Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Burada, in vivo microdialysis EEG kayıtları ile birlikte epileptik ve sigara-epileptik sıçan ventral hipokampus glutamat ve aspartat sürümde analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ekstraselüler glutamat ve aspartat konsantrasyonu hastalık farklı aşamalarında ile ilişkili.

Bu yöntem nörolojik hastalıkların doğal tarihi sırasında nörokimya değişiklikleri gibi nörolojik bilimlerde anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Önerilen mikrodiyaliz EEG tekniğinin en büyük avantajı, bu tür kombine yaklaşımın, hastalığın gelişimi ve ilerlemesinin belirli aşamalarında nörotransmitter salınımındaki değişikliklerin eşleşmesine olanak sağlamasıdır. Faraday Kafesi'nin dışına yerleştirilmiş amplifikatörün açılarak başlayın.

EEG yazılımını açın ve EEG edinimini başlatın ve bağlantısız kablolar tarafından üretilen EEG sinyalini gözlemleyin. Daha sonra, hayvanı bir elin iki gerilmiş parmağı arasında tutarak ve diğer serbest elini kullanarak konektörleri elektrot kaidesine vidalayarak gergin EEG kayıt sistemine bağlayın. EEG sinyali ölçekte olacak şekilde, amplifikatörün her kanalında tek bir hayvanın elektrot sinyaline göre bir amplifikasyon faktörü ayarlayın.

Sonra hayvan araştırmacının doğrudan gözlem altında en az bir saat için yeni kafes keşfetmek sağlar. Kabloyu hayvanın malına göre ayarlayın ve kabloların hayvanın hareketlerini ve yalan duruşunu etkilemediğinden emin olun. Son olarak, video kameralar üzerinde çerçeveleme doğru görüntü kontrol edin ve sonra video EEG kaydı nı başlatın.

Mikrodiyaliz problarını üretici kullanıcı kılavuzuna göre ilk kullanım için hazırlayarak başlayın ve Ringer's Solution ile doldurun. Daha sonra, FEP Boru 10 santimetre uzunluğunda parçalar kesilmiş ve farklı renklerde boru adaptörleri kullanarak prob giriş ve çıkış kanülleri bağlayın. Borunun tüm bağlantılarda ölü alan olmadan adaptörlere dokunduğundan emin olun.

Hayvanın kafasını sıkıca tutarak cımbızkullanarak kukla kanülünü kılavuzundan çıkarın. Mikrodiyaliz probu kılavuzukana yerleştirin ve kanülü daha da sağlamlamak için modelleme kil kullanın. Daha sonra, hayvanbağlı EEG kayıt sistemine bağlayın.

Sonra pleksiglas silindir içine hayvan koymak ve yeni bir ortam keşfetmek sağlar. Uyanık ve serbestçe hareket eden fare hareketlerini takip edin. Daha sonra, sondanın girişini boru adaptörlerini kullanarak Ringer's Solution içeren açıkptif 22 gauge iğneile 2,5 mililitrelik şırınga bağlayın.

2,5 mililitrelik şırınganın pistonuna sürekli iterek bir mililitre Ringer's Solution'ı 10 saniye içinde proba itin. Prob kullanıma hazır olduğunda belirtmek için prizde görünen sıvının damlasını kontrol edin. Son olarak, FEP boruya bağlı 2,5 mililitrelik şırıngaları Ringer's Solution ile bağdaştırıcılarla tüpleyerek doldurun ve infüzyon pompasına monte edin.

Pompayı dakikada iki mikrolitreden başlatın ve bir gecede çalıştırın. Video EEG kayıtları ile doğruladıktan sonra numune toplamadan önceki üç saat içinde nöbet lerin olmamasını, Ringer's Solution ile doldurulmuş FEP tüp konserveşleri taşıyan pompayı durdurun. 100 milimolar potasyum çözeltisi içeren değiştirilmiş bir Ringer's Solution ile doldurulmuş tüp adaptörleri ile FEP borubağlı 2,5 mililitrelik şırıngalar başka bir dizi monte.

Pompayı dakikada iki mikrolitreden başlatın ve çalıştırın. Sistemde hava kabarcıkları yokluğunu kontrol edin ve borunun tüm bağlantılarda ölü alan olmadan adaptörlere dokunduğundan emin olun. Daha sonra, prob kullanıma hazır olduğunda belirtmek için çıkışta görünen sıvının damlasını kontrol edin.

Daha sonra, Ringer's Solution ile doldurulmuş şırıngaların FEP borularını her hayvandaki sondanın giriş kanülüne bağlayın ve çıkış ın ucundaki sıvı damlasının görünümünü bekleyin. Sondanın çıkışını, test tüpünde toplanmasına yol açan FEP tüpüne bağlayın. FEP boruyu delikli bir kapakla kapalı 0,2 mililitrelik test tüpüne takın ve bir parça modelleme kilile sabitleyerek tüpün yerinde kalmasını sağlayın.

Pompayı sistemi dengelemek için numune toplamadan dakikada iki mikrolitrede 60 dakika çalıştırdıktan sonra, temel koşullar altında art arda beş tane 30 dakikalık diyaliz numunesi toplayın ve numuneleri buz üzerinde saklayın. 10 dakika sonra, 100 milimolar potasyum Ringer's Solution içeren şırıngalardan tüpü normal Ringer's Solution'a geçirin ve pompanın çalışmasına izin verin. Beşinci post-equilibration diyaliz toplandıktan sonra, bir saat boyunca her 10 dakikada 20 mikrolitre dialysate fraksiyonları toplamak.

Sonra üç ek 30 dakika dialysate örnekleri toplamak ve pompa durdurmak. Son olarak, deneyden sonra hplc analizine kadar numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın. Deney tamamlandıktan sonra, kullanılan mikrodiyaliz sondalarını distile suyla durulayın ve bir sonraki kullanıma kadar temiz distile su yla dolu bir şişede saklayın.

Son olarak, distile su ile tüm mikrodiyaliz kurulum durulayın ardından yüzde 70 etanol. Etanol'ü havayla değiştirin ve kurulumu steril bir ortamda saklayın. Bunlar hastalığın kronik evresinde kontrol ve epileptik sıçanların hipokampusundan kaydedilen temsili EEG izleridir.

Kontrol sıçanlarında EEG değişikliği gözlenmezken, epileptik sıçanlarda davranışsal nöbetlerden yaklaşık 500 milisaniye önce ve sırasında senkronize paroksismal epileptiform aktivite gözlendi. Kronik epileptik sıçanlarda bulunan bazal glutamat konsantrasyonu kontrol hayvanlarına göre anlamlı olarak yüksekti. Yüksek potasyum kontrol sıçanlarda yaklaşık 30 dakika ve kronik epileptik sıçanlarda yaklaşık 60 dakika glutamat ek bir salınım uyandırdı.

Bu prosedürü denerken, cihazla implante edilen hayvanların uzun süreli bir deney boyunca onu kaybetmeye meyilli olduklarını hatırlamak önemlidir, bu nedenle hayvan hareketliliğine müdahale etmekten kaçınmak için hafif bir kafa seti ve yeterince uzun kablolar kullanın. Uygun bir analitik denemenin kullanılabilirliğine bağlı olarak, yöntem aynı anda EEG kaydı nı kullanırken beyindeki farklı çözünür molekülleri test etmek için daha fazla kullanılabilir. Gelişiminden sonra, bu teknik epileptoloji alanında araştırmacılar bir temporal lob epilepsi durumunda uyarıcı nörotransmisyon değişiklikleri içine bir fikir sağlamak için izin verdi.

Bu videoyu izledikten sonra, serbestçe hareket eden bir epileptik sıçanda derinlik elektrot EEG kaydı ile birlikte in vivo mikrodiyaliz nasıl daha iyi bir anlayışa sahip olacak güveniyoruz.