Name: Alt akut serebral Microhemorrhages sıçanlarda Lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Keşfedin, LPS enjeksiyonu ile sıçanlarda serebral mikrokanamaları indüklemeyi ve görüntülemeyi. Bu yöntem, enflamasyonun rolünü inceleyerek nörolojik bozuklukların patogenezini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz öğretmen Jian Feng Lei ve sermaye Tıp Üniversitesi meslektaşlarıyla MRG sırasında rehberlik için teşekkür ederiz. Biz de Jing Zeng Nöroloji ikinci People's Hastanesi teknik destek sağlamak için Yichang dan teşekkür ederiz.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve kullanım Komitesi (ACUC) PLA Ordu Genel Hastanesi tarafından onaylanmıştır.
1. malzeme
<ol><li>LPS enjeksiyon hazırlanması<ol>
<li>S. typhimurium son konsantrasyonu 1 mg/mL için türetilmiş LPS tozu 25 mg 25 mL distile su ekleyin. Enjeksiyon steril tüp 4 ° C'de depolayın Dikkat: LPS zehirli.</li>
		<li>EB enjeksiyon çalışma konsantrasyonu tutmak için normal % 0,9 serum fizyolojik çözüm % 2 EB çözeltilerine hazırlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. hayvanlar
<ol><li>LPS 10 hafta yaşlı erkek Sprague-Dawley (SD) rats için yönetmek (Ortalama ağırlık: 280 ± 20 g) mayi enjeksiyonla. Dikkat: fareler başka bir kuruluştan satın aldıysanız, o zaman adaptif faz 7 günden az olmamalıdır.</li>
</ol>3. LPS enjeksiyonları
<ol><li>LPS intraperitoneally 1 mg/kg doz, her fare içine enjekte ve fareler için ev onların kafes dönmek. Not: Anestezi gerekli değildir.</li>
	<li>Altı saat sonra LPS enjeksiyon fareler içine aynı doz enjekte.</li>
	<li>On altı saat sonra LPS aynı doz fareler enjekte. Dikkat: SD fareler bir doz 1 mg/kg LPS ile enjekte bir % 5 mortalite hızında neden olabilir. Ölüm oranı daha da genç ya da yaşlı fareler veya hamile dişi rats artırmak olabilir.</li>
	<li>Fareler için onların kafes LPS enjeksiyon sonra dönün ve yiyecek ve içecek ad libitum erişim sağlar. Not: Fareler ayrı bir sistemik inflamatuar yanıt sergileyecek ve böylece kafesleri deney boyunca temiz kalması şarttır. Sıçanlar sık (2 x gün) ağırlık, genel görünüm ve tutum için ilk LPS enjeksiyon sonra izleme olması. Fareler bir Kambur duruş, isteksizlik taşımak için önemli kilo kaybı sergilemek başlatırsanız (> % 20), porfirin insancıl olması boyama euthanized 7 gün önce EB çalışma bitiş noktası.</li>
</ol>4. örnek koleksiyonu
<ol><li>EB enjeksiyon<ol>
<li>Yedi gün sonra ilk enjeksiyon anestezi sıçan tarafından onaylanmış, IACUC protokolüne göre intraperitoneally.</li>
		<li>Fareler Korneal refleks yanıt-e doğru göstermek değil kadar 1-2 dk bekleyin. 5-8 mm gerçekleştirmek-derin kalp ponksiyon üzerinde her fare; puncturing noktası 3 ve 4 kurulu alanı, göğüs kemiğinin sol kenar boşluğuna 5 mm olmalıdır.</li>
		<li>Kan kurtarma görülmektedir kadar bekleyin ve sonra EB 0.2 mL/100 g vücut ağırlığı bir doz sol kalp karıncığı enjekte. Dikkat: Kalp ponksiyon ve EB enjeksiyon dikkatle yapılmalıdır. EB göğüs boşluğuna veya kalp zarını yerine sol kalp karıncığı içine enjekte.<ol>
<li>Geri boş bir tüp ile emmek ve bir EB tüp önce enjeksiyon başarısızlık oranı azaltmaya yardımcı olmak için bu birim yerine (Örn., göğüs kafesi hata enjeksiyon).</li>
		</ol>
</li>
		<li>Fareyi 10 min için sırtüstü pozisyonda tutmak. Not: ayirt görüntülemede EB kaçağı tespit etmek için örnek kullanılırsa, bu adım sonra atlanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Brüt gözlem<ol>
<li>Kardiyak perfusions serebral damarlara ve beyin temizlemek için buz gibi 1 M fosfat tampon serum (PBS) kullanarak gerçekleştirin.<ol>
<li>Bir neşter kullanmadan, karın bir kesi diyafram tüm uzunluğu boyunca olun.</li>
			<li>Sadece kaburga ile kesme göğüs kafesi orta hat yaptı.</li>
			<li>Göğüs boşluğuna aç. Kelepçeler kalp göstermek için ve drenaj kan ve diğer sıvıların kolaylaştırmak için kullanın.</li>
			<li>Giriş noktası sıkma o konumdaki iğne Ekle yaklaşık 5 mm. için genişletmek için sol ventrikül çıkıntı içine bir iğne güvenli doğrudan tutarken sürekli kalp (kalp hala yenerek) forseps ile. Dikkat: iç duvarı delip olarak çözümler dolaşımını uzlaşma aşırı iğne genişletmek değil.</li>
			<li>Yaklaşık 20 mL/dk bir perfüzyon pompa kullanarak yavaş ve istikrarlı bir hızda akışı buz gibi PBS çözüm (200-300 mL) izin vermek için vana serbest bırakın. Hayvanlar fiksasyon brüt gözlem yerine gerektiriyorsa, buz gibi % 0,9 serum fizyolojik çözüm aynı doz kullanın.</li>
			<li>Keskin makas kullanırken, bir kesi çözüm sürekli akar sağlanması avluda olun. Sıvı serbestçe akmaz veya hayvanın burun veya ağız gelen, iğne yeniden konumlandırın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Brüt gözlem tarafından ekran CMHs için. Not: örnek CMHs sayısını hesaplamak için brüt gözlem tarafından kullanılırsa, sonra bu adımı ihmal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fiksasyon<ol>
<li>Kardiyak perfusions serebral damarlara temizlemek için buz gibi % 0,9 serum fizyolojik çözüm (200-300 mL) ve beyin kullanarak gerçekleştirin.</li>
		<li>Kardiyak perfusions buz gibi %4 paraformaldehyde fiksasyon için kullanarak gerçekleştirin.</li>
		<li>Fareyi başını kesmek, beyin ayırma ve % 20 sükroz çözüm için en az 6 h beyinde bırakın.</li>
		<li>% 30 sukroz ve düzeltme başka bir 6 h. için çözüm değiştirmek
</li>
	</ol>
</li>
	<li>10 mm kalınlığında beyin dokuları bölümleri bir cryostat kullanarak hazırlayın.</li>
</ol>5. O boyama
Not: Bu yordam bir o Kit boyama kullanılarak gerçekleştirilir.
<ol><li>Slaytlar distile suda yıkayın.</li>
	<li>8 dk. yıkama hematoksilen çözümde musluk suyu 5 min için çalışan leke.</li>
	<li>Musluk suyu 1 dk. için çalışan 30 s. Yıkama için % 1 asit alkol ayırt etmek.</li>
	<li>Leke % 0,2 Amonyaklı su (mavileştirme) veya doymuş Lityum Karbonat çözüm için 30 s 1 dk. yıkama musluk suyu 5 min için çalışan için.</li>
	<li>% 95 alkol (10 dips) durulayın.</li>
	<li>Counterstain eozin çözüm için 30 ile 1 dk s.</li>
	<li>% 95 alkol, 5 min için mutlak alkol iki değişiklik ile kurutmak.</li>
	<li>Net 30 ksilen içinde s.</li>
	<li>Liu'nun yöntemi9kullanarak bağlayın.</li>
	<li>Aydınlık alan floresan mikroskop kullanarak analiz. Not: kırmızı kan hücreleri CMHs bileşenleri olan kan damarlarının yayımlanan kırmızı-turuncu o boyama altında görünür.</li>
</ol>6. Perl Prusya Mavisi boyama
Not: Bu yordam Perls boyama seti kullanılarak gerçekleştirilir.
<ol><li>Slaytlar distile su ile yıkayın.</li>
	<li>Ferrocyanide ve hidroklorik asit, 10 min için eşit parçaya karışımı ile reaksiyon çözümde leke.</li>
	<li>Kurutmak, Sil, mount ve slaytları 5,7-5.10 adımlarda açıklandığı gibi analiz.</li>
</ol>7. EB çift-boyama
Not: Bu yordam adım 4.1.3 izler.
<ol><li>Slaytlar PBS ile 5 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>Slaytlar ile 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) çözüm 15 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
	<li>PBS çözüm 5 min için üç kez slaytlarla yıkayın ve slaytlar PBS-gliserol çözüm ile bağlayabilirsiniz.</li>
	<li>Floresan mikroskop görüntülerde analiz. EB ifade kırmızı floresans tarafından belirtilir; çekirdek tarafından mavi floresans gösterilir.</li>
</ol>8. MR SWI
<ol><li>MRI aktif korumalı bir degrade sistemi (16 cm iç çapında) ile donatılmış bir 7-T mıknatıs gerçekleştirin.</li>
	<li>Yedi gün sonra tedavi, fareler bir isoflurane anestezi sistemi kullanarak 1.5-%2.0 isoflurane sağlamlılık zehirlenmesinden anestezi.</li>
	<li>Veteriner merhem kuruluk anestezi iken altında önlemek için fareyi gözleri üzerine uygulayın.</li>
	<li>Fareler eğilimli pozisyonda tutun ve bir Mr-SWI taraması gerçekleştirin.</li>
	<li>Aşağıdaki parametreleri kullanarak bir hızlı-spin yankı sırası kullanılarak ağırlıklı SWI taramaları elde etmek: zaman (TE) 8 ms, echo tekrarlama (TR) 40 ms zaman, fiske vurmak açı 12 1 mm kalınlığında dilimler elde etmek için °, görüş alanı (FOV) 35 mm × 35 mm, edinme matris 384 × 384, =.</li>
	<li>CMHs Mr-SWI Greenberg ve ark. göre tanımlamak Aşağıdaki ölçütlere dahil 11,: (1) (2) dairesel, izole ve düşük sinyal şiddeti noktalar ve ≤10 mm çapında.</li>
	<li>Deney sonunda, aşırı dozda karbon dioksit (6 L/min akışı) veya konteyner hacmi %30 yöntemini kullanarak fareler ötenazi.</li>
</ol>

<ol><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).</li>
<li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li>
<li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbleed+topography%2C+leukoaraiosis%2C+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li>
<li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170(2016).</li>
<li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22(2018).</li>
<li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice%3A+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+H%26E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li>
<li>Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li>
<li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds%3A+A+guide+to+detection+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441(2016).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114(2017).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69(2018).</li>
<li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li>
<li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li>
<li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lipopolysaccharide+Parkinson%27s+disease+animal+model%3A+mechanistic+studies+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Fundamental+%26+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li>
<li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li>
<li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li>
<li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+small+vessel+disease%3A+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li>
<li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822(2017).</li>
<li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease%3F+-+New+insights+from+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Translational+Stroke+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4(2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Araştırma çalışmaları CMHs üzerinde son birkaç yılda artmıştır. Ancak, CMHs mekanizması bilim adamları bu belirli bir koşula taklit hayvan modeller kurmak isteyen, belirsizdir. Örneğin, Hoffmann vd. CMHs hipoksi ve serebrovasküler autoregulation12bozulmasına neden olduğu gösteren hipoksi indüklenen CMHs fare modeli geliştirdi. Reuter vd. 5 bu serebral amiloid angiopathy önemli bir rol CMHs. Fisher ve ark. etyolojisinde bildirdi LPS enjeksiyon<sup ...

Kırmızı kan hücrelerinin beyin1' den küçük perivasküler mevduat hemosiderin gibi kan bozulma ürünleri klasik serebral microhemorrhages (CMHs) bakın. Tarama Rotterdam araştırmaya göre CMHs kişi 60-69 yaş arası yaklaşık % 17,8 ve %38.3 80 yıl2üzerinde bulunamadı. CMHs yaygınlığı yaşlılarda nispeten yüksektir ve CMHs birikimi ve bilişsel ve nöropsikiyatrik disfonksiyon arasında bir ilişki kurulmuş3,4olmuştur. CMHs çeşitli hayvan modeller son zamanlarda, tip IV collagenase stereotaksik enjeksiyon5, APP transgenik6, β-N-methylamino-L-alanin pozlama7ve hipertansiyon8tarafından indüklenen kemirgen modelleri de dahil olmak üzere bildirilmiştir, bir en iyi kabul edilen seçenek sistemik inflamasyon tarafından indüklenen CMHs ile. Fisher vd. 9 ilk LPS Salmonella typhimurium türetilmiş bir akut CMHs fare modeli geliştirmek için kullanılır. Daha sonra aynı grup aynı yaklaşım2kullanarak alt akut CMHs fare modeli geliştirilmesi bildirdi.
LPS bir standart inflamatuar uyarıcı ile mayi enjeksiyon kabul edilir. Önceki çalışmalarda LPS enjeksiyon neuroinflammation microglia büyük miktarlarda tarafından yansıtıldığı gibi neden olabilir ve2,10astrocyte harekete geçirmek içinde hayvan modelleri doğruladı. Ayrıca, neuroinflammation harekete geçirmek harekete geçirmek ve CMHs sayısı arasında pozitif bir korelasyon kurulmuş2,10olmuştur. Bu önceki çalışmalar üzerinde bağlı olarak, biz bir CMHs fare modeli geliştirmek LPS mayi enjeksiyonu ile isteniyor.
Algılama teknolojileri CMHs üzerine araştırma araştırmalar sayısındaki bir artış sonuçlandı içinde ilerler. En yaygın CMHs algılama yöntemleri şunlardır kırmızı kan hücreleri hematoksilen eozin (HE), ferrik demir algılama tarafından Prusya Mavisi9, boyama boyama tarafından algılanmasını kabul Evans tespiti (EB) ifade ayirt tarafından mavi görüntü ve 7.0 Tesla manyetik rezonans görüntüleme-duyarlılık ağırlıklı görüntüleme (MRG-SWI)10. Bu da çalışmanın tarama için CMHs bir yöntem geliştirmeyi amaçlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Enflamasyon indüksiyonu için</td> <td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2630</td></tr><tr><td>EB sızıntı tespiti için</td><td>EB</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E2129</td></tr><tr><td>DAPI boyama solüsyonu</td><td>Servicbio</td><td>G1012</td> IF Perl' <td>için sayım ortamı</td></tr><tr><td> s Prusya boyama</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td>Prusya boyama kiti</td></tr><tr><td>HE boyama</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>HE boyama için kit</td></tr><tr><td>kloral hidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47335U</td><td>Anestezi için</td></tr><tr><td>fosfat tampon salin (PBS)</td><td>Solarbio</td><td>P1022</td>, <td>deneyde yaygın olarak kullanılan bir tür tampon çözelti</td></tr><tr><td>%0.9 tuzlu su çözeltisi</td><td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., Çin</td><td></td><td>perfüzyon</td></tr><tr><td>paraformaldehit</td> için çözüm <td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>fiksasyon için yaygın olarak kullanılan bir tür çözeltidir</td></tr><tr><td>%20 sükroz çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>G2461</td>, <td>fiksasyon için yaygın olarak kullanılan bir tür çözelti</td></tr><tr><td>%30 sükroz çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>G2460</td>, <td>fiksasyon</td></tr> <tr>için yaygın olarak kullanılan bir tür çözeltidir<td>veteriner merhemi</td><td>Solcoseryl göz jeli, Bacel,</td><td>sıçan gözlerinin korunması için</td> İsviçre <td></td></tr></tbody></table>

alt akut serebral microhemorrhages sıçanlarda lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Serebral microhemorrhages (CMHs) yaşlı hastalarda yaygındır ve çeşitli Nöropsikiyatrik bozukluklar correlated. CMHs etyolojisinde karmaşıktır ve neuroinflammation kez ortak bir olay görülmektedir. Burada, biz alt akut tarif CMHs fare modeli lipopolysaccharide (LPS) enjeksiyon yanı sıra CMHs. sistemik LPS enjeksiyon algılamak için bir yöntem tarafından indüklenen nispeten basit, ekonomik ve uygun maliyetli. LPS enjeksiyon bir büyük avantajı istikrarı iltihap neden olduğunu. LPS enjeksiyonu ile neden CMHs brüt gözlem, Hematoksilen ve eozin (o) boyama, Perl Prusyalı boyama, Evans mavi (EB) çift-etiketleme ve manyetik rezonans görüntüleme-duyarlılık ağırlıklı görüntüleme (MRG-SWI) teknolojisi tarafından tespit edilemedi. Son olarak, CMHs hayvan modelleri, kendi avantajları ve dezavantajları, dahil olmak üzere gelişmekte olan diğer yöntemleri de bu raporda ele alınmıştır.

CMHs çeşitli yaklaşımlar kullanarak tespit edilebilir. En iyi kabul edilen yöntemler şunlardır: (1) Brüt gözlem ve değerlendirme yüzey CMHs ( Şekil 1' de üst panel gösterilen); (2) o kırmızı kan hücreleri (gösterildiği Şekil 2A, üst panel) veya algılama ferrik demir boyama Prusya tespiti için boyama kırmızı kan hücreleri (Şekil 2A, alt panel); lizis türetilmiş (3) BBB sızıntı (paneli yaptı<strong cla...

Biz neden ve LPS enjeksiyon olabilir Sprague-Dawley sıçanlarda neden CMHs gelecekte CMHs patogenezinde üzerine araştırma araştırmalar kullanılan algılamak için bir protokol mevcut.

Alt akut serebral Microhemorrhages sıçanlarda Lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Bu yöntem, serebral mikro kanama nın etiyolojisi, dağılımı ve saptanması gibi serebral mikro kanama alanında anahtar soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı LPS enjeksiyonları stably inflamasyon neden olmasıdır. Buna ek olarak, LPS enjeksiyon oldukça basit, ekonomik, ve maliyet-etkin.Bu yöntem beyin kanaması indüksiyonu hakkında bilgi sağlasa da, depresyon, şizofreni, Parkinson hastalığı, Alzheimer hastalığı ve prion hastalığı gibi diğer beyin hastalıklarına da uygulanabilir. 10 haftalık erkek Sprague Dawley sıçanlara vücut ağırlığının kilogramı başına bir miligram dozda intraperitoneal enjeksiyon ile LPS uygulayın, sonra her sıçanı ev kafesine geri döndürün. Altı saat 16 saat sonra LPS enjeksiyonu tekrarlayın.SD sıçanlarına kilogram başına bir miligram dozda LPS enjekte edilmesinin %5 mortaliteye yol açabileceğini lütfen unutmayın. Mortalite daha genç veya yaşlı sıçanlar veya hamile dişi sıçanlarda artabilir. LPS enjeksiyonundan sonra fareleri kafeslerine geri getirin ve yiyecek ve içeceklere libitum erişimi sağlayın.Terminal anestezi altında, her sıçanda 5-8 milimetre derin kardiyak delik yapın. Delinme noktası, üçüncü ve dördüncü interkostal alanda göğüs kafesinin sol kenar boşluğuna beş milimetre olmalıdır. İğneyi yerinde tutun ve boş tüpü Evans mavisi içeren bir tüple değiştirin.Kan iyileşmesi gözlenene kadar bekleyin ve sonra sol kalp ventrikül içine vücut ağırlığı 100 gram başına 0.2 mililitre bir dozda Evans mavi enjekte edin. Immünoresans görüntüleme ile kan / beyin bariyerinden Evans mavi sızıntı değerlendirirken 10 dakika boyunca bir supine pozisyonda sıçan tutun. Serebral vaskülatür ve beyintemizlemek için% 0.9 tuzlu çözeltisi buz gibi 200-300 mililitre kullanarak kardiyak perfüzyon gerçekleştirin.Fiksasyon için buz gibi %4 paraformaldehite geçin. Sonra, beyni izole ettikten sonra, en az altı saat veya beyin tüpün dibine batana kadar PBS'de %20 sakaroza batırın. Çözeltiyi %30 sakarozla değiştirin ve altı saat daha düzeltin.Son olarak, bir kriyostat kullanarak 10 milimetre kalınlığında beyin dokusu bölümleri hazırlamak. Slaytları PBS ile üç kez beşer dakika yıkayın, ardından 4, 6'diamidino-2-fenilindole veya DAPI çözeltisi ile oda sıcaklığında 15 dakika kuluçkaya yatırın. Daha önce olduğu gibi PBS slaytlar yıkadıktan sonra, PBS-gliserol çözeltisi ile slaytlar monte.Floresan mikroskobunda görüntüleri yakalayın. EB birikimi kırmızı floresan ile gösterilir, çekirdekler mavi floresan ile gösterilir. Damıtılmış suda slaytlar yıkayarak H & E boyama başlayın.Sonra sekiz dakika hematoksilin çözeltisi batırın. Alternatif olarak, Perl Prusya mavi boyama için, 10 dakika boyunca ferrosiyanid ve hidroklorik asit eşit parça karışımı ile reaksiyon çözeltisi leke. Boyama sonra, beş dakika boyunca akan musluk suyu yıkayın.30 saniye boyunca %1 asitalkolü ayırt edin. Bir dakika boyunca akan musluk suyunda yıkandıktan sonra, %0,2 amonyağ suyunda veya doymuş lityum karbonat çözeltisinde 30 saniye ile bir dakika arasında lekeleyin. Daha sonra, beş dakika boyunca akan musluk suyunda yıkayın.30 saniye ile bir dakika arasında eozin çözeltisi ile karşı lekesi. % 90 alkol, daha sonra% 95 alkol ve 0,5-2 dakika her biri için mutlak alkol ile dehydrate. Dehidratasyondan sonra, ksilenin içinde 30 saniye boyunca temizleyin.Monte ettikten sonra, parlak alan floresan mikroskobu kullanarak H&E boyama analiz edin. CmH'lerin bileşenleri olan kan damarlarından salınan kırmızı kan hücreleri H&E boyama altında kırmızı-turuncu renkte görünür. Yüzey CMH'leri, kırmızı oklarda belirtildiği gibi brüt gözlem le tespit edilebilir.Evans mavi boyama evans mavi molekülleri yaralı bir kan-beyin bariyerinden sızan görünür kırmızı floresan ortaya koymaktadır. H&E boyama kılcal damarlar dışında bulunan kırmızı kan hücreleri gösterir, ve Prusya boyama kırmızı kan hücrelerinin lysis türetilen ferrik iyon noktaları gösterir. Bu prosedürü çalışırken, bu serebral mikro kanama neden LPS dozu Parkinson hastalığı veya şizofreni modelinde kullanılan daha büyük olduğunu hatırlamak önemlidir.Bu nedenle, hayvanların çevre mortalite oranını azaltmak için temiz tutulmalıdır. Bu işlemden sonra, serebral mikro kanamada kan-beyin bariyerinin dış yapısına verilen zararı belirlemek, beyin paranilinde beyin parankiminin in vivo'da serebral mikro kanamaların dağılımı ve glial hücre aktivasyonu gibi diğer yöntemler de uygulanabilmektedir.

sub-acute-cerebral-microhemorrhages-induced-lipopolysaccharide

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Anevrizmal subaraknoid kanama (SAK) zaman bir anevrizma rüptürü subaraknoid boşluğa oluşur kanıyor. Subaraknoid kanama birkaç yıl önce olduğu gibi aynı olmaya devam ediyor sonra bu olay gelen morbidite ve mortalite gelişmiş tedavi yaklaşımları nedeniyle bir düşüş, vazospazm riski olmuştur da. Serebral vazospazm başlatan olayları tanımlamak için kapsamlı ve tekrarlanabilir hayvan modeli kurmanın önemi Barry tarafından 1979 yılında deneysel vazospazm modelinde sıçanların ilk kullanımından bu yana...

Deneysel Subaraknoid Kanama Sonrası Gecikmeli Serebral Vazospazm değerlendirin A Düşük Mortalite Rat Modeli

Intraserebral kanama (İSK) ve Klinik ilgili hayvan modelleri hemorajik inme bilgimizi genişletmek ve yeni tedavi stratejileri incelemek gereklidir. Bu çalışmada, biz tanımlamak ve farelerin bazal ganglion (korpus striatum) içine otolog tam kan ya da bakteriyel kollajenaz ya tek taraflı enjeksiyon uygulamak iki ICH modelleri değerlendirir.

Farelerde Modelleme İntraserebral Kanama: Otolog Kan veya bakteriyel kollajenaz Enjeksiyon

Bu video, lipopolisakkarit (LPS) kullanan bir sıçan modelinde kan-beyin bariyeri (BBB) bozulmasını ve serebral mikrokanamaları indükleme sürecini göstermektedir. BBB geçirgenliğinin artmasına ve ardından beyin dokusu hasarına yol açan bağışıklık tepkilerinin sırasını vurgular.

Lipopolisakkarit Kullanılarak Bir Sıçan Modelinde Serebral Mikrokanamaların İndüksiyonu

Bu video, bir sıçan modelinde Serebral mikrokanamaları (CMH'ler) tespit etmek için yapılan bir testi göstermektedir. CMH'ler, sızan kırmızı kan hücreleri (RBC'ler) tarafından tanımlanan kan-beyin bariyerinin bozulmasına bağlı beyin kanamalarıdır. Bir sıçan modelinde, sabit beyin dokusu kriyodare ile korunur, kesitlere ayrılır ve RBC'ler için hematoksilen-eozin ile boyanır, bu da CMH'lerin mikroskobik görüntülenmesine izin verir. Sızan eritrositler mikroskop altında kırmızı-turuncu olarak...

Bir Sıçan Modelinde Serebral Mikrokanamaların Tespiti

İntraserebral kanamanın klinik öncesi modelleri, klinik hastalığın belirli yönlerini taklit etmek için kullanılır. Bu nedenle, yaralanma mekanizmaları ve potansiyel terapötik stratejiler araştırılabilir. Bu protokolde, intrastriatal (bazal gangliyonlar) otolog kan veya kollajenaz enjeksiyonları olmak üzere iki intraserebral kanama modeli tanımlanmıştır.

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Prematüre ensefalopatisi, erken doğumdan kaynaklanan yaralanma ile ilişkili merkezi sinir sistemi anormalliklerini kapsar. Bu rapor, koryoamniyoniti taklit eden in utero geçici sistemik hipoksi-iskemi ve intra-amniyotik lipopolisakkarit uygulamasının (LPS) klinik olarak anlamlı bir sıçan modelini ve enfeksiyöz uyaranların ve plasental underperfüzyonun CNS gelişimi üzerindeki ilişkili etkisini açıklamaktadır.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Burada sunulan protokol, yetişkin erkek Dark Agouti sıçanlarında her iki kortikal yarımkürenin yaygın bir gri madde demyelinasyonunun çoğaltılmasına izin verir. Yöntem, bir kateterin intraserebral implantasyonu, miyelin oligodendrosit glikoproteine karşı subklinik bağışıklama ve implante kateterden pro-enflamatuar sitokin karışımının intraserebral enjeksiyonundan oluşur.

Pro-enflamatuar Sitokinlerin İntraserebral Enjeksiyonu ile İndüklenen Yaygın Serebral Kortikal Demiyelinasyonun Sıçan Modeli

Otolog kanın çift enjeksiyonu yoluyla bir sıçanda büyük bir pontin kanama modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Otolog Kanın Çift Enjeksiyonu ile Masif Pontine Kanaması

Subaraknoid kanama insanda yüksek mortalite ve morbidite yükü taşımaya devam etmektedir. Durum ve patofizyolojisi hakkında daha fazla araştırmayı kolaylaştırmak için, kiazmatik öncesi, tek enjeksiyon modeli sunulmaktadır.

Bir sıçan modelinde deneysel subaraknoid kanamayı indüklemek için kiazmatik öncesi, tek otolog kan enjeksiyonu

Posthemorajik prematüre hidrosefali (PHHP), koryoamniyonit ve intraventriküler kanama kombine edilerek neonatal sıçanlarda modellenebilir. Bu doğum öncesi ve doğum sonrası olayların kombinasyonu, yaşam boyu makrosefali, ventrikülomegali ve yüksek kafa içi basınç dahil olmak üzere PHHP'nin klinik özelliklerini doğru bir şekilde özetler.

Sıçanlarda Prematüre Posthemorajik Hidrosefalisinin Modellenmesi

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Keşfedin, LPS enjeksiyonu ile sıçanlarda serebral mikrokanamaları indüklemeyi ve görüntülemeyi. Bu yöntem, enflamasyonun rolünü inceleyerek nörolojik bozuklukların patogenezini anlamaya yardımcı olur.

Alt akut serebral Microhemorrhages sıçanlarda Lipopolysaccharide enjeksiyonla indüklenen

Daha fazla video keşfet