Name: İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Keşfedin Vollenhovia emeryi karıncalarında akraba evliliği haçları oluşturma ve değerlendirme yöntemini. Bu protokol, cinsiyet belirlenmesinin genetik ve moleküler analizleri için laboratuvar koşullarında uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bay Taku Shimada, AntRoom, Tokyo, Japonya, temsilci emeryi V. reproductives onun fotoğrafı ile bize verdiğiniz için teşekkür ederiz. Bu proje Japonya Derneği tarafından bilim promosyon (JSP'ler) araştırma bursu için genç bilim adamları (16J00011) ve Grant genç bilim adamları (B)(16K18626). için yardım için finanse edildi

1. toplama ve laboratuvar kolonilerde V. Emeryi bakımından alanından
Not: V. emeryi yuvalarının günlükleri ve düşmüş çürüyen ağaç Accuwest'in ikincil ormanlar boyunca Japonya çürüyen bulunur. Bu tür koloniler, Yani, (1) koloniler sadece uzun kanatlı kraliçeler ve (2) koloniler esas olarak kısa kanatlı kraliçeler uzun kanatlı kraliçeler8,14az sayıda ek olarak üreten üreten iki tür gösterir. Bu protokol için Ishikawa ili, Japonya kolonilerde bu türdeki toplanan.
<ol><li>Emeryi kolonileri erken yaz aylarında toplamak. Not: yeterli sayıda cinsel bireylerin Üreme sezonunda elde etmek için 300'den fazla kişi içeren kolonileri tercih edilir.</li>
	<li>Karınca numuneler toplanan dallar bir aspiratör (Şekil 2, sol) kullanarak bir cam kapaklı bir yapay sıva yuvaya aktarın.</li>
	<li>25 ° c altında 16:8 h açık/koyu döngüsü yapay yuva kolonilerde korumak. Musluk suyu sıva ıslak bir yıkama şişeyle sağlar.<ol>
<li>Yaklaşık 100 mg alüminyum folyo ve kahverengi şeker su dolu İpucu (20 µL tıp) her geçen gün yeni reproductives (kanatlı F1 -queens ve F1 erkek) ortaya kadar sarılmış kuru kriket tozu ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. deneysel laboratuvar haçlar
Not: Yeni reproductives geç yaz sonbahar (Şekil 3) ortaya çıkmaya başlar. Uzun kanatlı kraliçeler cinsel üretilmektedir ve kısa kanatlı kraliçeler clonally üretilmektedir ve anne genom (Şekil 1). Uzun kanatlı kız ve erkek haçlar akraba evliliği için kullanın.
<ol><li>Bireylerin hareket etmesini durdurmak için bir sabit çevre Oda 4 ° C'de 15 dakika kolonilere yerleştirin.</li>
	<li>Bacaklar 30 işçi stereoskopik mikroskop altında forseps kullanarak kaldırmak ve haçlar akraba evliliği için yeni küçük sıva yuva (Şekil 2, sağ) içine aktarabilirsiniz. Not: Bacaklar sonraki akraba evliliği haçlar tarafından üretilen işçilerin mevcut işçi ayırmak için kaldırılır.</li>
	<li>3-4 larva veya pupa çalışanları içeren bir sıva yuva ekleyin. Not: İşçi F0 queens-az kolonisinde keşif faaliyet gösteriyor. Etkili bir şekilde bu işçiler ve yeni reproductives ortasına koloni larva veya pupa geçiş sınaması sırasında çekebilecek. Sonuç olarak, normal koloni yakın deneysel koloninin koşullar tutmak.</li>
	<li>Uzun kanatlı kız ve bir erkek haçlar akraba evliliği için 2,3 adımda hazırlanan bir sıva yuva içine aktarın.</li>
	<li>25 ° c altında 16:8 h açık/koyu döngüsü ile yiyecek ve su kadar Kraliçe kanatlarını kaybetmek ve yumurtalarını 1. 3'açıklandığı gibi sağlanan kolonileri tutun. Not: Bu bir ay için bir hafta sürüyor.</li>
	<li>Stereoskopik mikroskop altında deneysel koloni her gün kontrol edin. Akraba evliliği gerçekleştirmek F1 yavrular arasında haçlar sonra yumurta stereoskopik mikroskop altında görülebilir.</li>
	<li>F sonra yumurta1 Kraliçe başlar, F1 erkek ve larva veya yuvadan 2.3 basamaktaki pupa F1 üretimi (kadın ve erkek akraba evliliği haçlar için kullanılan) ve F2 nesil (çoluk çocuk karıştırma önlemek için kaldırma «««üretilen) akraba evliliği haçlar. Not: koloni içinde kaç erkek iseniz, bir erkek ve 1-3 queens aynı deneysel kolonisinde kullanarak akraba evliliği haçlar ikna etmek mümkün.</li>
	<li>Koloniler F2 yavru ortaya kadar 1. 3'açıklanan aynı conditionsas altında tutun. Not: Transfer F1 Kraliçe ve F2 yavru yeni daha büyük alçı (Şekil 2, sol) uzun vadeli koloni tutmak yuva içine.</li>
</ol>3. akraba evliliği başarı değerlendirilmesi
<ol><li>DNA ekstraksiyon ve genotipleme ebeveyn nesil (F0)<ol>
<li>Ve bacak 100 µL şelasyon ajanı içeren bir 1.5 mL microtube transfer forseps kullanarak F0 kraliçenin bir bacak çıkarın.</li>
		<li>Stereoskopik mikroskop altında bir kadın karin Ultrasaf Su forseps kullanarak 300 µL ile dolu cam tabak içinde incelemek ve şeklindeki erkek sperm içeren spermatheca yalıtır.</li>
		<li>Peel Away spermatheca doku ve böcek iğne kullanarak erkek dokusundan sperm yalıtır. Not: % 100 kadın numuneler spermatheca sperm extraction kolaylaştırmak için saklamak için bir günden fazla diseksiyon önce alkol.</li>
		<li>Bir micropipette kullanarak, sperm 100 µL şelasyon ajanı içeren bir 1.5 mL microtube aktarın.</li>
		<li>F0 Kraliçe ve adım 3.1.1 ve 3.1.3, anılan sıraya göre hazırlanan spermlerinin kuluçkaya, 20 dk. Flash 95 ° C'de microtube santrifüj kapasitesi ve 4 ° C'de depolayın</li>
		<li>Tüm örnekleri yöntemini kullanarak genotip4başka bir bölümünde.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Akraba evliliği için kullanılan karıncalar çifti DNA çıkarma (F1) geçer<ol>
<li>Yumurta üretimi sib tarafından teyit F1 Kraliçe şeklindeki sonra kulübe kanatlarını veya bir orta bacak ve genotip 3.1 yukarıdaki bölümde tanımlanan aynı yöntemi kullanarak kullanarak Kraliçe DNA ayıklayın.</li>
		<li>Bir bacak ve genotip bunları kullanarak kullanarak DNA F1 erkek ayıklamak 3.1 yukarıdaki bölümde açıklanan yöntemi. Not: Örnekleri DNA ekstraksiyon önce alkol ve DNA şelasyon ajanı ' 4 ° C'de iki ay saklanabilir % 100 saklanabilir</li>
	</ol>
</li>
	<li>Erkeklerde erkek üreme değerlendirilmesi haçlar akraba evliliği üretilen Not: diploit erkek akraba evliliği haçlar üretilen çoğu kez steril.<ol>
<li>İç üreme organları ile 400 µL PBS çözüm forseps kullanarak bir cam tabak içinde incelemek.</li>
		<li>PBS kaldırın ve % 4 paraformaldehyde (PFA) bir micropipette kullanarak ekleyin.</li>
		<li>Doku (15-25 ° C) Oda sıcaklığında 30 dakika içinde PFA kuluçka tarafından tamir.</li>
		<li>Doku 400 µL bir micropipette kullanarak PBS ile 5 kere yıkayın.</li>
		<li>4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) çözüm PBS 1 µg/ml oranında seyreltin.</li>
		<li>PBS kaldırın ve doku için yaklaşık 300 µL bu seyreltik DAPI boyama çözüm ekleyin.</li>
		<li>(15-25 ° C) Oda sıcaklığında karanlık koşul altında 15 dk kuluçkaya.</li>
		<li>Doku 400 µL PBS ile 5 kere yıkayın ve doku forseps kullanarak slayt cam merkezi aktarın.</li>
		<li>Doku orta içeren Tetramethylrhodamine TRITC Birleşik phalloidin montaj montaj.</li>
		<li>Örnekleri 20 X veya 63 X objektif lens kullanarak mikroskobu tarama confocal lazerle gözlemlemek.</li>
		<li>405 nm uyarma lazer ve bir melez Dedektör 410-530 nm DAPI algılaması için kullanabilir.</li>
		<li>561 nm uyarma lazer ve bir melez Dedektör 565-650 nm TRITC algılaması için kullanabilir.</li>
		<li>400 Hz tarama hızını kullanın (400 satırları/s) 1024 × 1024 piksel çözünürlükte.</li>
		<li>Esir alma imge istimal a bilgisayar yazılımı peron.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Mable, B. K., Otto, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+life+cycles+with+haploid+and+diploid+phases%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">The evolution of life cycles with haploid and diploid phases.</a> BioEssays. 20 (6), 453-462 (1998).</li>
<li>Beye, M., Hasselmann, M., Fondrk, M. K., Page, R. E., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+csd+is+the+primary+signal+for+sexual+development+in+the+honeybee+and+encodes+an+SR-type+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The gene csd is the primary signal for sexual development in the honeybee and encodes an SR-type protein.</a> Cell. 114 (4), 419-429 (2003).</li>
<li>Hasselmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+the+evolutionary+nascence+of+a+novel+sex+determination+pathway+in+honeybees%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evidence for the evolutionary nascence of a novel sex determination pathway in honeybees.</a> Nature. 454 (7203), 519-522 (2008).</li>
<li>Nissen, I., Müller, M., Beye, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22942126">The Am-tra2 gene is an essential regulator of female splice regulation at two levels of the sex determination hierarchy of the honeybee.</a> Genetics. 192 (3), 1015-1026 (2012).</li>
<li>Schmieder, S., Colinet, D., Poirié, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracing+back+the+nascence+of+a+new+sex-determination+pathway+to+the+ancestor+of+bees+and+ants%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Tracing back the nascence of a new sex-determination pathway to the ancestor of bees and ants.</a> Nature Communications. 3, 895(2012).</li>
<li>Miyakawa, M. O., Mikheyev, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QTL+Mapping+of+Sex+Determination+Loci+Supports+an+Ancient+Pathway+in+Ants+and+Honey+Bees%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">QTL Mapping of Sex Determination Loci Supports an Ancient Pathway in Ants and Honey Bees.</a> PLoS Genetics. 11 (11), (2015).</li>
<li>Miyakawa, M. O., Tsuchida, K., Miyakawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+doublesex+gene+integrates+multi-locus+complementary+sex+determination+signals+in+the+Japanese+ant%2C+Vollenhovia+emeryi%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochemistry+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The doublesex gene integrates multi-locus complementary sex determination signals in the Japanese ant, Vollenhovia emeryi.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 94, 42-49 (2018).</li>
<li>Ohkawara, K., Nakayama, M., Satoh, A., Trindl, A., Heinze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+reproduction+and+genetic+caste+differences+in+a+queen-polymorphic+ant%2C+Vollenhovia+emeryi%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+letters%22%5BJournal%5D)">Clonal reproduction and genetic caste differences in a queen-polymorphic ant, Vollenhovia emeryi.</a> Biology letters. 2 (3), 359-363 (2006).</li>
<li>Kobayashi, K., Hasegawa, E., Ohkawara, K. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/j.1479-8298.2008.00272.x">Clonal reproduction by males of the ant Vollenhovia emeryi (Wheeler).</a> Entomological Science. 11 (2), 167-172 (2008).</li>
<li>Okamoto, M., Kobayashi, K., Hasegawa, E., Ohkawara, K. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/280627935_Sexual_and_asexual_reproduction_of_queens_in_a_myrmicine_ant_Vollenhovia_emeryi_Hymenoptera_Formicidae">Sexual and asexual reproduction of queens in a myrmicine ant, Vollenhovia emeryi (Hymenoptera: Formicidae).</a> Myrmecological News. 21, 13-17 (2015).</li>
<li>Schrempf, A., Aron, S., Heinze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+determination+and+inbreeding+depression+in+an+ant+with+regular+sib-mating%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Sex determination and inbreeding depression in an ant with regular sib-mating.</a> Heredity. 97 (1), 75-80 (2006).</li>
<li>De Boer, J. G., Ode, P. J., Rendahl, A. K., Vet, L. E. M., Whitfield, J. B., Heimpel, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+support+for+Multiple-locus+complementary+sex+determination+in+the+parasitoid+Cotesia+vestalis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Experimental support for Multiple-locus complementary sex determination in the parasitoid Cotesia vestalis.</a> Genetics. 180 (3), 1525-1535 (2008).</li>
<li>Paladino, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+sex+determination+in+the+parasitic+wasp+Diachasmimorpha+longicaudata%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Complementary sex determination in the parasitic wasp Diachasmimorpha longicaudata.</a> PLoS ONE. 10 (3), (2015).</li>
<li>Kobayashi, K., Hasegawa, E., Ohkawara, K. <a target="_blank" href="http://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=US201301954975">No gene flow between wing forms and clonal reproduction by males in the long-winged form of the ant Vollenhovia emeryi.</a> Insectes Sociaux. 58 (2), 163-168 (2011).</li>
<li>Cowan, D. P., Stahlhut, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionally+reproductive+diploid+and+haploid+males+in+an+inbreeding+hymenopteran+with+complementary+sex+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Functionally reproductive diploid and haploid males in an inbreeding hymenopteran with complementary sex determination.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 101 (28), 10374-10379 (2004).</li>
<li>Armitage, S., Boomsma, J., Baer, B. <a target="_blank" href="https://research.ku.dk/search/?pure=en/publications/diploid-male-production-in-a-leafcutting-ant(99b05fe3-2eef-418e-82e6-9ae940a53b2c)/export.html">Diploid male production in a leaf-cutting ant.</a> Ecological Entomology. 35 (2), 175-182 (2010).</li>
<li>Krieger, M. J. B., Ross, K. G., Chang, C. W. Y., Keller, L. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/6884600">Frequency and origin of triploidy in the fire ant Solenopsis invicta.</a> Heredity. 82, February 1998 142-150 (1999).</li>
<li>Seeley, T. D., Mikheyev, A. S. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00040-003-0638-8">Reproductive decisions by honey bee colonies: Tuning investment in male production in relation to success in energy acquisition.</a> Insectes Sociaux. 50 (2), 134-138 (2003).</li>
<li>Hölldobler, B., Wilson, E. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aH%C3%B6lldobler%2C+B+%22The+Ants%22">The Ants</a>. , Harvard University Press. http://www.amazon.co.uk/Ants-Bert-H?lldobler/dp/3540520929 (1990).</li>
<li>da Souza, D. J., Marques Ramos Ribeiro, M., Mello, A., Lino-Neto, J., Cotta Dângelo, R. A., Della Lucia, T. M. C. <a target="_blank" href="https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/11250003.2010.490567">A laboratory observation of nuptial flight and mating behaviour of the parasite ant Acromyrmex ameliae (Hymenoptera: Formicidae).</a> Italian Journal of Zoology. 78 (3), 405-408 (2011).</li>
<li>Woyke, J. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/257472209_What_happens_to_diploid_drone_larvae_in_a_honeybee_colony--Ibid2_73-75">What happens to diploid drone larvae in a honeybee colony.</a> Journal of Apicultural Research. 2 (2), 73-75 (1963).</li>
<li>Schmidt, A. M., Linksvayer, T. A., Boomsma, J. J., Pedersen, J. S. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1365-2311.2011.01325.x">No benefit in diversity? The effect of genetic variation on survival and disease resistance in a polygynous social insect.</a> Ecological Entomology. 36 (6), 751-759 (2011).</li>
<li>Schrempf, a, Aron, S., Heinze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+determination+and+inbreeding+depression+in+an+ant+with+regular+sib-mating%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Sex determination and inbreeding depression in an ant with regular sib-mating.</a> Heredity. 97 (1), 75-80 (2006).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu makalede neden akraba evliliği haçlar ve akraba evliliği karınca emeryi V.oluşumunu değerlendirmek için kullanılan iletişim kurallarını gösterir. Deneylerde, Genotipleme haçlar için kullanılan bireylerin akraba evliliği haçlar başarılı sağlamak gereklidir. Ancak, bu geçiş testleri etkinliğini haploit erkekler sadece sonbaharda alan ve laboratuvar6üretilebilir sırasında tüm yıl boyunca, diploit erkek üretilen gibi açıkça belirgindir. Sib şeklindeki queens geçtikten hemen sonra erkek yav...

Eusocial Hymenopteran takson, karınca ve arı gibi bir veya daha fazla tamamlayıcı seks belirlenmesi Heterozigoz hangi bireylerde (CSD) loci homo - ya da hemizygous olanları ise kadın olmak bir haplodiploid seks tayin sistemi geliştirmişlerdir olmak erkekler (Şekil 1A)1.
Genetik ve moleküler bileşenleri seks belirlenmesi cascade yer de balarısı, Apis mellifera, hymenopteran model organizma2,3,4inceledik. Son karşılaştırmalı genomik araştırmalar karıncalar ve arıları seks belirlenmesi yolu ilk seks belirlenmesi gene, csd5gibi birçok sözde homologs paylaşmak öneririz. Ancak, bu homologs fonksiyonel korunması için kanıt hala içinde karıncalar bulunmuyor.
Bu sorunu çözmek için akraba evliliği satırların genetik haritalama ve Moleküler çalışmalar için gerekli olduğu gibi gelişmiş olması gerekir. Ancak, korumak ve laboratuvar geliştiğini yaşam döngüleri karmaşık doğası nedeniyle bu organizmalar arasında deneysel haçlar yapmak zordur.
Burada, karıncalar6,7seks belirlenmesi sisteminde genetik ve moleküler temeli araştırmak için bir model olarak Vollenhovia emeryi kullanırız. Akraba evliliği satırları bu türün daha önce nicel Özellik loci (QTL) karıncalar6ilk kez seks belirlenmesi ile ilgili özellikleri için bağlantı eşleştirilmesine geliştirilmiştir. Ayrıca, moleküler cinsiyet tayini cascade incelenen7oldu. Bu tür gynogenesis ve androgenesis (Şekil 1B)8,9istihdam bir olağandışı üreme sistemi gelişmiştir. Clonally en yeni kız ve erkek anne ve baba tarafından genleri sırasıyla üretilmektedir. Buna ek olarak, işçi ve bazı kraliçeler cinsel üretilmektedir8. Bu üreme sistemi cinsel kullanılarak üretilen akraba evliliği haçlar queens üretilen ve erkekler için klasik bir backcross genetik olarak eşdeğerdir Çünkü genetik çalışmalar için özellikle uygundur. Cinsel olarak üretilen queens morfolojik anne genleri10 (Şekil 1B) üretilen queens farklı olduğundan, iletken ve akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi büyük ölçüde bu yöntemi kullanarak basitleştirilmiştir.
Bu makaledeki yöntemleri geçiş testi için laboratuar koloniler kurulması için akraba evliliği uygulanması tam-sib çiftleri kullanılarak ve genotipleme koloni üyeleri ve erkek çoluk çocuk diseksiyon kullanarak bu haçlar başarısını değerlendirmek haçlar genital emeryi V.içinde açıklanmıştır.
İstihdam üreme sistemi ne olursa olsun, haçlar akraba evliliği, sık sık önemli ilk adım seks belirlenmesi Hymenoptera sistemlerinde herhangi bir soruşturma uygulamadır. Örneğin Cardiocondyla obscurioriçinde neredeyse tam-sib laboratuvarda çiftleşme, 10 kuşak sonra diploit erkek olmaması CSD locus11yokluğu gösterir. Akraba evliliği haçlar6,12,13' te üretilen erkeklerin oranı düşük CSD loci sayısını tahmin etmek mümkündür.

<table><tbody><tr><td>Alçı tozu</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Herhangi bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Kömür, Aktif, Toz Wako</td><td></td><td>033-02117,037-02115</td><td></td></tr><tr><td>Sürgülü cam</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Herhangi bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Kuru Kriket diyeti</td><td>N/A</td><td>N/A Herhangi</td><td>bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Kahverengi shuger&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Herhangi bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Stiren Kare Şekilli Kasa</td><td>BİR</td> OLARAK <td>Herhangi bir boyut Boyut</td><td>karınca sayısına göre değişir</td></tr><tr><td>Incbator</td><td></td><td></td><td>Herhangi bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Alüminyum blok banyosu Kuru termo ünite DTU-1B</td><td>TAITEC</td><td>0014035-000</td><td></td></tr><tr><td>1.5mL Hiper Mikrotüp, Şeffaf, Yuvarlak alt</td><td>WATSON</td><td>131-715CS</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (99.5)</td><td>Wako</td><td>054-07225</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskopik mikroskop</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Herhangi bir marka kullanılabilir</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>DUMONT</td><td>0108-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Chelex 100 sodyum formu</td><td>SIGMA</td><td>11139-85-8</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tampon Salin (PBS) Tabletleri, pH 7.4</td><td>TaKaRa</td><td>T9181</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Wako</td><td>162-16065</td><td></td></tr><tr><td>-Cellstain- DAPI çözeltisi</td><td>Dojindo Moleküler Teknolojiler</td><td>D523</td><td></td></tr><tr><td>ABI 3100xl Genetik Analiz Cihazı</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan yapıcı ile iletişime geçin.</td></tr><tr><td>Konfokal lazer tarama mikroskobu Leica TCS SP8</td><td>Leica</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan yapıcı ile iletişime geçin.</td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 20x/0.75 IMM</td><td>Leica</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan yapıcı ile iletişime geçin.</td></tr><tr><td>HC PL APO CS2 63x/1.20 SU</td><td>Leica</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan yapıcı ile iletişime geçin.</td></tr><tr><td>Leica HyDTM</td><td>Leica</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan inşaatçı ile iletişime geçin.</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X (LAS X)</td><td>Leica</td><td></td><td>Daha fazla bilgi için doğrudan yapıcı ile iletişime geçin.</td></tr></tbody></table>

İndüksiyon ve karınca, vollenhovia emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

Cinsiyet tayini cascade genetik ve moleküler bileşenleri balarısı, Apis mellifera, hymenopteran model organizma kapsamlı bir şekilde inceledik. Ancak, küçük karıncalar gibi diğer sigara modeli hymenopteran takson bulunan seks-belirleme mekanizmaları hakkında bilinir. Hymenopteran türler geliştiğini yaşam döngüleri karmaşık doğası nedeniyle, korumak ve bu organizmaların Laboratuvarı arasında deneysel haçlar yapmak zordur. Burada, akraba evliliği haçlar yürütmek için ve bu haçlar başarısında karınca Vollenhovia emeryideğerlendirmek için yöntemleri açıklanmaktadır. Akraba evliliği emeryi V.kullanarak laboratuvar inducing, bu tür benzersiz biyolojisi nedeniyle oldukça kolaydır. Özellikle, bu tür androgenetik erkek üretir ve kadın reproductives genetik haçlar fenotipleri tanımlaması basitleştirir kanat çok biçimlilik sergilemek. Erkekler sürekli iken normal erkekler yalnızca iyi tanımlanmış bir üreme sezonunda alanında belirir. haçlar, akraba evliliği tarafından üretilmiş olması gibi Ayrıca, akraba evliliği başarısını değerlendirmek basittir. Bizim iletişim kuralı izin karınca türleri seks belirlenmesi sisteminde genetik ve moleküler temeli araştırmak için emeryi bir model olarak kullanmak için.

F0 ile F1 nesiller kullanarak microsatellite incelemenin sonuçlarını gösterdi akraba evliliği haçlar başarıyla üretildi (Şekil 4)6. Sonuç olarak haçlar akraba evliliği, şeklindeki queens deneysel geçiş koloniler kurulması bir ay içinde elde edilmiştir. Kalan erkek (işçi ve bir kraliçe)6iken tüm yavrular (F2) akraba evliliği haçlar üzerinden çeyrek (27.1 ± %8.91 SD) Erkek, oldu. H...

Bu protokol için ant Vollenhovia emeryiiçin akraba evliliği haçlar iletken ve bu haçlar başarısını değerlendiren yöntemler açıklanmıştır. Bu protokoller seks belirlenmesi sistemlerinde Hymenoptera genetik temeli anlama amaçlayan deneyler için önemlidir.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

Bu yöntem, hymenoptera moleküler biyoloji ve genetik alanlarda anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, cinsiyet belirleme sistemleri gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, genetik haritalama ve moleküler durum için gerekli olan Vollenhovia Emery antı üzerinde kolayca üreme çizgileri inbreeding hatları ikna edebilirsiniz. Yani, bu misyon belirli bir karıncanın cinsiyet belirleme sistemi içine fikir sağlayabilir ve aynı zamanda diğer karıncalar ve diğer Hymenoptera türler, eşek arıları gibi uygulanabilir.Protokole başlamak için, yaz başında V.Emeryi kolonilerini toplayın. Toplanan dallardan karınca örneklerini bir aspiratör kullanarak cam kapaklı yapay bir alçı yuvaya aktarın. 16 ila sekiz saatlik açık-koyu bir döngü altında, 25 derece C yapay yuvada koloniler koruyun.Aynı anda her gün alçı nemli tutmak için bir yıkama şişesi ile musluk suyu sağlayın. Daha sonra, yeni üreme karıncalar ortaya çıkana kadar her gün 20 mikrolitre ucu kullanarak, alüminyum folyo ve kahverengi şeker su dolu ucu sarılmış kuru kriket tozu yaklaşık 100 mikrogram ekleyin. Bu alanlardan mikro koloniler toplamak ve onlara yeni kraliçeler ve erkekler kazanmak için yeterli yiyecek sağlamak için önemlidir.İlk olarak, 15 dakika boyunca dört derece santigrat ayarlanmış kontrollü bir ortama sahip bir odaya koloniler yerleştirerek bireylerin hareket durdurmak. Sonraki inbreeding haçlar üretilen işçilerden F-sıfır nesil ayırt etmek için bir stereoskop altında forceps kullanarak 30 işçi karıncaların orta bacaklarını çıkarın. Sonra karıncalar yeni bir küçük alçı yuva içine inbreeding haçlar için aktarın.Daha sonra, işçilerin içeren bir alçı yuva içine üç ila dört larva veya pubekleyin. Uzun kanatlı bir kraliçe ve bir erkek daha önce hazırlanmış alçı yuva içine inbreeding haçlar için aktarın. Bu adım için, normal bir koloni ile aynı durumda deneysel geçiş kolonikorumak önemlidir.Sadece erkek ve dişileri bir araya getirerek üremeyi teşvik etmek zordur. Kolonileri 16-8 saatlik bir ışık altında 25 derecede tutun, kraliçe kanatlarını kaybedip yumurtlayıncaya kadar yiyecek ve su sağlanan karanlık döngü. Deneysel koloniyi her gün stereo mikroskop altında kontrol edin.F-one yavruları arasında inbreeding haçlar kurduktan sonra, yumurta bir stereoskop altında görülebilir. F-one kraliçesi yumurtlamaya başladıktan sonra, F-one neslinin ve F-iki kuşağının karışmasını önlemek için yuvadan F-one erkekleri ve larvaları veya pube'leri çıkarın. F-2 yavruları ortaya çıkana kadar kolonileri aynı koşullarda tutun.Bir F-zero kraliçesinin bir bacağını forceps kullanarak çıkarın. Bacağı 100 mikrolitre soğuk luk maddesi içeren 1,5 mililitrelik mikro tüpe aktarın. Bir stereoskop altında bir cam çanak içinde bir kadın karın incelemek 300 ultra saf su 300 mikrolitre ile dolu forceps kullanarak.Çiftleşmeli erkeklerin spermiçeren spermatica sissimilate. Spermatica doku soyma ve böcek pimleri kullanarak kadın dokusundan sperm izole. Bir mikro pasta pedkullanarak, bir chill ajan 100 mikrolitre içeren 1.5 mililitrelik mikro tüp içine sperm aktarın.F-zero kraliçesi ve spermden alınan örnekleri 20 dakika boyunca 95 derecede kuluçkaya yatırın. Flash centro mikro tüpü kaynaştırır ve numuneleri dört santigrat derecede saklar. Siv-mated F-one kraliçesi tarafından yumurta üretimini doğruladıktan sonra, döken kanatları veya bir orta bacak ve genotip kullanarak kraliçenin DNA ayıklayın.Sonra, bir bacak genotipleyerek bir F-one erkek DNA ayıklayın. Üreme haçlar erkek karıncaların doğurganlık değerlendirmek için, forseps kullanarak PBS çözeltisi 400 mikrolitre ile cam bir çanak iç üreme organları incelemek. Sonra PBS çıkarın ve bir mikro pasta ped kullanarak yüzde dört paraformaldihyde ile değiştirin.PfA'daki numuneleri oda sıcaklığında kırk dakika kuluçkaya yatırarak dokuyu düzeltin. Fiksasyondan sonra, bir mikro pasta pedi kullanarak 400 mikrolitre PBS ile dokuları beş kez yıkayın. PBS'de mililitre başına bir miligrama seyreltilmiş DAPI çözeltisi.PBS çıkarın ve dokuya seyreltilmiş DAPI boyama çözeltisi yaklaşık 300 mikrolitre ekleyin. Karanlık koşullarda bir oda sıcaklığında 15 dakika boyunca doku kuluçka. Kuluçkadan sonra, 400 mikrolitre PBS ile beş kez doku yıkayın ve plüps kullanarak bir cam slayt merkezine doku aktarın.Daha sonra tritc tetrametietiloidin içeren montaj ortamına doku monte edin. Son olarak 20 veya 60 3x objektif lensler kullanarak bir konfokal lazer tarama mikroskop ile örnekleri gözlemleyin. Haploid erkek v Emeryi testislerinin mikroskobik görüntüleri, sağlıklı fibröz doku göstermeyen Diploid male v Emeryi'de bulunmayan sağlıklı fibröz doku veya spermi göstermektedir.Diploid erkek v Emeryi'nin erkek üreme organları sperm üretmedi ve testisleri gelişmedi, bu da inbreeding haçlarda üretilen erkeklerin steril olduğunu düşündürmektedir. Gelişiminden sonra, bu teknik bize hızlı zamanlama karınca türleri için Vollenhovia Emeryi bir sabit seks miatony keşfetmek için yol açtı.

induction-evaluation-inbreeding-crosses-using-ant-vollenhovia

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Sinir indüksiyon beyin oluşumunda ilk adımdır. Hensen düğüm (düzenleyen), sinir kaderi kabul komşu doku talimatını hangi bir mekanizma, yani sinir sistemi yol açmaları. Bu video civciv embriyo sinir indüksiyonu için bir test göstermektedir.

Civciv Embriyo Sinir İndüksiyon için Testi

Biz Setaris viridis'e (S. viridis) haçları gerçekleştirmek için bir metodoloji geliştirdik. Yöntem, uygun bir polen öldürmek için önce bir sıcak su tedaviye salkım budama içerir. Haçlar iyi-kontrollü bir büyüme rejimi aşağıdaki gerçekleştirilen ve genellikle 1 tohum / s salkımda başına çapraz tozlaşma 7 kurtarma neden vardır.

In Cross Sahne Yöntemleri<em&gt; Setaris viridis&#39;in</emOtlar için&gt; Yeni Bir Model Sistemi

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; Drosophila</em

Çiçekli bitkiler mantar ilacı spreyler yalnız arı polen kaynaklı fungisit kalıntılarının yüksek konsantrasyonları maruz bırakabilir. Laboratuvar tabanlı deneyler vitroiçeren kullanarak-yetiştirilen arı larvaları, bu çalışmada mantar ilacı tedavi polen ana bilgisayar ve ev sahibi olmayan bitkilerden elde edilen tüketen etkileşimli etkilerini inceler.

Vitro Yalnız arı yetiştirme: larva Risk faktörleri değerlendirmek için bir araç

Bu protokol, Drosophila'nın embriyodan yetişkine kadar her gelişim aşamasındaki canlılığını değerlendirmek için tasarlanmıştır. Yöntem, farklı genotiplerin veya büyüme koşullarının canlılığını belirlemek ve karşılaştırmak için kullanılabilir.

Drosophila Melanogaster'In Embriyodan Yetişkine Canlılığını Değerlendirmek Için Doğrudan ve Basit Bir Yöntem

Flüoresan mikroskopi ile öz-genotiyon un belirlenmesini birleştiren kayısı(Prunus armeniaca L.) çeşitlerinin tozlaşma gereksinimlerini niçin pcr analizi ile s-genotipinin tanımlanması ile biraraya getiren bir metodoloji salıyoruz.

El-Tozlaşma, Mikroskopi ve Genetik Analizleri Birleştiren Kayısıda Öz ve İnter-(in)Uyumluluk İlişkilerinin Belirlenmesi

Burada, erkek Aedes aegypti'nin çiftleşme rekabet gücünün bir işaretleyici olarak floresan boyası kullanılarak incelenmesi için bir protokol sunuyoruz. Dişi sivrisinekler çiftleşme için hem işaretli hem de işaretlenmemiş erkeklere maruz kalır. Çiftleşme sonrası spermathecae'leri çiftleşme partnerlerini belirlemek için floresan mikroskop altında incelenir.

Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinde Çiftleşme Rekabet Gücünü Incelemek için Floresan Boyası Rhodamine B'yi Kullanmak

Burada, C. elegans model organizmasını kullanarak embriyonik canlılığı ve üretilen toplam embriyo sayısını (kuluçka) belirlemek için genel bir yöntem sunuyoruz.

Caenorhabditis elegans'ta embriyonik canlılık ve yavru büyüklüğünün ölçülmesi

Bu çalışmada, Tithonia diversifolia ekstraktlarının biyolojik aktiviteleri, küçük ruminantlarda gastrointestinal nematodlar üzerindeki etkilerini değerlendirmek için radikal bazlı yöntemler ve in vitro yumurta kuluçka testi (EHA) kullanılarak değerlendirilmiştir. Metodoloji ve temel bulgular açıklanmakta ve bu ekstraktların parazitleri kontrol etme potansiyeli vurgulanmaktadır.

Tithonia diversifolia Ekstraktlarının Gastrointestinal Nematod Yumurtalarına Karşı Antioksidan ve Antelmintik Özelliklerinin İn Vitro Deneyler Kullanılarak Değerlendirilmesi

Bu protokol, Caenorhabditis elegans'ta mayoz bölünme sırasında çaprazlama frekanslarını ve dağılımını ölçmek için bir yöntem sağlar. Kromozomların kökenini belirlemek için gerçek zamanlı PCR ile tek nükleotid polimorfizm genotiplemesi kullanıldı. 4 noktalı haritalama, her kromozomun sol kol, merkez ve sağ kol bölgelerinin çapraz dağılımlarını belirlemeye izin verdi. ...

Gerçek Zamanlı PCR Kullanılarak SNP Genotipleme ile Caenorhabditis elegans Mayozunda Çaprazlama Sıklığı ve Dağılımı

Keşfedin Vollenhovia emeryi karıncalarında akraba evliliği haçları oluşturma ve değerlendirme yöntemini. Bu protokol, cinsiyet belirlenmesinin genetik ve moleküler analizleri için laboratuvar koşullarında uygulanabilir.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet