Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Sepsis çoklu organ yetmezliği ve ölüme yol açabilir. Endotoksin gram-negatif bakterilerin temel bir bileşenidir. Endotoksinin yüksek dolaşım düzeyleri daha ciddi bir hastalık geliştirmek için daha yüksek risk altındaki hasta yı belirleyebilir.

Endotoksin Aktivite Ssay sistemik endotoksemi basit, hızlı ve güvenilir bir biyomarker olarak kullanılabilir. Bu toksinerken teşhis septik şok hastaları tedavi klinisyenler yardımcı olabilir. Septik şok uyğun hastada, hızla gelişen bir durumun erken teşhisi daha hızlı ve daha yoğun bir yaşam destek tedavisi ne kadar hızlı ve daha yoğun olabilir, potansiyel olarak daha iyi sonuçlara yol açabilir.

Bu prosedürü gösteren Lisa Mathiasen, araştırma grubumuzla işbirliği yapan moleküler biyolog. Bu yordamı başlatmak için, bir EA test kiti ayarlayın ve tüpler beş farklı türde açmak. Belirli bir antikor yokluğunda hastanın nötrofillerin spesifik olmayan oksidatif patlama bazal aktivitesini ölçmek için tüp bir numaralı, Kontrol tüpü kullanın.

LPS-antikor kompleksine yanıt olarak oksidatif patlamayı ölçmek için iki numaralı tüp olan Örnek tüpü kullanın. Endotoksin fazlasına yanıt olarak hastanın nötrofillerinin maksimal oksidatif patlamasını ölçmek için üç numaralı Max tüpü kullanın. Eksojen endotoksin kaynağı olarak dört numaralı tüp LPS tüpünü kullanın.

Ve kan depolamak için beş numaralı Tüpü, Aliquot tüpünü kullanın. EDTA antikoagülan içeren steril tüplerde hasta kan örneklerini toplayın ve EA testini çalıştırmadan önce oda sıcaklığında saklayın. Teste başlamadan önce, kemilüminometreyi ve kuvöz çalkalayıcıyı açın ve kuvözden 37 dereceye Kadar ısıtın.

İlk olarak, tüp raflarında kullanılmak üzere EA tüpleri yerleştirin ve kapakları çıkarın. Bir mililitre EA reaktifini şişeden bir mililitresini tüplerin yan tarafına boru lar atarak bir numaralı, iki numara ve üç numaralı tüplere aktarmak için bir kombi kullanın. Hastanın kan örneğini karıştırmak için kan toplama tüpünü 20 kez hafifçe ters çevirin.

Sonra, pipet 0.5 mililitre hasta kanı dört numaralı tüpe ve beş numaralı tüpe. 10 saniye boyunca dört numaralı girdap tüpü. Tüm EA test tüplerini içeren tüp raflarını kuvöz çalkalayıcıya yerleştirin.

Kapağıkapatın ve 37 derecede 10 dakika kuluçkaya yatın. Bundan sonra, kuvöz kapağını açın ve tüp raflarını çalkalayıcıdan çıkarın. Beş numaralı girdap tüpü.

Steril bir uç kullanarak, pipet 40 mikrolitre kan tüpleri sayısı bir ve iki numara, yinelenen. Dört numaralı girdap tüpü. Aynı pipet ucunu kullanarak, 40 mikrolitre kanı dört numaralı tüpten üç numaralı tüpe aktarın.

Girdap altı son test tüplerini birer birer. Tüp raflarını kuluçka yakaya geri yerleştirin ve kapağıkapatın. Shaker'ı 100 rpm'ye ayarlayın ve hareketi 14 dakika boyunca başlatın.

EA etiketli yonga kartını kemiluminometreye takın ve Başlat tuşuna basın. 14 dakikalık kuluçkadan sonra, kemilüinometrede görüntülenen talimatları uygulayın. Kemilüminometrenin numune tutucusu üzerine yerleştirmeden önce her tüpü 10 saniye boyunca yavaşça girdaplayın.

Örnek çekmeceyi açın ve bir numaralı tüpü numune tutucuya yerleştirin. Ardından, örnek çekmeceyi kapatın ve göreli ışık ünitesi okumasını bekleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi, iki ve üç ve tüm yinelenenler için bu okuma işlemini tekrarlayın.

Tüm tüpler işlendikten sonra, EA sonuçları otomatik olarak hesaplanır ve yazdırılır. Test edilmesi gereken her kan örneği için tüm tahkikat işlemini tekrarlayın. EA Tsay kitini ve bileşenlerini orijinal mühürlü ambalajda iki ila 25 santigrat derece arasında bir sıcaklıkta saklayın.

Bu çalışmada, kritik hastalarda tam kan endotoksemisini saptamak için Endotoksin Aktivitesi Tahlili yapılmıştır. 0.40 EA biriminin altında bir EA değeri düşük endotoksin aktivite düzeyini gösterir, düşük dolaşan LPS konsantrasyonuna eşittir, bu da ciddi bir hastalık durumuna ilerleme riskini düşük gösterir. 0.40 ve 0.59 EA üniteleri arasında bir sonuç şiddetli sepsis ve septik şok gelişimi için bir ara risk temsil eden bir ara endotoksin aktivite düzeyi gösterir.

Sonuçlar 0.60 EA ünitesine eşit veya daha büyük türdedir ve bu da septik şok ve kötü hasta sonuçları için yüksek risk teşkil eden yüksek endotoksin aktivite düzeyini gösterir. Dört ve beş numaralı tüplerden gelen kan doğru test tüpüyle karıştırılmalıdır. Protokolde belirtilen doğru sırayı takip etmek için ekstra özen gösterilmelidir.

Her tüp yinelenenler halinde çalıştırılır ve bu aşamada hatalara yol açabilecek. Piyasaya sürüldükten sonra, EA Tsay sistemik hipoperfüzyonlu hastanın risk tabakalaşması için bir biyomarker olarak önerilmiştir. Ayrıca, ileri hemopurification tedavi stratejileri için hasta seçmek için bir tarama testi olarak çalışılmıştır.