Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Bu kültür tekniğinin en büyük avantajı, eşleştirme deneyimlerini kontrol ederken ve gelişimlerini takip ederken bakire kopepodlar elde edebilirsiniz. Aşağıdaki davranış analizi yöntemi kayalık gelgit havuzlarında ortak zooplankton olan Tigriopus koppodların mate koruma davranışı üzerinde kontrollü ve tekrarlanabilir deneyler yardımcı olabilir. Bu yöntemler Tigriopus üreme davranışı içine fikir sağlayabilir rağmen, onlar da genetik ve çevresel faktörlerin fizyolojisi ve bu kopepodların davranışını nasıl etkilediğini bakmak için kullanılabilir.

Başlamak için, stok kültüründen berrak turuncu yumurta taşıyan gravid dişileri toplamak için bir Pasteur pipet kullanın. Nazik pipetleme yoluyla temiz kültür ortamı ile kadın durular. Sonra, temiz kültür ortamı ile altı iyi hücre kültür plaka bireysel bir kuyu içine her kadın yerleştirin.

Daha sonra yumurta keseleri serbest bırakana kadar kültür dişiler için bir kuvöz de plaka yerleştirin. Yumurta keseleri serbest bırakıldıktan sonra, tabağın kuyularından dişileri çıkarmak için bir Pasteur pipet kullanın. En kısa sürede ilk copepodid aşamasında hayvanlar veya CI ortaya çıkmaya başlar, onları toplamak için bir P-10 micropipekullanın.

Her 2-3 günde bir, erimiş eksüle için kuyuları izleyin. Bundan sonra, onların anten morfolojisi inceleyerek hayvanlar seks. Yetişkin dişileri doğru bir şekilde tanımlamak için, yetişkin dişiler ve gençler arasındaki anten şeklindeki farklılıklar bazı popülasyonlarda gözle görülür derecede önemli olmadığından, kültür kuyularında zaten beş eksüle erimiş olduğundan emin olun.

Uygun sahne ve cinsiyet hayvanları seçtikten sonra, ince zemin balık gıda ile seçilen bireyleri beslemek. Hayvanlar yemek yerken, test odaları olarak iki 48-iyi düz alt hücre kültür plakaları hazırlayın. 30 dakika geçtikten sonra, her hayvanı temiz yapay deniz suyuyla dolu 24 kuyuluk dört kuyuya boruyla yıkın.

Daha sonra durulanmış bireyleri A ve B plakalarının kuyularına LED ışık yastığına yerleştirin. Hayvanların 30 dakika boyunca alışmalarına izin verin, ardından hedefleri B plakasından A.Plate'e aktarmak için pasteur pipeti kullanın.Video kaydını durdurmadan önce belirlenen gözlem süresi boyunca bir erkek ve bir hedefin her kuyuda etkileşime girmesine izin verin. İlk olarak, her hedefin A.Next plakalı bir kuyuya aktarıldığı zaman ki zamanlamayı inceleyin, bir erkeğin koruma girişimini hedefin herhangi bir vücut parçasıyla bir teması olarak tanımlayın.

Bir erkeğin koruma girişiminin sona erdirilmesini, erkeğin anteninin her ikisinin de hedefin vücudundan ayrılması olarak tanımlayın. Daha sonra, bir erkek bir dorsal vücut viraj tarafından çiftleşme başlatılması tanımlamak, kadın karşı ürozom tekrarlayan bir basın izledi. İlk olarak, filmi film düzenleme yazılımıyla kırparak ilgi çekici bir bölüm içeren bir video klip oluşturun.

Ardından ImageJ'i açın ve video klibi ni aktarın. Görüntü işleme için gereken belleği azaltmak için gizli 8 bit gri tonlama seçeneğini seçin. Ardından, aralıklı kalibrasyon için düz çizgi seçim aracını seçin ve kuyunun çapı boyunca bir seçim çizgisi çizin.

Ayarlanan ölçek menüsünü açın ve bilinen mesafe kutusuna bilinen uzunluğu ve uzunluk birimibirimine girin. Bundan sonra özellikler menüsünü açın ve çerçeve aralığı kutusuna çerçeve aralığını girin. Eklentileri ve MtrackJ'i seçerek MTrackJ eklentisini açın.

Ardından, izleme yapılandırması menüsünü açmak için iletişim penceresindeki izleme düğmesini tıklatın. Parça sırasında yerel imleç tutturma uygulayın ve tutturma özelliği olarak koyu santrifüj'ü seçin. Ardından, izlemeye başlamak için MTrackJ iletişim penceresindeki ekle düğmesini tıklatın.

İzlenecek video klipteki kişileri kapsayacak şekilde bir imleç yerleştirin. Ardından, kare içindeki nesnenin koyu centroid algılamak için tıklatın. Veri tablosu oluşturmak için, MTrackJ iletişim penceresinde ölçü tablosunu tıklatın ve ardından renkli bir çizgi olarak çizilmiş izlenen yörüngeye sahip bir film oluşturmak için film düğmesini tıklatın.

Son olarak, sonuçları kaydetmek için MTrackJ iletişim penceresindeki kaydet düğmesini tıklatın, izlenen iki boyutlu yörüngedeki veriler de dahil. Bu deneyde Tigriopus kopepodlarının eş koruma davranışı kaydedildi ve gözlendi. Analizler, erkek-erkek çiftleri ile Erkek-Erkek çiftlerinin erkek-erkek çiftlerinin erkek-erkek çiftlerine göre daha kısa bir süre sergiledikleri erkek-erkek çiftleri arasındaki ortalama koruma süresi nde bir fark göstermektedir.

Tigriopus californicus'un yeni oluşan koruma çiftlerinin iki boyutlu uzamsal takibi, erkek-erkek çiftlerin koruma denemelerinin ilk üç saniyesinde erkek-dişi çiftlerinden daha yüksek hız gösterdiğini ortaya çıkardı. Bu teknik, gelişiminden sonra etoloji, biyokimya ve evrimsel genetik alanlarındaki araştırmacıların bu tip kopepodların eşsiz miyon sistemini keşfetmelerinin önünü açtı.