>
	<li>(Buz) dondurulmuş (-20 ° C) sulu çözüm lizis arabellek kitinin fosfataz ve proteaz inhibitörleri, çözülme ve lizis tampon ve proteaz/fosfatazlar inhibitörleri DMSO çözeltisi buza koyun.</li>
	<li>1.85 mL lizis arabellek temiz, buz gibi 15 mL tüp içine ekleyin. Daha sonra sulu çözüm inhibitörleri ve DMSO çözünmüş inhibitörleri 0.05 mL 0.1 mL ekleyin. Son olarak, kap ve kısaca girdap tüp ve kadar kullanmak-20 ° C'de saklayın.</li>
	<li>24 temiz microcentrifuge tüpler (0.5 mL her) lizis yordam için etiket. Beyin kolostrum unprimed grubunun (U) [6 kişi (L) ve 6 doğru (R) beyin çekirdekleri] ve etiket çekirdeği kısaltma göre ücret belirlenmesi 12 tüpler yan ve durumu (Örn., NTS-L-U, NTS-R-U, vb). 12 tüpler kolostrum astarlanmalıdır örnekleri için ikinci grup etiket.</li>
	<li>Tüpler iki ek kümesi adım 2.4 (1,5 mL Eppendorf tarzı borular kullanarak) hisse senedi proteini özleri ve numune hazırlama (0.5 mL tüpler kullanarak) ilk kümesi için yapılan gibi etiketleyin. Bu tüpler iki ayrı, etiketli dondurucu kutularını (her biri 100 tüpler için tasarlanmış) unutmayın. Bir kutu unprimed örnekleri ve diğer astarlanmalıdır örnekleri için kullanılacaktır.</li>
	<li>Belgili tanımlık pups teslim gün ve beyin dilimler halinde ACSF, aliquot 0,06 mL lizis çözüm lizis yordamı tüpler (Kimden adım 2.4) içine kuluçka sırasında lizis çözüm buz çözme ve çekirdekleri yumruklar ekleyin ve buz 60 dk için kuluçkaya.</li>
	<li>İnkübe lysed çekirdeği 30 dk içinde soğutmalı mini santrifüj 14000 rpm (10.000 x g) için santrifüj kapasitesi ve dikkatle 0,055 mL süpernatant düzgün ayarlanmış bir pipet ile Aspire edin. Süpernatant önceden soğutulmuş 1,5 mL stok tüpler içine (adımından 2.5) aktarmak ve onları buza koy. (-20 ° C'de) protein hisse senedi tüpler dondurma önce süpernatant 0.012 mL (adımından 2.5) ilk numune hazırlama için 0.5 mL önceden soğutulmuş tüpler içine transfer ve buz üzerinde bırakın.</li>
</ol>3. numune hazırlama-kapiller Protein ölçümü için
<ol><li>Bir kit kullanın ve reaktifleri üreticinin talimatına göre ayrılması için hazır olun. Master-mix reaktif 0,003 mL 0.5 mL (Kimden adım 2.5) tüpler buzda 0.012 mL proteini özleri içeren etiketli 12 örneklerinde her ekleyin.</li>
	<li>Isıtma blok 95 ° c açın ve biotinylated molekül ağırlıklı (MW) merdiven bir tüp 0,016 mL deiyonize su ile 3.1. adımda hazırlanan reaktif 0,004 mL ekleyin. Merdiven ve örnekleri tabiatını, merdiven tüp ve unprimed proteini özleri 12 örnekleri 5 min için 95 ° C ısı bloğunda yerleştirin ve kadar kullanmak 4 ° C'de depolamak için.</li>
	<li>Adım protein ayıklama için numune hazırlama, 2.0 3.2, kolostrum astarlanmalıdır sıçanlarından emir yumruk çekirdekler için yineleyin.</li>
</ol>4. Elektroforez hazırlık
<ol><li>(-80 oC derin dondurucuda depolanan) reaktif tezgah üzerinde etiketleme biotin çözülme ve üreticinin yönergeleri takip 4 ° C'de buzda protein algılama çantası hazırla.</li>
	<li>Luminol 0.15 mL peroksit 0.15 mL ile mix ve 0,01 mL plaka otomatik Batı makine için 25 wells (satır E, kuyu 1 / 25) yükleyin. Streptavidin-HRP 0,008 mL Seti'nden kuyu D1 D25 için yük</li>
	<li>0,01 mL antikor Dilüent çözeltisi wells C1 C25 ve B1 içine yükleyin.</li>
	<li>24 protein örnekleri ve merdiven tüpler kısa bir süre (2-3 saniye) bir minicentrifuge tüp kapağıyla buharlaştırılmış su havuzu için spin.</li>
	<li>12 unprimed örnekleri 0,003 mL wells A2 A13, 0,003 mL 12 kolostrum astarlanmalıdır örnekleri içine kuyu A14 A25 için ve iyi A1 içine biotinylated merdivenin 0.005 mL yüklemek.</li>
	<li>Satır F boş bırakın ve her biri 5 bölmeleri altındaki satırı F. kalan yordamları sırasında buharlaşma önlemek için kapak plastik kapağı ile plaka 3 satırlarının her birindeki yıkama arabelleği 0,45 mL yüklemek.</li>
	<li>Kısaca girdap çözdürülen biotin 0.15 mL reaktif için belirlenen onun tüp; ekleyin ve reaktif etiketleme o zaman için toplam protein sulandırma Ajan 0.15 mL ve homojenliği için karıştırın.</li>
	<li>Plaka kapağını çıkarın ve kuyu B2 B25 için 1 ve 2 ajanların 0,01 mL yüklemek. Plaka kapak ve herhangi bir hava kabarcıkları çeşitli çözümlerinden kaldırmak için 1000 x g, 10 dk santrifüj kapasitesi. Boş bir levha santrifüj dengesi için kullanın.</li>
</ol>5. Elektroforez
<ol><li>Plaka dönüyor iken çalışan bir dosyası otomatik Batı bilgisayar makine bağlı toplam protein tahlil çalıştırmak için "dosya" açılan sayfadan gösteren ve ilgili nokta tıklatarak açın.</li>
	<li>Bilgisayar kuyuda tarafından örnekleri açıklama ekleyin. Plaka santrifüj kaldır kapağını kaldır ve dikkatle ayrılık çözüm bölmeleri alüminyum kapağından akasındaki.</li>
	<li>Plaka otomatik Batı enstrüman yerleştirin, kapiller kartuş kutusu kapağından akasındaki, belirlenen yerinde kartuşu takın ve kapıyı kapat.</li>
	<li>"Çalıştır" düğmesini tıklatın ve tahlil ("Toplam protein") türü ile istendiğinde adına örnekleri yazın (örneğin, "unprimed 2-13 ve kolostrum astarlanmalıdır 14-25"). Tıkırtı "OK" ve aktif çalışma tarih ve çalışma dosyasının kimliği numarası tarafından istendiğinde Çalıştır bittiğinde zaman not alın.</li>
	<li>Çalıştır (başladıktan sonra 170 dk) sonunda, enstrüman kapıyı aç, kapiller kartuşunu çıkarın ve "Sharps" bertaraf atmak. Biyolojik madde elden plaka atmak.</li>
	<li>Çalışma dosyasının analiz sayfasını ayırma Eğriler simgesini tıklatın ve tüm örneklerini düzgün çalışması ve birden fazla protein eğriler tüm kılcal gösterilen kontrol edin.</li>
</ol>6. proteinler Sinyal Analizi
<ol><li>Etiketli 1,5 mL Tüp, tavşan Fosfo-eIF2a (p-eIF2a) antikor anti 0,003 mL ekleyin ve antikor uygun algılama Seti'nden Dilüent 0.3 mL (1: 100 seyreltme) askıya. Daha sonra buz üzerinde tutmak.</li>
	<li>Luminol tüp etiket ve bu algılama modülü Seti'nden 0.15 mL luminol ve peroksit 0.15 mL ekleyin ve içine kuyu E1 E25 taze, otomatik Batı plaka için 0,01 mL dağıtmak.</li>
	<li>Tavşan antikor wells D2 D25 için içine anti ikincil 0,01 mL dağıtmak ve streptavidin-HRP 0,01 mL teçhizat--dan iyi D1 için ekleyin.</li>
	<li>Birincil antikor (Kimden adım 6.1) içine kuyu C2 C25 için 0,01 mL dağıtmak ve kuyu C1 ve B1 B25 için 0,01 mL antikor Dilüent 2 çözeltisi ekleyin.</li>
	<li>Satır F wells boş bırakın ve yıkama arabelleği 0,45 mL 5 bölmeleri F satırının altında 3 satır içine doldurun.</li>
	<li>Kısa bir süre buzdolabında örnekleri 3 için spin s ve her örnek 0,003 mL satıra A onlar olduklarını da sözlerine ekledi için A25 A2 başlayan toplam protein tahlil için aynı sırada ekleyin. A1 iyi ve plaka kapak için biotinylated MW merdiven 0.005 mL ekleyin.</li>
	<li>Plaka santrifüj kapasitesi 4,8 adımda yapılır. Plaka dönüyor, (otomatik Western ilişkili yazılım ve bilgisayar) yeni bir çalışma dosyası açın ve açılan sayfada "dosyasından ilgili nokta tıklatarak bir moleküler boyutu tahlil çalıştırmak için" gösterir.</li>
	<li>Tahlil sayfa örnek adları her kılcal yazın, sonra da ayrılmış nokta ve ikincil Anti-tavşan antikor altındaki birincil antikor adını yazın.</li>
	<li>Bu sefer çalışma dosyasına verilen ad-meli var olmak "unprimed 2-13 ve kolostrum astarlanmalıdır 14-25 p-eIF2a" dışında Santrifüjü sonunda adımları 5.3-5,5, tekrarlayın.</li>
	<li>Elektroforez boşanmadan sonra 40-43 kDa boyutlarında antijenleri doruklarına bağışıklık-reaktivite için çalışma dosyasını denetleyin. MW zirvesinin bu boyutu olduğu eksik, eğrisi sağ tıklatın ve boyut ve eğri aşağıda rasgele miktar kaydedilir sağlar zirvesine MW eklemek için aşağı açılan liste içinde gösterir.</li>
</ol>7. sonuçlar işleniyor
<ol><li>Toplam protein için bir elektronik tablo dosyasını çalıştırın otomatik Western açık dosyasını çalıştırın ve bir kimlik numarası sağlar.</li>
	<li>Toplam protein tahlil Analiz sayfasında eğrisi modunda çalışma dosyasını açın ve bireysel kılcal Peaks'e işaretleyin. Sonra kopyalayın ve bunları elektronik tabloya yapıştırabilirsiniz ve tüm kılcal kaydedilen tüm tepeler eğri altındaki alanları toplamı.</li>
	<li>Ayrı bir sütunda protein toplam miktarı her sütun için Yerleştir kapiller numaraları, ilgili beyin çekirdekleri ve kimlik numaraları çalışma dosyalarının adları ile.</li>
	<li>P-eIF2a antijen için ve tek bir sütunda bir elektronik tablo açın, her taraftan kılcal yan-tarafından-eğri altındaki alan kayıt onun ilgili kapiller numarası, beyin çekirdeği ve kimlik numarası çalışma dosyasının adı.</li>
	<li>Toplam protein sütun (paralel p-eIF2a eğrisi miktarları için) üçüncü bir elektronik tabloya kopyalayın ve p hesaplamak-eIF2a:total protein oranlarının üçüncü bir sütun.</li>
	<li>Her beyin çekirdeği için 4-6 arası adımları sonuçları toplamak, çekirdeği gruplar halinde onları düzenlemek ve bir çubuk grafik oluşturmak.</li>
</ol>

<ol><li>Hietaniemi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiles+in+fetal+and+neonatal+rat+offspring+of+energy-restricted+dams%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutrigenetics+and+Nutrigenomics%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiles in fetal and neonatal rat offspring of energy-restricted dams.</a> Journal of Nutrigenetics and Nutrigenomics. 2 (4-5), 173-183 (2009).</li>
<li>Okabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homogenous+glycine+receptor+expression+in+cortical+plate+neurons+and+Cajal-Retzius+cells+of+neonatal+rat+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Homogenous glycine receptor expression in cortical plate neurons and Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex.</a> Neuroscience. 123 (3), 715-724 (2004).</li>
<li>Mailleux, P., Takazawa, K., Erneux, C., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+the+neurons+containing+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+3-kinase+and+its+messenger+RNA+in+the+developing+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Distribution of the neurons containing inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase and its messenger RNA in the developing rat brain.</a> Journal of Comparative Neurology. 327 (4), 618-629 (1993).</li>
<li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+and+Human+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Oxytocin and Human Evolution.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. , (2017).</li>
<li>Sippel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+and+Stress-related+Disorders%3A+Neurobiological+Mechanisms+and+Treatment+Opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Chronic+Stress+%28Thousand+Oaks%29%22%5BJournal%5D)">Oxytocin and Stress-related Disorders: Neurobiological Mechanisms and Treatment Opportunities.</a> Chronic Stress (Thousand Oaks). 1, (2017).</li>
<li>Agnati, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspects+on+the+integrative+actions+of+the+brain+from+neural+networks+to+%22brain-body+medicine%22%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Receptors+and+Signal+Transduction+Research%22%5BJournal%5D)">Aspects on the integrative actions of the brain from neural networks to "brain-body medicine".</a> Journal of Receptors and Signal Transduction Research. 32 (4), 163-180 (2012).</li>
<li>Welch, M. G., Margolis, K. G., Li, Z., Gershon, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+regulates+gastrointestinal+motility%2C+inflammation%2C+macromolecular+permeability%2C+and+mucosal+maintenance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+Physiology%3A+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oxytocin regulates gastrointestinal motility, inflammation, macromolecular permeability, and mucosal maintenance in mice.</a> American Journal Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 307 (8), G848-G862 (2014).</li>
<li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+developmental+regulation+of+oxytocin+%28OT%29+and+oxytocin+receptors+%28OTR%29+in+the+enteric+nervous+system+%28ENS%29+and+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Expression and developmental regulation of oxytocin (OT) and oxytocin receptors (OTR) in the enteric nervous system (ENS) and intestinal epithelium.</a> Journal of Comparative Neurology. 512 (2), 256-270 (2009).</li>
<li>Prakash, B. S., Paul, V., Kliem, H., Kulozik, U., Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+oxytocin+in+milk+of+cows+administered+oxytocin%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Determination of oxytocin in milk of cows administered oxytocin.</a> Analytica Chimica Acta. 636 (1), 111-115 (2009).</li>
<li>Solangi, A. R., Memon, S. Q., Mallah, A., Khuhawar, M. Y., Bhanger, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+separation+of+oxytocin%2C+norfloxacin+and+diclofenac+sodium+in+milk+samples+using+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Chromatography%22%5BJournal%5D)">Quantitative separation of oxytocin, norfloxacin and diclofenac sodium in milk samples using capillary electrophoresis.</a> Biomedical Chromatography. 23 (9), 1007-1013 (2009).</li>
<li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+modulates+markers+of+the+unfolded+protein+response+in+Caco2BB+gut+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+and+Chaperones%22%5BJournal%5D)">Oxytocin modulates markers of the unfolded protein response in Caco2BB gut cells.</a> Cell Stress and Chaperones. 19 (4), 465-477 (2014).</li>
<li>Klein, B. Y., Tamir, H., Hirschberg, D. L., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X13002398">Oxytocin modulates mTORC1 pathway in the gut.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 432 (3), 466-471 (2013).</li>
<li>Klein, B. Y., Tamir, H., Ludwig, R. J., Glickstein, S. B., Welch, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colostrum+oxytocin+modulates+cellular+stress+response%2C+inflammation%2C+and+autophagy+markers+in+newborn+rat+gut+villi%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+an+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi.</a> Biochemical an Biophysical Research Communications. 487 (1), 47-53 (2017).</li>
<li>Donnet-Hughes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+role+of+the+intestinal+microbiota+of+the+mother+in+neonatal+immune+education%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nutritional+Society%22%5BJournal%5D)">Potential role of the intestinal microbiota of the mother in neonatal immune education.</a> Proceedings of the Nutritional Society. 69 (3), 407-415 (2010).</li>
<li>Perez, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+imprinting+of+the+neonatal+immune+system%3A+lessons+from+maternal+cells%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Bacterial imprinting of the neonatal immune system: lessons from maternal cells?</a> Pediatrics. 119 (3), e724-e732 (2007).</li>
<li>Takeda, S., Kuwabara, Y., Mizuno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentrations+and+origin+of+oxytocin+in+breast+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinolcia+Japonica%22%5BJournal%5D)">Concentrations and origin of oxytocin in breast milk.</a> Endocrinolcia Japonica. 33 (6), 821-826 (1986).</li>
<li>Quintana, D. S., Outhred, T., Westlye, L. T., Malhi, G. S., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+oxytocin+administration+on+brain+activity%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">The impact of oxytocin administration on brain activity: a systematic review and meta-analysis protocol.</a> Systematic Reviews. 5 (1), 205(2016).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.463.8516&rep=rep1&type=pdf">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), 79-83 (1979).</li>
<li>Orr, M. E., Garbarino, V. R., Salinas, A., Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+Postnatal+Brain+Development+in+the+Longest-Lived+Rodent%3A+Prolonged+Maintenance+of+Neotenous+Traits+in+the+Naked+Mole-Rat+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Extended Postnatal Brain Development in the Longest-Lived Rodent: Prolonged Maintenance of Neotenous Traits in the Naked Mole-Rat Brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 504(2016).</li>
<li>Hansson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-resolved+quantitative+proteome+analysis+of+in+vivo+intestinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Time-resolved quantitative proteome analysis of in vivo intestinal development.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 10 (3), (2011).</li>
<li>Mochizuki, K., Yorita, S., Goda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+jejunum+of+rats+during+the+transient+suckling-weaning+period%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nutritional+Science+and+Vitaminology+%28Tokyo%29%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the jejunum of rats during the transient suckling-weaning period.</a> Journal of Nutritional Science and Vitaminology (Tokyo). 55 (2), 139-148 (2009).</li>
<li>Rinaman, L., Banihashemi, L., Koehnle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+life+experience+shapes+the+functional+organization+of+stress-responsive+visceral+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Early life experience shapes the functional organization of stress-responsive visceral circuits.</a> Physiology and Behavior. 104 (4), 632-640 (2011).</li>
<li>Johannes, G., Sarnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cap-independent+polysomal+association+of+natural+mRNAs+encoding+c-myc%2C+BiP%2C+and+eIF4G+conferred+by+internal+ribosome+entry+sites%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Cap-independent polysomal association of natural mRNAs encoding c-myc, BiP, and eIF4G conferred by internal ribosome entry sites.</a> RNA. 4 (12), 1500-1513 (1998).</li>
<li>Rinaman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindbrain+noradrenergic+A2+neurons%3A+diverse+roles+in+autonomic%2C+endocrine%2C+cognitive%2C+and+behavioral+functions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hindbrain noradrenergic A2 neurons: diverse roles in autonomic, endocrine, cognitive, and behavioral functions.</a> American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (2), R222-R235 (2011).</li>
<li>Walker, C. D., Toufexis, D. J., Burlet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic+and+limbic+expression+of+CRF+and+vasopressin+during+lactation%3A+implications+for+the+control+of+ACTH+secretion+and+stress+hyporesponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic and limbic expression of CRF and vasopressin during lactation: implications for the control of ACTH secretion and stress hyporesponsiveness.</a> Progress in Brain Research. 133, 99-110 (2001).</li>
<li>Montiel-Castro, A. J., Gonzalez-Cervantes, R. M., Bravo-Ruiseco, G., Pacheco-Lopez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiota-gut-brain+axis%3A+neurobehavioral+correlates%2C+health+and+sociality%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Integrative+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The microbiota-gut-brain axis: neurobehavioral correlates, health and sociality.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 7, 70(2013).</li>
<li>Blevins, J. E., Ho, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+oxytocin+signaling+in+the+regulation+of+body+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Endocrine+and+Metabolic+Disorders%22%5BJournal%5D)">Role of oxytocin signaling in the regulation of body weight.</a> Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 14 (4), 311-329 (2013).</li>
<li>Welch, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+administration+of+secretin+and+oxytocin+inhibits+chronic+colitis+and+associated+activation+of+forebrain+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+Motility%22%5BJournal%5D)">Combined administration of secretin and oxytocin inhibits chronic colitis and associated activation of forebrain neurons.</a> Neurogastroenterology Motility. 22 (6), 654(2010).</li>
<li>Berthoud, H. R., Neuhuber, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+chemical+anatomy+of+the+afferent+vagal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Autonomic+Neuroscience%3A+Basic+and+Clinical%22%5BJournal%5D)">Functional and chemical anatomy of the afferent vagal system.</a> Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 85 (1-3), 1-17 (2000).</li>
<li>Taniuchi, S., Miyake, M., Tsugawa, K., Oyadomari, M., Oyadomari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+stress+response+of+vertebrates+is+regulated+by+four+eIF2alpha+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Integrated stress response of vertebrates is regulated by four eIF2alpha kinases.</a> Scientific Reports. 6, 32886(2016).</li>
<li>Altschuler, S. M., Bao, X. M., Bieger, D., Hopkins, D. A., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscerotopic+representation+of+the+upper+alimentary+tract+in+the+rat%3A+sensory+ganglia+and+nuclei+of+the+solitary+and+spinal+trigeminal+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Viscerotopic representation of the upper alimentary tract in the rat: sensory ganglia and nuclei of the solitary and spinal trigeminal tracts.</a> Journal of Comparative Neurology. 283 (2), 248-268 (1989).</li>
<li>Shapiro, R. E., Miselis, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+central+neural+connections+of+the+area+postrema+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The central neural connections of the area postrema of the rat.</a> Journal of Comparative Neurology. 234 (3), 344-364 (1985).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (1997).</li>
<li>Nayak, R., Pintel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viruses+can+induce+phosphorylation+of+eIF2alpha+via+PKR+activation%2C+which+can+be+overcome+by+helper+adenovirus+type+5+virus-associated+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viruses can induce phosphorylation of eIF2alpha via PKR activation, which can be overcome by helper adenovirus type 5 virus-associated RNA.</a> Journal of Virology. 81 (21), 11908-11916 (2007).</li>
<li>Zaborske, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+tRNA+charging+and+activation+of+the+eIF2+kinase+Gcn2p%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of tRNA charging and activation of the eIF2 kinase Gcn2p.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (37), 25254-25267 (2009).</li>
<li>Hollis, J. H., Lightman, S. L., Lowry, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+systemic+and+visceral+sensory+information+by+medullary+catecholaminergic+systems+during+peripheral+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Integration of systemic and visceral sensory information by medullary catecholaminergic systems during peripheral inflammation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1018, 71-75 (2004).</li>
<li>Klein, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+opposes+effects+of+bacterial+endotoxin+on+ER-stress+signaling+in+Caco2BB+gut+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Oxytocin opposes effects of bacterial endotoxin on ER-stress signaling in Caco2BB gut cells.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1860 (2), 402-411 (2016).</li>
<li>Kaltschmidt, B., Kaltschmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF-kappaB+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">NF-kappaB in the nervous system.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (3), a001271(2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Mikrodiseksiyon ayrı olan bir tekniği, OTR zengini beyin çekirdekleri yenidoğan sıçan beyin bu yazıda sunulur. Bu nöronlar yüksek, beyindeki iyi karakterize hücre çekirdeği içinde bile uzmanlaşmış olan bu de tanınır. Sağlam hipotez testleri belirli OTR zengini çekirdeği yalıtmak için son derece tekrarlanabilir bu yaklaşım sağlar. Otomatik Western blot kullanarak, tutarlılık ve tekrarlanabilirlik sonuçları daha da düzeldi. Bu tekniğin bir sınırlama mütevazı beyin yumruk değişkenlik kalırken; Bu teknik, tek hücreli, tüm be...

Gün-için-hafta Doğum sonrası boyunca meydana gelen erken beyin gelişimi anlayışımızı aksine nispeten az dinamik değişiklikleri sıçanlarda yaşamın ilk saatlerinde meydana gelen sayısız hakkında bilinir. Önemli bir sorun küçük boyutu yenidoğan sıçan beyin ve ayrık beyin bölgeleri veya tek hücre yalıtmak yüksek teknoloji ürünü araçlar için bir gereklilik olmuştur. Çalışmalar kez aktif sinyal moleküllerinin işlev düzeylerini sağlam bir anlayış vermez gen transkripsiyon ve translasyon değil1,2, değerlendirmek. Diğerleri ifade ifade düzeyleri3miktar için izin vermeyen immünhistokimya başvuru beyin bölgelerine kullanarak inceleyin. Bugüne kadar hiçbir çalışma gerektiren hızlı yalıtım ve fedakarlık ve protein ifade ve protein fosforilasyon Western kullanarak ölçüm ayrı beyin bölgelerinde yem rats ilk kolostrum ile ilişkili yollar sinyal aktif inceledi kurutma. Beyin mikrodiseksiyon büyük ve daha büyük beyin üzerinde gerçekleştirilir iken, bir tek hücre beyin yumruk P0 beyinde gerçekleştirme başvuru belirlenememiştir. Bu kağıt kısıtlı protein ifade nispeten küçük örneklerinde ölçmek için nispeten düşük teknoloji yumruk tekniği ve bir Western blot yordamı kullanarak yenidoğan beyin bölgelerinde izole için bir protokol sunar. Bu iletişim kuralı translasyonel modifikasyonlar ve protein ifade değerlendirme gerektiren araştırma soruları için uygun olabilir (Örn., fosforilasyon) herhangi bir tür küçük beyni nispeten sınırlı bölgelerde aşağıdaki koşullarda Kullanıcı bir atlas ve tanımlanabilir yerler ile görsel olarak beyin bölgesi ilgi belirlemek için.
Bu teknik yenidoğan rats ilk kolostrum besleme, oksitosin (OT) zengin olduğu sonucu beyinde meydana gelen değişiklikleri anlamak için geliştirilmiştir. OT uzun süt hayal kırıklığı ve rahim kasılması uyarmak onun yetenek için bilinmektedir. Ancak, OT şimdi birçok vücut fonksiyonları ve davranışları4Yönetmelikte çok çeşitli roller oynamak için bilinir. Örneğin, OT stres ve inflamasyon adaptif affiliative davranışlar5ile birlikte karşı çıkıyor, mide boşalma gecikmeler ve bağırsak transit yavaşlatır. OT reseptörleri (OTR) enterik sinir hücreleri ve bağırsak epitel6,7,8' tespit edilmiştir. OT, gastrointestinal etkilerini erken postnatal dönemde bebek için özellikle önemlidir. Örneğin, emzirme OT önemli miktarda teslim yenidoğan gut9,10ile ilişkilidir ve veri OTR ağır dönem8emdikleri süt sırasında duodenal villus overexpressed göster.
Vitro deneyler bir gut hücre satırı kullanarak hücresel düzeyde bu oksitosin yolu11,12 sinyal stres önemli molekülleri modüle ve proteinler Çeviride bir düzenleyici rol oynar göstermiştir 12. bu çalışmalar bileşenleri süt anneden eksojen oksitosin de dahil olmak üzere, hücresel stres13azaltmak için ventilasyon gelişeceğini protein yanıtta önemli olduğunu göstermektedir.
Vivo ve ex vivo çalışmalar kolostrum OT yeni doğmuş fare gut villus hücresel stres tepki, inflamasyon ve autophagy işaretleyicilerini modüle göstermiştir. Gut microbiota için kolostrum14,15 ve OT9 gibi hormonlar dahil çok sayıda protein anneden aynı anda maruz kaldığında yenidoğan enterositler önemli hücresel stres luminal yan acı , 10 , 16.
OT etkileri beyin eğitimi17olmuştur. Ancak, gut erken postnatal dönemde gösterdi OT sinyal mekanizmaları beyinde incelenmiştir değil. Bu yazıda, ayrık beyin çekirdekleri yenidoğan sıçan beyin sapı ve Elektroforez kullanarak hipotalamus izole bir yöntem izole beyin bölgeleri profil için kullanılır. Bu yöntem genel hücre beyin alanlarda Doğum, önce ve sonra en düşük fiyat gliyal/nöronal dizini olan beyin dokusunda emdikleri ilk süt mümkün olduğunca yakın sinyal durumunu yakalamak için hedeftir. Bu tekniğin geliştirilmesi için gerekçe bu nöronların otomatik bir Western blot kullanarak ex vivo çalışmalar için daha homojen bir koleksiyon ile sınırlı, mikroskopik beyin bölgeleri yenidoğan pups yalıtım hızlı için sağlanmıştır metodoloji, nispeten küçük disseke örnekleri üzerinde son derece tutarlı sonuçlar sunuyor. Ön çalışma bir eksiklik daha fazla brüt diseksiyon (beyin dilimler veya tüm beyin) ve büyük hayvanlar18,19içerir. Dalgalar doğumdan sonra gliyal farklılaşma featuring son derece dinamik ve Genç yavrularını beyinlerdir. Belgili tanımlık pups ilk besleyerek etkisinde beyin değişiklikleri incelemek için tekrarlanabilir diseksiyon ile sınırlı nöronal hücre çekirdeği eğitim gereklidir.
Beyin gelişimi sırasında beyin bölgeleri üzerindeki etkisi nadiren okudu, ancak süt yem genellikle sağlık veya gen ifadesinde (örneğin, enterositler20,21), üzerindeki immünolojik ve beslenme etkisi için analiz edilir. Süt transit gut etkisi beyin fonksiyonu referans olarak gut cholecystokinin reseptörleri vagus geçiş beyin sapı çekirdeği, ancak hücre içi sinyal yolları22analiz edildi. Orada geniş bir edebiyat gelişmekte olan yenidoğan beyin güvenlik açığı için yetersiz annelerin beslenme sırasında gebelik23, ama stres ve inflamasyon sinyalleri değil ele alınmaktadır. Önemlisi, geçerli yöntem visseral uyaranların vagus röle üzerinden kan tarihi kolostrum uyaranlara izole bir fenomen gün sıfır sıçan yenidoğanlarda yararlanır. Bu olgunlaşmamış çekirdeği tractus solitarius (NTS) tarafından karakterize sözde stres Hipo-yanıt dönemdir-hipotalamik devre NTS, paraventricular çekirdeği (PVN), sınırlayan hemen Doğum24,25 sonra ve supraoptic çekirdeği (oğlu) kan tarihi uyaranlara sinyalleri.
Bu yöntem birden çok sinyal yolları analiz için yararlıdır ve beyin dokusu içinde rats, anneler meydan var ek olarak ya da değil her türlü tedavi Doğum sonrası gün-0 hasat olması koşuluyla nöronal hücre için nispeten sınırlı Hamilelik sırasında. Çöp sinyal ön besleme karşı yem kolostrum etkileri için analiz edilebilir. Zavallı zengin protein verim karşı ile beyin bölgeleri arasında sinyal karşılaştırırken, bu yöntem bağışıklık-Nefelometri protein antijenleri için paralel kılcal polipeptid bantlarında toplam protein tayini kılcal sağlar. Bu yöntem, rasgele birimleri, standart nicel eğrileri olmadan aynı antikor ve kılcal başına toplam protein referansı tarafından elde edilen sonuçlar kullanarak sayısal karşılaştırma sağlar. Farklı antikor tarafından elde edilen sonuçlar karşılaştırma yalnızca nicel standart eğrileri kullanılarak mümkündür.
Çift yönlü gut ve beyin ve bu arasında meydana gelen her iki organ26işlevinde etkisi olabilir sinyal değerlendirmesi için bu yönteme izin. Kapsamlı son yıllarda27' eğitimi aldı, oksitosin ve gıda alımı arasındaki ilişkiyi artan oksitosin sinyalizasyon ve besin kullanılabilirlik arasındaki bağlantıyı destekler. Bu çalışmalar da açıkları hipotalamik oksitosin sinyal içinde indirimleri ile birleştiğinde bu enerjiyi converse kavramı destekler.
OT etkisi beyin aktivitesi üzerinde daha önceki çalışmalar indüklenen bağırsak iltihabı olan vagotomy28için ateşe dayanıklı hipotalamik PVN, amigdala ve piriform kortekste cFos transkripsiyon elde edildi gösterdi. Ancak, sistemik OT infüzyonu ile secretin gut28provoke inflamatuar reaksiyon beyin cFos yanıtı azalmıştır. Bu eksojen OT etkisini vagus Röleler, muhtemelen kan yoluyla sinyal molekülleri alan postrema6,29taşınan üzerinden başka yolları tarafından gerçekleştirildiği ileri sürdü.
Bu çalışmada, daha önce gut gözlemledim hücresel stres sinyal yolları beyinde değerlendirildi. Hipotez süt bileşenleri korumak veya inflamasyon etkisi bağırsak geçirgenliği mikrobiyal ve diğer metabolitler için erteleme ve sırayla, beyin üzerindeki etkileri işlev yapıldı. Önce ve sonra tarafından kolostrum13, astar villus içinde bulunan BiP sinyali karşı IKB açık uzlaşmaz farklılıklar hala süreci geliştirmek, yenidoğan bebeklerin, beyinlerinin bu gut kolostrum kaynaklı sinyaller hissediyorum önerdi.
Endoplazmik retikulum stres ile ilişkili olan önceki gut deneylerde kullanılan sinyal protein işaretleri ölçüldü. ER refakatçi BIP, (Bu bir stres yanıt ıntegrator30hizmet vermektedir) çeviri başlatma faktörü eIF2a, eIF2a kinaz p dahil-PKR ve iki iltihap sinyalli proteinler (NF-kB ve onun inhibitörü, IKB).
Yeteneklerini salgılar ya OT için cevap erişkinlerde temel altı beyin bölgeleri seçilmiştir. Üst medulla bulunan NTS, visseral giriş ilk geçiş ve gut31 ve muhtemelen kan tarihi sitokinler, toksinler ve hormonlar aracılığıyla bitişik alan-postrema32vagus duyusal nöronlarda üzerinden doğrudan sinyal alır. PVN, supraoptic çekirdeği (oğlu), striatum nükleuslar (STR), serebral korteks (CX) ve medial preoptic çekirdeği (MPO) almak gut NTS üzerinden gelen sinyal.
Sonuçları bu hemen postnatal dönem kolostrum priming önce ve sonra hemen ilk besleme PVN ve oğlu ile karşılaştırıldığında NTS farklıdır hücresel stres tepki gösterdi. CX içinde sinyal, STR ve MPO PVN ve oğlu, bundan de farklıydı. Daha önce hücre stres ve bağırsak iltihabı modüle gösterilen OT ayrı koruyucu işlevlerinin büyük olasılıkla beyin bazı alanlara göre hissettim. Toplu olarak, verilerin hücresel düzeyde, Doğum sonra ilk saatlerde beyin besin yetersizliği ile ilişkili metabolik stres yanıt verdiğini gösterir. Verileri ölçüde ve yem kolostrum modülasyonlu etkileri yönünü bölge bağımlı olduğunu ve bazı bölgelerde, onlar daha önce gösterilen gut OT etkileri ayna de gösterilir.

<table><tbody><tr><td>Bradford çözümü</td><td>Bio Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protein lizis kiti</td><td>Protein basit</td><td>CBS403</td><td>Bicine / CHAPS</td></tr><tr><td>WES kitleri</td><td>Protein basit</td><td>WES-Mouse 12-230 ana kiti (PS-MK15), WES-Rabbit 12-230 ana kiti (PS-MK14), WES 12-230 kDa toplam Protein ana kiti (PS-TP07)</td><td></td></tr> <tr><td>anti-fare IgG HRP konjuge</td><td>Protein basit</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-fosfo-eIF2a</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>SER51, 9721</td><td></td></tr><tr><td>fare mAb anti-PKR</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>2103</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-fosfo-PKR</td><td>Millipore</td><td>Thr451, 07-886</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan mAb anti-PKR</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>12297</td><td></td></tr><tr><td>tavşan mAb anti-GAPDH</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>2118</td><td></td></tr><tr><td>fare mAb anti-fosfo-IKB</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>9246</td><td></td></tr><tr><td>fare mAb anti-IKB</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>4814</td><td></td></tr><tr><td>tavşan anti-BiP</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>3183</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti GCN2</td><td>Hücre Sinyalizasyon teknolojisi</td><td>3302</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan mAb anti-fosfo-GCN2</td><td>BIORBYT</td><td>T899</td><td></td></tr><tr><td>hamile Sprague-Dawley sıçanları</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Punch cihazı</td><td>WellTech Rapid Core veya Harris Uni-Core</td><td>0.35, 0.50, 0.75, 1.0, 1.20, 1.50</td><td></td></tr></tbody></table>

hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

Bu iletişim kuralı oksitosin reseptör zengin beyin çekirdekleri yenidoğan beyinde önce ve sonra ilk kolostrum besleme yalıtmak için hedeftir. Ifade için metabolik stres yanıt vermek için bilinen proteinlerin beyin çekirdekleri yalıtır Western blot kullanarak ölçülmüştür. Bu vücuttaki metabolik stres kaynaklı besin yetersizliği tetiklenen nöronal stres değerlendirmek için yapılmıştır. Biz daha önce ventilasyon besin yetersizliği gut metabolik stres aydınlığa çıkartıyor gösterdi. Ayrıca, kolostrum oksitosin hücresel stres tepki, inflamasyon ve autophagy işaretleyicilerini yeni doğmuş fare gut villus öncesinde ve ilk yem sonra gelen. Endoplazmik retikulum stres ile ilişkili protein işaretleri sinyal [ER refakatçi bağlayıcı immünglobulin protein (BiP), ökaryotik çeviri başlatma faktör 2A (eIF2a) ve eIF2a kinaz protein kinaz R (p-PKR)], iki yanı sıra iltihap sinyalli proteinler [nükleer faktör-κB (NF-kB) ve inhibitörü κB (IKB)], yeni doğan beyin çekirdekleri içinde ölçülen [yalnız yolu (NTS), paraventricular çekirdeği (PVN), supra-optik çekirdeği (oğlu), korteks (CX), striatum çekirdeği (STR), çekirdek ve medial preoptic çekirdeği (MPO)] (kolostrum tarafından unprimed) ilk besleme önce ve (kolostrum tarafından astarlanmalıdır) hemşirelik başladıktan sonra. Sesli uyarı/GRP78 ve p-eIF2a ifadesi astarlanmalıdır NTS dokuda upregulated içinde unprimed ve downregulated vardı. Oysa NF-kB alt ve koşulların her ikisi de NTS, PVN ve oğlu değişmeden NF-kB (yüksek) CX, STR ve MPO sitoplazmada muhafaza edildi. Toplu BiP ve p-eIF2 bulgular bir stres tepkisi ile tutarlıdır. eIf2a tarafından dsRNA bağımlı kinaz (p-PKR) oğlu, CX, STR ve MPO fosforile. Ancak, NTS (ve daha az bir ölçüde de PVN), eIf2a başka bir kinaz, genel kontrol nonderepressible-2 kinaz (GCN2) tarafından fosforile. Daha önce yeni doğan gut enterositler gözlenen stres oransal mekanizmaları bazı OTR zengini beyin bölgelerde yansıtılması için görünür. NTS ve PVN diğer bölgelerden farklı fosforilasyon mekanizması (altında besin eksikliği) kullanmak ve besin yetersizliği etkisini ateşe dayanıklı olabilir. Toplu olarak, bu veri besin yetersizliği stres beyin yanıt kolostrum astarlanmalıdır enterositler sinyal tarafından mahsup edilir öneriyor.

İmmunoreactivity göre toplam protein temsilcisi bantları beyin çekirdekleri çok düşük hasat protein ile olduğunu göstermektedir. Bu kanonik Western blot karşılaştırıldığında son derece hassas otomatik Western blot tekniğin kullanımı gerektirir. Bu yaklaşım lane Batı lekesi içinde başına göre kılcal başına fortyfold daha az protein ile çalıştırabilirsiniz.
Kolostrum astar farklı etkileri beyin çekirdekleri BIP düzeyde
<p class="...

Burada, ilk kolostrum beslenme ile birlikte yenidoğan sıçan beyin beyin çekirdekleri yalıtmak için bir iletişim kuralı mevcut. Bu teknik Enterocytes sinyal tarafından modüle gibi besin yetersizliği stres beyin çalışma sağlar.

Hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

Bu yöntem, doğum sonrası gelişim alanında süt emzirmenin beyindeki stres sinyalini nasıl etkilediği ne kadar önemli soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu teknik, ilk doğal açlık döneminde belirli beyin bölgelerini yakalamak ve ilk doğal kolostrum yemi kısa bir süre sonra ilgili bölgelerle karşılaştırmak için kullanılabilir. Emzirmenin davranış ve duygu fizyolojisini nasıl etkilediğini anlamak, ex-vivo beyin dokusu analizi sırasında çeşitli reseptörlere karşı bir antagonist kullanılmasını sağlar.Çekirdek yumrukları elde etmek için, eldivenli bir el ile kuyruğundan sıçan yavruları kaldırın. Beyin hasat sonra, hızla oda sıcaklığında bir polimetil metakrilat beyin kalıbına tüm organ yerleştirin ve hemen doku 500 mikrometre kalınlığında dilim yapmak için yeni bir jilet kullanın. Kesitlerin doğru yönünü korumak için elde edilen dilimleri petri kabına yerleştirin.Tüm beyin kesitli olduğunda, hızlı bir şekilde çanak glikoz olmadan yapay beyin omurilik sıvısı ekleyin ve bir orbital shaker sürekli karıştırma ile 28-30 derece santigrat 60 dakika boyunca dilimleri kuluçka. Yumruklanacak beyin çekirdeklerini belirlemek ve kesiği yeni bir Petri kabına inceleyici mikroskop altında yerleştirmek için her dokuda bir beyin atlası ve anatomik işaretler kullanın. Görselleştirildikten sonra, 4 ila 6 farklı çekirdeği hızlı bir şekilde delmek ve her delikli çekirdeği proteus inhibitörleri ve fosfataz inhibitörleri içeren uygun şekilde etiketlenmiş mikro-santrifüj tüpüne 0,06 mL buz gibi protein çıkarma tamponuna hızla batırmak için bir yapıştırma aracı kullanın.Kuluçka sonunda, soğutulmuş bir mini santrifüj içinde çıkarılan çekirdekleri santrifüj ve dikkatle buz üzerinde uygun önceden soğutulmuş 1,5 mL mikro-santrifüj tüp içine her tüpten supernatant 0.055 mL aktarmak için bir mikro pipet kullanın. Negatif 20 santigrat santigrat depolamadan önce, her protein stok tüpünden 0,012 mL süpernatant ı ilk numune hazırlama için buz üzerinde uygun 0,5 mL önceden soğutulmuş tüpe aktarın. Numuneleri kapiller protein ölçümü için hazırlamak için, protein lisis kitinden 0,5 mL etiketli tüplerdeki numunelerin her birine 0,003 mL ana karışım reaktifi ekleyin.Daha sonra, 0,016 mL deiyonize su da bir biyotinylated moleküler ağırlık merdiven çözeltisi için master mix reaktif 0.004 mL ekleyin ve merdiven ve protein özü örnekleri 95 derece santigrat ısı bloğu, beş dakika sonra dört derece santigrat tüm tüpleri depolama. Sinyal protein analizi için, yeni bir otomatik Batı plakası olan E-1'den E-25'e kadar yeni hazırlanmış luminol peroksit çözeltisine 0,01 mL, D-2'den D-25'e kadar olan wells'e 0,01 mL ikincil anti-fare antikor ekleyin ve kitten D-1'e 0,01 mL streptavidin horseradish peroksidaz ekleyin. C-2'den C-25'e kadar yeni hazırlanmış primer antikorların 0,01 mL'sini ve B-25'e kadar olan kuyulara 0,01 mL antikor dilüent iki çözelti ekleyin.F sırakuyularını boş bırakın ve F satırının altındaki üç satırın beş bölmesini 0,45 mL yıkama tamponuyla doldurun. Daha sonra, buzdolabındaki numuneleri 30 saniye boyunca kısaca döndürün ve A-2 ile başlayan a satırının her kuyusuna her numuneden 0,03 mL ekleyin. Daha sonra, iyi A-1 biyotinylated moleküler ağırlık merdiveni 0.005 mL ekleyin ve santrifüj için plaka kapağı.Plaka santrifüj edilirken, otomatik Batı ilişkili yazılımda yeni bir çalışma dosyası açın ve moleküler boyut analizi başlatın. Test sayfasında, her kılcal damara örnek adlar ve birincil ve ikincil antikorların adlarını girin. Santrifüjün sonunda, plakayı otomatik Batı aletine yerleştirin ve kapağı kılcal kartuş kutusundan soyun.Santrifüjden sonra, hava kabarcıklarını incelemeyi unutmayın, çünkü kılcal damardaki hava kabarcıkları elektroforetik akımı engelleyebilir ve tüm turda başarısız olabilir. Kartuşu cihazın içinde belirlenen konuma takın ve kapıyı kapatın. Başlat'ı tıklatın.Tdenemenin türü yle birlikte istendiğinde, denemenin adını uygun metin kutusuna girin ve tamam'ı tıklatın. Etkinleştirilmiş çalıştırma tarihi ve çalıştırma dosyasındaki kimlik numarası istendiğinde, çalıştırmanın ne zaman sona erdiğini not edin. Koşunun sonunda, kılcal kartuşun keskinlik lerin bertaraf edilmesine ve plakayı biyolojik tehlikeli maddelerin bertaraf edilmesine atın.Elektroforez ayrımından sonra, fosforilasyonlu ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A'yı temsil eden 40-43 kilodaltonantijenantijenlerin immün reaktivite zirveleri için çalışma dosyalarını kontrol edin. Bu boyuttaki molekül ağırlığı zirvelerinin eksik olduğu durumlarda, eğrinin altına sağ tıklayın ve eğrinin altındaki boyutların ve rasgele miktarların kaydedilmesini sağlamak için zirveye moleküler ağırlık eklemeyi seçin. Unprimeds doku örnekleri içinde, yalnız parçanın çekirdeklerinde bağlayıcı amino globulin protein düzeyleri diğer bölgelerin tümgöre anlamlı olarak daha yüksektir.Kolostrum ile bağırsak dokusunun priming yalnız parçanın çekirdeklerinde bağlayıcı amino globulin protein düzeylerini azaltır ve paraventriküler çekirdekleri ve süper optik çekirdekleri üzerinde hiçbir etkisi yoktur. Tersine, priming korteks içinde amino globulin protein düzeylerini artırır, striation çekirdekleri, ve medial preoptik çekirdekleri unprimed dokuya göre, çeşitli test beyin çekirdeklerinde bağlayıcı amino globulin protein düzeyleri bağırsak astar farklı tepki ve henüz test edilen çeşitli çekirdekler arasında herhangi bir göstermiştir çapraz konuşma olduğunu ima. Ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A ve fosforilasyonlu ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A düzeyleri diğer çekirdeklere göre asal olmayan durumda yükselir.Astarlamadan sonra hem ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A hem de fosforilasyonlu ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A düzeyleri, astarlanmamış dokuya göre tek başına pistin çekirdeğine göre azalır. Diğer tüm test edilmiş çekirdeklerde primer, ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A ve fosforilasyonlu ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A'nın asal olmayan dokuya göre düzeylerini artırır. Ancak, fosforilasyon protein kiziaz reseptör düzeyleri soliter parçanın çekirdeklerinde astarlanmış örneklere göre astarlanmamış örneklerde düşüktür, kuvvetle başka bir kiazaz ökaryotik çeviri başlatma faktörü 2A fosforilasyon dahil olduğunu düşündürmektedir.Bu teknik, gelişiminden sonra, doğum sonrası gelişim alanında araştırmacıların doku büyümesi ve farklılaşmasında rol oynayan sinyal yollarını ve emzirmeden etkilenip etkilenmediklerini keşfetmelerinin önünü açmıştır. Örneğin, dithiothreitol gibi uçucu azaltıcı ajanlarla çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü hazırlarken kimyasal başlıkta hazırlık gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

assessing-cellular-stress-inflammation-discrete-oxytocin-secreting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz TSSB hastalarının karakteristik nöroendokrin fonksiyonlarda kalıcı değişikliklere ve gecikmiş uzun vadeli, abartılı bir korku tepkisi, ortaya travma sonrası stres bozukluğu (TSSB) bir sıçan modelinde tarif. Hayvan modeli ve burada tarif edilen yöntemler, fakat mekanistik çevresel beyaz kan hücrelerindeki biyolojik olan hastalarda ölçülemez beyin çekirdeklerinde biyo, kutu arasında ilişki için yararlıdır.

TSSB, Nöral Hematolojik ve Davranış Bağlantılı Revealing için Hayvan Modelinde Biyobelirteçler

Bu video, yenidoğan sıçan beyninden oksitosin reseptörü açısından zengin çekirdeklerin izolasyonunu göstermektedir. Koronal dilimleme, ardından oksitosin reseptörü açısından zengin beyin çekirdeklerinin tanımlanması ve hassas bir şekilde delinmesi, daha fazla analiz için oksitosin reseptörü açısından zengin çekirdeklerin etkili bir şekilde ekstraksiyonunu sağlar.

Yenidoğan Sıçan Beyninden Oksitosin Reseptöründen Zengin Çekirdeklerin İzolasyonu

Bu makale modeli doğum sonrası depresyon ve kemirgenler laktasyondaki anksiyete bir ethologically ilgili paradigma gibi kronik ikamet saldırgan sosyal stres kullanımı anlatılmaktadır.

Kemirgenler Emziren yılında Model Doğum Sonrası Depresyon Kronik Sosyal Stres Kullanımı

Bu kağıt sıçan yavrularının dokunsal uyarım ve nöronal morfoloji sonraki Golgi-Cox boyama işlemleri anlatılmaktadır. Dokunsal uyarım bir ev silgi ile yavrular okşayarak tarafından perinatal dönemde uygulanır olumlu bir deneyim olduğunu. Golgi-cox boyama tüm nöronların görüntülenmesine olanak güvenilir bir işlemdir.

Golgi-Cox Boyama ile dendritik morfoloji ve sinaptik bağlantı üzerinde olumlu bir Erken Deneyimi, Tactile uyarılması Etkileri, görselleştirme

Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu bir klinik öncesi modelini teşvik etmek amacıyla yenidoğan anne ayrılık, - Biz bir erken yaşam stresi paradigmasını uygulanan erkek C57BL / 6 farelerin prostat perigenital mekanik duyarlılık ve mast hücre aktivasyonunu ölçüyorlar.

Yenidoğan Anneden Ayrılma Fare Modelinde perigenital Duyarlılık ve Prostat Mast Hücre aktivasyonu Değerlendirilmesi

Stresli yaşam olayları bilişsel işlevi bozarak psikiyatrik bozukluk riskini artırır. Bu protokol, erkek ve dişi Sprague Dawley sıçanlarında paradigmayı değiştiren otomatik bir strateji kullanarak stresin bilişsel esnekliği nasıl etkilediğini göstermektedir. Belirli davranışların altında kalan belirli beyin bölgeleri tartışılır ve sonuçların çevirisel ilgisi araştırılır.

Operant Strateji Değiştirme Paradigması Kullanılarak Bilişsel Esneklik Üzerindeki Stres Etkilerinin Değerlendirilmesi

Kronik psikososyal stres (CGS) paradigması, annelerin ve bebeklerin psikiyatrik bozukluklarını modellemek için farelerde hamilelik sırasında klinik olarak ilgili stresörler kullanmaktadır. Burada, bu modeli doğrulamak için CGS paradigmasını ve aşağı akış değerlendirmelerini uygulamak için adım adım bir prosedür sunuyoruz.

Anne ve Bebeklerde Psikiyatrik Bozukluklar İçin Çevirisel olarak İlgili Bir Paradigma Olarak Gebelikte Psikososyal Stresin Murine Modelini Kullanmak

Burada, erken postnatal ağrı yönetimi ile ilgili araştırmaları kolaylaştıran bir preterm sıçan modeli oluşturmak için kısa bir protokol sunuyoruz. Yöntem, beklenen doğumdan üç gün önce sezaryen yapılmasını, erken doğmuş sıçan yavrularının histerektomi yoluyla çıkarılmasını ve bunların bir vekil barajın biyolojik yavruları ile entegre edilmesini içerir.

Ağrı Çalışmaları için Preterm Sıçan Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, doğum sonrası erken dönemde yoksul bir çevre ve öngörülemeyen anne bakımının neden olduğu erken yaşam sıkıntılarının beyin gelişimini ve gelecekteki zihinsel bozukluk riskini nasıl etkilediğini incelemek için bir hayvan modelini açıklamaktadır.

Farelerde Erken Yaşam Sıkıntısı için Bir Model Olarak Sınırlı Yatak Takımı ve Yuvalama

Makale, erken gebeliksel iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kapsamlı bir protokol sunar; bu model, güvenilirlik ve tekrarlanabilirliği sağlamak için temel metrikleri içerir.

Nörogelişim üzerindeki prenatal iltihabı değerlendirmek için erken gebeliksel anne immün aktivasyon fare modelinin oluşturulması

Keşfedin yeni doğan sıçanlarda ilk kolostrum besleme öncesi ve sonrası beyin çekirdeklerinin izolasyonunu. Bu yöntem, besin yetersizliği stresinin beyin sinyalleşmesine etkisini incelemek için geliştirilmiştir.

Hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal

Hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet