Name: Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-10T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Öğrenin optik koherens tomografi ve optokinetik yanıt yöntemleriyle fare ve sıçanlarda retinal yapı ve görsel işlevi değerlendirmeyi. Bu teknikler nöroloji ve oftalmoloji araştırmalarında uzunlamasına çalışmalara olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser hibe Dr Robert Pfleger-Vakfı ve Ilselore Luckow-Vakfı, yanı sıra Biogen ve PA Novartis tarafından desteklenmiştir Şekil 1B çoğaltılamaz "tüm vücut pozisyonel manipülatörler anaesthetized fareler ve sıçanlar oküler görüntüleme için:-it-yourself bir rehber. Dietrich, M., Cruz-Herranz, A., yurttaş, H., Aktaş, O., Brandt, A. U., Hartung, HP., yeşil, A., Albrecht, P. BMJ açık göz hastalıkları. 1 (1), e000008, 2017" izniyle BMJ Publishing Group Ltd

Tüm hayvan yordamlar bölgesel yetkililer (kamu kurumu doğa, çevre ve tüketici koruma; başvuru numarası 84-02.04.2014.A059) tarafından onaylanmış deneysel yönergelere uygun olarak gerçekleştirilen ve derneğin için uygun Vizyon ve Oftalmoloji (ARVO) deyim kullanımı hayvan Ophthalmic ve vizyon araştırma ve Avrupa Yönergesi 2010/63/AB bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması için araştırma.
1. confocal tarama Lazer Ophthalmoscopy optik koherens tomografi
Not: CSLO-Ekim ölçüm için tüm suşların laboratuvar fareler ve sıçanlar için uyarlanabilir protokolüdür.
<ol><li>Kurulum ve öncesi görüntüleme ürünleri Not: Bu protokol için kullanılan OCT cihazın sistem yapılandırma zaten başka bir bölümünde31.</li>
	<li>
Kemirgen hazırlık için soluk çeken anestezi
	<ol>
<li>Kemirgen bir indüksiyon odasında yerleştirip isoflurane konsantrasyonu % 2, 2 L/min O2Buharlaştırıcı ayarlarsınız.</li>
		<li>Kemirgen kuyruk pinching tarafından anestezi, odasından kaldırın bakın ve sıcak tutmak için kağıt havlu sarın.</li>
		<li>Buharlaştırıcı (% 2.5 isoflurane 2 L/dk O2) bağlı ağız parçası entegre ısırık çubuğundaki üst kesici dişler kanca ve kemirgen özel tutucu33 olarak yerleştirin.</li>
		<li>Phenylephrine 2.5%-Tropicamide bir damla % 0.5 her gözün gözbebeği genişlemesi için uygulayın.</li>
		<li>Göz damlası herhangi bir aşırı sıvı 1 dakika sonra silin ve Metil Selüloz esaslı oftalmik jel gözlerle yağlamak (örneğin, mellose % 0,3 göz damlası) kurutma önlemek için out ve bulanıklık kornea.</li>
		<li>Özel kontakt lens (4 diyoptriden) fare göz el ya da forseps kullanarak yerleştirin. Bir uçak yüzey sağlamak için optik özellikleri olmadan (örneğin, yuvarlak 12 mm çapında cam coverslip) bir cam levha ile sıçan gözünü kapat. Not: Anestezi sırasında solunum hızı monitörü. Gerekirse Isoflurane konsantrasyon azaltabilir veya artırabilirsiniz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ölçüm ve analiz Not: Gerçekleştirmek ve34 APOSTEL öneriler doğrultusunda OCT ölçümleri rapor ve kalite kontrol OSCAR-IB fikir birliği kriterleri35göre gerçekleştirmek emin olun. Bu önerileri insan OCT görüntüler için geliştirilmiştir gibi bazı kriterlere ya da sadece değildir kısmen uygulanabilir.<ol>
<li>Sol göz görüntü için sol gözünü ampul kemirgen yüz emin olmak için Şekil 1A ' kamera sunulan tutucu getirin.</li>
		<li>Başlat düğmesi satın alma modunu başlatmak için Denetim Masası görüntü sağ köşesinde basın.</li>
		<li>R için filtre mandalının ve BR + OCT mavi yansıma fundus görüntüleme ve kontrol panelindeki B-tarama satın alma için seçin.</li>
		<li>Yaklaşık 38 diyoptriden odak düğmesi kameranın arka kullanarak odak mesafesini ayarlamak ve retina üzerinde OCT tarama ekranda görünene kadar yakınlaştırın. Not: İlk ölçüm kemirgen ölçüm için adapte başvuru kol var. Kombinasyonu Ctrl + Alt + üst karakter + O tuşlarına basın ve OCT-inceden inceye gözden geçirmek ekranda görünene kadar açık pencerede başvuru kol değerini ayarlayın.</li>
		<li>Tüm uçaklar retinada bir dik açı ile öğrenci ortasına bir ışın yol sağlamak için optik disk ışıklı alan (BR) ortasında konumlandırın ve yatay ve dikey çizgi B-inceden inceye gözden geçirmek yatay bir düzeye döner/dönüm tarafından ayarlamak tutucu (Şekil 1B) veya kamera hareketli.</li>
		<li>Birim tarama modunu seçin ve yüksek çözünürlüklü modunda 50 otomatik gerçek zamanlı izleme (sanat, rasterleştirilmiş 50 Ortalama A-taramaları) yazılım ekranında 25 B-inceden inceye gözden geçirmek için ayarlayın.</li>
		<li>Optik disk üzerinde birim tarama kılavuzunun orta merkezi ve edinme siyah hassasiyet topuzu ve zaman Kontrol Paneli'nde basarak başlatın.</li>
		<li>Aiçin filtre mandalının, Mavi otomatik Variety (BAF) kontrol panelinde seçin ve hassasiyet topuzu ile görüntü parlaklığını ayarlayın. Hassasiyet topuzu ve kazanmak için görüntü floresan hücreleri (örneğin, EGFP) veya Otomatik floresan mevduat tuşuna basın.</li>
		<li>Kemirgen hayvan bir ısı kaynağı ile ayrı bir kafeste koymak ve su kaybı önlemek için göz göze ait jel uygulayın.</li>
		<li>Kadar tamamen ayrı bir kafeste anestezi kurtarıldı ve ayrı ayrı muhafaza kemirgen gözetmek. Ne zaman hayvan Ambulatuvar, ev kafese geri.</li>
		<li>Analiz Birimi tarama, tarama üzerinde sağ tıklatarak OCT aygıtın yazılım otomatik ayrılmasını kullanın ve segmentasyon sonra Tüm katmanlarıseçin. OCT görüntülerin kalitesi yeterli olduğundan emin olun ve kalite cutoffs deneyler, Örneğin, her kümesinin tanımlamak > 20 desibel.</li>
		<li>Katmanların el ile düzeltme yanında çift tıkırtı üzerinde istenen tarama gerçekleştirmek, Kalınlığı profili seçin ve Katman Segmentations Düzenleüzerinde'yi tıklatın. Bir katmanı seçin, örneğin, ILM iç zar sınırlamaiçin tuşuna basın ve, gerekirse, yeşil hat kırmızı nokta ile doğru konumuna sürükleyip taşıyarak düzeltin. Not: El ile düzeltme gerçekleştirme araştırmacı deneysel grupları kör emin olun.</li>
		<li>Seçme belgili tanımlık etiket Kalınlığı harita ve diyabetik retinopati çalışma (ETDRS) kılavuz 1, 2, 3 mm erken tedavi seçin. İç Daire (Şekil 2, sol) optik disk üzerinde ortalayın.</li>
		<li>Faiz farklı Retina sektörleri için yazılım tarafından sağlanan kalınlığı değerlerden Retina katmanları kalınlığı hesaplamak. Birim taramaları ortalama kalınlığı değerleri hesaplamak için tüm 1 kullanın yaklaşık 25 ° optik disk (Şekil 2, sağ) içeren iç 1 mm daire hariç, açısı kapsayan 2, 3 mm ETDRS kılavuz.</li>
		<li>Yeterli yazılım kullanarak istatistiksel çözümleme gerçekleştirme. Her iki gözde bir hayvanın varsa, konu arası göz korelasyon içinde bir istatistiksel model hesaplanmasında dikkate alın (örneğin, denklemler tahmin Genelleştirilmiş veya karışık doğrusal modeller), bir konu tabii ki istatistiksel olarak bağımlı olduğu gibi36 .</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Optokinetic yanıt
Not: Aşağıda, OKR ölçümleri fareler ve sıçanlar için ayrıntılı bir kılavuz, bireysel belirli ihtiyaçlarına göre adapte edilebilir sağlanır.
<ol><li>
Kurulum ve öncesi ölçüm ürünleri
	<ol>
<li>Bilgisayarı açın. Sistem önyükleme sonra37ekranları test odası daha ayrıntılı başka bir yerde açıklandığı gibi açın.</li>
		<li>Fare ya da sıçan ölçümü için uygun bir platform seçin. Not: Platform boyutu kemirgen vücut boyutuna göre seçilir. Hayvan-meli muktedir düzgün dolaşmak için yetenek olmadan platformun üzerinde durur.</li>
		<li>Yazılım üzerinde çift tıklayarak ön ayarları penceresini açmak, Yeni grubunu seçin ve grup adı, konular, tür ve suşların sayısını seçin. Değişken bir uyarıcı seçin: kayma/zamansal frekans, kontrast duyarlılık, hız veya yönlendirme açılır menüsünden, ardından Yeni grup oluşturtuşuna basın.</li>
		<li>Kameranın üst kısmında odası odak halkasını işleyerek platform üzerinde odaklanmak ve (sürükle ve bırak) yerleştirerek sistemi kalibre platformunda siyah daire kırmızı çember.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ölçüm ve analiz
	<ol>
<li>Hayvan platformda yer, ~ 5 dk. hayvan geri platformda (Şekil 3A) düşerse Lift ortamına uyum izin.</li>
		<li>Konu numarası ve koşul yazılım ekran (Şekil 3B) sağ üst köşesinde seçin. Bir uyarıcı değişkendir, diğer uyaranlara sabit tutulur. Bu uyarıcı yanında açık kilit veya kapalı kilit simgesi tarafından doğrulanır.</li>
		<li>Ölçüm hayvan izler veya sırasıyla izlemez ◄ Evet veya ■ için Hayıriçin seçerek başlayın. Not: Saat yönünde izleme sol ve saat yönünün tersine izleme sağ gözü'karşılık gelir. Yazılım rastgele hareketli kılavuz yönünü değiştirir.</li>
		<li>Uyarıcı adım boyutunu el ile değişken uyarıcı yanındaki yukarı ve aşağı okları tıklatarak seçin ya da uyarıcı eşik yakınsar Eğer yazılım tarafından otomatik olarak uyum.</li>
		<li>En iyi sonuçlar için hayvan, Örneğin, yüksek sesleri ıslık ve silme, yazılım ekranında siyah ya da beyaz kutu simgesini tıklatarak animasyon. Bu eylemleri tekrar tekrar uzun süreli ölçümleri söz konusu olduğunda.</li>
		<li>Veri çözümlemeleri için Özet sekmesini seçin ve tıklayın Dosya | İstenen veri kümesini dışa aktarmak için Dışa Aktar tablo/grafik .</li>
		<li>İstenen yazılım kullanarak istatistiksel analiz (Ayrıca bkz: adım 1.3.15).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Sunulan iş ilişkisi olmayan yazarlar aşağıdaki mali açıklamalar ilan:
Michael Dietrich hoparlör honoraria Novartis aldı. Andrés Cruz-Herranz Ulusal multipl skleroz Derneği bir doktora sonrası adam var. Ari J. yeşil MedImmune, Novartis, OCTIMS, kurulduğu günden 5 Biosciences ve Bionure Bilimsel Danışma Kurulu görev yaptı; JAMA Nöroloji bir editör olduğunu; Nöroloji içerik yönetim kurulu üyesi vardı; bir patent remyelination moleküller ve yollar için tutar; kurulduğu günden 5 Bilimler için istişare; Novartis Pharma OCTIMs, kurulduğu günden bu Bilimler SRA, NINDS, NIA, Ulusal MS Derneği, Sherak Vakfı ve Hilton Vakfı alınan araştırma desteği; hisse senedi ya da hisse senedi seçenekleri başlangıçtan 5'te tutar; ve Mylan v Teva Pharma adlı bir bilirkişi olarak görev yaptı. Hans-Peter Hartung, direksiyon komitelere hizmet ücretlerini aldı, Biogen Yunanistan'dan IDEC, GeNeuro, Sanofi Genzyme, Merck, Novartis ilaç, Octapharma, Opexa tedavi, Teva eczacılık, MedImmune, Bayer HealthCare, ileri Pharma, ve Roche, Biogen Yunanistan'dan IDEC, Sanofi Genzyme, Merck, Novartis ilaç, Octapharma, Opexa tedavi, Teva Eczacılık ve Roche danışma kurullarında hizmet ücretlerini ve ders ücretleri Biogen Yunanistan'dan IDEC, Sanofi Genzyme, Merck, Novartis ilaç , Octapharma, Opexa tedavi, Teva eczacılık, MedImmune ve Roche. Philipp Albrecht Ipsen, Novartis, Biogen bilimsel danışma kurullarında hizmet için tazminat aldı; hoparlör honoraria aldığı ve destek seyahat Novartis, Teva, Biogen, Merz ilaç, Ipsen, Allergan, Bayer Healthcare, Esai, UCB ve Glaxo Smith Kline; Novartis, Biogen, Teva, Merz ilaç, Ipsen ve Roche araştırma desteği aldı. Diğer yazarlar hiçbir açıklamaları rapor.

Bu iletişim kuralı bir yönerge kalınlığı ölçümleri ve görsel fonksiyon incelenmesi Rodents için sağlar. Görsel dökümanları giderek translasyonel araştırma18,26,38,39,40 içinde kullanılan ve klinik için kolayca transfer edilebilir. Boyuna analizleri büyük ölçüde değişkenlik ve sayısını azaltarak dinamik patolojik süreçlerin soruşturma izin mümkündür, Ekim hayvan deneyleri histolojik araştırmalar ile karşılaştırıldığında önemli avantaj olduğunu hayvan çalışma gerekli. Ayrıca, OCT ile içinde vivo görüntülemede kesme veya katman kalınlığı histolojik araştırmalarda etkileyebilir eserler boyama fiksasyon, tabi değildir.
Ancak, lazer ışını retina ile ilgili olarak tüm uçaklarda ortogonal oryantasyon kalite ve tekrarlanabilirlik kalınlığı değerleri sağlamak için kritik bir adımdır. Bu araştırmacı bazı eğitim gerektirir ve OCT taramaları edinme önce zorunludur. Ticari cihazlar insan uygulamalar için inşa edilir gibi Ayrıca, kemirgen OCT görüntülerin kalitesi insan hasta B taranmasını karşılaştırıldığında hala aşağı kalır yanı yok. Yazarın deneyimi farklı iç Retina ayırt etmek zor olabilir katmanları (retina sinir lifi tabakası, ganglion hücre katmanı ve iç pleksiform tabaka) el ile Düzeltme sırasında. Bu yüzden bu katmanlar bir bileşik okuma (IRL) analiz öneririz.
Deneysel Kur uçucu anestezi, örneğin, hangi, deneyim, daha güvenli ve daha kolay ketamin-xylazine41,42 enjekte edilebilir anestezi Örneğin, kontrol ve riskini azaltır soluk çeken isoflurane için bir seçenek sağlar kemirgenler uzun satın alma durumunda erken Uyanış (örn., düşsel fluorescently etiketli hücre gerçekleştirirken) kere. Bir ön çalışmada, birim taramalar iletişim kuralları en yüksek geçerlilik ve güvenilirliği ile tespit edilmiştir. Ne zaman cilt taramaları optik disk içeren orta kesiminde hariç tüm değerlendirmeler için 0.85 üzerindeki ICC (Intra-sınıf korelasyon katsayısı) değerleri ile değerlendirildi arası Oylayıcısı ve test testi tekrarlayın güvenilirlik mükemmel.
Optokinetic yanıt ölçümü yanıt olarak sürekli hareketli bir alan oluşur istemsiz optokinetic refleks dayanır. Diğer türler, aksine Rodents sadece gözleri, ama kolayca kamera ile tespit edilebilir tüm baş hareketi içerir.
"İzleme" arasında ayırt edici veya normal hayvanların davranış hareketleri gerektirir araştırmacı bazı eğitim ve deney grubu için kör önemlidir. Buna ek olarak, hayvanların deneysel ayarı ve uzun süredir ölçüm protokolleri sırasında karşılamak için bir adaptasyon faz ihtiyacım var, "izleme" OKR eşik ulaşmasını nedeniyle değil de, azalan temin için art arda animasyon hayvanlar var dikkat. Önemli zorlanma değişkenliği ile ilgili laboratuvar fareler ve sıçanlar43,44görsel fonksiyonu da vardır. Kemirgen görme keskinliği önce test edilir ve gen Pde6brd1 için homozigoz oldukları gibi SJL fareler gibi bazı suşları bile OKR ölçümleri için uygun olmayabilir bu nedenle değerlendirilmelidir (Retina dejenerasyonu 1).
Özetle, Retina Morfoloji ve görsel fonksiyon incelenmesi hayvan modellerinde non-invaziv, Boylamsal araştırmalar EAE bağlamında meydana gelen yapısal ve işlevsel hasar için izin verir ve görsel içeren diğer modellerinde yararlı olabilir Sistem, ancak bunlarla sınırlı olmamak retinopathies ya da optik sinir yaralanma modelleri de dahil olmak üzere.

Görsel yolu, sınav merkezi sinir sisteminin bir parçası olarak sadece Oftalmolojik1,2,3,4,5 ele etkili bir başlangıç noktası olması için kanıtlanmıştır , ama ayrıca nörolojik6,7,8,9,10,11,12,13,14 ,15,16 soru. Son yıllarda, OCT ve OKR çok çeşitli retinopathies ve çeşitli kemirgen modelleri17,18,19 Retina belirtileri değerlendirmek için yararlı analitik, non-invaziv araçları olarak tespit edilmiştir , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. hızlı ve yüksek çözünürlük vivo içinde görsel olarak retina Morfoloji ve fare ve sıçanlar, yapısında histolojik kesitler iyi doğrultusunda sonuçlarını gösteren hayvanlar retinae26OCT sağlar. OKR kantitatif görsel işlevini değerlendirmek için hızlı ve sağlam bir yöntem kabul ettiğiniz anlamına gelir.
Birçok OCT aygıt tanılama Retina patolojileri, yani Kılavuzu farklı dalga boylarında, lipofuscin mevduat görüntülenmesini veya Retina değişiklikleri ile aynı anda confocal tarama Lazer ophthalmoscopy (cSLO) görüntüleme izin pigment epitel27. Ayrıca, transjenik hayvanlar hücrelerde etiketli floresans in vivo görüntüleme mümkün28,29,30,31,32' dir. Ancak, OCT teknoloji kemirgen modellerinde hala, ağırlıklı olarak küçük göz boyutu nedeniyle meydan okuyor. Çeşitli ticari olarak kullanılabilir aygıtlar uyarlamalar gerektirir ve sık sık sahibi farklı bir boyutunu farklı tür hayvanların Image için gereklidir. Ayrıca, hayvanlar ölçüm için anestezi gerektirir.
OKR cihazlar kemirgenler görsel işlevinde değerlendirmek için kullanılabilir. Hayvanlar bir gerçek ya da sanal silindir hareketli bir görüntüleme merkezi bir platform üzerinde yansımalı baş ve boyun hareketleri ile hayvanlar izleyen ızgara, yerleştirilir. Bu optokinetic yanıt azaltılmış veya azaltma veya görsel fonksiyon kaybı söz konusu olduğunda ortadan kaldırılmıştır.
Bu iletişim kuralının amacı bir soluk çeken anestezi sağlayan özel bir sahibi ile piyasada bulunan OCT aygıtı kullanarak Retina kalınlığı ölçümü için el sunmaktır. Protokol, yazılım üreticisi tarafından sağlanan kullanarak ses taramaları analiz verilmektedir. Görsel sınama, OKR değerlendirmek için ticari olarak kullanılabilir bir sistem kullanımı hakkında yönergeler sağlamak için amaçtır.

<table><tbody><tr><td>Heidelberg Spectralis HRA+OCT sistemi&nbsp;</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>N/A</td><td>oftalmik görüntüleme platform sistemi</td></tr><tr><td>Heidelberg Göz Gezgini</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>N/A</td><td>Sürüm 1.9.10.0</td></tr><tr><td>mavi 25D temassız&nbsp; lens</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>Kemirgen ölçümü için</td><td>N/A</td> lens</tr><tr><td>OptoMotry</td><td>CerebralMechanics Inc., Kanada</td> Görsel fonksiyon analizi için <td>N/A</td><td>sistemi</td></tr><tr><td>OptoMorty HD yazılımı</td><td>CerebralMechanics Inc., Kanada</td><td>N/A</td><td>Sürüm 2.1.0</td></tr><tr><td>İnhalasyon Anestezik İzofluran</td><td>Piramal Yoğun Bakım, Bethlehem, PA, ABD&nbsp;</td><td>803250</td><td>inhalasyon anestezik</td></tr><tr><td>Fenilefrin %2.5-Tropikalamid %0.5&nbsp;</td><td>Üniversite Hastanesi D&uuml; sseldorf, Almanya</td><td>N/A pupiller</td><td>dilatasyon&nbsp;</td></tr><tr><td>Visc-Ophtal</td><td>Dr. Robert Winzer Pharma GmbH, Berlin, Almanya</td><td>58407</td><td>oftalmolojik göz jeli</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software Inc, San Diego, CA, ABD</td><td>N/A</td><td>istatistiksel analiz yazılımı, Sürüm 5.00</td></tr><tr><td>IBM SPSS İstatistikleri</td><td>IBM Corporation, Armonk, New York, ABD</td> N<td>/A</td><td>istatistiksel analiz yazılımı, Sürüm 20</td></tr></tbody></table>

optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optik koherens tomografi (OCT) yüksek çözünürlüklü Retina görüntüleme sağlayan hızlı, non-invaziv, dalgaboyu bir tekniktir. Ateş, neuroprotection ve nöro-onarım görsel sistemin bu kez correlate Retina değişiklikleri ile ilgili işlemlerin incelenmesi için ideal bir araçtır. Fonksiyonel bir okuma görsel olarak uyarılmış telafi edici göz ve baş hareketleri deneysel modelleri görsel işlevi içeren yaygın olarak kullanılır. Her iki teknikleri birleştiren bir nicel içinde vivo araştırma yapısı ve patolojik koşullarını veya roman therapeutics potansiyelini değerlendirmek için kullanılan işlev sağlar. Sunulan tekniklerin büyük yarar sağlayan dinamik süreçler, değişkenliği azaltmak incelenmesi boyuna çözümlemesi yapma ihtimali ve hayvanların deneyler için gerekli sayıda aşağı keser. Protokol amaçları Alım ve yüksek kaliteli retina taramalarını fareler ve sıçanlar inhalational anestezi sunmak için bir seçenek ile düşük maliyetli bir özelleştirilmiş tutucu kullanarak analiz için bir kılavuz sağlamak için nitelendirdi. Ayrıca, önerilen Kılavuzu bir öğretim kılavuzu kendi özel ihtiyaçlarına ve çıkarları için adapte edilebilir Rodents optokinetic yanıt (OKR) analizi ile araştırmacılar yöneliktir.

Miyelin oligodendrocyte glikoprotein (MOG) peptid 3rd üretimi OCT Imaging'i kullanma indüklenen deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE) fare modelleri, yüksek çözünürlüklü morfolojik bölümleri fare Retina elde edilmiştir. Bu teknolojiyi kullanarak, farklı maddeler koruyucu kapasiteleri gösterdiği17yaşındaydın. Histolojik Retina wholemounts (Şekil 4) boyama tarafından elde edilen Retina ganglion hücrelerinin (RGC) sayıda iyi doğrultusunda elde edilen iç Retina katmanları (IRL) kalınlığı değerleri vardır.
OKR izleme tarafından Ekim görülen ateş işlevsel bir okuma sağlar. Bu deneylerde, görsel işlev olarak uzamsal frekansta OKR tarafından değerlendirildi ve neuroaxonal hasar tarafından Ekim, IRL inceltme olarak değerlendirildi yakın korelasyon17' idi. Çeşitli protokoller kayma veya zamansal frekans, kontrast duyarlılık, yönlendirme veya hareketli kılavuz hızını değiştirerek görme keskinliği incelemek için istihdam edilebilir. EAE modelinde, tedavi edilmezse MOG EAE fareler (Şekil 5) karşılaştırıldığında geliştirilmiş bir kayma frekansı 0,05 devir/derecesi (c/d) Madde 1 ile tedavi hayvanların tespit edilmiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58571/58571fig1.jpg"> Şekil 1: özel tutucuyla OCT ölçüm için. (A) OCT görüntüleme özel tutucu33 ve (B) dönme ekseni etrafında kemirgen göz kullanarak bir C57BL/6J fare. Döndürme transvers düzlemde (solda) ve Aksiyel düzlemde (sağda) gösterilmiştir. Bu rakam Dietrich, M. değiştirildi vd.33. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58571/58571fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58571/58571fig2.jpg"> Şekil 2: OCT edinme analiz sonrası. "1, 2, 3 mm" ETDRS ızgara üzerinde 25 B-tarama birimi iletişim kuralı (solda). Retina katman kalınlığı farklı Retina sektörleri için yazılım (sağ) tarafından sağlanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58571/58571fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58571/58571fig3.jpg"> Şekil 3: fareler ve uyarıcı OKR ölçüm ayarlarını. (A)Top görüntülemek C57BL/6J fare odasında platformda analiz kamera. (B) Kullanıcı arabirimi ve OKR yazılımının ayarlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58571/58571fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58571/58571fig4.jpg"> Şekil 4: C57BL/6J fareler MOG EAE ile göstermek madde tedavi edilmezse kontrollere göre 1 ile tedavi ederken bir zayıflatılmış hastalığı kursu. (A) iç Retina katmanları dejenerasyonu olan azaltılmış (B) ve klinik EAE puanı EAE boyunca zayıflatılmış ne zaman madde 1 yönetiliyordu. Fareler her gün skorlanmıştır ve OCT ölçümleri aylık 120 gün bir süre içinde gerçekleştirilmiştir. Grafikler ortalama ve standart hata grubu başına en az on hayvanların temsil eder. (*p &lt; 0,05, ***p &lt; 0,001, ANOVA tarafından Dunnett'ın öğleden hoc testi ile karşılaştırıldığında eğri altındaki alan). (C) IRL kalınlığı değişimdir içinde RGC kaybı ile iyi uyum (***p &lt; 0,001, ANOVA ile Dunnett'ın öğleden hoc testi tedavi edilmezse MOG fareler için karşılaştırıldığında tarafından). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58571/58571fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58571/58571fig5.jpg"> Şekil 5: OKR ölçüm MOG EAE ile C57BL/6J farelerin. Madde 120 gün boyunca test uzamsal frekansa eşik tarafından ölçülen tedavi edilmezse MOG EAE farelere göre 1 ile geliştirilmiş görme keskinliği hayvan tedavi (A) OKR ortaya çıkarır. Grafikler ortalama ve standart hata grubu başına en az altı hayvanların temsil (**p &lt; 0,01, ***p &lt; 0,001, ANOVA tarafından Dunnett'ın öğleden hoc testi ile karşılaştırıldığında eğri altındaki alan). (B) görüntü test odasında bir C57BL/6J fare. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58571/58571fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Yapısal ve görsel dökümanları Rodents optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt tarafından değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sunulmuştur. Sonuçları Oftalmolojik gibi nörolojik araştırma için değerli bilgiler sağlar.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Bu yöntemler nöroloji ve oftalmoloji alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir ve çeşitli kemirgen modellerinde çok çeşitli retinopatilerin ve retinal bulguların değerlendirilmesine yardımcı olabilir. Bu tekniklerin en büyük avantajı, noninvaziv boylamsal incelemelerin yapIlebilmektedir, değişkenliği azaltmak ve deneyler için gerekli hayvan sayısını azaltmak. Bu yöntemler, patolojik koşulları araştırmak veya yeni terapötiklerin potansiyel yararLarını değerlendirmek için kullanılabilecek yapı ve fonksiyonun kantitatif in vivo araştırılmasına olanak sağlar.Ancak, özellikle kemirgen modellerde optik koherens tomografi teknolojisinin uygulanması, özellikle küçük göz boyutu nedeniyle, hala zorlu. Prosedürleri gösteren Michael Dietrich, bizim laboratuvardan bir doktora öğrencisi olacaktır. Kemirgen anestezi sonra, pupillary genişleme için her göz fenilefrin Tropicamide bir damla uygulayın.Bir dakika sonra fazla göz damlası ıslak silin. Ve göz kurumasını önlemek ve bulanık bir kornea oluşturmak için gözleri metilselüloz bazlı oftalmik jel yağlayın. Sonra göze özel bir kontakt lens yerleştirmek için forceps kullanın.Satın alma modunu başlatmak için kontrol paneli ekranının sağ köşesindeki Başlat düğmesine basın. Daha sonra, sol gözü niçin görüntüleyip, kemirgenin sol göz ampulünün kameraya dönük olduğundan emin olmak için tutucuyu yerleştirin. Filtre düzeyini R olarak ayarlayın ve yazılımda mavi yansımalar fundus görüntüleme ve B-taraması edinimi için BR ve OCT'yi seçin.Ardından, kameranın arka tarafındaki odak tonuzunu kullanarak odak mesafesini yaklaşık 38 diyoptriye ayarlayın. Ve okt taraması ekranda görünene kadar retinayı yakınlaştırın. Daha sonra tüm düzlemlerde retinanın ortogonal açısı ile, öğrencinin ortasından bir ışın yolu sağlamak için, ışıklı alanın ortasında optik disk konumlandırın.Ve tutucuyu döndürerek yatay ve dikey b-taramalarını yatay bir seviyeye ayarlayın. Yazılım ekranında ses tarama modunu seçin ve 50 otomatik gerçek zamanlı izleme yüksek çözünürlük modunda 25 B-taramaları ayarlayın. Optik diskteki ses tonu ızgarasının ortasını ortalayın ve siyah hassasiyet düğmesine basarak satın almaya başlayın ve ardından kontrol panelinde edinin.Edinme tamamlandıktan sonra, filtre düzeyini kontrol panelindeki A.Select Blue Autofluorescence olarak ayarlayın. Ve duyarlılık tonlasıyla görüntü parlaklığını ayarlayın. Duyarlılık tonuna basın ve ardından floresan hücreleri veya otofloresan mevduatları görüntülemek için edinin.Birim taramalarının analizi için, taramaüzerine sağ tıklayarak OCT cihazının yazılımının otomatik bölümlemesi kullanılır. Ve Segmentasyon, sonra Tüm Katmanlar seçin. İstenilen tarama çift tıklayarak katmanların manuel düzeltme gerçekleştirin.Kalınlık Profilini seçin. Ve Katman Bölümlerini Edit'e tıklayın. Her seferinde bir katman seçin.Ve gerekirse sürükleyerek ve doğru konuma bırakarak kırmızı nokta hareket ettirerek yeşil çizgi düzeltin. Ardından sekme Kalınlık Haritası'nı seçin. 1, 2, 3 milimetrelik ETDRS ızgarasını seçin.Optik diskteki iç daireyi ortala. Son olarak, farklı retinal sektörler için yazılım tarafından sağlanan kalınlık değerlerinden retina katmanlarının kalınlığını hesaplayın. Birim taramalarından ana kalınlık değerlerini hesaplamak için, optik diski içeren iç bir milimetrelik daire hariç, yaklaşık 25 derecelik bir açıyı kaplayan 1, 2, 3, milimetrelik ETDRS ızgarasının tamamını kullanın.Kemirgenleri ölçmek için bir platform seçerek başlayın. Yazılımı çift tıklatarak Ayarlar penceresini açın. Yeni Grup'u seçin ve grup adını, konu sayısını, türünü ve suşlarını seçin.Açılan menüden değişken bir uyarıcı, spatiotemporal frekans, kontrast hassasiyeti, hız veya oryantasyon seçin ve Yeni Grup Oluştur'a basın. Odanın üstündeki kameranın odak halkasını manipüle ederek platforma odaklanın. Ve platformdaki siyah dairenin etrafındaki kırmızı daireyi hizalayarak sistemi kalibre edin.Daha sonra, platformüzerine kemirgen yerleştirin ve yaklaşık beş dakika boyunca çevreye uyum sağlar. Daha sonra hayvan takip ediyorsa veya takip etmiyorsa, evet için sol oku veya hayır için kareyi seçerek ölçümü başlatın. Değişken uyarıcının yanındaki Yukarı ve Aşağı Oklara tıklayarak uyarıcının adım boyutunu el ile seçin.Son olarak, Özet sekmesini seçin ve istenen veri kümesini dışa aktarmak için Dosya, Dışa Aktarma Tablosu veya Grafik'e tıklayın. Sonuçlar, iç retina tabakalarının dejenerasyonunun azaldığını göstermektedir. Ve klinik AAE skoru Madde 1 uygulandığında EAE kursu sırasında zayıflatılır.Ayrıca, OKR 120 günlük bir süre içinde mekansal frekans eşik testi ile ölçülen işlenmemiş MOG EAE fareler ile karşılaştırıldığında madde 1 ile tedavi hayvanların geliştirilmiş bir görme keskinliği ortaya koymaktadır. OCT ölçümleri yaparken, kritik bir adım, kalınlık değerlerinin kalitesini ve tekrarlanabilirliğini sağlamak için retinaile ilgili tüm düzlemlerde lazer ışınının ortogonal yönüdür. OKR tekniği için, hayvanın izleme ve normal davranış hareketleri arasında ayrım, araştırmacı bazı eğitim gerektirir.Deney grubu için kör olmak önemlidir. Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit bağlamında meydana gelen yapısal ve fonksiyonel hasar bu araştırmalar sonrasında, prosedür de retinopati modelleri de dahil olmak üzere ancak retinopati modelleri ile sınırlı olmamak üzere görme sistemi içeren diğer modellerde yararlı olabilir, veya optik sinir hasarı. Bu teknikler nöroloji ve oftalmoloji alanlarında in vivo araştırmanın önünü açmakta ve klinik çalışmalara kolayca aktarılabilmekte.

using-optical-coherence-tomography-optokinetic-response-as-structural

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optik Koherens Tomografi: Fare Retinal Ganglion Hücrelerini Görüntüleme In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  Bu videoda, optik nöropatili genetik olarak değiştirilmiş bir fare modelinde retina katmanlarını görüntülemek ve yapısal değişiklikleri değerlendirmek için spektral alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını gösteriyoruz.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Fare Retinasının İn Vivo Görüntülenmesi

Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Fare vizyonu incelemek için, biz bir giderek test yaptı. Fareler tavan üzerinde bir monitör ile büyük bir kare arenada yerleştirildi. Giderek yükselen görsel uyarıcı, farelerde sürekli olarak donma veya uçuş reaksiyonlarını uyarmaktadır.

Fare vizyonu değerlendirmek için görsel stimuli Looming kullanma

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Diyabet sonucu hem gözlerde hem de beyinde nöral dejenerasyon kemirgenler üzerinde yapılan davranışsal testlerle gözlemlenebilir. Mekansal bilişin bir ölçüsü olan Y labirenti ve görsel fonksiyonun bir ölçüsü olan optomotor yanıtı, hem potansiyel teşhisler hem de tedaviler hakkında fikir sağlar.

Diyabetik Sıçanlarda Y-Labirenti Yoluyla Optomotor Yanıtı ve Bilişsel İşlev Yoluyla Görsel İşlevin Davranışsal Değerlendirmesi

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Mevcut protokol, in vivo görüntülerde gözlenen retinal ganglion hücre akson demeti morfolojisini doğrulamak amacıyla in vivo görünür ışık optik koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) görüntülerini aynı fare retinasının ex vivo konfokal görüntüleriyle hizalama adımlarını özetlemektedir.

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

Burada, optokinetik refleksi ölçmek için standart bir protokol açıklıyoruz. Sanal davul stimülasyonunu ve video-okülografiyi birleştirir ve böylece davranışın özellik seçiciliğinin ve uyarlanabilir plastisitesinin hassas bir şekilde değerlendirilmesine izin verir.

Farelerde Optokinetik Refleksin Görsel Özellik Seçiciliğinin Ölçülmesi

Öğrenin optik koherens tomografi ve optokinetik yanıt yöntemleriyle fare ve sıçanlarda retinal yapı ve görsel işlevi değerlendirmeyi. Bu teknikler nöroloji ve oftalmoloji araştırmalarında uzunlamasına çalışmalara olanak tanır.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Daha fazla video keşfet