Name: Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Öğrenin, fare modelinde endometriozis lezyonlarının canlı görüntülenmesiyle tedavi ilaçlarının etkilerini gerçek zamanlı değerlendirme yöntemini. Bu teknik, ilaç etkinliğinin dinamik olarak izlenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser İspanyolca Ekonomi ve rekabet Miguel Servet FEDER (Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu) tarafından cofounded programı [CP13/00077] aracılığıyla Bakanlığı tarafından desteklenen ve Dr R. Gómez yanı sıra ödül Carlos III Sağlık Enstitüsü hibe tarafından ödüllendirildi Dr R Gómez [PI14/00547 ve PI17/02329] ve Prof A. Cano [PI12/02582].

İnsan dokusu örnekler kullanımı Kurumsal değerlendirme Komitesi ve hastane Universitario La Fe Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Tüm hastalar yazılı Onam sağlanan. Hayvanları içeren çalışma Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia kurumsal hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi ve tüm yordamlar Ulusal kurumları için bakım ve memeliler kullanım yönergeleri izleyerek gerçekleştirilmiştir Sağlık.
1. rahim dokusu koleksiyonu ve ön işleme
<ol><li>Kaliteli biyopsi insan endometrium aspiratı ve emme bir aygıta bağlı bir kanül kullanarak elde. Biyopsi 10 mL steril serum fizyolojik ve nazik el ile ajitasyon ile yıkama içeren bir şişe içine dökün. Not: Kaliteli biyopsi almak hakkındaki yordamlar yukarıda açıklanan17olmuştur.</li>
	<li>Biyopsiyi kalan herhangi bir kan ya da mukus yıkayın. Doku doku temiz görülmektedir kadar gerektiği gibi çok sayıda diş taze serum fizyolojik içeren Şişeler için dökerek tekrarlayın.</li>
	<li>Transfer biyopsi parçaları 10 mL içeren bir çözüm içine sağlıklı bir görünüm ile Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) orta % 10 Fetal sığır Serum (FBS) ve % 1 antibiyotik antimycotic çözüm ile tamamlayın.</li>
	<li>İçeriği bir 10 cm Petri kabına dökün ve neşter çifti ile 5-10 mm3 parçaya doku kesmek için devam edin.</li>
</ol>2. adenoviral Transfection, endometrium parçacıkları
Not: Sürecinde istihdam edilebilir dair bütün malzemeler mahallede önceden sunulması. Bu süreç içinde kullanılan ve bir şişe çamaşır suyu ile yerleştirmek için gitmiyor her şeyi al. Adenoviral vektör temas geliyor tüm malzeme biohazard kapsayıcısında atılmadan önce çamaşır suyu ile dezenfekte gerekir.
<ol><li>Sonra doğranmış biyopsi, yeni Petri kabına alın. Birden fazla 30 – 50 µL DMEM damla bütün yemek boyunca yayılan pipette. Onlar kişiye gelmiyor bu yüzden damla arasında yeterli boşluk bırakın.</li>
	<li>Şırıngaya bağlı bir iğne ile destekli, tek bir parça her orta damla içinde yerleştirin. Not: Her damla tek bir endometrium içermelidir.</li>
	<li>Ad-mCherry çalışan çözüm 1:20 mCherry adenoviral hisse senedi çözüm [1 x 1010 pfu/mL] sulandrarak DMEM hazırlamak) orta (DMEM + % 10 filtre FBS) antibiyotik olmadan.</li>
	<li>100-200 μL iyi parçaları Petri kabına damla (Adım 2.2) kullanılabilir gibi çok sayıda wells doldurma 96-şey tabakta başına reklam-mCherry çözüm dağıtmak. Buna ek olarak, en az 3 Kuyu adenovirus ücretsiz DMEM orta ile bir negatif kontrol doldurun.</li>
	<li>Şırıngaya bağlı bir iğne ile destekli, her bir Petri kabına (Adım 2.2) içinde parçaları her reklam-mCherry solüsyon 96-şey plaka içeren Wells aktarın.</li>
	<li>96 iyi plaka 16 h için % 5 CO2 37 ° C'de bir kuluçka içine reklam-mCherry çözüm ile endometrium parçaları içeren bir yer.</li>
	<li>Kalan adenovirüse bakın dokular ile tam DMEM orta dolu yeni bir 96-şey plaka içine aktarma tarafından orta dışarı yıkama (antibiyotik-antimycotics ile adenovirus ücretsiz) ve % 5 CO2 için 24-48 h 37 ° C için kuluçkaya. Not: Bütün iyi plakalar ve reklam-virüs ile temas geldi biohazard konteyner içine atarak önce ipuçları çamaşır suyu ile kapak unutmayın.</li>
	<li>Kuluçka makinesi tabaktan dışarı almak ve 568 adlı bir floresan mikroskop altında yer en uygun etiketleme için test etmek için nm (kırmızı kanalı).</li>
	<li>En parlak parçaları seçin ve yeni bir 96-şey plaka ile taze tam DMEM orta içine koyun (antibiyotik-antimycotics ile adenovirus ücretsiz).</li>
	<li>İyi bir plastik parafin film ile plaka mühür ve kendisine endometrium parçaları implantasyonu içine alıcı hayvanlar için özel patojen ücretsiz hayvan alana taşıma.</li>
</ol>3. nesil endometriozis fare modeli
Not: 6 – 8 hafta kullanın-eski korele çıplak (ya da benzer immün suşları) alıcı hayvanlar gibi patojen-ücretsiz spesifik koşullar içerisinde yer alan kadın fareler. Hormonal döngüsü bağımlı varyasyonları ve aynı anda yakıt lezyon büyüme estradiol ile önlemek için Ovariektomili ve ile yerleştirilen 60 günlük yayın kapsüller 17 βeta-Estradiol (17β-E2) 18 mg içeren hayvanlar vardır. Ooforektomi ve Pelet yerleşim var endometrium parçaları alıcı hayvanlara aşılama öncesinde en az bir hafta gerçekleştirilecek.
<ol><li>
Ooforektomi Not: Bir başlıklı cerrahi steril malzeme hazırlamak. Anestezi ekipman ve aynı odada bir ameliyat sonrası kurtarma bölge hazır hazır olun.<ol>
<li>Morfin türevi bir doz 5 mg/kg / fare, subkutan enjeksiyon gerçekleştirin. Ağrı kesici ilaç etkileri tecelli olabilir bu yüzden sonra enjeksiyon için 30 dk bekletin fareler izin.</li>
		<li>İnhalasyon anestezi ekipman ve izin oksijen ve isoflurane (% 2 mg/kg) akışı için bir kaç dk mühürlü anestezi odasına bağlayın.</li>
		<li>Hayvan isoflurane anestezi odasına tanıtmak. 3-5 dakika için bekleyin ve hayvanlar tam olarak onun pençeleri birini basarak anestezi kontrol edin. Hayvan ameliyat alanına aktarmak ve anestezi sürekli solunum solunum yolları kapsayan isoflurane gaz akışının bir maskeyle yerleştirerek korumak.</li>
		<li>Alan chlorohexidine ile dezenfekte sonra kalça bir enine 0.5 cm kostal kesi-yaklaşık yükseklikte keskin makas ile gerçekleştirin.</li>
		<li>Cilt karın boşluğu erişin, yumurtalık çevreleyen beyaz yağ yastığı tanımlamak ve yumurtalık diseksiyon Forseps ile geri çekmek için kas ayırmak.</li>
		<li>Bir düğüm ovidukt absorbe dikiş ile çevresinde ve uygun hemostaz yumurtalık bilincin önce emin olmak için sıkın.</li>
		<li>6-0 absorbe dikiş katmanı kas ve cilt 6-0 absorbe olmayan sütür ile kapatın. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.</li>
		<li>Contra yanal yumurtalık kaldırmak için yordamı yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Estradiol cips implant Not: Hayvan ooforektomi ameliyatta peletler bu noktada yerleştirmek için anestezi ilgilen.<ol>
<li>Hemen sonra ooforektomi yordamı tamamlandıktan, deri boyun çevreleyen antiseptik solüsyonla temiz ve keskin makas ense ile enine subkutan küçük (0.5 cm) kesi yapmak.</li>
		<li>Makas granül yerleştirerek izin vermek için yeterince büyük bir cep yapma kas, deriden incelemek için kullanın.</li>
		<li>17β-E2 18 mg içeren Pelet takın ve cilt ile 6-0 absorbe olmayan dikiş dikerim. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.</li>
		<li>Hayvan Kurtarma bölgesinde yer ve iyileşme süresi kolaylaştırmak için uzun süreli analjezi en iyi bir doz yönetmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Endometrium implant ameliyatı Not: En azından bir süre yedi gün karantina hayvanların tam kurtarma sonra ooforektomi endometrium parçası implantasyonu ameliyatı başlamadan önce izin vermek için izin. Dokusunun etiketleme ile en iyi eşitleme için 2 – 3 gün böylece uzun vadeli explants kültürünün önlemek için implantasyon ameliyattan önce biyopsi toplamak.<ol>
<li>Belirli patojen serbest bölge cerrahi odaya önceden hazır olun. Ayrıca tüm gerekli cerrahi malzeme, anestezi ekipman ve ameliyat sonrası kurtarma bölgesi ile örtünün hazırlayın.</li>
		<li>Hayvanlar odaya getireceksin, her fare, 5 (mg/kg) bir doz morfin türevi bir Subkutan Enjeksiyon gerçekleştirin. Uyuşturucu analjezik etkileri tecelli olabilir bu yüzden sonra enjeksiyon için 30 dk bekletin fareler izin.</li>
		<li>İnhalasyon anestezi ekipman ve izin oksijen ve isoflurane (% 2 mg/kg) akışı için bir kaç dk mühürlü anestezi odasına bağlayın.</li>
		<li>Ameliyat başlamadan önce fluorescently içeren plaka bu PIN'i parçaları (Kimden adım 2.10) hood, etiketli ve parçaları bir petri daha kolay kullanım için içine dökün taşıyın.</li>
		<li>Hayvan isoflurane anestezi odasına tanıtmak. 3-5 dakika için bekleyin ve hayvanlar tam olarak onun pençeleri birini basarak anestezi kontrol edin. Hayvan ameliyat alanına aktarmak ve anestezi sürekli solunum solunum yolları kapsayan isoflurane gaz akışının bir maskeyle yerleştirerek korumak.</li>
		<li>Yer imzalat hayvan yüzleri yukarıya. Ventral bölgeyi dezenfekte. Boyuna 1,5 cm kesi karnından keskin makas ile gerçekleştirmek ve cilt kas ayrı. Sonra boyuna 1,5 cm kesi Periton boşluğuna erişmek için kas içinde gerçekleştirin.</li>
		<li>Karın kaslı duvar sol kenarına Mini Forseps ile tutun ve dış Periton iç yüzünü ortaya çıkarmak çalışırken katlayın.</li>
		<li>Endometrium implant mini cımbız ile kısa bir süre içinde bir n-butil-ester siyanoakrilat yapıştırıcı emmek alıp karın zarını için nerede o bağlı olsun yerleştirin. Bir kaç saniye için kurumasını bekleyin. 3.3.6 ve 3.3.7 bir implant karın zarını kontralateral tarafına yerleştirmek için adımları yineleyin.</li>
		<li>Bir absorbe 6-0 sütür ile kas katmanı ve 6-0 sütür ile bir olmayan-absorbe cilt kapatın. Antiseptik solüsyonu ile tekrar alanı temizleyin.</li>
		<li>Hayvan Kurtarma bölgesinde yer ve uzun ömürlü analjezi en iyi bir doz yönetmek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. içinde görüntüleme sistemi içinde bir Vivo floresan görüntüleme vivo
<ol><li>İçinde vivo görüntüleme sistemi aygıtı açın, program başlatmak ve CCD fotoğraf makinesi birkaç dakika soğumasını sağlar.</li>
	<li>İnhalasyon anestezi ekipman hazırlayın. %2 min anestezik odası doldurmak için birkaç isoflurane akışı açın. Sonrası anestezi kurtarma bölge hazırlayın.</li>
	<li>Program başladı ve CCD kamera soğuduktan sonra Sihirbazı görüntüleme aracı tıklatın: bir öğretici ardışık windows görüntülenen bir dizi ile başlar, her biri birkaç ile ilgi bir parametreye karşılık gelen seçilecek kullanılabilir seçenekleri ilgili kutuya tıklayarak. Her pencerede uygun kutuları seçerek öğretici ile ileriye taşımak ve aşağıdaki sıra ile sonraki parametrelerinin taşımak için Tamam düğmesini tıklatın.<ol>
<li>Floresans parametresi için Epiluminescence kutusunu seçin, filtre çiftleri parametresi için mCherry kutusunu seçin. Fotoğraf modu ve Onaylamak odak kutuları işaretleyin ve pozlama parametresi için otomatik kutusunu seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Araç kurulmuş olan bir kez, bir hayvan anestezi odası içinde hareket. Tam anestezi zaman içinde sistem kafes görüntüleme in vivo hayvan aktarmak ve anestezi makineye bağlı bir tübül onun kafasında ile yan yerleştirin. Kapağı kapatın ve izlemek için Al düğmesini tıklatın.</li>
	<li>(Toplam beş fotoğraf, seçilen filtreleri her çift için bir görüntü) görünen görüntüleri ve veri Kaydet düğmesini tıklatarak kaydedebilirsiniz. Fare sonrası anestezi kurtarma alanına taşıyın. Kalan hayvanlar ile işlemi tekrarlayın.</li>
	<li>İki izlemeyi yineleyin veya üç kez bir hafta takip sinyali uygun zaman boyunca.</li>
	<li>Zamanlı kurs sonunda hayvan CO2 boğulma tarafından feda etmeye devam edin.</li>
</ol>5. Vivo Floresans görüntülerin miktar
<ol><li>
Görüntü unmixing aracılığıyla gerçek Floresans ayrılığı:
	<ol>
<li> Vivo analiz görüntüleme yazılım programı birleştiğindeaçın.</li>
		<li>Analiz başlamak için "Sequenceinfo" dosyasını seçin. İki pencere-ecek gözükmek: "Sıra görünüm" ve "Araç paleti". Araç paleti seçin ve görüntülenen menü sonra aşağıdaki seçenekleri işaretleyin.</li>
		<li>Düzeltmeler seçin ve istenmeyen floresan sinyallerini Işıksaçan görüntü verileri kaldırmak için Uyarlamalı FL arka plan çıkarma kutusunu tıklatın. Eşik büyük ilgi seçin ve ayarla' yı tıklatın.</li>
		<li>Tayf Unmixingtıklatın, dalga boyu ilgi, unmixing (Kütüphane için rehberli, otomatik veya el ile) seçilmiş olan yönteme bağlıdır seçin ve sonra Unmix Başlat ' ı tıklatın.</li>
		<li>MCherry sinyal için karşılık gelen Unmixed resmi seçin ve çift tıklatın. Yeni bir pencere faiz sinyal son görüntüleri ile gösterilir.</li>
		<li>5.1.3 arasındaki adımları yineleyin.</li>
		<li>İsteğe bağlı: bir temsili resim (JPEG) unmix sonucu gerekiyorsa, araç paleti istenen ayarları seçmek | Görüntü ayarlama (renk tablosu, binning, kontrast, vs.) ve şu anki görüntüsü gibi ters bir resim olarak vermek için İhracat grafik unmix penceresinde tıklatın.</li>
		<li>Karışmamış dosyayı kaydedin: dosyası | Farklı Kaydet | Klasör seçin ve Ok.</li>
		<li>Bütün hayvanlar ile izleme gün geri kalanı ile işlemi yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ROIs kurmak ve miktar sinyal
	<ol>
<li>Gözat ' ı tıklatın ve karışmamış dosya seçin (bkz. Adım 5.1.8) analiz edilebilir ilgi. Yeni pencere-ecek gözükmek.</li>
		<li>Tıklayın Listesine ekle her hayvan farklı zaman noktalarda tüm karışmamış dosyaları içerir ve Yükleme olarak bir grupüzerinde'yi tıklatın. Tüm görüntüleri tek bir sıra görünmesi gerekir.</li>
		<li>Araç paleti penceresine git: Ben aynı ölçekte tüm görüntüleri elde etmek içinkaynaklandığıdır ölçek kutusunu tıklatın.</li>
		<li>Çift sıra bir görüntüyü tıklatın ve bir yatırım Getirisi aşağıdaki işlem sırasını kullanarak faiz bölge üzerinde oluşturun. ROI araçlar ' a gidin ve Countour ve Otomatik 1 seçeneğini seçin, görünen daire şekli tıklatın, floresan sinyal üstünde belgili tanımlık merkez yerleştirin ve sonra görüntülenen pencerede Oluştur ' u tıklatın. Not: Bu otomatik olarak piksel floresan arka plan değerleri (Yani, lezyon) yukarıda bir yoğunluk ile vurgular ve kimin alanı Seviyelendirilmiş piksel kucaklayan bir şekil oluşturur.</li>
		<li>Oluşturulan yatırım Getirisi şekli kopyalayıp bir arka plan bölge olduğu yerde sinyal yok.</li>
		<li>Tıklatın ölçü ROIs üzerinde | Floresans yoğunluk değerleri görüntülemek için Tümünü Seç . Fare ile veri değerleri seçin, sağ düğmesini tıklatın, Kopyala seçeneğini tıklatın ve bir elektronik tabloya yapıştırmak için devam edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. veri (floresan sinyal) normalleştirme
<ol><li>Hangi sinyal şiddeti maksimal başlangıç zaman noktasını seçin. Formül kullanarak, her zaman bir noktada sinyal normale devam: Sinyal şiddeti, her zaman bir noktada / maksimal sinyal şiddeti gözlenen zaman boyunca) x 100.</li>
</ol>

<ol><li>Nap, A. W., Groothuis, P. G., Demir, A. Y., Evers, J. L., Dunselman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Practice+%26+Research%3A+Clinical+Obstetrics+%26+Gynaecology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of endometriosis.</a> Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 18, 233-244 (2004).</li>
<li>Holoch, K. J., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="https://journals.lww.com/clinicalobgyn/Abstract/2010/06000/Endometriosis_and_Infertility.19.aspx">Endometriosis and infertility.</a> Clinical Obstetrics and Gynecology. 53, 429-438 (2010).</li>
<li>Eskenazi, B., Warner, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology Clinics of North America. 24 (2), 235-258 (1997).</li>
<li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15541453">Endometriosis.</a> Lancet. 364 (9447), 1789-1799 (2004).</li>
<li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+medical+and+surgical+treatment+of+endometriosis-associated+infertility+and+pelvic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+and+Obstetric+Investigation%22%5BJournal%5D)">The efficacy of medical and surgical treatment of endometriosis-associated infertility and pelvic pain.</a> Gynecologic and Obstetric Investigation. 54, 2-7 (2002).</li>
<li>D'Hooghe, T. M., Bambra, C. S., Cornillie, F. J., Isahakia, M., Koninckx, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+laparoscopic+appearance+of+spontaneous+endometriosis+in+the+baboon+%28Papio+anubis%2C+Papio+cynocephalus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Prevalence and laparoscopic appearance of spontaneous endometriosis in the baboon (Papio anubis, Papio cynocephalus).</a> Biology of Reproduction. 45 (3), 411-416 (1991).</li>
<li>Dick, E. J., Hubbard, G. B., Martin, L. J., Leland, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Record+review+of+baboons+with+histologically+confirmed+endometriosis+in+a+large+established+colony%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Primatology%22%5BJournal%5D)">Record review of baboons with histologically confirmed endometriosis in a large established colony.</a> Journal of Medical Primatology. 32 (1), 39-47 (2003).</li>
<li>Donnez, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+endometriotic+nodules+in+an+experimental+baboon+modelmimicking+human+deep+nodular+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">Induction of endometriotic nodules in an experimental baboon modelmimicking human deep nodular lesions.</a> Fertility & Sterility. 99 (3), 783-789 (2013).</li>
<li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+endometriosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Animal models in endometriosis research.</a> Human Reproduction Update. 12 (5), 641-649 (2006).</li>
<li>Rossi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+aspects+of+endometriosis+in+a+mouse+model+through+analysis+of+implantation+and+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Gynecology+and+Obstetrics%22%5BJournal%5D)">Dynamic aspects of endometriosis in a mouse model through analysis of implantation and progression.</a> Archives of Gynecology and Obstetrics. 263 (3), 102-107 (2000).</li>
<li>Grummer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+endometriosis%3A+validation+of+an+in-vivo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Peritoneal endometriosis: validation of an in-vivo model.</a> Human Reproduction. 16 (8), 1736-1743 (2001).</li>
<li>Becker, C. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0002944010622249">A novel non-invasive model of endometriosis for monitoring the efficacy of antiangiogenic therapy.</a> The American Journal of Pathology. 168 (6), 2074-2084 (2006).</li>
<li>Laschke, M. W., Giebels, C., Nickels, R. M., Scheuer, C., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+contribute+to+the+vascularization+of+endometriotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells contribute to the vascularization of endometriotic lesions.</a> The American Journal of Pathology. 178 (1), 442-450 (2011).</li>
<li>Nap, A. W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15001592">Antiangiogenesis therapy for endometriosis.</a> The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 89 (3), 1089-1095 (2004).</li>
<li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prodrug+of+green+tea+epigallocatechin-3-gallate+%28Pro-EGCG%29+as+a+potent+anti-angiogenesis+agent+for+endometriosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Prodrug of green tea epigallocatechin-3-gallate (Pro-EGCG) as a potent anti-angiogenesis agent for endometriosis in mice.</a> Angiogenesis. 16 (1), 59-69 (2013).</li>
<li>Delgado-Rosas, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+ergot+and+non-ergot-derived+dopamine+agonists+in+an+experimental+mouse+model+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">The effects of ergot and non-ergot-derived dopamine agonists in an experimental mouse model of endometriosis.</a> Reproduction. 142 (5), 745-755 (2011).</li>
<li>Al-Jefout, M., Andreadis, N., Tokushige, N., Markham, R., Fraser, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pilot+study+to+evaluate+the+relative+efficacy+of+endometrial+biopsy+and+full+curettage+in+making+a+diagnosis+of+endometriosis+by+the+detection+of+endometrial+nerve+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+%26+Gynecology%22%5BJournal%5D)">A pilot study to evaluate the relative efficacy of endometrial biopsy and full curettage in making a diagnosis of endometriosis by the detection of endometrial nerve fibers.</a> American Journal of Obstetrics & Gynecology. 197 (6), 578(2007).</li>
<li>Fortin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+human+endometriotic+tissue+maintenance+and+regression+in+a+noninvasive+mouse+model+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of human endometriotic tissue maintenance and regression in a noninvasive mouse model of endometriosis.</a> Molecular Therapy. 9 (4), 540-547 (2004).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+nude+mouse+models+for+green+fluorescence+human+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology+Research%22%5BJournal%5D)">Improved nude mouse models for green fluorescence human endometriosis.</a> Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 36 (6), 1214-1221 (2010).</li>
<li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+red+fluorescent+nude+mouse+model+of+human+endometriosis%3A+advantages+of+a+non-invasive+imaging+method%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Obstetric+Gynecologic+and+Reproductive+Biology%22%5BJournal%5D)">A red fluorescent nude mouse model of human endometriosis: advantages of a non-invasive imaging method.</a> European Journal of Obstetric Gynecologic and Reproductive Biology. 176, 25-30 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada ayrıntılı iletişim kuralı aynı anda gerçek zamanlı değerlendirmesini Floresans izin yayılan iken lezyonlar mimari Reproduction Mimarlık mCherry tarafından korunur endometriozis bir hayvan modeli uygulamasını açıklar endometrium dokusu etiketli. Bu protokol için belirli içinde vivo görüntüleme sistemi ve non-invaziv etiketli lezyon tarafından yayılan Floresans değerlendirmek için ilgili yazılım kullanımını açıklar. Her kullanıcı bağlı olarak belirli görüntü aygıtı ve ilgili yazılım kendi kurum olarak mevcut Protoko...

Endometriozis rahim boşluğuna dışında işlevsel endometrium implantasyonu tarafından başlatılan kronik bir jinekolojik hastalıktır. Ektopik lezyonlar büyümek ve iltihabi süreçleri kronik pelvik ağrı ve infertilite1için önde gelen neden. Bu kadar üreme çağındaki kadınların % 10-15 endometriosis2 tarafından etkilendiğini tahmin edilmektedir ve infertil kadınlar3yaklaşık % 40-50 mevcut. Endometriozis için mevcut farmakolojik tedaviler lezyonlar tamamen ortadan kaldırmak için ve yan etkileri4,5özgür değil. Endometriozis insan lezyonlar uygun şekilde taklit ve diğerleri arasında lezyon boyutu bileşikler etkilerini yakından tespit edilebilir şekilde varolan hayvan modellerinin arıtma, daha etkili tedaviler için araştırma gerektirir.
Primat modelleri endometriozis Ektopik lezyonlar implantasyonu histolojik olarak aynı ve benzer sitelerde olduğu gibi insanlar6,7,8taklit etmek için kullanılmıştır; Ancak, etik kaygılar ve yüksek ekonomik maliyetler primatlar sınırı ile deneme onların kullanım9ile ilgili. Sonuç olarak, küçük hayvanlar, özellikle kemirgenler, kullanım endometriozis ın-vivo modellerinin uygulanması için çalışmalar bireyler10,11daha büyük sayılarla verdiğinden tercih devam ediyor. Endometriozis indüklenen bu hayvanlara kemirgen rahim boynuzları ("homolog modelleri")12,13 adet veya Ektopik sitelere (kapaklı modelleri) insan endometrium/endometriotic doku nakli tarafından14 . Aksine insanlar, kemirgenler endometrium doku döken değil ve böylece endometriozis kendiliğinden bu türler içinde geliştirilebilir değil. Bu nedenle, homolog fare modelleri endometriozis gerçeğini Ektopik fare rahim dokusu implante nedeniyle eleştirdi var insan endometriotic lezyonlar15özelliklerini yansıtacak.
Endometriozis uygun fizyolojisi nerede taze insan endometrium parçaları immünyetmezligi hayvana implante edilir endometriozis kapaklı modelleri taklit. Geleneksel Contegra modellerinde bileşikler ilgi tedavi edici etkileri yaygın lezyon boyutu değerlendirme Çap pergeli16kullanımı ile tarafından bitiş noktası değerlendirilir. Bu nedenle, bitiş noktası hayvan modelleri implantasyon dynamics ya da zaman içinde endometriotic lezyon geliştirme eğitim izin vermez, bir açık kısıtlamadır. Çap pergeli kullanımı doğru ölçümler lezyon boyutu izin vermez bir ek kısıtlamadır. Nitekim, aynı aralıkta (yani, milimetre) farelerde, böylece gerçek varyasyonları boyutu algılamak için bu araçları kapasitesine sınırlama implante lezyonlar boyutu olarak Çap pergeli tarafından sağlanan standart hata olduğunu.
Gibi sınırlamalar üstesinden gelmek için burada, implante insan dokusu içinde bir muhabir m-kiraz floresan protein hızlı şekilde tasarlanmıştır endometriozis bir kapaklı fare modeli oluşturmayı açıklar. Bir uygun görüntü sistemi ile floresan sinyal tespiti non-invaziv lezyon durumunu gerçek zamanlı olarak boyutunun aynı anda miktar ile izleme sağlar. Böylece, bizim model derecede o getirmek gerçek zamanlı non-invaziv izleme fırsatı ve olasılığı daha objektif ve varyasyonları doğru tahmin lezyon boyutunda gerçekleştirmek için geleneksel bitiş noktası modelleri karşılaştırıldığında Net avantajlar sağlar.

<table><tbody><tr><td>Endosampler ve ticaret;</td><td>Medgyn</td><td>22720</td><td>Uterus endometrium</td></tr><tr><td>DMEM Orta</td><td>VWR</td> HYCLSH30285 örneklemek için kanül<td>. FS</td><td>Medium</td></tr><tr><td>Ad-mCherry</td><td>Vector Biolabs</td><td>1767</td><td>mCherry PBS ifade eden adenoviral vektör</td></tr>, <tr><td>1x çözelti, steril, pH 7.4</td><td>VWR</td><td>E504-500ML</td><td>Yıkamalar için Tampon</td></tr><tr><td>Peletler 17-B-Estradiol 18 mg / 60 gün</td><td>Amerika'nın Yenilikçi Araştırması</td><td>SE-121</td><td>Kemirgenler için hormon peletleri</td></tr><tr><td>Vetbond & trade; Doku Yapıştırıcısı</td><td>3M</td><td>780-680</td><td>Doku yapıştırıcısı</td></tr><tr><td>Polistiren kristali Petri kapları</td><td>Levantina</td><td>367-P101VR20</td><td>Petri kapları</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Sigma</td><td>P4333-100ML</td><td>Antibiyotikler</td></tr><tr><td>Şırıngalar, tıbbi 10 mL 0.5 ml</td><td>VWR</td><td>CODA626616</td><td>Şırıngalar</td></tr><tr><td>Nitril eldivenler, pudrasız</td><td>VWR</td><td>112-2754</td><td>Eldivenler</td></tr><tr><td>Yumuşak İsviçre çıplak fareler</td><td>Charles River</td><td>SNUSSFE05S</td><td>Hayvan deneyi için fareler</td></tr><tr><td>Ivis Spectrum In vivo Görüntüleme sistemi</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>In vivo İzleme ekipmanı</td></tr><tr><td>Living Image&reg; (Ivis yazılımı)</td><td>Perkin Elmer</td><td>---</td> <td>in vivo izleme yazılımı</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td>Zenginleştirme serumu</td></tr><tr><td>96 oyuklu hücre kültürü ile muamele edilmiş plakalar</td><td>Yaşam teknolojileri</td><td>167008</td><td>Kültür plakaları</td></tr><tr><td>İdrar şişeleri</td><td>Summedical</td><td>4004-248-001</td><td>Yıkama şişeleri</td></tr><tr><td>Steril cerrahi bıçaklar</td> <td>(Aesculap Bölümü) Sanycare</td><td>1609022-0008</td><td>Cerrahi bıçaklar</td></tr><tr><td>Isovet 1.000 mg/g</td><td>B-BRAUN</td><td></td>---<td>Isofluran (Anestezik)</td></tr><tr><td>Buprex&reg; 0.3 mg</td><td>Schering Plough S.A.</td><td>---</td><td>Buprenorfin (Analjezik çözelti)</td></tr><tr><td>Enjekte edilebilir morfin çözeltisi 10 mg/mL</td><td>B BRAUN</td><td></td>---<td>Morfin (Analjezik çözelti)</td></tr><tr><td>Monofyl&reg; Emilebilir Sütürler</td><td>COVIDIEN</td><td></td><td>---Sütürler</td></tr><tr><td>Desinclor klorheksidin</td><td>Promedic SA</td><td></td><td>---Antiseptik çözelti</td></tr><tr><td>Mikroskopi DMi8</td><td>Leica Mycrosystems</td><td>---</td><td>floresan mikroskobu</td></tr><tr><td>Hera Cell 150 İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td>51026282</td><td>İnkübatör</td></tr></tbody></table>

lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Burada, biz hangi endometriozis ilerlemesini noninvaziv implante Ektopik insan endometrium dokusu tarafından yayılan Floresans izleme aracılığıyla gerçek zamanlı olarak tespit edilebilir bir kapaklı fare modeli uygulanması için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu amaçla, insan endometrium biyopsi donör kadınlar devam eden oosit bağış elde edilir. İnsan endometrium parçaları muhabir floresan protein mCherry için hızlı cDNA için tasarlanmış adenovirüse bakın huzurunda kültürlü. Enfeksiyon daha sonra seçilen alıcı farelerde implantasyon için görselleştirme, doku floresan en uygun bir fiyata sahip adlı. İmplantasyon ameliyat öncesi bir hafta alıcı fareler oophorectomized ve östradiol granül subkutan hayatta kalma ve büyüme lezyonların sürdürebilmek için yerleştirilir. Ameliyat günü fareler küçük (1.5 cm) kesi linea alba. tarafından erişilen imzalat ve Periton boşluğu vardır. Fluorescently etiketli implantlar kaşların, kısa bir süre içinde tutkal batırılmış ve Periton katmana bağlı. İnsizyon sütüre ve hayvanlar birkaç gün kurtarmak için yaptı. Floresan endometriotic implantlar tarafından yayılan genellikle non-invaziv 3 günde 4 hafta içinde vivo bir görüntüleme sistemi ile izlenir. Endometriotic implantları boyutunda varyasyonlar gerçek zamanlı olarak mCherry sinyal ve normalleştirme maksimal floresan yoğunluğu gösteren ilk zaman noktası karşı miktar tarafından tahmin edilebilir.
Endometriozis modellerin geleneksel preklinik kemirgenler non-invaziv lezyon gerçek zamanlı izleme izin vermez ama oldukça bitiş noktası denetlesinler ilaçların etkilerinin izin. Bu iletişim kuralı bir lezyonlar gerçek zamanlı olarak izlemek izin verir ve endometriozis Preklinik modellerin uyuşturucu tedavi potansiyelini keşfetmek için daha yararlı olduğunu. Böylece üretilen modeli ana sınırlandırılması non-invaziv izleme reklam-virüs episomal ifadesi nedeniyle uzun süreler boyunca mümkün değildir.

Burada, böylece non-invaziv izin insan endometrium fluorescently etiketli adet immün fareler yerleştirerek tarafından lezyonlar mimarisini korunduğu endometriozis kapaklı bir model oluşturmak için süreci tanımlamak lezyon ilerlemesini izleme. Endometrium parçaları etiketleme tarafından Enfeksiyon Mod hızlı mCherry, Floresans yakın kızılötesi bölgesi yayan bir protein için tasarlanmış adenovirus ile elde edilir. Şekil 1' de, Ad-mCherry ile enfekte insan endome...

Burada, canlı görüntüleme, farelerde aşılı fluorescently etiketli insan endometrium parçacıkları için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntemi seçim ilaçların etkileri izleme aracılığıyla endometriotic lezyon boyutu ve gerçek zamanlı olarak flüoresan muhabir tarafından yayılan Floresans miktar sağlar

Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Bu yöntem, anti-androjenik bileşiklerin endometriotik lezyonların boyutu üzerindeki etkileri gibi endometriozis alanındaki terapötik ilaç etkilerinin değerlendirilmesinde anahtar soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, spesifik ilaçların etkilerinin son noktadan ziyade gerçek zamanlı olarak endometriozisin hayvan modellerinde değerlendirilebiliyor olmasıdır. Prosedürü gösteren Jessica Martinez, benim laboratuvarbir teknisyen, yanı sıra Viviana Bisbal ve Nerea Marin, Centro de Investigacion Principe Felipe veterinerler ve ekibimiz ile yakın işbirlikçileri vardır.İmplant ameliyatından 2-3 gün önce, durulanmış, sağlıklı endometrial doku biyopsi si parçalarını tam orta içeren 10 santimetrelik Petri kabına aktarın ve dokuyu 5 ila 10 milimetreküp küp parçalara dönüştürmek için neşterler kullanın. Bir mikropipet kullanarak, yeni bir 10 santimetrelik kültür çanak altında DMEM 30 ila 50 mikrolitre damla ekleyin, böylece birbirleriyle temas gelmez her damla arasında yeterli boşluk bırakarak. Tüm damlalar yerleştirildiğinde, her damla içine biyopsi doku parçası tek bir parça yerleştirmek için bir şırınga iğnekullanın.Daha sonra, doku parçası başına 96 kuyu p

noninvasive-monitoring-lesion-size-heterologous-mouse-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Fare ve sıçanlarda barsak mezenter arter kaskad rahim dokusundaki otomatik nakli endometriozis cerrahi indüksiyon açıklaması.

Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Yumurtalık kanseri büyümesinin ve nüksünün tespitine, ölçülmesine ve izlenmesine olanak tanıyan non-invaziv bir hayvan görüntüleme platformunu tanımlıyoruz. Bu intraperitoneal ksenogreft modeli, yumurtalık kanserli hastaların klinik profilini taklit eder.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Farelerde kolon patolojilerinin tedavisi için terapötiklerin etkinliğinin rijit bir endoskop kullanılarak uzunlamasına izlenmesi için yöntemleri açıklıyoruz. Bu protokol, canlı farelerde tek bir tümörün terapötik yanıtının karakterizasyonu ve ayrıca potansiyel hastalık nüksünü izlemek için kolayca kullanılabilir.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Over kanseri metastazı, tümör yükünün doğru görsel kantitasyonunun zor olduğu çok sayıda yaygın intraperitoneal lezyon ile karakterizedir.  Burada, kırmızı floresan protein (RFP) etiketli tümör hücreleri ve optik görüntüleme kullanarak metastatik tümör yükünün in situ ve ex vivo kantitasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Bu protokol, endometriyal kanserin indüklenebilir bir fare modelinde, brüt ve histolojik değişikliklerle korelasyonlu ultrason görüntüleme kullanarak uterusta morfolojik değişikliklerin zaman içindeki ilerlemesini izlemek için bir yöntem açıklamaktadır.

Farelerde Tümör Baskılayıcıları Arid1a ve Pten'in Pax8'e Yönelik Delesyonunda Endometriyal Kanser Progresyonunun Non-İnvaziv Ultrason Değerlendirmesi

Bu çalışma, endometriozisin klinik olarak anlamlı bir alt tipi olan endometrioma'yı simüle etmek için özel olarak tasarlanmış yeni bir fare modelini tanıtmaktadır. Model, C57BL / 6J farelerini kullanarak, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaları aydınlatmayı ve üreme tıbbındaki mevcut bilgi boşluğunu kapatmak için rafine bir araç sunmayı amaçlamaktadır.

Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Bu çalışmada, kimyasal maddeler, endüstriyel atık su veya kanalizasyon ve tuzlu kabuklu sıvı çevresel örneklerde tarafından uygulanan uzun vadeli (14 gün) ölümcül toksisite belirlemek için değerli bir metodolojik protokolünün geliştirilmesi ve standardizasyonu ile...

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

A ile Üretilen Kompleksi Antibiyotik Eritromisin Featuring Mantık, Deneysel Merdivenleri ve Heterolog Doğal Ürün biyosentezi Potansiyeli<em&gt; E. coli</em

Öğrenin, fare modelinde endometriozis lezyonlarının canlı görüntülenmesiyle tedavi ilaçlarının etkilerini gerçek zamanlı değerlendirme yöntemini. Bu teknik, ilaç etkinliğinin dinamik olarak izlenmesini sağlar.

Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Daha fazla video keşfet