Name: Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Öğrenin, kritik hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için Endotoksin Aktivite Assay protokolünü. Bu yöntem, sepsisli hastalarda erken tanı ve tedavi kararlarını iyileştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Paolo Braganò ve Lisa Mathiasen, Ph.D. tahlil protokol metodolojisi gözden geçirilmesi için teşekkür ederiz. Dario Winterton, MD Ingilizce dil yeterlilik için el yazması gözden önemli yardım sağladı.

Protokol, insan biyoörneklerinin işlenmesi ile ilgili kurumsal yönergelere göre ve klinik laboratuvarımızın mevcut standart operatif prosedürlerini takiben gerçekleştirilir. Test edilen hastaların EA verilerinin ve klinik bilgilerinin kullanımı, kurumunuzun insan Araştırma Etik Komitesinin yönergelerini takip eder.
1. laboratuar ekipmanları ve tahlil kiti Içeriği
<ol><li>EA setini kullanımda değilken 2 – 8 °C ' de saklayın.</li>
	<li>
Her EA testi 5 farklı çeşit tüpten oluşur; her birini testin farklı bir bölümü için kullanın (bkz. Bölüm 2).
	<ol>
<li>Belirli bir antikor yokluğunda hastanın nötrofiller non-spesifik oksidatif patlama bazal etkinliğini ölçmek için tüp #1 ("kontrol" tüp) kullanın.</li>
		<li>LPS-Antibody kompleksine yanıt olarak oksidatif patlaması ölçmek için tüp #2 ("örnek" tüp) kullanın.</li>
		<li>Endotoksinin fazlasına yanıt olarak hastanın nötrofiller maksimal oksidatif patlaması ölçmek için tüp #3 ("Max" tüp) kullanın.</li>
		<li>Eksojen endotoksin kaynağı olarak tüp #4 ("LPS" tüpü) kullanın.</li>
		<li>Kan depolama için tüp #5 ("aliquot" tüp) kullanın. Not: Tüpler #1, #2 ve #3 kopyaları, test edilen her kan örneği için kullanılmak üzere toplam 8 tüp için sağlanır (EA reaktif şişesi ve kalite kontrol testi bir poşetin içerdiği tüm testler için kullanılabilir).</li>
	</ol>
</li>
	<li>EDTA antikoagülan içeren steril tüplerde hasta kan örneklerini toplayın. EA testini çalıştırmadan önce kan örneklerini oda sıcaklığında saklayın.</li>
	<li>Test başlamadan önce, kemiluminometre ve kuluçagör Shaker açın. 37 ° c sıcaklığına kadar ısıtıcıyı ısınır.</li>
	<li>İdeal olarak, kan koleksiyonundan 30 dakika içinde numuneyi işlemeye başlayın.</li>
</ol>2. endotoksin aktivite tahlil
<ol><li>Test etmeniz gereken her hastanın kan örneği için EA test tüplerini hazırlayın. Tüpleri tüp rafları içine koyun. Sonra kapakları çıkarın.</li>
	<li>Bir combipipette kullanarak, bir 1 mL hacim EA reaktiği şişe tüpler içine #1 (kontrol tüpü), #2 (örnek tüp) ve #3 (Max tüp), her biri yinelenen. Not: Çözeltinin geri sıçramasını önlemek için tüpün yan tarafındaki pipet.</li>
	<li>Hasta kan örneğini hafifçe 20 kez kan toplama tüpünün tersine çevirerek karıştırın. Sonra, pipet 0,5 mL hasta kanı tüp #4 (LPS maks tüp) ve tüp #5 (aliquot tüp). Vortex tüp 10 s için #4.</li>
	<li>Tüp rafları tüm EA test tüpleri ile inküvatör Shaker koyun. Kapağı kapatın ve 37 °C sıcaklıkta 10 dakika boyunca inküye yapın.</li>
	<li>Kapağı açın ve boru rafları kuluçlağının çalkalayıcı çıkarın. Vortex tüp #5 (aliquot tüp). Steril bir uç kullanarak, pipet 40 #1 ve #2, çoğaltır.</li>
	<li>Vortex tüp #4 (LPS tüp). Aynı Pipet ucunu kullanarak, boru #4 boru #3 (maks tüp), çoğaltır, pipet 40 μL kan.</li>
	<li>Altı final test tüpü Vortex (#1, #2, #3 ve ilgili kopyaları), sonra onları geri onların raflar içine yerleştirin. Not: Tüm tüpler aynı miktarda zaman için vortekslenir emin olun.</li>
	<li>Tüp raflar geri inkükülasyon shaker içine koymak ve kapağı kapatın. 100 RPM 'de inküden çalkalayıcı ayarlayın, sonra 14 dakika hareket başlatın.</li>
	<li>EA etiketli çip kartını kemiluminometreye takın ve Başlat 'a basın. 14 dakika kuluçdak sonra, doğru sırada EA tüpleri okumak için kemiluminometre görüntülenen talimatları izleyin.</li>
	<li>Her tüpü, kemiluminometrenin örnek tutucusuna yerleştirmeden önce 10 s için hafifçe yerleştirin. Örnek çekmeceyi açın ve örnek tutucuya tüp #1 yerleştirin. Ardından, örnek çekmeceyi kapatın ve bağıl ışık ünitesi (RLU) okuması için bekleyin.</li>
	<li>Tüp 2 ve Tüp 3 için 2,10 adımı yineleyin.</li>
	<li>Yinelenen Tüpler 1, 2 ve 3 için 2,10 adım yineleyin. Not: Adım 2.10 – 2.12 sırasında aynı miktarda zaman için tüm tüpler Vortex deneyin.</li>
	<li>Tüm tüpler işlendikten sonra, EA sonuçlarının otomatik olarak hesaplanacağını ve yazdırıldığını unutmayın. Seviyeleri EA birimleri olarak ifade edilir ve aynı örneklerden yinelenen belirleyici ortalama temsil eder.</li>
	<li>Test edilmesi gereken her kan örneği için 2,13 2,2 adımları yineleyin.</li>
	<li>Tahlil tamamlandıktan sonra, kalan test tüplerini ve EA reaktiflerini 30 güne kadar 2 – 8 °C ' de saklayın.</li>
</ol>

<ol><li>Akira, S., Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor signalling.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).</li>
<li>Takeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+integration+of+innate+immune+recognition+systems%3A+the+Toll-like+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endotoxin+Research%22%5BJournal%5D)">Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors.</a> Journal of Endotoxin Research. 11 (1), 51-55 (2005).</li>
<li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li>
<li>Natanson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotoxin+and+tumor+necrosis+factor+challenges+in+dogs+simulate+the+cardiovascular+profile+of+human+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endotoxin and tumor necrosis factor challenges in dogs simulate the cardiovascular profile of human septic shock.</a> The Journal of Experimental Medicine. 169 (3), 823-832 (1989).</li>
<li>Suffredini, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cardiovascular+response+of+normal+humans+to+the+administration+of+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The cardiovascular response of normal humans to the administration of endotoxin.</a> The New England Journal of Medicine. 321 (5), 280-287 (1989).</li>
<li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Third+International+Consensus+Definitions+for+Sepsis+and+Septic+Shock+%28Sepsis-3%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%3A+The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3).</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 801-810 (2016).</li>
<li>Gupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture-Negative+Severe+Sepsis%3A+Nationwide+Trends+and+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Culture-Negative Severe Sepsis: Nationwide Trends and Outcomes.</a> Chest. 150 (6), 1251-1259 (2016).</li>
<li>Ikeda, T., Ikeda, K., Suda, S., Ueno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usefulness+of+the+endotoxin+activity+assay+as+a+biomarker+to+assess+the+severity+of+endotoxemia+in+critically+ill+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Usefulness of the endotoxin activity assay as a biomarker to assess the severity of endotoxemia in critically ill patients.</a> Innate Immunity. 20 (8), 881-887 (2014).</li>
<li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Targeted+Polymyxin+B+Hemoperfusion+on+28-Day+Mortality+in+Patients+With+Septic+Shock+and+Elevated+Endotoxin+Level%5BTitle%5D)+AND+%22The+EUPHRATES+Randomized+Clinical+Trial.+JAMA%3A+The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Effect of Targeted Polymyxin B Hemoperfusion on 28-Day Mortality in Patients With Septic Shock and Elevated Endotoxin Level.</a> The EUPHRATES Randomized Clinical Trial. JAMA: The Journal of the American Medical Association. 320 (14), 1455-1463 (2018).</li>
<li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+and+prognostic+implications+of+endotoxemia+in+critical+illness%3A+results+of+the+MEDIC+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Diagnostic and prognostic implications of endotoxemia in critical illness: results of the MEDIC study.</a> The Journal of Infectious Diseases. 190 (3), 527-534 (2004).</li>
<li>Levin, J., Bang, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clottable+protein+in+Limulus%3B+its+localization+and+kinetics+of+its+coagulation+by+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+et+Diathesis+Haemorrhagica%22%5BJournal%5D)">Clottable protein in Limulus; its localization and kinetics of its coagulation by endotoxin.</a> Thrombosis et Diathesis Haemorrhagica. 19 (1), 186-197 (1968).</li>
<li>Marshall, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+endotoxin+activity+in+critically+ill+patients+using+whole+blood+neutrophil+dependent+chemiluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Measurement of endotoxin activity in critically ill patients using whole blood neutrophil dependent chemiluminescence.</a> Critical Care. 6 (4), London, England. 342-348 (2002).</li>
<li>Grimaldi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Level+of+Endotoxemia+Following+Out-of-Hospital+Cardiac+Arrest+Is+Associated+With+Severity+and+Duration+of+Postcardiac+Arrest+Shock%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">High Level of Endotoxemia Following Out-of-Hospital Cardiac Arrest Is Associated With Severity and Duration of Postcardiac Arrest Shock.</a> Critical Care Medicine. 43 (12), 2597-2604 (2015).</li>
<li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EUPHRATES+trial+%28Evaluating+the+Use+of+Polymyxin+B+Hemoperfusion+in+a+Randomized+controlled+trial+of+Adults+Treated+for+Endotoxemia+and+Septic+shock%29%3A+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">The EUPHRATES trial (Evaluating the Use of Polymyxin B Hemoperfusion in a Randomized controlled trial of Adults Treated for Endotoxemia and Septic shock): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 15, 218(2014).</li>
<li>Bottiroli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+clinical+significance+of+early+high+Endotoxin+Activity+in+septic+shock%3A+An+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Prevalence and clinical significance of early high Endotoxin Activity in septic shock: An observational study.</a> Journal of Critical Care. 41, 124-129 (2017).</li>
<li>Kaukonen, K. M., Bailey, M., Suzuki, S., Pilcher, D., Bellomo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+related+to+severe+sepsis+and+septic+shock+among+critically+ill+patients+in+Australia+and+New+Zealand%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%3A+The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Mortality related to severe sepsis and septic shock among critically ill patients in Australia and New Zealand.</a> JAMA: The Journal of the American Medical Association. 311 (13), 1308-1316 (2014).</li>
<li>Biagioni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotoxin+activity+levels+as+a+prediction+tool+for+risk+of+deterioration+in+patients+with+sepsis+not+admitted+to+the+intensive+care+unit%3A+a+pilot+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Endotoxin activity levels as a prediction tool for risk of deterioration in patients with sepsis not admitted to the intensive care unit: a pilot observational study.</a> Journal of Critical Care. 28 (5), 612-617 (2013).</li>
<li>Roth, R. I., Levin, F. C., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+detection+of+bacterial+endotoxin+in+plasma+with+the+Limulus+test%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Laboratory+and+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of detection of bacterial endotoxin in plasma with the Limulus test.</a> The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 116 (2), 153-161 (1990).</li>
<li>Yaguchi, A., Yuzawa, J., Klein, D. J., Takeda, M., Harada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+intermediate+levels+of+the+Endotoxin+Activity+Assay+%28EA%29+with+other+biomarkers+in+the+assessment+of+patients+with+sepsis%3A+results+of+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Combining intermediate levels of the Endotoxin Activity Assay (EA) with other biomarkers in the assessment of patients with sepsis: results of an observational study.</a> Critical Care. 16 (3), London, England. (2012).</li>
<li>Earley, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+Injury+Alters+the+Intestinal+Microbiome+and+Increases+Gut+Permeability+and+Bacterial+Translocation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Burn Injury Alters the Intestinal Microbiome and Increases Gut Permeability and Bacterial Translocation.</a> PLoS One. 10 (7), (2015).</li>
<li>Munster, A. M., Smith-Meek, M., Dickerson, C., Translocation Winchurch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidental+phenomenon+or+true+pathology%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Incidental phenomenon or true pathology?</a> Annals of Surgery. 218 (3), 321(1993).</li>
<li>Clementi, A., Virzì, G. M., Brocca, A., Ronco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Endotoxin+in+the+Setting+of+Cardiorenal+Syndrome+Type+5%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiorenal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Role of Endotoxin in the Setting of Cardiorenal Syndrome Type 5.</a> Cardiorenal Medicine. 7 (4), 276-283 (2017).</li>
<li>Virzì, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiorenal+Syndrome+Type+5+in+Sepsis%3A+Role+of+Endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22in+Cell+Death+Pathways+and+Inflammation.+Kidney+and+Blood+Pressure+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiorenal Syndrome Type 5 in Sepsis: Role of Endotoxin.</a> in Cell Death Pathways and Inflammation. Kidney and Blood Pressure Research. 41 (6), 1008-1015 (2016).</li>
<li>Mignon, F., Piagnerelli, M., Van Nuffelen, M., Vincent, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+empiric+antibiotic+treatment+on+plasma+endotoxin+activity+in+septic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%22%5BJournal%5D)">Effect of empiric antibiotic treatment on plasma endotoxin activity in septic patients.</a> Infection. 42 (3), 521-528 (2014).</li>
<li>Klein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+variation+in+endotoxin+levels+is+associated+with+increased+organ+failure+in+critically+ill+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Daily variation in endotoxin levels is associated with increased organ failure in critically ill patients.</a> Shock. 28 (5), 524-529 (2007).</li>
</ol>

Estor SpA, derginin yayın ve video üretim ücretinin maliyetini ele aldı. Yazarlar, ifşa etmek için ilgi çatışması yok.

Septik şok halen günümüzde% 40 kadar yüksek bir mortalite ile ilişkilidir, ancak bu oran kabul edilen raporlara göre değişir16. Yeni ve daha iyi biyomarkerlere olan ihtiyaç, klinisyenler erken teşhis, daha iyi yönetim ve septik şok6olan hastaların prognostikasyonunda yardımcı olmak amacıyla alanlarda çoğu uzman tarafından savunulmuş.
Bir EA testi yapmak, önceki teknik bilgi veya sofistike laboratuvar ekipmanlarını gerektirmez ve herhangi bir sağl...

Endotoksin olarak da bilinen Lipopolysaccharide (LPS), gram-negatif (GN) bakterilerin membran yapısının önemli bir bileşenidir. Hücre duvarının yaklaşık% 10 ' unda, dış membran bütünlüğü ve homeostaz için hayati önem taşımaktadır. Dahası, bu ev sahibi doğuştan gelen bağışıklık sistemi güçlü bir aktivatörü1,2.
LPS için doğuştan gelen bağışıklık sistemi hücrelerinin in vitro pozlama çoklu genler ifadesinde değişikliklere yol açar3. Sağlıklı insan Gönüllüleri çok küçük miktarlarda LPS yönetimi Akut sistemik inflamasyon Cascade tetikler, sepsis ve septik şok yüksek endotoksin konsantrasyonları ile ortaya çıkabilir4,5.
Sepsis hayat tehdit edici bir durumdur, Eğer hemen tanınmazsa, çoklu organ yetmezliği ve ölüme yol açabilir. Septik hastalar zamanında tedavi edilmelidir, agresif resüsitasyon ile, yeterli antibiyotik tedavisi, optimum kaynak kontrolü, ve hızlı organ destek stratejileri. Sepsis etiyolojisinin tanısı öncelikle klinik tanıma ve kültür bazlı patojen algılama6' ya dayanır. Bununla birlikte, mikrobiyal kültürlerin sonuçları 48 h 'ye kadar sürebilir ve7' ye kadar% 30 ' a kadar sonuçsuz olabilir. Erken teşhis ve müdahale daha iyi hasta sonuçlarına yol açabilir. Sepsis şüphelenilen hastalarda, kararlar genellikle fizyolojik ve biyokimyasal parametreler temelinde yapılır, endotoksemi net bir işareti olmadan.
Endotoksin aktivitesi (EA) ölçümü, tüm kandaki ticari bir tahlil ( malzeme tablosunabakın) yoluyla elde edilebilir. Hastalığın şiddetinin erken katmanlaştırılması için sistemik endotoksemi biyomarker olarak kullanılabilir, özellikle septik şok geliştirme riski olan hastalarda8. Tahlil, septik şok9olan hastalarda son zamanlarda yayınlanan çift kör randomize kontrollü klinik denemlerde Polymyxin B hemoperfüzyon tedavisine rehberlik etmek için kullanılmıştır. Kritik hasta hastalarda, MEDIC çalışması, birden fazla organ fonksiyon bozukluğu, yoğun bakım ünitesi (ıCU) konaklama süresi ve mortalite10ile ILIŞKILENDIRILECEK EA düzeylerini artırdı.
Endotoksini tespit etmek için farklı YAZIS geliştirilmiştir. Limulus Amoebocyte lysate (LAL) assay, bir jel-pıhtısı olarak, turbidimetrik, veya kromojenik test, şimdiye kadar en sık serum endotoksin tahmini için benimsenen olmuştur. Bu endotoksin, at nalı yengeç, Limulus Polyphemushemolymph koagülasyon neden yeteneği dayanmaktadır. Ancak, bu tahlil özgüllük açısından bazı sınırlamalar vardır. Özellikle, ayrıca endotoksin dışında Mikrobiyal Ürünler tarafından aktive edilebilir, mantar hücre duvar bileşenleri gibi, ve çeşitli insan Plazma proteinleri tarafından engellenmiş olabilir11.
Son on yıl içinde EA ölçümü gelişen endotoksemi biyomarker olarak geliştirilmiştir ve doğrulandı. LAL testi ile karşılaştırıldığında, EA daha hızlı ve klinik ortamda uygulanması daha kolaydır. Dahası, her ikisi de in vitro ve in vivo12, artan duyarlılık ve özgüllük ile, tüm kanda Lal daha doğru olduğu gösterilmiştir.
GN bakterilerinin sepsis nedensel ajanlar olarak hızlı tanımlanması için erken teşhis aracı olarak ilk uygulanmasına rağmen, EA seviyesi de hastalık şiddetinin biyomarker olarak incelenmiştir. Bu bağlamda, septik şok veya kardiyo sonrası tutuklanma sendromu13gibi devam eden kritik hastalık nedeniyle hipoperfüzyon durumunu değerlendirmek için özellikle yararlı olduğu gösterilmiştir. Daha yakın zamanda, hemofurasyon sistemlerinin gelişimi nedeniyle, olumlu bir EA sonucu da bu tür terapi için potansiyel adaylar doğru belirlemek için bir tarama aracı olarak önerilmiştir14. Son zamanlarda 107 yılında septik şok olan hastalarda EA 'nın erken yüksek düzeylerinin prevalansı ve klinik önemi hakkında gözlemsel retrospektif bir çalışma gerçekleştirdik. Diğer son sonuçlara göre, EA 'nın septik şok olan hastalarda hastalığın şiddetinin umut verici bir belirteci olduğunu bulduk15.
Bu yazının amacı, EA tahlil işlemini, baş ucunda ya da laboratuarda gerçekleştirme yöntemini tarif etmek ve septik şok temsili senaryosunda potansiyel kullanımını açıklamak. Bu teknik, bir anti-endotoksin antikor ve LPS kompleksler tarafından kendi astar aşağıdaki nötrofiller gelişmiş oksidatif patlama ölçerek LPS etkinliğini algılayabilir. Artmış solunum patlaması bir kemiluminometre ile tespit edilir ve yayılan ışık miktarı kan örneğinde endotoksin miktarına orantılı olarak kabul edilir. Tahlil birkaç reaktifler gerektirir, yaklaşık 30 dakika gerçekleştirmek için alır ve tüm kan 40 μL kadar az kullanır12.

<table><tbody><tr><td>EAA kiti</td><td>Spektral Medikal A.Ş.</td><td>EAAST-20</td><td>Paketi, 20 test + 1 kalite kontrol</td></tr><tr><td>Akıllı Hat TL</td><td>Berthold</td><td>EAASL</td><td>Luminometre</td></tr><tr><td>İnkübatör çalkalayıcı</td><td>GRANT</td><td>ES-20</td><td>Mini inkübatör çalkalayıcı</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>444-2790</td><td>Vorteks aleti</td></tr></tbody></table>

eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Endotoksin olarak da bilinen lipopolysaccharide, gram-negatif bakterilerin temel bir bileşenidir ve sepsis ve septik şok gelişiminde önemli bir rol oynamaktadır. Kritik bir hastalığa hızla gelişen bulaşıcı bir sürecin erken tanımlanması, daha hızlı ve daha yoğun bir tedavi isteyebilir, böylece potansiyel olarak daha iyi hasta sonuçlarına yol açın. Endotoksin aktivitesi (EA) assay, sistemik endotoksemi güvenilir bir biyomarker olarak başucunda kullanılabilir. Yüksek endotoksin aktivite düzeylerinin tespiti, sepsis ve septik şok hastalarında artan bir hastalık şiddetiyle ilişkili olarak tekrar tekrar gösterildi. Tahlil hızlı ve kolay gerçekleştirmek için. Kısaca, örnekleme sonra, tam kan bir kısım bir anti-endotoksin antikor ile karıştırılır ve eklenen LPS ile. Endotoksin aktivitesi, kemioluminesans ile algılandığı gibi, astar nötrofiller bağıl oksidatif patlaması olarak ölçülür. Testin çıkışı 0 ' dan (bulunmayan) 1 ' e (maksimal) ve "düşük" (< 0.4 ünite), "Orta" (0.4 – 0.59 birimler) veya "yüksek" (≥ 0,6 birimler) olarak sınıflandırılmış bir ölçekte ifade edilir. Bu yazıda EA testin uygulanması için ayrıntılı metodoloji ve mantık bildirilmektedir.

72 yaşındaki bir adam, akademik bir kentsel hastanenin acil servise (ED) kabul edildi. Birkaç gün önce onun birincil bakım Doktoru idrar üzerine yanma şikayet sundu. Oral fosfomiyisin kısa kurs tedavisi tavsiye edildi. Onun tıbbi geçmişi hipertansiyon, karmaşık olmayan tip-2 diyabet ve benign prostat hiperplazisi dahil. İlaçları enalapril, atorvastatin, tamsulosin ve metformin dahil.
ED 'de, uyanmış olduğunda karıştı. Sıcaklık 3...

Bu konuda, insan bütün kan örneklerinin endotoksin aktivitesinin başında ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Endotoksin aktivite tahlil gerçekleştirmek için basit bir test ve sepsis ile eleştirel hasta hastalarda yararlı bir biyomarker olabilir.

Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

Sepsis çoklu organ yetmezliği ve ölüme yol açabilir. Endotoksin gram-negatif bakterilerin temel bir bileşenidir. Endotoksinin yüksek dolaşım düzeyleri daha ciddi bir hastalık geliştirmek için daha yüksek risk altındaki hasta yı belirleyebilir.Endotoksin Aktivite Ssay sistemik endotoksemi basit, hızlı ve güvenilir bir biyomarker olarak kullanılabilir. Bu toksinerken teşhis septik şok hastaları tedavi klinisyenler yardımcı olabilir. Septik şok uyğun hastada, hızla gelişen bir durumun erken teşhisi daha hızlı ve daha yoğun bir yaşam destek tedavisi ne kadar hızlı ve daha yoğun olabilir, potansiyel olarak daha iyi sonuçlara yol açabilir.Bu prosedürü gösteren Lisa Mathiasen, araştırma grubumuzla işbirliği yapan moleküler biyolog. Bu yordamı başlatmak için, bir EA test kiti ayarlayın ve tüpler beş farklı türde açmak. Belirli bir antikor yokluğunda hastanın nötrofillerin spesifik olmayan oksidatif patlama bazal aktivitesini ölçmek için tüp bir numaralı, Kontrol tüpü kullanın.LPS-antikor kompleksine yanıt olarak oksidatif patlamayı ölçmek için iki numaralı tüp olan Örnek tüpü kullanın. Endotoksin fazlasına yanıt olarak hastanın nötrofillerinin maksimal oksidatif patlamasını ölçmek için üç numaralı Max tüpü kullanın. Eksojen endotoksin kaynağı olarak dört numaralı tüp LPS tüpünü kullanın.Ve kan depolamak için beş numaralı Tüpü, Aliquot tüpünü kullanın. EDTA antikoagülan içeren steril tüplerde hasta kan örneklerini toplayın ve EA testini çalıştırmadan önce oda sıcaklığında saklayın. Teste başlamadan önce, kemilüminometreyi ve kuvöz çalkalayıcıyı açın ve kuvözden 37 dereceye Kadar ısıtın.İlk olarak, tüp raflarında kullanılmak üzere EA tüpleri yerleştirin ve kapakları çıkarın. Bir mililitre EA reaktifini şişeden bir mililitresini tüplerin yan tarafına boru lar atarak bir numaralı, iki numara ve üç numaralı tüplere aktarmak için bir kombi kullanın. Hastanın kan örneğini karıştırmak için kan toplama tüpünü 20 kez hafifçe ters çevirin.Sonra, pipet 0.5 mililitre hasta kanı dört numaralı tüpe ve beş numaralı tüpe. 10 saniye boyunca dört numaralı girdap tüpü. Tüm EA test tüplerini içeren tüp raflarını kuvöz çalkalayıcıya yerleştirin.Kapağıkapatın ve 37 derecede 10 dakika kuluçkaya yatın. Bundan sonra, kuvöz kapağını açın ve tüp raflarını çalkalayıcıdan çıkarın. Beş numaralı girdap tüpü.Steril bir uç kullanarak, pipet 40 mikrolitre kan tüpleri sayısı bir ve iki numara, yinelenen. Dört numaralı girdap tüpü. Aynı pipet ucunu kullanarak, 40 mikrolitre kanı dört numaralı tüpten üç numaralı tüpe aktarın.Girdap altı son test tüplerini birer birer. Tüp raflarını kuluçka yakaya geri yerleştirin ve kapağıkapatın. Shaker'ı 100 rpm'ye ayarlayın ve hareketi 14 dakika boyunca başlatın.EA etiketli yonga kartını kemiluminometreye takın ve Başlat tuşuna basın. 14 dakikalık kuluçkadan sonra, kemilüinometrede görüntülenen talimatları uygulayın. Kemilüminometrenin numune tutucusu üzerine yerleştirmeden önce her tüpü 10 saniye boyunca yavaşça girdaplayın.Örnek çekmeceyi açın ve bir numaralı tüpü numune tutucuya yerleştirin. Ardından, örnek çekmeceyi kapatın ve göreli ışık ünitesi okumasını bekleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi, iki ve üç ve tüm yinelenenler için bu okuma işlemini tekrarlayın.Tüm tüpler işlendikten sonra, EA sonuçları otomatik olarak hesaplanır ve yazdırılır. Test edilmesi gereken her kan örneği için tüm tahkikat işlemini tekrarlayın. EA Tsay kitini ve bileşenlerini orijinal mühürlü ambalajda iki ila 25 santigrat derece arasında bir sıcaklıkta saklayın.Bu çalışmada, kritik hastalarda tam kan endotoksemisini saptamak için Endotoksin Aktivitesi Tahlili yapılmıştır. 0.40 EA biriminin altında bir EA değeri düşük endotoksin aktivite düzeyini gösterir, düşük dolaşan LPS konsantrasyonuna eşittir, bu da ciddi bir hastalık durumuna ilerleme riskini düşük gösterir. 0.40 ve 0.59 EA üniteleri arasında bir sonuç şiddetli sepsis ve septik şok gelişimi için bir ara risk temsil eden bir ara endotoksin aktivite düzeyi gösterir.Sonuçlar 0.60 EA ünitesine eşit veya daha büyük türdedir ve bu da septik şok ve kötü hasta sonuçları için yüksek risk teşkil eden yüksek endotoksin aktivite düzeyini gösterir. Dört ve beş numaralı tüplerden gelen kan doğru test tüpüyle karıştırılmalıdır. Protokolde belirtilen doğru sırayı takip etmek için ekstra özen gösterilmelidir.Her tüp yinelenenler halinde çalıştırılır ve bu aşamada hatalara yol açabilecek. Piyasaya sürüldükten sonra, EA Tsay sistemik hipoperfüzyonlu hastanın risk tabakalaşması için bir biyomarker olarak önerilmiştir. Ayrıca, ileri hemopurification tedavi stratejileri için hasta seçmek için bir tarama testi olarak çalışılmıştır.

endotoxin-activity-assay-for-detection-whole-blood-endotoxemia

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz autoinflammatory fenotipleri ile başvuran hastalarda, IL-1 beta üretim gibi pro-inflamatuar sitokinlerin üretimi, ölçmek için basit bir immunoassay açıklar. Özellikle lipopolisakkarid patojen ilişkili moleküler paternleri, tam kan kültürlerinde hücreleri aktive ederek, sitokin salgılanması tam kan Süpernatantları rahatlıkla değerlendirilebilir.

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Bu video, kemilüminesans tabanlı bir yöntemle bir tam kan örneğindeki endotoksin aktivitesini araştırmak için hızlı bir biyo-testi göstermektedir. Bu test, endotoksin aracılı sepsisin erken evre tanısı için hızlı ve hassas bir biyobelirteç testidir.

Endotoksin Aktivite Testi: Kan Örneğindeki Endotoksin Aktivitesini Araştırmak İçin Kemilüminesans Bazlı Bir Biyo-Test

Bu video, PEGile lipozomal doksorubisin nano formülasyonlarında endotoksin kontaminasyonunu tahmin etmek için Limulus amoebosit lizat veya LAL testinin türbidimetrik formatını açıklar. Endotoksinin LAL reaktifi ile reaksiyonunu takiben çözeltinin bulanıklığı, numunedeki endotoksinin tahmin edilmesine yardımcı olur.

Türbidimetrik Limulus Amiposit Lizat Testi: Nano Formüllü İlaçlarda Endotoksin Kontaminasyonunu Tespit Etmek ve Ölçmek İçin Bir Teknik

Bu videoda, at nalı yengeçlerinin kan hücrelerinden elde edilen Limulus Amip Losit Lizat kullanılarak nano formülasyonlarda bakteriyel endotoksinlerin varlığını belirlemek için bir jel-pıhtı testi açıklanmaktadır. Test, nano bazlı formülasyonlar da dahil olmak üzere farmasötik ürünlerin endotoksin kontaminasyonunun test edilmesine yardımcı olur.

Jel-Pıhtı Limulus Amip Lizat Testi: Nanopartikül Formülasyonlarında Bakteriyel Endotoksin Tayini İçin Bir Yöntem

Bu video, makrofajlardaki transkripsiyon faktörleri nükleer faktör-kappa-B (NF-κB) ve aktivatör protein-1'in (AP-1) toll benzeri reseptöre (TLR) bağlı aktivitesini incelemek için bir testi göstermektedir. TLR'ler, NF-κB ve AP-1'i aktive ederek, hasarla ilişkili moleküler modelleri (DAMP'ler) tanıdıktan sonra bir pro-inflamatuar sinyal kaskadını tetikler. Tasarlanmış raportör makrofajlar, NF-κB ve AP-1 aktivasyonu üzerine salgılanan embriyonik alkalin fosfataz (SEAP) enzimi üretir ve bu...

Makrofajlarda TLR'ye Bağımlı NF-&kcy;B/AP-1 Transkripsiyon Faktörü Sinyalizasyonu için Bir Test

Hava örnekli filtrelerden atmosferik biyolojik partiküllerin iki tamamlayıcı analizi burada açıklanmıştır: endotoksin ve DNA'nın ekstraksiyonu ve tespiti.

Endotoksin ve DNA İçeriği için Hava örneklenmiş Filtresi Analizi

İntravenöz endotoksin uygulaması, çeşitli patolojik durumlarla tutarlı doza bağlı fizyolojik ve immünolojik değişiklikleri güvenilir bir şekilde ortaya çıkarır. Bu indirgemeci yaklaşım, sistemik inflamasyonun ve insandaki aşağı yönlü etkilerinin araştırılmasına, modellenmesine ve deneysel olarak değiştirilmesine izin verir.

Sağlıklı İnsanlarda İntravenöz Endotoksin Mücadelesi: Deneysel Bir Platform Araştırma ve Sistemik Enflamasyon Değiştirmeye Yönelik

Endotoxins mühendislik Nanomalzemeler içinde tespiti nanomedicine alanında büyük zorluklardan biri temsil eder. Burada, nano tanecikleri potansiyel endotoksin kirlenme tahmin etmek için üç farklı biçimlerinin LAL oluşan çerçeve açıklar bir örnek çalışma mevcut.

Nano-formülasyonları endotoksin tespiti Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) deneyleri kullanarak

Burada, sıçanlarda tekrarlanabilir bir yoğun bakım ünitesi odaklı endotoksin modeli sunuyoruz.

Sıçanlarda Tekrarlanabilir Yoğun Bakım Ünitesi Odaklı Bir Endotoksin Modeli

Burada kurum içi hücre dışı vezikül dokusu faktör aktivite testini açıklıyoruz. İnsan plazma örneklerinden hücre dışı veziküllerdeki doku faktörünü ölçmek için aktiviteye dayalı testler ve antijen bazlı testler kullanılmıştır. Aktiviteye dayalı tahliller, antijen bazlı tahlillere göre daha yüksek duyarlılık ve özgüllüğe sahiptir.

Hücre Dışı Vezikül Doku Faktörü Aktivite Testi

Öğrenin, kritik hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için Endotoksin Aktivite Assay protokolünü. Bu yöntem, sepsisli hastalarda erken tanı ve tedavi kararlarını iyileştirmeye yardımcı olur.

Eleştirel hasta hastalarda tam kan endotoksemi tespiti için endotoksin aktivite assay

Daha fazla video keşfet