Name: Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda portal kan örneklemesi kullanarak bağırsak-kan bariyeri geçirgenliğini doğrudan ölçme yöntemini. Bu teknik karaciğer ve böbrek fonksiyonlarından etkilenmez.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

İş Bilim Bakanlığı ve Yükseköğretim RP tarafından desteklenmektedir, elmas vermek no: DI2017 009247.

Deneyler bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması yönergesi 2010/63 AB göre erkek Wistar Kyoto fareler üzerinde gerçekleştirilen ve ben Varşova yerel Biyoetik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. Intraintestinal yönetim için satır ekleme
Not: Burada bir kateter kullanarak bir işaretleyici İdaresi intracolonic teklif ediyorum. Sözlü yönetim veya sonda ile besleme sindirim sistemi Örneğin mide ve oniki parmak bağırsağı çeşitli düzeylerde tarafından değiştirilebilir. Cerrahi Önlük, başlık ve eldiven gibi tek kullanımlık cerrahi giyim kullanmak (iğne, vb) 1-6 işlemler sırasında kullanılan keskin aletler ile ilgili güvenlik önlemleri takip etmek emin olun unutmayın.
<ol><li>Gecede daha önce yordamı hızlı hayvanlar. Üretan 1.5 g/kg bw ı.p. değerlendirin uygun anesthetization enjeksiyonu ile palpebral ve kornea refleksleri eksikliği ve ayak-çimdik ve Kuyruk tutam yöntemi tarafından elde edilen yani genel anestezi sırasında tüm yordamları gerçekleştirin.</li>
	<li>Pediatrik Foley kateter (10F veya 8F) kolon kateter kullanın. Kateter kolon (yaklaşık 8 cm) eklenecek bölümü göstermek için işaretleyin.</li>
	<li>Anal bölge ve rektum dışkı içeriğinde kateter kolon eklemeden önce kontrol edin. Dışkı varsa, rektal alan masaj rektum boş.</li>
	<li>Bir yağ (Örneğin gliserin veya petrolatum) kateter boyunca koymak. Anüs ve çevresini yağ ile nemlendirin.</li>
	<li>Bir kılavuz tel yaklaşık 8 cm dış anal sfinkter aracılığıyla sondayla yerleştirin. Yavaş ileri geri ve dairesel hareketler yapmak. Not: kateter konumunu kateter ekleme sırasında abdominal palpasyonla tarafından kontrol tutmak.</li>
</ol>2. inferior Vena kava kateterizasyon
<ol><li>Kasık kürk tıraş. Alternatif olarak alkol ve povidone iyot ile cilt 3 kez dezenfekte ve kasık bölgesinde cerrahi perdeler ile kaplayın.</li>
	<li>Femoral arter darbe hissediyorum ve boyuna 2,0 cm darbe aşikar yerde uzunluğu için deriyi kesme deneyin.</li>
	<li>Fasya ve nörovasküler demet görselleştirmek için kas incelemek.</li>
	<li>Nörovasküler demet üzerinden femoral ven teşrih: ilk sinirler, sonra femoral arter ve ven. Not: femoral ven küçük dalları kolayca kanama üreten hasarlı, beri nörovasküler demet diseksiyon sırasında dikkatli olun.</li>
	<li>İki bitişik harfler üzerinde femoral ven koymak. Henüz knot kravat mı. İğne bağı ile proksimal ip uçları yakalamak.</li>
	<li>Dikkatle ip uçları yukarı doğru damarı proksimal kısmı kapatmak için sahibi ile çek. Damar kan ile dolu kadar bekleyin ve distal düğüm kravat.</li>
	<li>Küçük bir kesi yapmak (ca. 1 mm) üzerinde ven düğümü atacağız ve proksimal bağ arasında mikrocerrahi makas kullanarak. Cımbız veya iğne ile eğri sonuna kullanarak kateter takın. Not: damar ponksiyon ve iğne kıvrık ucu kateter için bir kılavuz olarak kullanın. Proksimal bağ kateter eklerken gevşetin. 6-7,0 cm için kateter takın.</li>
	<li>İki tek cerrahi knot ile femoral ven kateteri güvenli. Proksimal bağ de bağla.</li>
	<li>Kateterin a_ılabilinirse şırıngayla kan girişiminde bulunarak denetleyin. Sonda heparinized serum (100 adet/mL) 0.3 mL ile yıkayın.</li>
	<li>Tek dikiş iki kat ile cerrahi yara kapatın.</li>
</ol>3. Portal ven kateterizasyonu
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58456/58456fig1.jpg"> Resim 1 : Portal kateter. Portal kateter bir iğne OD oluşur: 0.9 mm uzunluğu yaklaşık 25.0 mm [A], Esnek poliüretan kateter OD: 0,025", uzunluğu yaklaşık 100,0 mm [B], kateter OD esnek polietilen ucu: 0.040", yaklaşık 15.0 mm uzun [C], bir eklenti [D]. ve bir bağ 3/0 100,0 mm [E] uzunluğunda. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58456/58456fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol><li>Şekil 1göre portal kateter hazırla.<ol>
<li>İğne kesim ucunu bağlayın (OD: 9 mm) içine poliüretan kateter OD: 0,025".</li>
		<li>İğne ve kateter, bağ 3/0 bağla. Not: bağ daha uzun bir parçası en az 6 cm uzunluğunda olduğundan emin olun.</li>
		<li>Kateter OD sonuna yerleştirin: 0,025" içine polietilen kateter OD: 0.040".</li>
		<li>Bir metal veya plastik fiş sondayla kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Orta hat laparotomi<ol>
<li>Kürk karın tıraş, dönüşümlü olarak alkol ve povidone iyot ile cilt 3 kez dezenfekte ve cerrahi perdeler ile alanı kapsamaktadır.</li>
		<li>Deriden boyuna göğüs kemiği xiphoid göbek için kesti.</li>
		<li>Beyaz hattı boyunca karın duvarı kaslarının kesti.</li>
		<li>Böylece xiphoid kıkırdak iki kesim arasında kesme Y şeklinde rostrally genişletin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Portal ven diseksiyon<ol>
<li>Serum fizyolojik ile cerrahi temizleme bezi nemlendirin.</li>
		<li>Çekum, artan ve enine kolon ve ince bağırsak döngü exteriorize. Bağırsak bıçaklanmasından kökünü göstermek için sol tarafa koy. Not: bağırsak bağırsak kurumasını korumak için bir fizyolojik serum ile ıslatılmış gazlı bezle kapak.</li>
		<li>Portal ven göstermek için dikkatli bir şekilde karaciğer lobları taraf veya yukarı doğru diyafram nemlendirilmiş temizleme bezi ile doğru taşıyın.</li>
		<li>Bıçaklanmasından (içinde karaciğer Hilus, 5 mm uzun) ile kapsanmayan portal ven parçası yerelleştirilmesine ve portal ven altında bağ 3/0 (15 cm uzunluğunda) geçirin. Not: bir fizyolojik serum fizyolojik solüsyonu ile bağ dokuları bağ yerleştirerek süre zararlardan korumak için kadar ıslat!</li>
		<li>Forseps ile ip uçları kelepçe ve yavaşça gemi stabilize etmek sıkın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ekleme ve stabilization kateterin<ol>
<li>Portal kateter'ın bağ portal ven ücretsiz parçası altında daha uzun bir parçası geçmek ve böylece kateter sadece portal ven yanında bulunan çekin.</li>
		<li>Üst mezenterik ven üst mezenterik ven ve portal ven altında 3 mm iğne takın. 30 ° açıyla ve damar içine girdikten sonra iğne tutun, açı azaltmak ve iğne neredeyse yatay olarak, portal ven paralel ilerlemek. Not: bir süre boyunca yaklaşık 6-7 mm iğne yerleştirin. Teskin bağ-hafifçe sıkın portal ven kateteri eklerken.</li>
		<li>1-2 damla doku yapıştırıcısı iğne yerleştirildiği yerde geçerlidir. Karaciğer kapak bezlerden kaldırın.</li>
		<li>Bağırsak karın boşluğuna koy.</li>
		<li>Bağırsak kadar ısıtılmış serum fizyolojik solüsyonu ile nemlendirin ve nemli steril gazlı bez ile kaplayın.</li>
		<li>Kateterin a_ılabilinirse kontrol ve heparinized tuz (100 adet/mL) 0.3 mL sondayla durulayın. Not: Venöz kan kateter içinde kendiliğinden backflows.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ameliyat sonu<ol>
<li>5 dakika sonra bağırsak ve peristaltik hareketleri rengini kontrol, uygun mezenterik kan akımı korunur emin olun.</li>
		<li>3 dikiş ile karın boşluğu kapatmak: periton karın duvarı kasları - sürekli, absorbe dikiş; iç tabakası ile duvar kalan kasları karın duvarı - sürekli, absorbe dikiş; deri ve subkutan doku - tek, absorbe olmayan dikiş. Not: göbek çevresinde kateterin distal bölümü Exteriorize.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Portal ven kan örnekleme
<ol><li>Örnek portal ven kan zaman zaman kullanılan belirli test protokolüne göre; bkz. Tablo 1.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Kısa protokol</td>
			<td>Uzun protokol</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 – temel (önce intracolonic yönetim)</td>
			<td>t0 – temel (önce intracolonic yönetim)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 – 5 dk sonra intracolonic yönetim</td>
			<td>t1 – 30 dk sonra intracolonic yönetim</td>
		</tr>
<tr>
<td>t2 -30 dk sonra intracolonic yönetim</td>
			<td>t2 -60 dk sonra intracolonic yönetim</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Portal kan örnekleme protokolleri bağırsak geçirgenliği değerlendirmesi için.
Not: Üst üste kan örnekleme arasındaki süre esas olarak test edilmiş maddelerin bioavailability ve site yönetim (kolon, mide, vb) bağlıdır.
<ol start="2"><li>Portal kateter tak aç ve kan akımı serbestçe izin ver.</li>
	<li>Kullanım şırınga (vol. 2 mL) ve iğne OD künt: 0.9 mm. den fazla 0.7 mL kan toplamak.</li>
	<li>Sonda heparinized serum (100 adet/mL) 0.3 mL ile durulayın ve kateter tak kapatın.</li>
</ol>5. inferior Vena kava kan örnekleme
<ol><li>Örnek inferior vena kava kan zaman zaman kullanılan belirli test protokolüne göre; Tablo 2' ye bakın.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Portal ven</td>
			<td>İnferior vena kava</td>
		</tr>
<tr>
<td>t0 – temel (önce intracolonic yönetim)</td>
			<td>t0 – temel (önce intracolonic yönetim)</td>
		</tr>
<tr>
<td>t1 – 30 dk sonra intracolonic yönetim</td>
			<td>t1 – 30 dk sonra intracolonic yönetim</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: Protokolü karaciğer Temizleme ölçüm için örnekleme ve gut-portal kan karaciğer sistemik kan yolu izleme kan.
<ol start="2"><li>İnferior vena kava kateter tak aç ve kan akımı serbestçe izin ver.</li>
	<li>Fazla 0.7 mL şırınga kullanarak kan toplamak (vol. 2 mL) ve iğne OD kırık: 0.9mm.</li>
	<li>Sonda 0.2-0.3 ile durulayın mL heparinized serum fizyolojik (100 adet/mL) ve kateter tak kapatın.</li>
</ol>6. Yönetim bir bağırsak geçirgenliği Marker
<ol><li>Kılavuzu kaldır ve steril su (genellikle 1 mL ama onay gerçek balon boyutu ekleme önce) yeterli hacim kullanarak kolon kateter balon şişirmek. Not: Balon çapı 1 cm aşmaması gerekir.</li>
	<li>Sıçan baş aşağı (iki nokta üst üste yönetilen çözümden çıkış riskini en aza indirmek için eğim yaklaşık % 15) yerleştirin.</li>
	<li>Yavaş yavaş test madde yönetmek (Örneğin trimethylamine, 100 mg/kg bw) kolon kateter drenaj limanda kullanarak. Not: hacmi yönetilen çözümün 0.75 mL ve anüs yönetilen çözümden çıkış önlemek için 0.5 mL/dk besleme hızı fazla olamaz.</li>
	<li>10 dakika sonra kateter balonu deflate.</li>
	<li>Örnek kan inferior vena kava ve portal ven kullanılan belirli test protokolüne göre; bkz: Tablo 1 ve tablo 2.</li>
	<li>Hayvan onaylı yöntemi ile ötenazi.</li>
</ol>7. karaciğer Temizleme hesaplanması
<ol><li>Karaciğer Temizleme, hepatik çıkarma portal kan konsantrasyonu ve inferior vena kava kan konsantrasyonu arasındaki fark veya inferior vena kava portal kan konsantrasyonu, (1 - (inferior vena kava toplama oranı tarafından anlaşılmış hızlı / portal ven konsantrasyon)).</li>
</ol>8. Test madde konsantrasyonu n kan örnekleri değerlendirilmesi
<ol><li>Test madde ve test metodoloji bağlı olarak örnek uygun Laboratuvar yordamları (Santrifüjü, vb) tabi. Önerilen Protokoller'de TMA/TMAO ve sıvı kromatografi triple quadrupole kütle spektrometresi ile birleştiğinde kullanarak SCFA konsantrasyon değerlendirin. Lütfen ek malzeme yöntemi ayrıntılı bir açıklamasını bulabilirsiniz.</li>
</ol>

<ol><li>Camilleri, M., Madsen, K., Spiller, R., Greenwood-Van Meerveld, B., Verne, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+function+in+health+and+gastrointestinal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier function in health and gastrointestinal disease.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 24 (6), 503-512 (2012).</li>
<li>Keita, A. V., Soderholm, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intestinal+barrier+and+its+regulation+by+neuroimmune+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%3A+The+Official+Journal+of+the+European+Gastrointestinal+Motility+Society%22%5BJournal%5D)">The intestinal barrier and its regulation by neuroimmune factors.</a> Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society. 22 (7), 718-733 (2010).</li>
<li>Farhadi, A., Banan, A., Fields, J., Keshavarzian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier%3A+an+interface+between+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier: an interface between health and disease.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (5), 479-497 (2003).</li>
<li>Jaworska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+in+rats+is+associated+with+an+increased+permeability+of+the+colon+to+TMA%2C+a+gut+bacteria+metabolite%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypertension in rats is associated with an increased permeability of the colon to TMA, a gut bacteria metabolite.</a> PloS one. 12 (12), e0189310(2017).</li>
<li>Fujii, H., Nakai, K., Fukagawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+oxidative+stress+and+indoxyl+sulfate+in+progression+of+cardiovascular+disease+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Apheresis+and+Dialysis%3A+Official+Peer-Reviewed+Journal+of+the+International+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Apheresis%2C+the+Japanese+Society+for+Dialysis+Therapy%22%5BJournal%5D)">Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease.</a> Therapeutic Apheresis and Dialysis: Official Peer-Reviewed Journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy. 15 (2), 125-128 (2011).</li>
<li>Tomasova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracolonic+hydrogen+sulfide+lowers+blood+pressure+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%3A+Biology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intracolonic hydrogen sulfide lowers blood pressure in rats.</a> Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 60, 50-58 (2016).</li>
<li>Brahe, L. K., Astrup, A., Larsen, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+butyrate+the+link+between+diet%2C+intestinal+microbiota+and+obesity-related+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+Reviews%3A+An+Official+Journal+of+the+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%22%5BJournal%5D)">Is butyrate the link between diet, intestinal microbiota and obesity-related metabolic diseases?</a> Obesity Reviews: An Official Journal of the International Association for the Study of Obesity. 14 (12), 950-959 (2013).</li>
<li>Ufnal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimethylamine-N-oxide%3A+a+carnitine-derived+metabolite+that+prolongs+the+hypertensive+effect+of+angiotensin+II+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Canadian+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Trimethylamine-N-oxide: a carnitine-derived metabolite that prolongs the hypertensive effect of angiotensin II in rats.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 30 (12), 1700-1705 (2014).</li>
<li>Huc, T., Nowinski, A., Drapala, A., Konopelski, P., Ufnal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole+and+indoxyl+sulfate%2C+gut+bacteria+metabolites+of+tryptophan%2C+change+arterial+blood+pressure+via+peripheral+and+central+mechanisms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Indole and indoxyl sulfate, gut bacteria metabolites of tryptophan, change arterial blood pressure via peripheral and central mechanisms in rats.</a> Pharmacological Research. 130, 172-179 (2018).</li>
<li>Ufnal, M., Pham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut-blood+barrier+permeability+-+A+new+marker+in+cardiovascular+and+metabolic+diseases%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">The gut-blood barrier permeability - A new marker in cardiovascular and metabolic diseases?</a> Medical Hypotheses. 98, 35-37 (2017).</li>
<li>Le Ferrec, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+the+intestinal+barrier.+The+report+and+recommendations+of+ECVAM+Workshop+46.+European+Centre+for+the+Validation+of+Alternative+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Alternatives+to+Laboratory+Animals%3A+ATLA%22%5BJournal%5D)">In vitro models of the intestinal barrier. The report and recommendations of ECVAM Workshop 46. European Centre for the Validation of Alternative methods.</a> Alternatives to Laboratory Animals: ATLA. 29 (6), 649-668 (2001).</li>
<li>Bohets, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+absorption+screening+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Strategies for absorption screening in drug discovery and development.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 1 (5), 367-383 (2001).</li>
<li>Grootjans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+assessment+of+barrier+integrity+and+function+of+the+human+gut%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Surgery%22%5BJournal%5D)">Non-invasive assessment of barrier integrity and function of the human gut.</a> World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2 (3), 61-69 (2010).</li>
<li>Bielinska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+salt+intake+increases+plasma+trimethylamine+N-oxide+%28TMAO%29+concentration+and+produces+gut+dysbiosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">High salt intake increases plasma trimethylamine N-oxide (TMAO) concentration and produces gut dysbiosis in rats.</a> Nutrition. 54, 33-39 (2018).</li>
<li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li>
<li>Denno, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+lactulose+to+mannitol+ratio+to+evaluate+childhood+environmental+enteric+dysfunction%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%3A+An+Official+Publication+of+the+Infectious+Diseases+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Use of the lactulose to mannitol ratio to evaluate childhood environmental enteric dysfunction: a systematic review.</a> Clinical Infectious Diseases: An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America. 59 Suppl 4, S213-S219 (2014).</li>
<li>Lugea, A., Salas, A., Casalot, J., Guarner, F., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+hydrophobicity+of+the+rat+colonic+mucosa+is+a+defensive+barrier+against+macromolecules+and+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Surface hydrophobicity of the rat colonic mucosa is a defensive barrier against macromolecules and toxins.</a> Gut. 46 (4), 515-521 (2000).</li>
<li>Bloemen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+chain+fatty+acids+exchange+across+the+gut+and+liver+in+humans+measured+at+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Short chain fatty acids exchange across the gut and liver in humans measured at surgery.</a> Clinical Nutrition. 28 (6), 657-661 (2009).</li>
<li>Huc, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonic+hydrogen+sulfide+produces+portal+hypertension+and+systemic+hypotension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Colonic hydrogen sulfide produces portal hypertension and systemic hypotension in rats.</a> Experimental Biology and Medicine. 243 (1), 96-106 (2018).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Açıklanan doğrudan, in vivo, GBB geçirgenliği ölçüm yöntemi closetophysiological koşulları (bağırsak kan akışını korur) gastrointestinal sistemde korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenir hemen hemen değil.
Kritik bu tekniği portal Kateter yerleştirilmesi adımdır. Bu aynı zamanda yavaşça ve kararlı yapılmalıdır. Bir hafif, kısa kanama portal ven doğru gerçekleştirilen bir delik ortaya çıkabilir; Ancak, iğne damar eklenir durur. Sürekli kanama portal ven delikli gösterir....

Gut-kan bariyerini (GBB), bağırsak bariyer olarak da bilinir, besin1emilimini izin verirken zararlı bileşikler geçişini sınırlamak için kan dolaşımına bağırsak lümen ayıran karmaşık bir çok katmanlı sistemidir. Üç ana katmandan oluşur: mukus tabakası, epitel ve lamina propria.
Çok sayıda faktör GBB bütünlüğü ve fonksiyonu2etkileyebilir. GBB dahil kardiyovasküler ve metabolik hastalıklar3gut bakteri metabolitleri artan bir geçit kan dolaşımına4için yol açabilir, gastrointestinal ve extraintestinal hastalıklarında bozulmuştur gösterilmiştir. Gut bakteri metabolitleri artan bir penetrasyon tüm organizmanın çalışmasını etkileyebilir. Örneğin, son yıllarda yapılan çalışmalarda indoller, H2S, kısa zincirli yağ asitleri (SCFA) ve trimethylamine N-oksit, gibi bakteriyel metabolitleri önemli bir etkisi dolaşım sistemi işlevleri5,6,7 göster ,8,9. Son olarak, artan bir GBB geçirgenliği kardiyovasküler ve metabolik hastalıkların morfolojik ve fonksiyonel değişiklikler bağırsak10ile ilişkili olan bir işaretleyici olarak hizmet verebilir önerilmiştir. Bu nedenle, bakteriyel metabolitleri gut-portal kan karaciğer sistemik kan yol izleme için temel ve klinik Bilimleri ilgi olabilir.
Yaygın olarak kullanılan deneysel GBB geçirgenliği değerlendirilmesi için gerçekleştirilen vitro rezeke bağırsak kesimleri, mukoza veya yapay membran11,12parçaları kullanarak yöntemlerdir. Bu yöntemleri doğruluğunu GBB düzgün sürekli bağırsak kan akımı gerektirir Aslında tarafından güvenilir değil. Öte yandan, mevcut vivo Yöntemler idrar değerlendirilmesi veya periferik kan konsantrasyonları eksojen işaretleri13temel alan. Ancak, periferik kan ve idrar konsantrasyon eksojen bileşiklerin böbrek fonksiyonu, Yani, glomerular filtrasyon ve borulu atılımı yanı sıra karaciğer metabolizması tarafından etkilenir, Yani, önce metabolizma geçmem. Her iki parametre GBB işlev bağımsız olarak çalışma konuları arasında önemli ölçüde farklı olabilir.
Bu kağıt GBB geçirgenliği sıçanlarda portal kan örnekleme kullanarak doğrudan ölçümü açıklar. Vivo Buyöntem bağırsak kan akışını korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenir hemen hemen değil. Açıklanan yaklaşım yaygın olarak, muhtemelen bazı yöntembilimsel zorluklar nedeniyle kullanılır. Biz ayrıntılı olarak tarif kateterizasyon portal ven ve inferior vena kava hepatik ven kesiştiği yerde hemen üstünde. Kan örnekleme portal ven ve inferior vena kava GBB geçirgenliği ve karaciğer Temizleme değerlendirilmesi yanı sıra ilgi gut bakteri metabolitleri veya ilaç gibi moleküllerin gut-portal kan karaciğer sistemik kan yolu izleme sağlar. Biz de bizim laboratuvar test edildi birkaç uygulama Yöntem mevcut. Bu iki nokta üstüste geçirgenliği TMA, gut bakteri metaboliti, TMA karaciğer Gümrükleme değerlendirilmesi ve SCFA bir gut-portal kan karaciğer sistemik kan yol değerlendirilmesi için değerlendirilmesi içerir.
Gut-kan bariyerini geçirgenliği değerlendirmek için protokolü aşağıdakileri, sırayla takip edilmelidir: 1 (intraintestinal idareler için satır ekleme), 3 (portal ven kateterizasyonu), 4 (portal ven kan örnekleme ), 6 (bağırsak geçirgenliği marker yönetim), 4.
Karaciğer temizlik ve gut-portal kan karaciğer sistemik kan yolu değerlendirmek için protokolü aşağıdakileri, sırayla takip edilmelidir: 1 (intraintestinal idareler için satır ekleme), 2 (inferior vena kava kateterizasyon), 3 (portal ven kateterizasyonu), 4 (portal ven kan örnekleme), 5 (inferior vena kava kan örnekleme), 6 (bağırsak geçirgenliği marker yönetim), 4, 5, 7 () karaciğer Temizleme hesaplanması).

<table><tbody><tr><td>İğne Dış Çapı: 9 mm</td><td>Becton Dickinson&nbsp; Ve Tic. A.Ş.</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen kateter ID: 0.025 ", OD: 0.040" &nbsp;</td><td>Bilimsel Emtialar, Inc.</td><td>#BB520-40</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen kateter ID: 0.012 ", OD: 0.025" &nbsp;</td><td>Bilimsel Emtialar, Inc.</td><td>#BB520-25</td><td></td></tr><tr><td>C-Flex Boru, Opak Beyaz 1/50 "ID x 1/12" OD & nbsp; &nbsp;</td><td>Cole-Parmer Enstrüman A.Ş.</td><td>06424-59</td><td></td></tr><tr><td>Pediatrik Foley kateter (boyut 10F veya 8F)&nbsp;</td><td>Sigmed</td><td>0000 80305</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi ligatürler 3/0</td><td>Yavo Sp. Z o.o.&nbsp;</td><td>P48JE</td><td></td></tr><tr><td>Emilebilir cerrahi sütürler - Poliglaktin 910 4/0</td><td>KRUUSE Polska Sp. Zo.o.</td><td></td><td></td>152336</tr><tr><td>Doku tutkalı - Loctite 454Siyanoakrilat Yapıştırıcı</td><td>Loctite&nbsp;</td><td></td><td></td>1370127</tr><tr><td>Povidon iyot</td><td>EGIS İlaç PLC</td><td>4449 11</td><td></td></tr><tr><td>Heparin - Heparinyum WZF&nbsp;</td><td>WZF Polfa Sa</td><td>02BK0417</td><td>Fizyolojik tuzlu su ile 10 kez seyreltin</td></tr><tr><td>Gliserin %86</td> <td>Laboratorium Farmaceutyczne Avena</td><td>5.90999E+12</td><td>Kolon kateterizasyonunda kayganlaştırıcı görevi görür</td></tr><tr><td>Ksilokain %2AstraZenca</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>9941342</tr><tr><td>Üretan</td><td>Sigma-Aldrich (Merck)&nbsp;</td><td>U2500-500G</td><td></td></tr><tr><td>Trimetilamin çözeltisi% 45</td> <td>Sigma-Aldrich (Merck) &nbsp;</td><td>92262-1L</td><td></td></tr><tr><td>Şırıngalar 2 mL</td><td>B.Braun Melsungen AG</td><td>4606027V</td><td></td></tr><tr><td>Salin 250 mL</td><td>Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o.</td><td>15LL707WL</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas, düz, uzunluk 115 mm, 4 1/2 "künt uçlar</td><td>Braun</td><td>NS-010-115-PKM</td><td></td></tr><tr><td>Arter forseps tipi Micro-Adson bükülmüş, uzunluk 140 mm 5 1/2 "</td><td>Braun</td><td>KN-008-140-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>Anatomik forseps, uzunluk 95 mm, 3 3/4" keskin 0.7x0.55</td><td>Braun</td><td>PO-001-007-ZMK</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Makas tipi Vannas,&nbsp; düz, uzunluk 85 mm, 3 3/8 " bıçakların uzunluğu 6 mm</td><td>Braun&nbsp;</td><td>NO-010-085-PMK</td><td></td></tr><tr><td>Havlu kelepçeleri tipi Arka ev, uzunluk 130 mm, 5 1/8 "&nbsp;</td><td>Braun</td><td>HO-128-130-PMK</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucular, uzunluk 150 mm, 6" t=0,4 1/2&nbsp;</td><td>Braun&nbsp;</td><td>IM-927-150-PZMK</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Makas, uzunluk 110 mm, düz, 4 3/8" keskin&nbsp;</td><td>Braun</td><td>NO-052-110-PMK</td><td></td></tr><tr><td>Anatomik forseps, uzunluk 95 mm, 3 3/4" keskin</td><td>Braun</td><td>PO-022-001-PMK</td><td></td></tr></tbody></table>

gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için in vivo yöntemi

An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products

Gut-kan bariyerini (GBB) ilaç besinler, bakteriyel metabolitleri ve oyundan pasaj intestinal lümen için kan dolaşımına denetler. GBB bütünlüğü gibi bağırsak bakteri metabolitleri, biyolojik olarak aktif bileşikler daha kolay erişim için kan neden olabilir gastrointestinal, kardiyovasküler ve metabolik hastalıklarda bozulmuştur. Böylece, GBB geçirgenliği extraintestinal ve bağırsak hastalıklarının bir işaret olabilir. Ayrıca, bakteriyel metabolitleri artan penetrasyon tüm organizmanın çalışmasını etkileyebilir.
GBB geçirgenliği türleri çalışmak için yaygın olarak kullanılan gerçekleştirilen ex vivoyöntemlerdir. GBB işleyişi bağırsak kan akımı üzerinde bağlı olduğundan bu yöntemleri doğruluğunu sınırlıdır. Bu yöntemleri üzerinde idrar değerlendirme dayalı olarak Öte yandan, yaygın olarak kullanılan in vivo Yöntemler karaciğer ve böbrek performans, önyargılı olabilir veya / ve periferik kan konsantrasyonları eksojen işaretleri. Burada, bağırsak kan akışını korur ve karaciğer ve böbrek işlev tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği sıçanlarda örnekleme, portal kan dayalı bir vivo içinde yöntemini kullanarak doğrudan ölçülmesi mevcut.
Poliüretan kateterler portal ven yerleştirilir ve inferior vena kava hemen üstünde hepatik izdiham damarlar. Kan temel ve seçili bir işaretleyici yönetim gastrointestinal sistem istenen bir parçası haline sonra örneklenir. Burada, yönteminin (1) iki nokta üstüste geçirgenliği TMA, gut bakteri metaboliti, TMA karaciğer Gümrükleme değerlendirmesi (2) ve (3) gut bir gut-portal kan-karaciğer-periferik kan yol değerlendirilmesi değerlendirilmesi de dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar mevcut kısa zincirli yağ asitleri bakteri kaynaklı. Ayrıca, protokol bağırsak emilim ve ilaçların karaciğer metabolizması izlemek için veya portal kan basıncı ölçümleri için de kullanılabilir.

Başarıyla GBB geçirgenliği ve karaciğer Temizleme TMA sıçanlarda ölçülen var. Hipertansif fareler bir artan kolon geçirgenliği TMA için normotansif fareler (Şekil 2)4ile karşılaştırıldığında var göstermiştir. Başka bir çalışmada bulduk o yüksek Tuz tüketiminizi TMA (Şekil 3)14GBB geçirgenliği ve karaciğer geçiş izni etkilemez.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page...

Erişimi besinler, microbiota metabolitleri ve dolaşım için ilaçlar, gut-kan bariyerini (GBB) tarafından denetlenir. Biz hangi sık kullanılan dolaylı yöntemler aksine, karaciğer ve böbrek işlevleri tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği vivo içindeölçmek için doğrudan bir yöntem açıklanmaktadır.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

The gut-blood barrier (GBB) controls the passage of nutrients, bacterial metabolites and drugs from intestinal lumen to the bloodstream. The GBB integrity ...

Bağırsak-kan bariyeri, besinlerin, bakteri metabolitlerinin, ilaçların ve bağırsak lümeninden kan dolaşımına kadar diğer eksojen bileşiklerin geçişini kontrol eden çok katmanlı bir sistemdir. Bildiğimiz gibi, bariyerbütünlüğü gastrointestinal yanı sıra kardiyovasküler ve kan dolaşımına bağırsak bakteri metabolitleri gibi biyolojik olarak aktif bileşiklerin daha kolay erişim neden olabilir ve tüm organizmanın işleyişini etkileyebilir bazı metabolik hastalıklarda bozulmuş olabilir. Bu nedenle bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliği hem intestinal hem de ekstraintestinal hastalıkların bir belirteci olabilir.Bu videoda, bir test maddesinin sindirim sistemine uygulanmasından sonra portal kan örneklemesi kullanan sıçanlarda bağırsak-kan bariyerinin geçirgenliğinin doğrudan bir ölçümlerini salıyoruz. Biz ayrıntılı olarak portal ven ve inferior vena kava sadece hepatik ven birleşimi yukarıda kategorize açıklar. Portal ven ve inferior vena kava dan kan örnekleme bağırsak-kan bariyergeçirgenliği değil, aynı zamanda bağırsak bakteri metabolitleri veya ilaçlar gibi ilgi moleküllerin bir hepatik açıklık ve emilim yolu sadece değerlendirmek için izin verir.Bu yöntem neredeyse karaciğer ve böbrek f

an-vivo-method-for-evaluating-gut-blood-barrier-liver-metabolism

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Postoperatif ileus (POI) artmış morbidite ve uzamış hastanede kalış yol abdominal cerrahi bir komplikasyonudur. Profilaktik veya terapötik stratejiler yoğunlaştırılmış araştırma yokluğu nedeniyle gereklidir. Bu nedenle İÇN patofizyolojisi araştırmak ve olası tedavi seçenekleri incelemek için bir standart ve uygulanabilir fare modeli kurulmuştur.

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Kaynak: Calatayud Arroyo, M. ve diğerleri. In vitro bağırsak konak-mikrob arayüzünde sentetik bakteriyel konsorsiyumunun uygulanabilirliğinin değerlendirilmesi. J. Vis. Exp. (2018).Bu video, bakteriyellerin canlılığını incelemek için in vitro bağırsak konakçı-mikrop modelini gösteriyor. Caco-2 ve HT29-MTX hücrelerinin ortak kültürü, simüle edilmiş sindirim koşullarında önceden işlenmiş bakterilerle kuluçka geçirilir. Epitel bariyer bütünlüğü transepitelyal elektriksel direnç kullanılarak...

Bakteriyel Yapışma ve İçselleştirmeyi Değerlendirmek İçeriği Değerlendirmek İçerik Bağırsak Modeli

Bu protokol, eksize edilmiş bağırsak dokusu preparatlarının veya "bağırsak keselerinin" bağırsak bariyer fonksiyonunun ex vivo modeli olarak kullanımını tanımlar. Bu model, sindirim hastalığının hayvan modellerinde belirli bağırsak bölgelerinde hem epitel bariyerinin hem de mukoza jel tabakasının bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılabilir.

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

İki yöntem burada bağırsak bariyer fonksiyonunu belirlemek için sunulmuştur. Bir epitel metre (volt/ohm) doku kültürü kuyu içinde doğrudan kültürlü epiteli transepithelial Elektrik direniş ölçümler için kullanılır. Farelerde, FITC dextran sonda ile besleme yöntemi bağırsak geçirgenliği vivobelirlemek için kullanılır.

Vitro ve In Vivo yaklaşımlar Bağırsak epitel hücre geçirgenliği belirlemek için

Burada, fizyolojik şartlarda mide bağırsak, taklit Biyoreaktörler bir dizi kullanarak gut microbiota kolon tüp bebek, kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Uygulama gelişmiş teknoloji insan Gut Microbiota Eğitim Kültür Vitro

Biz asetaminofen (APAP) bağırsak ve karaciğer organoidleri ile bir mikrofizyolojik sistem (MPS) maruz. Bu makalede, MPS'de organoid üretim yöntemleri ve APAP farmakokinetik ve toksikolojik özellik değerlendirmeleri açıklanmaktadır. Ayrıca sonuçları doğrulamak için gerekli doku işlevselliği analizleri açıklar.

İlaç Farmakokinetik ve Toksikolojik Değerlendirme için Bir Bağırsak/Karaciğer Mikrofizyolojik Sistemi

İntravital mikroskopiden yararlanan burada sunulan yöntem, canlı hayvanlarda bağırsak epitel hücresi dökülmesinin gerçek zamanlı olarak görüntülenmesidir. Bu nedenle anestezili farelerin topikal lekeli bağırsak mukozası (acriflavine ve rhodamineB-dextran) konfokal mikroskopi kullanılarak tek hücreçözünürlüğe kadar görüntülenir.

İntravital Mikroskopi Tabanlı Bir Yaklaşım Bağırsak Geçirgenliği ve Epitel Hücre Dökülme Performansını Değerlendirmek için

Düzensiz bağırsak epitel bariyer fonksiyonu ve immün yanıtlar, fizyolojik modellerin eksikliği nedeniyle kötü araştırılmaya devam eden enflamatuar bağırsak hastalığının ayırt edici özellikleridir. Burada, mukozal geçirgenliği ve lökosit işe alımını vivo olarak incelemek için iyi vaskülerleştirilmiş ve dışlanmış bir bağırsak segmenti kullanan bir fare bağırsak döngüsü modelini tarif ediyoruz.

Standartlaştırılmış Bağırsak Döngüsü Modeli Kullanılarak Farelerde Bağırsak Geçirgenliği ve Nötrofil Transepithelial Göçün Fonksiyonel Değerlendirmesi

Bu makale, ex vivo deneyleri için yeni bir bağırsak organ kültürü sistemi kullanarak konak mikrobiyom etkileşimlerini analiz etmek için benzersiz bir yöntem salamaktadır.

Konak-Mikrobiyota Etkileşimlerini Analiz Etmek için Bağırsak Bağırsak Organ Kültürü Sistemi

Bu çalışmada, floresein-izotiyosiyanat etiketli (FITC) dekstran, hem in vivo hem de plazma ve dışkı örneklerinde bağırsak geçirgenliğini değerlendirmek için farelere oral gavaj yoluyla uygulanmaktadır. Bağırsak bariyeri fonksiyonu birçok hastalık sürecinde etkilendiğinden, bu doğrudan ve nicel tahlil çeşitli araştırma alanlarında kullanılabilir.

Floresein-İzotiyosiyanat-Etiketli Dextran Kullanarak Farelerde Bağırsak Bariyer Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Öğrenin, sıçanlarda portal kan örneklemesi kullanarak bağırsak-kan bariyeri geçirgenliğini doğrudan ölçme yöntemini. Bu teknik karaciğer ve böbrek fonksiyonlarından etkilenmez.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

Daha fazla video keşfet