Name: Polikistik over sendromu çalışmaya Hyperandrogenic fare modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Öğrenin, dihidrotestosteron pelletleri kullanarak polikistik over sendromu için hiperandrojenik fare modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, üreme sağlığı ve endokrinoloji alanında maternal hiperandrojenizmin etkilerini araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüleri (hibe S.W. için R00-HD068130) ve Baltimore diyabet araştırma merkezi tarafından desteklenmiştir: pilotlar ve fizibilite Grant (için S.W.).

Burada, detaylı protokol DHT Pelet hazırlık ve ekleme ve üreme ve metabolik testleri için mevcut. Bu çalışmada kullanılan fare karışık bir arka plan (C57/B6, CD1, 129Sv) olduğunu ve gıda ile muhafaza ve ad libitum Broadway araştırma bina hayvan tesiste Johns Hopkins Üniversitesi School of 24 ° c 14/10 h açık/koyu döngüsünde su Tıp. Tüm yordamları Johns Hopkins Üniversitesi hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi.
1. PCOS benzer fare modeli oluşturmak
<ol><li>
DHT Pelet hazırlık
	<ol>
<li>Otoklav Silastik tüp sterilize etmek için. Bir tıraş bıçağı ile 15 mm uzunluğu Silastik tüp kesme;</li>
		<li>Bir tarafta 3 mL şırınga bağlı 20 G körelmenin iğne ile tıbbi yapışkanlı silikon tüp içine enjekte edilerek kapatın. Dalgıç şırınga ve sonra göle eklediğiniz yapışkanı geri olmalıdır. Pistonu reinserted ve yapışkan iğne çıkmaya başlayana kadar itti. Körelmenin iğne 20 G iğne keskin uç tarafında güçlü herhangi bir makasla kesim tarafından yapılır. Silikon tüp uzunluğu post-prodüksiyon kırpma için izin vermek için daha--dan 2 mm olmalıdır;</li>
		<li>Gecede Kuru; mühürlü tarafında hava kabarcık açısından kontrol edin. Bu hiçbir hava kabarcıkları ile DHT parçaları için kullanılır. Başkalarının no-DHT denetim granül için kullanılabilir.</li>
		<li>Eldiven, maske, gözlük ve önlük giymek DHT Pelet cilde DHT maruz önlemek için bir mahallede yapmadan önce.</li>
		<li>Pour DHT toz haline plastik bir ağırlık tekne ve basın yapıştırıcı açık tarafına (A1.1 içinde üretilen) tüpler DHT toz haline şapkalı.</li>
		<li>DHT toz doğruldu büyük bir kağıt atacı ile yanından.  DHT (veya istenilen uzunlukta) 4 mm yüksekliğe ulaşıncaya kadar devam edin. DHT uzunluğu cetvelle kontrol ve silikon, Kuru ile açık yan gecede mühür.</li>
		<li>Silikon 2 mm uzun uzunluğu yapmak için kapalı her tarafı kesti. Pelet toplam uzunluğu 8 mm olacaktır.</li>
		<li>Her iki tarafında boş Silastik tüp kontrol (no-DHT) Pelet olarak kapatın.</li>
		<li>Granül (ışık etkilenmemek için) Oda sıcaklığında folyo ile kadar kullanmak sarılmış bir 50 mL konik tüp unutmayın. DHT granül depolama en az 3 ay süreyle tam etkinliğini korumak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DHT ekleme ve değiştirme
	<ol>
<li>20 DHT ilâ granül veya denetim granül ayrı ayrı bir 50 mL konik tüp 37 °C için denge ekleme hemen önce 24 h 30 mL steril % 0,9 serum ile sular altında.</li>
		<li>Ameliyat, öncesi yüzeyler ve eldiven clidox ile dezenfekte ve çalışma yüzeyleri temiz plastik yedeklenmiş emici kağıt (cerrahi pedi) ile kaplıdır.  Bu hayvanların temas tüm aletleri hayvan tesisi girmeden önceki ısıyla tarafından dekontamine.  Aletleri kuru ve serin önce kullanımı için izin verilir.</li>
		<li>2 aylık dişi fareler kullanılır (4 – 5 fare/kafes). Fareler intraperitoneally Xylazine ile enjekte (3.5 mg/kg bw) ve ketamin (78.8 mg/kg bw) bir insülin Ģırınga kullanarak. Karıştırma ve dozaj anestezi için hesaplamaları Tablo 1' de var.</li>
		<li>Yeterli anestezi ayak refleks kaybı tarafından ölçülen elde edilir ve solunum yavaşladı sonra fare ameliyat için hazır.</li>
		<li>Çevrenin cilt steril gazlı bez kullanarak betadin ile dezenfekte ve % 70 etanol ile temiz.  Alanı yeniden betadin ile boyalı.</li>
		<li>Yaklaşık 5 mm uzunluğu ile boyun yakınındaki deri altına makas bir delik açın. 10 G trochar kullanarak, küçük tünel (15 mm) rostral yönde olun. Pelet dorsally trochar ile eklenir.</li>
		<li>Açılış sonra cerrahi yapıştırıcı ile kilitlendi. El ile yaklaşık forseps ve sıvı yapıştırıcı ince bir film için yaklaşık yara kenarları uygulamak için nazik fırça vuruşları ile yara kenarları. Birikimini 3 ince tabakalar Yapıştırıcı Yapıştırıcı yara üzerinde eşit olarak dağıtılır emin olmak için. Yapıştırıcı apposed yara kenarları her tarafında 1 cm genişletmek. Dikiş veya cerrahi klipleri deliği kapatmak için de kullanılabilir. Fareler kafesi, tek tek yer, kurtarma için bir ısı pad ile içine koy. Pelet 4 haftada androjen pozlama sürekli düzeyini korumak için değiştirin. Özgün Pelet kaldırılacak ve A1.15 benzer pozisyonda açıklandığı gibi yeni Pelet eklenir.</li>
		<li>Estrous endüstriyel DHT ekleme 3 gün sonra sınayın. Estrous döngüsü aşamasını vajinal sitoloji tarafından değerlendirilir.  Vajinal hücreleri 16 gün üst üste steril serum fizyolojik (yaklaşık 10 µL) vajinal boşluğuna squirt p10 pipettor kullanarak ve serum aynı steril pipet ucu geri çekilmesi toplanır.  Vajinal hücreleri vajinal duvardan derisinin ı serum mix ve toplanır.</li>
		<li>Serum hücreleri etiketli bir slayt üzerine yayıldı. Her slayt altı örnekler içerebilir. Slaytlar hangi örneğin her altı yerlerde yerleştirilir dikkat edilmesi gereken etiketlenir.</li>
		<li>Sonra serum tamamen slaytta slaytlar hücreleri düzeltmek için % 100 etanol ile bir kaba koymak kurudu. Slaytlar için en az 5 dk sabit ancak sabitleştirici süresiz olarak daha fazla kullanılmasını kadar kalabilir.</li>
		<li>Slaytlar için arabellek B her 1 dk. için boyama çözümler ve C. yıkama slaytlar musluk suyu ile ve kuru oda sıcaklığında içine koymak.</li>
		<li>Hücre morfolojisi 10 X objektif hafif mikroskop altında incelemek.  Başvurular27,28,29proestrus (P), estrus (E), metestrus (M) ve diestrus (D) ayırt etmek için hücre morfolojisi açıklanmıştır.</li>
		<li>Her gün sahne ve gün her aşamada yüzde süresini hesaplamak için toplam sayısı bölü sayısı.</li>
		<li>Glikoz toleransı DHT ekleme sonra 21 gün, fareler gecede (16 h) oruç ve 2 g/kg vücut ağırlığı % 20 dekstroz intraperitoneally enjekte sınayın. Bir farenin vücut ağırlığı 25 g ise, örneğin, bu fare % 20 dekstroz 250 µL ile 50 cc (0.5 mL) insülin şırıngayla eklenecek. Glikoz seviyesi 0, 15, 30, 60, 90, kuyruk damar kan örnekleyerek şeker ölçüm ve test şeritler tarafından değerlendirildi 120 dak. Bu anlatılan ayrıntılı olarak başka bir yerde30.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kan toplama
	<ol>
<li>Kan çeşitli gün DHT ekleme (biz 100 µL için steroid ve 30ul LH/FSH tahlil için koleksiyon ses seviyesini sınırlandırma) sonra 9 ve 10 arasında lanset ile kanama submandibular ven tarafından toplamak. Bu11' de açıklanmıştır.</li>
		<li>4 ˚C 10 dk de 6.000 x g kan santrifüj kapasitesi ve serum katman-80 °C-ebilmek var olmak stok tahlil kadar başka bir 1,5 mL tüp içine toplamak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. üreme değerlendirmek profilleri kronik DHT gelen dişi yavru eklenen barajlar
<ol><li>
Çiftleşme
	<ol>
<li>Test edilecek dişi fare Pelet ekleme izleyen onbeş gün (yani daha önce yavru dişi fare ile olmuştur) kanıtlanmış bir verimli erkek ile kafes içine taşınır.</li>
		<li>Barajı'nın vücut ağırlığı her hafta fare hamile olup olmadığını belirlemek için belge. Bir hafta içinde daha--dan 3 g Barajı ağırlık artar gebelik gösterir.</li>
		<li>Kan baraj baraj artan vücut ağırlığı üzerinden bir hafta önce 3 g den büyük gözlemledikten sonra ikinci hafta toplamak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ergenlik vajinal açılış ve ilk estrus tarafından değerlendirildi
	<ol>
<li>Vajinal açılış görsel denetim her gün sonra yavrular sütten kesmek tarafından kontrol 21 Doğum sonrası günlük (PND), anogenital mesafeyi ölçmek ve vajinal açılış yaşın kaydetmek.</li>
		<li>Bir kez vajina açık, vajinal hücreleri günlük, estrous endüstriyel kontrol 1.2.8–1.2.11 içinde açıklandığı gibi toplamak.</li>
		<li>Hücre morfolojisi açıklanan 1.2.12 olarak gözlemlemek ve ilk estrus tüm hücreleri cornified epitel hücreleri vardır tarihi olarak tanımlanır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vücut ağırlığı ve kulak yumruk
	<ol>
<li>Mazgal ipucu dövme hamur içine daldırma ve başvuru12 7 PND, açıklandığı gibi her yavru ayak parmağı dövme ile işaretlemek ve fareler her 7 günde yaş 70 gün kadar tartın.</li>
		<li>Onları numaralandırmak için kulak yumruk fare Şekil 1 12-16 PND arasında sistem kullanarak. Seks ayırt, ventral vücut yüzeyini inceleyerek, kadın görünür meme gerekir.</li>
		<li>21, 26, 70, kan toplamak PND 1.3.1 içinde yukarıda açıklandığı gibi doğumdan sonra</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hormonal tahlil
	<ol>
<li>Kan serum DHT seviyeleri her iki enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) tarafından ölçülür ve sıvı kromatografi tandem tarafından kütle spektrometresi (LC-MS)23,24,31,32. T LC-MS veya bir fare/fare üreme23,24saat içinde Virginia Üniversitesi Ligand tahlil çekirdek Araştırma Merkezi tarafından doğrulandı ELISA ölçülür.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li>
<li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li>
<li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , 1933719117749761 (2018).</li>
<li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+reproductive%2C+metabolic%2C+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li>
<li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li>
<li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine%2C+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li>
<li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).</li>
<li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat%3A+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li>
<li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome%3A+phenotypic+presentation%2C+pathophysiology%2C+and+the+effects+of+different+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Reprod.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li>
<li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gend.+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li>
<li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li>
<li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction%3A+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li>
<li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li>
<li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li>
<li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li>
<li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li>
<li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation%3A+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li>
<li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gynecol.+Obstet%22%5BJournal%5D)">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608(2016).</li>
<li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553(2016).</li>
<li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li>
<li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome%3A+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19575469">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , Appendix 4, Appendix 4I (2009).</li>
<li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test%2C+Measurement+of+Lung+Function%2C+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li>
<li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li>
<li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Steroid+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li>
<li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li>
<li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li>
</ol>

İfşa etmek bir şey yok.

Hyperandrogenism PCOS önemli bir özelliktir. Bu protokol için kullanılan (iki yüksek no-DHT farelerde DHT farelerde kat) serum DHT seviyeleri bu önceki çalışmalarda diğer müfettişler tarafından bildirilen daha düşüktür ve PCOS5,19kadınlarla orantılı olarak taklit etmek için kalibre, 20,21. Diğer modelleri farklı olarak, vücut ağırlığı ve 3.5 ay sonra DHT ekleme23,<...

Hyperandrogenism polikistik over sendromu (PCOS) NIH kriterleri göre ve androjen fazlalığı ve PCOS (AE-PCOS) toplumun özelliğimizdir. PCOS ile kadın hamile zorluk ve gebelik komplikasyonları1riski artmıştır. Onlar hamile bile, dişi yavrularını bir olumsuz sağlık sonuçları2,3var. Hayvan modelleri çeşitli stratejileri4,5,6,7,8,9,10,11 ile geliştirilmiş , 12 ve PCOS (anovulation, ve/veya bozulmuş glukoz ve insülin dayanıklılık) birçok özellikleri artan vücut ağırlığı ve genişlemiş adipocyte boyut ve artan adipocyte ağırlık ile ilişkili obezite ile sergilenmesi. PCOS incelemek için kullanılır hayvan modelleri üretmek için iki büyük strateji vardır. Doğum13den sonra tedavi androjenler doğrudan (eksojen androjen enjeksiyon/ekleme) ya da dolaylı olarak (örneğin, androjen dönüşüm için östrojen aromataz inhibitörü ile engelleme) düzeyi yüksek olan biri. Başka androjenler fetal hyperexposure tarafından gebelik14,15 sırasında belgili tanımlık çoluk çocuk incelemektir. Örneğin, al yanaklı maymun16,17, koyun18ve intrauterin dönemde androjen erkek düzeyde maruz kemirgenler dişi yavru sonraki hayatında PCOS benzeri özellikleri geliştirmek. Bu modeller önemli ölçüde yükseltilmiş androjen etkileri ve fetal programlama ve rahim çevresel etkileri bizim anlayış gelişmiş. Ancak, bu modeller kendi sınırlamaları vardır: 1) hayvanlar obezite geliştirmek ve bu nedenle indüklenen obezite üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu; hyperandrogenemia etkilerini ayırt etmek zordur 2) daha önce gebelik, kadın PCOS ile zaten androjen yüksek düzeyde sergi, böylece yumurta androjen fertilizasyon önce aşırı maruz kalmış; 3) farmakolojik dozlarda testosteron (T) veya doğumdan sonra veya gebelik sırasında kullanılan dihidrotestosteron (DHT) PCOS androjen ortamının yansıtmıyor olabilir. Yumurtalık foliküler sıvı ve/veya serum testosteron ve DHT seviyeleri ölçüldü ve 1.5-3,9 kat PCOS5,19,20,21 olan kadınlarda daha yüksek testosteron ve DHT seviyeleri ,22,23 etkilenmemiş kadınlara kıyasla. Üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu bir Pelet ekleme 4 mm uzunluğu ile kronik DHT maruz inisiyasyon iki hafta içinde gelişen bir yetişkin fare modeli23,24,25 yarattık Kristal DHT toz (Pelet toplam uzunluğu 8 mm'dir). Bu model hakkında (2xDHT anılacaktır) 2 kat daha yüksek serum DHT seviyeleri kontrol fareler DHT tedavi olmadan daha üretir. 2xDHT fareler değişiklik bazal serum östradiol, testosteron, LH ve sergi değil değil obezite geliştirmek ve benzer yumurtalık ağırlık, kolesterol, serbest yağ asitleri, leptin, serum düzeyleri göster TNFα ve Il-623,24, bile ilâ 3,5 ay sonra DHT ekleme23,24,25 25 göreli olarak denetler. Ayrıca, zaten PCOS özelliklerini geliştirdik dişiler çiftleşme tarafından15yavru bir hyperandrogenic anne tarafından çevre-metabolik ve üreme sağlığı üzerinde etkisini eğitim görebilirsiniz.
Bu yeni paradigma (NIH ve AE-PCOS toplum kriterlerine uygun) hastalık nispeten benzer bu kadınların androjenler ile PCOS 2 - 3 kat daha yüksek testosteron düzeylerini veya etkilenmemiş kadınlara kıyasla DHT seviyeleri üreterek modelleri. Bununla birlikte, DHT içine kapanık bir kez bu model programlanmış endojen hyperandrogenism değil ve sürekli eksojen DHT tarafından korunur. Bu makalede genel amacı 1 odaklanmaktır) nasıl DHT Pelet; 2) nasıl bir yalın PCOS gibi fare modeli oluşturmak için; 3) stratejileri bu barajlar gelen kadın çoluk çocuk değerlendirmek için. Diğer ölçümler ve fenotipleri değerlendirilmesi bu el yazması ele değil ama5,15,23,24,25,26içinde bulunabilir.

<table><tbody><tr><td>Kristal 5 & alfa ; - DHT tozu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380-1G</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Silastik boru</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-15D</td><td>0,04 inç / 1 mm iç çap x0,085 inç / 2,15 mm dış çap</td></tr><tr><td>Tıbbi yapıştırıcı silikon</td><td>Faktör II, InC.</td><td>A-100</td><td></td></tr><tr><td>Gözlükler, laboratuvar önlükleri, eldivenler ve maskeler.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ve mikro; L filtresiz pipet uçları</td><td>ABD Bilimsel</td><td>11113700</td><td></td></tr><tr><td>Smear için mikroskop slaytı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Boyama hücreleri için Diff Quik</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9979740</td><td></td></tr><tr><td>Lancet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9416572</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Şırınga</td><td>Becton, Dickinson and Company (BD),</td><td>30985</td><td></td></tr><tr><td>ekli iğne: 20 G</td><td>BD</td><td>305176</td><td></td></tr><tr><td>Cetvel: milimetre ölçeğinde 10 cm'den daha uzun herhangi bir uzunluk.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td><td>NDC13985-704-10</td><td>100 mg / mL</td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür</td><td>Hospira, Inc</td><td>NDC 0409-2051-05</td><td>100 mg / mL</td></tr><tr><td>Cerrahi zımba</td><td>AutoClip & reg; Sistem, Güzel Bilim Aracı</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası</td><td>BD</td><td>329461</td><td>1/2 CC, düşük doz U-100 insülin şırıngası</td></tr><tr><td>Trokar</td><td>Amerika'nın Yenilikçi Araştırması</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss Primo Star</td><td>415500-0010-001</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Kulak yumruğu</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>Testosteron sıçan / fare ELISA kit</td><td>IBL</td><td>B79174</td><td></td></tr><tr><td>DHT ELISA kiti</td><td>Alpha Diagnostic International</td><td>1940</td><td></td></tr><tr><td>Tek dokunuşla ultra glukometre</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek dokunuşla ultra test şeritleri</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-402-18</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş bıçağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Clidox</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0089321</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi alt bezi</td><td>Fisher Scientific</td><td>50587953</td><td>Üretici: Andwin Scientific 56616018</td></tr><tr><td>Betadine Antiseptik Solüsyon</td><td>Walgreens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond (n-bütil siyanoakrilat)</td><td>3M Bilim. Hayata</td><td></td><td></td> Uygulanır</tr></tbody></table>

polikistik over sendromu çalışmaya hyperandrogenic fare modeli

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenemia kadın üreme ve metabolik işlevinde önemli bir rol oynar ve Polikistik over sendromu özelliğidir. PCOS kadınlarla taklit eden bir yalın PCOS gibi fare modeli geliştirmek klinik olarak anlamlı demektir. Bu protokol için böyle bir model açıklar. DHT (dihidrotestosteron) kristal toz Pelet 4 mm uzunluğunda ekleyerek (Pelet toplam uzunluğu ise 8 mm) ve aylık değiştirmek yerine, biz bir PCOS gibi fare modeli ile serum DHT seviyeleri 2 kat DHT (no-DHT) ile implante değil fareler daha yüksek üretmek mümkün. Biz üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu vücut ağırlığı ve vücut kompozisyonu değiştirmeden gözlenen. Süre kısırlık yüksek derecede sergilenmesi, küçük bir alt kümesi bu PCOS benzeri dişi fareler hamile kalabilir ve yavrularını gecikmeli ergenlik ve artan Testosteron yetişkin olarak gösterir. Bu PCOS benzer yalın fare modeli PCOS ve belgili tanımlık çoluk çocuk bu PCOS benzeri baraj üzerinden Patofizyoloji eğitim için yararlı bir araçtır.

Serum DHT seviyeleri ve glikoz tolerans testi
DHT seviyeleri toplanan serum her iki ELISA ve LC-MS tarafından ölçüldü protokolü 1,24-1,25 ve 2.9, 3.0 göre. DHT mutlak değerler farklı kütle spektrometresi ve ELISA, ancak, göreli kat no-DHT ekleme her iki deneyleri benzer ve genelinde15,23,24 ( deneyler DHT vs (yaklaşık ...

Biz bir yalın PCOS gibi fare modeli ile PCOS ve belgili tanımlık çoluk çocuk bu PCOS benzeri baraj üzerinden Patofizyoloji çalışmaya dihidrotestosteron Pelet gelişimi tanımlamak.

Polikistik over sendromu çalışmaya Hyperandrogenic fare modeli

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Bu yöntem, çoğaltma alanındaki anahtar soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Ve endokrinoloji. Polikistik Over Sendromu veya PKOS ve hiperandrojenizm çalışmaları için de geçerlidir.Bu tekniğin avantajı, pahalı etkili bir şekilde hormonların tutarlı, düzgün, uzun vadeli salınımını kolaylaştırıyor olmasıdır. Prosedürü tedavi eden JHUs Ping Xue, benim laboratuvar bir teknisyen olacaktır. Dihidrotestosteron veya DHT pelet hazırlama için, silikon boru 15 milimetrelik bir parça kesmek için bir jilet kullanın.Ve tüpün bir ucuna iki ila beş milimetrelik tıbbi yapışkan silikon enjekte etmek için körtilmiş 20 gauge iğne ile donatılmış üç mililitrelik şırınga kullanın. Tüpün bir gecede kurumasını bekleyin. Ve mühürlü ucunda hava kabarcıkları kontrol edin.Uygun kişisel koruyucu ekipman giyen akışiçinde plastik bir yol teknesi içine DHT tozu dökün. Yapışkan kapaklı tüpün açık ucunu tozun içine doğru etkileyin. Büyük bir düzleştirilmiş ataş kullanarak, DHT uygun deneysel derinliğe ulaşana kadar tozu boruya boşaltın.Sonra bir gecede silikon ile tüpün açılan tarafı mühür. Ertesi sabah, DHT'nin her iki tarafında iki milimetre uzunluğunda silikon elde etmek için her mühürlü tarafı kesin ve DHT kon

a-hyperandrogenic-mouse-model-to-study-polycystic-ovary-syndrome

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makalede, farelerde Polikistik Over Sendromunu (PCOS) modellemek için dihidrotestosteron (DHT) peletleri hazırlamanın ve yerleştirmenin bir yolu açıklanmaktadır. Örnek protokol, üreme ve metabolik çalışmalar için kullanılan farelerdeki prosedürü göstermektedir.

Deri Altı Dihidrotestosteron (DHT) Tedavisi: Polikistik Over Sendromunun (PCOS) Fare Modeli

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda folikül stimüle edici hormon (FSH) birçok hastalığın patogenezi ile ilişkilidir. Yumurtalıklı ve FSH ile tedavi edilmiş fare modeli (OVF), FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

Folikül Uyarıcı Hormonun Bağımsız Etkilerinin Bir Fare Modelinde İn Vivo Olarak Araştırılması

Bu çalışma, endometriozisin klinik olarak anlamlı bir alt tipi olan endometrioma'yı simüle etmek için özel olarak tasarlanmış yeni bir fare modelini tanıtmaktadır. Model, C57BL / 6J farelerini kullanarak, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaları aydınlatmayı ve üreme tıbbındaki mevcut bilgi boşluğunu kapatmak için rafine bir araç sunmayı amaçlamaktadır.

Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

Bu protokol, mini pompalar kullanılarak kontrollü letrozol salınımı yoluyla farelerde polikistik over sendromu (PCOS) modellerini indüklemek için bir teknik sunar. Yeterli anestezi altında, mini pompa deri altına implante edildi ve mini pompa salınımından belirli bir süre sonra farelerde PCOS başarılı bir şekilde indüklendi.

Farelerde Polikistik Over Sendromunu İndüklemek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik

Geliştirici aktivitenin deneysel doğrulamasına en iyi fonksiyon kaybı analizi ile yaklaşılır. Burada, hibrit bir genom (Mus musculus129 x Mus castaneus) içeren F1 ES hücrelerinde gen transkripsiyonunun alele özgü regülasyonunu incelemek için CRISPR/Cas9 aracılı delesyon kullanan etkili bir protokol sunulmaktadır.

Yaratma CRISPR / Cas9 aracılığı monoallelik Delesyonlar Fare Embriyonik Kök Hücreleri Artırıcı Fonksiyonu Eğitim için

Bu protokol Fare preimplantasyon embriyolar soy özellikleri çalışma protein ekspresyonu in situ analiz kantitatif, tek hücreli gerçekleştirmek için bir yöntem sunmaktadır. blastosist toplanması için gerekli işlemler, proteinlerin immunofluorescent algılama tüm montaj, bir konfokal mikroskop ve nükleer segmentasyon ve görüntü analizi örneklerin görüntüleme açıklanmıştır.

Protein İfade Kantitatif Analiz Fare Preimplantasyon Embriyolar Lineage Şartname Eğitim için

Bu iletişim kuralı yalıtım, kültür ve kalsifikasyon sıçan kaynaklı Vana interstisyel hücrelerin son derece fizyolojik vitro manken kireçlenmeler aort kapak hastalığı (CAVD) açıklanmaktadır. Bu fare modeli sömürü CAVD araştırma hücre ve moleküler mekanizmaları bu karmaşık patolojik süreç altında yatan Exploring kolaylaştırır.

Birincil fare malzemelerin yalıtım ve Vana interstisyel hücreleri: Aort Kapak kalsifikasyon eğitim için yeni bir Model

Burada, dallanma morfogenez ve periferik sinirler ve kan damarları yanı sıra bağışıklık hücre dağıtım desenlendirme görselleştirmek sağlayan tüm yetişkin fare kulak deride bir yüksek çözünürlüklü bütün Dağı görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır.

Bütün-Confocal mikroskobu yetişkin kulak cilt için mount: nöro-vasküler dallanma morfogenez ve bağışıklık hücre dağıtım modeli sistemi

Öğrenin, dihidrotestosteron pelletleri kullanarak polikistik over sendromu için hiperandrojenik fare modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, üreme sağlığı ve endokrinoloji alanında maternal hiperandrojenizmin etkilerini araştırmaya yardımcı olur.

Polikistik over sendromu çalışmaya Hyperandrogenic fare modeli

Daha fazla video keşfet