Name: Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Öğrenin, yeni doğan farelerde polimikrobiyal sepsis oluşturmak için standartlaştırılmış sekum süspansiyonu hazırlama ve enjeksiyon yöntemlerini. Bu protokol, erken dönemde moribund yavruları belirlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onların rehberlik ve hayvan izleme ve su kuyusu-varlık giriş için özel Claire Harrison ve hayvan bakım tesisi, British Columbia Çocuk Hastanesi Araştırma Enstitüsü (BCCHR) destek için hayvan çalışmalarında, hem de doktor Po-Yan Cheng için teşekkürler.

<ol><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+causes+of+child+mortality+in+2000-13%2C+with+projections+to+inform+post-2015+priorities%3A+an+updated+systematic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national causes of child mortality in 2000-13, with projections to inform post-2015 priorities: an updated systematic analysis.</a> The Lancet. 385 (9966), 430-440 (2015).</li>
<li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+mortality+and+altered+immunity+in+neonatal+sepsis+produced+by+generalized+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Increased mortality and altered immunity in neonatal sepsis produced by generalized peritonitis.</a> Shock. 28 (6), 675-683 (2007).</li>
<li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li>
<li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+innate+immunity+predisposes+murine+neonates+to+poor+sepsis+outcome+but+is+reversed+by+TLR+agonists%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Defective innate immunity predisposes murine neonates to poor sepsis outcome but is reversed by TLR agonists.</a> Blood. 112 (5), 1750-1758 (2008).</li>
<li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+CXC+ligand+10%2FCXC+receptor+3+signaling+in+the+murine+neonatal+response+to+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Critical role for CXC ligand 10/CXC receptor 3 signaling in the murine neonatal response to sepsis.</a> Infection and Immunity. 79 (7), 2746-2754 (2011).</li>
<li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+immunity+and+defects+in+the+neonatal+and+elderly+immune+response+to+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protective immunity and defects in the neonatal and elderly immune response to sepsis.</a> Journal of Immunology. 192 (7), 3156-3165 (2014).</li>
<li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+emergency+myelopoiesis+following+polymicrobial+sepsis+in+neonates%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Delayed emergency myelopoiesis following polymicrobial sepsis in neonates.</a> Innate Immunity. 21 (4), 386-391 (2015).</li>
<li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+emergency+myelopoiesis+and+survival+in+neonatal+sepsis+by+caspase-1%2F11+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Improved emergency myelopoiesis and survival in neonatal sepsis by caspase-1/11 ablation.</a> Immunology. 145 (2), 300-311 (2015).</li>
<li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+IL-17A+attenuates+neonatal+sepsis+mortality+induced+by+IL-18%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Targeting IL-17A attenuates neonatal sepsis mortality induced by IL-18.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), E2627-E2635 (2016).</li>
<li>Fallon, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Program+Cell+Death+Receptor-1-Mediated+Invariant+Natural+Killer+T-Cell+Control+of+Peritoneal+Macrophage+Modulates+Survival+in+Neonatal+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Program Cell Death Receptor-1-Mediated Invariant Natural Killer T-Cell Control of Peritoneal Macrophage Modulates Survival in Neonatal Sepsis.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1469(2017).</li>
<li>Young, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+survival+after+induction+of+sepsis+by+cecal+slurry+in+PD-1+knockout+murine+neonates%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved survival after induction of sepsis by cecal slurry in PD-1 knockout murine neonates.</a> Surgery. 161 (5), 1387-1393 (2017).</li>
<li>Rincon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvant+pretreatment+with+alum+protects+neonatal+mice+in+sepsis+through+myeloid+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Adjuvant pretreatment with alum protects neonatal mice in sepsis through myeloid cell activation.</a> Clinical & Experimental Immunology. 191 (3), 268-278 (2018).</li>
<li>Starr, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+cecal+slurry+preparation+protocol+with+improved+long-term+reproducibility+for+animal+models+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A new cecal slurry preparation protocol with improved long-term reproducibility for animal models of sepsis.</a> PLoS ONE. 9 (12), e115705(2014).</li>
<li>Hansen, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiency+in+milk+fat+globule-epidermal+growth+factor-factor+8+exacerbates+organ+injury+and+mortality+in+neonatal+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deficiency in milk fat globule-epidermal growth factor-factor 8 exacerbates organ injury and mortality in neonatal sepsis.</a> Journal of Pediatric Surgery. 52 (9), 1520-1527 (2017).</li>
<li>Fujioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+heme+oxygenase-1+attenuates+the+severity+of+sepsis+in+a+non-surgical+preterm+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22SHOCK%22%5BJournal%5D)">Induction of heme oxygenase-1 attenuates the severity of sepsis in a non-surgical preterm mouse model.</a> SHOCK. 47 (2), 242-250 (2017).</li>
<li>Al Asmari, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+quinacrine+against+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Protective effect of quinacrine against glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> BMC Nephrology. 18, PMC5273840(2017).</li>
<li>Geng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+gene+expression+profiles+and+signaling+pathways+in+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Differences in gene expression profiles and signaling pathways in rhabdomyolysis-induced acute kidney injury.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (11), 14087-14098 (2015).</li>
<li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+depletion+ameliorates+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Macrophage depletion ameliorates glycerol-induced acute kidney injury in mice.</a> Nephron Experimental Nephrology. 128 (1-2), 21-29 (2014).</li>
<li>Nara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluations+of+lipid+peroxidation+and+inflammation+in+short-term+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Evaluations of lipid peroxidation and inflammation in short-term glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 43 (11), 1080-1086 (2016).</li>
<li>Zager, R. A., Johnson, A. C. M., Lund, S., Hanson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure%3A+determinants+and+characteristics+of+the+injury-induced+hyperinflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure: determinants and characteristics of the injury-induced hyperinflammatory response.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 291 (3), F546-F556 (2006).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+Endpoints+for+Infectious+Disease+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Institute+for+Laboratory+Animal+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">Humane Endpoints for Infectious Disease Animal Models.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guidelines+on%3A+choosing+an+appropriate+endpoint+in+experiments+using+animals+for+research%2C+teaching+and+testing%22">Guidelines on: choosing an appropriate endpoint in experiments using animals for research, teaching and testing</a>. , https://www.ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Appropriate_endpoint.pdf (1998).</li>
<li>Nemzek, J. A., Xiao, H. Y., Minard, A. E., Bolgos, G. L., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+in+shock+research%5BTitle%5D)+AND+%22SHOCK%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints in shock research.</a> SHOCK. 21 (1), 17-25 (2004).</li>
<li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+approach+for+establishing+humane+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Institute+for+Laboratory+Animal+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">A systematic approach for establishing humane endpoints.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 80-86 (2000).</li>
</ol>

Dr James Wynn aldığı destek üzerinden ulusal kurumları sağlık (NIH) / Ulusal Enstitüsü genel tıbbi Bilimler (R01GM128452) ve NIH /Eunice Kennedy Shriver Ulusal Enstitüsü Çocuk Sağlığı ve insan geliştirme (NICHD) () R01HD089939).

Doğum sonrası yenidoğan fareler var çok sınırlı mobilite ve kendilerini onların back on ne zaman bile tartışmasız konuyor sonra sağ için başarısız. DOL 7 tarafından yaş bu modelde, meydan fare hareketi hakları-Mobile FTR-cep telefonunuza kapsayan bir dizi önemli bir farkı, tartışmasız farelerde yani gözlendi tartışmasız bir fare bu yaşta FTR uyuşuk davranışı göstermedi. Meydan polymicrobial sepsis ile fareler olmak gözlendi FTR-uyuşuk; Bu nedenle, bu yanıt hastalık şiddeti bir işaret olabilir. Kalça hareketi için yatay gelen bir 90 ° açıyla kesme için özenli olmak uyuşuk veya mobil kalça hareketi farelerde tutarlı ve doğru tayini için sağlar. Zaman dilimi 4 s bir fare kendisi değil eğer görmek için tartışmasız fareler sürekli olarak kendilerini bu zaman dilimi içinde sağa doğru çünkü seçildi. Tekrarlanan aynı fare ölçümü kaçınılması, kendilerini sağ için zaman ve kalça hareketlilik ölçümü için 4 sınırlı s Aksi takdirde gıda ve sıcaklık elde etmek için yeteneğini etkileyebilir ve etkileyebilecek fare, aşırı yorucu önlemek için onun prognoz daha iyi olmak. Kendisi hem sol hem de sağ tarafındaki keşfetmiş gözlendi ve puanları daha yüksek kullanılan fare insancıl bir bitiş noktası olup olmadığını belirlemek için FTR-Nonmobile bir tarafta görüntülemek için bazı fareler bulunduğundan henüz diğer tarafında ve b daha yüksek bir hareketlilik var e sonunda kurtarabilirsiniz.
Fare sistem durumunu değerlendirmek için kullanılan puanlama sistemi kategorik cutoffs uygulanması için hareket bir spektrum nedir dayanıyordu ve bu nedenle, bireysel önyargı eğilimli olabilir. Personel birlikte her kişi fareler aynı attı emin olmak için eğitim gördü; Ancak, büyük olasılıkla öznellik varyasyon için önde gelen bir seviyede kalır. Puanlama tutarlılığını yedi alarak değerlendirildiğinde daha önce yenidoğan fare izleme gerçekleştirilen vardı değil araştırmacılar bu protokolü ve video gereklere öğrenmek, bağımsız olarak davranışları atamak ve insancıl belirlemek bitiş noktası. %97 doğruluk bireysel önyargı bu model davranış atamaları önemli bir rol oynamıyor düşündüren 60 meydan fareler üzerinde yapılan Puanlama ile gözlenmiştir. Sunulan davranış izleme protokolü üzerinde DOL 7 meydan hayvanlar gözlemleri dayanır, henüz tartışmasız bir sağlıklı devlet 6 gün genç farelerde, sürekli olarak kendilerini değil. Böylece, açıklanan insana ilişkin son nokta ölçütleri doğrudan küçük fareler için uygulanamadı. Küçük fareler bu deneysel modelinde kullanılan veya farklı meydan modeli ile farklı hastalık kinetik uygulanırsa, sonra uygun insana ilişkin son nokta ölçütleri olmalı geliştirilen ve ötenazi istiyorsunuz yoksa, sonunda farelerin önlemek için pilot yeniden elde etmek. Skor sistemi test ve onaylama ile diğer modeller için potansiyel olarak uygulanan olabilir bu insancıl bitiş noktası sınıflandırma artırma sağlam bir yöntemini görüntüler.
Cecal Bulamaç her hazırlanması veya yeni bir fare türü kullanımı benzer bir öldürücü doz elde etmek için yönetmek için cecal Bulamaç doz retitration gerekli. Her hazırlık tarafından ilgi, yani hayatta kalma, okuma standartlaştırılmış aynı bakteri sayısı vermek yerine. Her cecal Bulamaç hazırlık'ın uygun bakteriyel konsantrasyon biraz, potansiyel donör komensal bakteriler farklılıkları nedeniyle veya'deki ağırlığı nedeniyle çeşitli cecal Bulamaç hisse senedi postfiltration hücre süzgeç yaptı. Cecal Bulamaç titrasyon sırasında ilk iki çöp iki gruba ayrıldı ve çöp her yarı doz her iki çöp test edilir böylece iki doz biri ile meydan. Elde edilen sağkalım oranı gerekli seviyesi eşleşmedi, mücadele dozun ya artırılması veya % 5-10 oranında azaltılması ve deneme tekrarladı. Birden çok çöp çöp çöp fark bu direnç neden olabilir veya bir çöp sepsis duyarlılık arttı hesaba kullanılmıştır. Doğru bir şekilde titresi cecal Bulamaç yeni titrasyon önceki cecal Bulamaç hazırlıkları için karşılaştırılabilir emin olmak için her yeni hazırlık ile cecal Bulamaç stok için önemliydi. Aşırı gürültü ve titreşim özellikle asfalt ve yakındaki bina ve road, inşaat düzenleme işlemi sırasında bir süre barajlar stres artırmak için tespit edildi. Bu markada artış oranları ile ilişkili ve ölüm bile tartışmasız fareler, ayrıca için denetlenmesi gereken yenidoğan sağkalıma yabancı etkileri olabileceğini belirten etkileyen yaşam deneyler etkiledi.
Cecal Bulamaç hisse senedi hazırlık için önceki yöntemleri dahil taze cecal Bulamaç kullanımı ya da kaçınılmaz olarak meydan okuma sırasında transfer olacağı gliserol içinde depolama gibi yöntemleri kullanarak donmuş cecal Bulamaç hazırlanması. Taze cecal Bulamaç kullan bakteriyel kompozisyon orijinal cecal içindekiler-e doğru en yakın sahip olmanın avantajı sağlamasına karşın, bireysel donör fareler komensal bakteriler varyasyonu nedeniyle arasındaki farkları riski vardır. Bu geliş ve denemenin ilerlemesi arasındaki en az süre ile aynı satıcıdan cecal bağış kullanarak minimize iken, bu bazı laboratuvarlar için maliyet engelleyici bir seçenek haline gelebilir ve sahip başka bir zamanlama lojistik meydan okuma sundu Fareler cecal bir bulamaç başlıyor ne zaman kullanılabilir yaş eşlemeli 7 günlüktün yenidoğan farelerde deney. Burada birden çok yetişkin bağış cecal içeriği havuza alınmış, D5W, gliserol, olmadan-80 ° C arasında dondurulup resuspended ve deneyler için bir seferde bir aliquot çözdürülen taze cecal Bulamaç kullanarak alternatif bir yöntem kullanılmıştır. Yetişkin donör cecal Bulamaç neonatal sepsis çalışmaya kullanımı potansiyel olarak bakteri yenidoğan fare için maruz kaldığı şiddete güzel değil cecal Bulamaç mevcut türleri transfer olabilir, ancak farelerde neonatal sepsis incelenmesi için izin veren bir strateji ve Yenidoğan fare biyoloji son13,14,15dakika içinde çalışmaya kullanılmıştır. Cecal Bulamaç bakteri enjekte edildi ve besin Periton boşluğunda kullanılabilirliğini Nekroze edici sırasında taklit etmek için yapıldı sonra aktif bir bulaşmayı kuruluş izin bakteriler, beslenme sağlamak için D5W düşürülmüştü enterokolit. Gliserol gliserol enjeksiyon tek başına ortaya çıkabilecek olası olumsuz yan etkileri nedeniyle bakteri dondurma teskin bir ajan olarak dahil değildi. Gliserol cecal Bulamaç hazırlanmasında eklediyseniz, o zaman potansiyel zarar o gliserol yalnız neden bir salt gliserol (eksik olan cecal Bulamaç) ekleyerek için test edilecek enjeksiyon artmıştır farelerde kullanım fare. Cecal Bulamaç stokları bakteri canlılık gliserol olmadan cecal Bulamaç stok dondurma sonra test edildi ve sürekli aynı cecal Bulamaç hazırlık 6 üzerinde-80 ° C'de depolanan ayrı aliquots bakteri konsantrasyonu hiçbir değişiklik ile bulundu aylık süre. Bu depolama gliserol olmadan tutarlı bir biyolojik sonuç sağlayan uygun olduğunu göstermektedir. Bir toplu-hazır cecal Bulamaç hisse senedi donmuş kullanımı da maliyet azaltma ve başka doğurmak gelen aşırı olacağını erkek fare kullanmak, bu nedenle fare israfını azaltmak şirket içinde yetiştirilmiş fare kullanımı için izin verdi.
Farelerde başarısız zorluklar tanımlaması sisteme ilave gürültü ekleyerek önlemek önemliydi. Mayi enjeksiyonu cecal Bulamaç geçiyor sonra fareler için aslında subkutan başarısız bir enjeksiyon belirtilen cilt altında bir çıkıntı varlığı tespit edildi. Fareler gözlendi kaçakları enjeksiyon yerinde hemen sonra iğne kaldırma ve sonra onları enjeksiyon sonra bir adım atmak izin çünkü fareler bazen (nadiren) kaçak sadece bir adım alarak enjeksiyon yeri uzuv taşıdıktan sonra. Bir çıkıntı veya enjeksiyon takip sızıntı varlığı analiz fare giderilmesinde sonuçlandı. Sonuçta, ya bu cecal Bulamaç enjekte meydan doz % 5 farklılığı sonraki hayatta kalma etkilemeye gözlemlediği gibi yanlış miktarı nedeniyle farklı bir sonuç neden olabilir.
Cecal Bulamaç meydan ağırlık ayarlanmış dozlarda değişen kez gerekli değişen hedef öldürücü doz deneyleri. Bu nedenle, az 20 µL gelen ve en fazla 100 µL enjeksiyon birimleri arasında olabilir. İlişkili orantılı deneysel hata ölü iğne ile cilt de doğrudan farklı dozlarda karşılaştırmak için zorluk artan enjeksiyon hacmi ile birlikte değişir. Enjeksiyon hacmi standartlaştırılması basit değişiklik ile bu kaynak bir varyans deneyden kaldırılır.
Bu protokol için kullanılan yenidoğan fare davranış izleme sistemi türünün ilkidir. Yeni doğan fareler ile etik araştırma araştırmacılar niyet kez zorlu hayvan refahı bu yaşta değerlendirmek için kaynak yetersizliği ile karşı karşıya. Bu bilgi boşluğu adrese sunulan sezgisel ve tutarlı izleme sistemi başlar. Önemlisi, bu kanıt temelli yaklaşım elde edilen deneysel verilerin kalitesini artırır kalmayıp, aynı zamanda da deneysel hayvan acı azaltır.

Sepsis, insan yeni doğan bulaşıcı ölüm1önde gelen nedenidir. Yenidoğan Sepsisinde kötü anlaşılmaktadır çünkü az bir ilerleme her iki hastalık sırasında erken risk altındaki yenidoğan tanımlaması ve etkili tedaviler veya prophylaxes geliştirme yapılmıştır. Bu süreci ve test olası müdahaleler daha iyi anlamak için sepsis hayvan modelleri kullanımını gerektirir. Ayrıca, Yetişkin kemirgenler farklı sepsis, aynı öldürücü doz (LD) elde etmek için yönetmek için bakteri sayısı istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar ve yenidoğan2ile karşılaştırıldığında elde edilen ana bilgisayar yanıt farklılıkları ile yanıt. Böylece, neonatal sepsis ventilasyon içinde incelenecektir vardır. Birkaç yetişkin sepsis modelleri sepsis araştırmada kullanılmıştır. Bunlar belirli organizmalarla yetişkin insan sepsis veya cecal tüp ligasyonu ve ponksiyon (CLP) karıştığı bir intravenöz challenge içerir. CLP burada çekum cerrahi olarak izole, tane ve bağırsak içeriği kaçağı periton izin vermek için delinmiş bir endojen meydan okuma sonunda sistemik dağıtımı mikroplar ve onların ürünleri3lider modelidir. Ancak, CLP kurmak için gerekli cerrahi müdahale için yeni doğmuş hayvanlar öldürücü. Bu nedenle, farklı bir yöntem neonatal sepsis ikna etmek için CLP polymicrobial meydan taklit etmek gereklidir. Yenidoğan polymicrobial sepsis için cecal Bulamaç modeli mademki hayvanlar cecal içeriğini hasat, steril dekstroz sudaki (D5W) % 5 askıya ve intraperitoneally yeni doğan fareler2enjekte bu gereksinimi karşılamak için geliştirilmiştir. Bu yana, sepsis yeni doğan ve yetişkin hayvanlarda eğitim için giderek daha popüler bir model haline gelmiştir ve hastalığın süreci4,5,6,7 mekanik anlayışlar önemli ölçüde ilerlemiştir ,8,9,10,11,12,13,14,15.
Bu model artan kullanımı ve doğrudan sonuçları yayınlar arasında karşılaştırmak için araştırmacılar arzunun göz önüne alındığında, teknik özellikleri de açıklanmıştır ve standart çalışmalar arasında olmak için gerek yoktur. Standardizasyon model, üç yönden Yani, i) cecal Bulamaç stok, II) hazırlanması meydan aliquots için deneysel hayvan içine enjeksiyon ve III) insana ilişkin bitiş noktası tanımını hazırlanması sayede hayvanlar için geçerlidir nonsurvivors meydan deneylerde olarak kabul edilir. Özellikle, cecal Bulamaç hisse senedi hazırlamak için yöntemleri kez orijinal araştırma modeli2tanıtımı için başvurulur. Bu model kısa bir özetini cecal içindekiler--dan yetişkin fareler hasat, 80 mg/mL konsantrasyonu steril D5W askıya ve içinde 2 h deneysel hayvan enjekte için kullanılan var. Bu orijinal modeli ile onların anılan sıraya göre araştırma tesislerinde cecal içeriği hasat öncesinde en az 2 hafta için muhafaza aynı satıcı konumdan fareler aynı yaştaki kullanılır. Şirket içinde yetişmiş fareler, kullanımı düzenli satıcı teslimat ve aşırı fareler, cinsiyet ve yaş, daha geniş bir aralığı için izin maliyeti azaltmak, ancak aynı zamanda önemli ölçüde donör donör değişkenlik arttı. Bu sayede birden fazla fareler cecal içeriğinden birlikte bölünmemeli ve saklı-80 ° C13büyük bir hisse senedi hazırlamak için havuza alternatif bir teknik geliştirme motive. Bu alternatif yöntem birden çok grupları14,15tarafından uyarlanmıştır. Ancak, bazı teknik varyasyonları, kullanılan depolama ortamı (% 10 veya % 15 gliserol veya D5W tek başına) ve hem de filtrasyon partikül kaldırmak için strateji bu adaptasyon sonuçlandı (860 µm ve sonra 190 µm çok kademeli filtrasyon filtre veya birey Filtrations 100 µm veya 70 µm filtreleri yoluyla)13,14,15. %25 - %50 gliserol enjeksiyonları böbrek yaralanma16,17,18,19kemirgen bir model olarak kullanılan verilen bu gliserol yalnız enjeksiyon potansiyel olarak, zarar verebilecek, 20. Gliserol istenmeyen yan etkileri önlemek için bu çalışmada fareler için cecal Bulamaç hisse senedi hazırlık D5W içinde gliserol dondurulur ve depolama-80 ° C'de bakteriyel canlılık testleri yapılır. Bu çalışmada kullanılan filtrasyon doğrudan diğer filtrasyon stratejileri için listelenen kıyaslanamaz bir 70 µm filtresi ile tek seferde stratejisidir.
Enjekte cecal Bulamaç ağırlık-düzeltilir öldürücü dozda tesis tesis değişebilir ve bireysel gruplar için istenen lethality için dışarı titered olmalıdır. Farklı meydan doz ile eşlik eden meydan okuma birimleri elzem değiştirin. Ancak, bu metodolojik ayrıntı daha önce bildirilmemiştir. Ayrıca, mayi enjeksiyon gibi standart prosedürler için stratejiler nadiren edebiyat içinde üzerinde özenli, ama yeni doğmuş fare enjekte edildiğinde sızıntı ve onların final sonuçları etkisi olup olmadığını bireysel teknikleri etkileyebilir.
Hayvan refahı, insana ilişkin bitiş noktası, bir tanım da dahil olmak üzere bu modelin enfeksiyon ve kemirgenler21iltihabı, herhangi bir modeli merkezi bir yönüdür. 1998 yılında Kanada Konseyi hayvan bakım (CCAC) yayınlanan insana ilişkin son nokta seçimi için kapsamlı yönergeler "herhangi bir gerçek ya da potansiyel ağrı, acı veya rahatsızlık veya simge durumuna küçültülmemiş en erken seçim yaparak ortadan kalkar gibi insana ilişkin bitiş noktası tanımlama Son nokta bu araştırma bilimsel hedefleri ile uyumlu "22. Diğerleri de insana ilişkin bitiş noktaları oluşturulmalıdır dikkat bilimsel gerekçe yerine öznel bir hayvanın devlet tek başına21yorumlanması göre. İçin kaynaklarının zenginliği ise klinik, davranışsal ve vücut-Koşul ölçütlerini inflamasyon ve enfeksiyon bağlamında bile insana ilişkin son nokta için oturum tabanlı özellikle21,23,24, hiçbiri-in bunlar , insana ilişkin bitiş noktası22, CCAC yönergeleri de dahil olmak üzere söz yeni doğan fareler. Böylece, objektif ve bilimsel olarak haklı insana ilişkin bitiş noktaları yetişkin için yaygın olarak kullanılan kilo kaybı gibi ölçütler arasında sınırlı davranışsal yetenekleri ve delil yetersizliğinden verilen yeni doğan hayvanlar için kurmak çok daha zordur fareler. Şu anda, tüm model2kullanılmaya geri orijinal el yazması için başvuru cecal Bulamaç edebiyat 5 için 12 gün-çocuk yenidoğan fareler için kullanılan insana ilişkin son nokta için ölçüt. Bu orijinal yazıda, yeni doğan hayvanlar için insana ilişkin bitiş noktası tanımını iki kriterlere göre; Yani, bir fare yuvası (saçılma) dışında konumunu ve süt noktalar eksikliği ölüm saat içinde neden için görülmüştür. İnsancıl bir bitiş noktası atanmasında bozan süt noktalar hasta hayvanlara hayat (DOL) 14 güne kadar izlenir iken fare suşları yaygın olarak istihdam C57BL/6J zorlanma gibi koyu kürk ile hayat, ilk hafta sonra görmek zor hale meselesi. Ayrıca, ölü hayvanlar bu ölçütleri uygulanırken postchallenge bulunabilir (kendi gözlem; yayınlanmamış); Böylece, daha sıkı bir insana ilişkin bitiş noktası tanımını deneysel hayvan acı hafifletmek ve nerede sonucu doğru bir şekilde daha önce ayırt edilebilir durumlarda ölüm önlemek gereklidir.
Cecal Bulamaç modeli her üç metodolojik açıdan bir standart çalışma prosedürü cecal Bulamaç stok hazırlanması ayrıntılı sunulmaktadır, deneysel hayvan enjekte bir yöntem bu doz arasında enjeksiyon birim sabit tutar ve sızıntı riski ve davranışsal modelleme sistemini temel alan 7 için 12-günlük eski fareler için insana ilişkin bitiş noktası tanımını azaltır. Fare sağlık puanları'den fazla 240 deneysel hayvan davranış bilgiler toplanır ve insana ilişkin bitiş noktası kanıt temelli bir tanımını gösteren son hayatta kalma sonucu tarafından gruplandırılmış. Deneysel hayvan acı biyolojik olarak önemli sağkalım sonuçları anahtar değişkenler gözlemleyerek anlaşılmaktadır olabilir süre en erken zamanda noktada can çekişen yenidoğan fareler tanımlayarak azalır. Cecal Bulamaç hazırlık ve neonatal fare davranışları görsel temsilini sepsis ya da yeni doğan meydan modeli hayvanlar eğitim herhangi bir grup için mükemmel bir kaynak olarak görev yapacak.

<table><tbody><tr><td>0.1 - 20 &mu; L pipet uçları</td><td>VWR</td><td>732-0799</td><td></td></tr><tr><td>1.8 mL Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Costar</td><td>3621</td><td></td></tr><tr><td>100 - 1000 &mu; L pipet uçları</td><td>VWR</td><td>732-0801</td><td></td></tr><tr><td>1 - 200 & L pipet uçları</td><td>VWR</td><td>732-0800</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Santrifüj tüpü</td><td>FroggaBio</td><td>TB15-25</td><td></td></tr><tr><td>23G1 iğneleri</td><td>Becton Dickinson</td><td>305145</td><td>fareyi strafora sabitlemek için kullanılan şırıngayı değil sadece iğneyi</td></tr><tr><td>28G 0,5 mL İnsülin şırıngası</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>2 mL Kriyojenik flakon</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Santrifüj tüpü</td><td>Fisher scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>5 mL pipet</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>6 - 10 haftalık C57BL/6J yetişkin fareler</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>7 + günlük C57BL/6J yenidoğan fareler</td><td></td><td>70</td> & numaralı evde <td></td>yetiştirildi</tr><tr><td>; m Hücre süzgeci</td><td>Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Defibrine Koyun Kanı</td><td>Dalynn</td><td>HS30-500</td><td></td></tr><tr><td>Dekstroz% 5 Su (D5W)</td> <td>Baxter</td><td>JB0080</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon forseps</td><td>VWR</td> <td>ve nbsp; 82027-386</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Makası, Keskin Uçlu</td><td>VWR</td><td>&nbsp; 82027-592</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Makası, Keskin/Künt Uçlu</td><td>VWR</td><td>82027-594</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (HistoPrep %95 Denatüre Etil Alkol)</td><td>Fisherbrand</td><td>HC11001GL</td><td>çift damıtılmış su ile %70'e seyreltilmiş</td></tr><tr><td>Etanol geçirmez işaretleyici; Laboratuvar işaretleyici</td><td>VWR</td><td>52877-310</td><td></td></tr><tr><td>EZ Anestezi Buharlaştırıcı</td><td>EZ Anestezi</td><td>EZ-155</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500, Kuru sterilize cerrahi alet (Sıcak boncuk sterilizatörü)</td><td>Braintree Scientific</td><td>GER 5287-120V</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Fresenius Kabi</td><td>CP0406V2</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Spatula</td><td>Chemglass</td><td>CG-1983-12</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Destekli</td><td>Drummond</td><td>4-000-100</td><td></td></tr><tr><td>Rainin Klasik Pipet PR-1000</td><td>Rainin</td><td>17008653</td><td></td></tr><tr><td>Rainin Klasik Pipet PR-20</td><td>Rainin</td><td>17008650</td><td></td></tr><tr><td>Rainin Klasik Pipet PR-200</td><td>Rainin</td><td>17008652</td><td></td></tr><tr><td>Terazisi</td><td>Sartorius</td><td>BL 150 S</td><td></td></tr><tr><td>Numune forseps</td><td>VWR</td><td>82027-440 / 82027-442</td><td></td></tr><tr><td>Kare 1000 mL Depolama Şişesi</td><td>Corning</td><td>431433</td><td></td></tr><tr><td>Strafor levha</td><td>Herhangi</td><td>bir n.a</td><td></td></tr><tr><td>Sure-Seal Fare / Sıçan ötenazi odası</td><td>Euthanex</td><td>EZ-178</td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22091-2.5KG</td><td></td></tr><tr><td>VX-200 Lab Vorteks Karıştırıcı</td><td>Labnet International</td><td>S0200</td><td></td></tr><tr><td>tartın kağıt</td><td>Fisherbrand</td><td>09-898-12B</td><td></td></tr></tbody></table>

yenidoğan polymicrobial sepsis için kontrollü fare modeli

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis küresel bir yük kalır. Preklinik manken ekran etkili profilaktik veya tedavi müdahaleler için gereklidir. Yenidoğan fare polymicrobial sepsis cecal Bulamaç intraperitoneally hayat 7 fare gün içine enjekte ve onları aşağıdaki hafta için izleme bağlı olmak. Burada sunulan bu neonatal sepsis model uygulanması için gerekli detaylı adım vardır. Bu ağırlık ve çöp ayarlanmış doz, anahat izleme zamanlama ve gözlemlenen sağlık Kategoriler insana ilişkin bitiş noktaları tanımlamak için kullanılan bir tanımını sulandrarak homojen cecal Bulamaç hisse senedi, yapım içerir. Birçok çöp içine yönetim zamanla, bağışçılar arasında varyasyon azaltılması ve potansiyel olarak toksik gliserol kullanımını engelleme için havuza alınan bağış homojen cecal Bulamaç stoktan nesil sağlar. Hayatta kalma sonucu beklentisiyle ve daha sonra insana ilişkin son nokta için bir önceki kimlik izin ölüme ilerleme fareler tanımlanması için kullanılan izleme stratejisi sağlar. İki temel davranış özellikleri sağlık puanları, yani, yetenek yenidoğan farelerin kendilerini onların sırt ve hareketlilik düzeylerini yerleştirildiğinde sağ tanımlamak için kullanılır. Bir pilot çalışma doğruluğunu onaylamak için gerçekleştirilen sürece bu kriterleri adresi insana ilişkin bitiş noktaları, farelerde neonatal hastalık diğer çalışmalarda potansiyel olarak uygulanabilir. Sonuç olarak, bu yaklaşım hayvan refahı meydan hayvanlar için erken insana ilişkin bitiş noktalarını tanımlamak için kullanılan değerlendirmek için kaynakları sağlarken modeli yenidoğan Sepsisinde farelerde, standart bir yöntem sağlar.

Cecal Bulamaç canlılığı-80 ° C'de depolanan seri olarak sulandrarak ve aliquots %5 koyun kan tryptic soya agar, aerobik kuluçka 37 ° C'de 24 saat takip üzerinde cecal Bulamaç stokunun kaplama zamanla sınanabilir Sonraki culturable koloni oluşturan birim (CFU) içeriğini cecal Bulamaç hazırlık sayma değil değişmek 6 aylık bir süre içinde bulundu ve canlılığı-80 ° c (Şekil 2) uzun süreli depolama etkilenen değil. Her donör fare, ortalama 3-4 çöp (veri gösterilmez) meydan okumak için yeterli cecal Bulamaç içinde sonuçlandı.
Challenge 12 h içinde insana ilişkin son noktana ulaşmak üzere fare polymicrobial sepsis ikna etmek için cecal Bulamaç ile DOL 7'de meydan başladı ve polymicrobial sepsis çoğunlukla birleşiminden bir Kaplan-Meier sağkalım eğrisi içinde gözlemlediği gibi 48 h postchallenge tarafından çözüldü 200 meydan fareler (Şekil 1A)'den fazla veri. Ölümcül meydan doz sonuçlanan bir % 5 değişiklik ile yönetilen meydan doz bağımlı bir sağkalım oranı (Şekil 1B) kabaca % 15 fark. Fare vücut ağırlığı izleme her ziyarette ölçüldü. Kilo kaybı yaşayan kadar sona erdi fareler ve bu da ilk 24 h (Şekil 1 c) postchallenge değil arasında ayrım olmak tüm meydan hayvanlarda görüldü. 24 saat sonra bütün nonsurvivors kilo kaybetmeye devam etti ve onların insana ilişkin bitiş noktasına taşındı kendi ağırlığı, yeniden elde etmek en hayatta kalan hayvanlar başladı. Ancak, küçük bir oran aynı zamanda kilo vermek için devam onların iyileştiren refleks muhafaza ve kilo, deneme, hatta kadar 40 h Challenge içinde onların ilk vücut ağırlığının kaybetme sonuna kadar başarısız hayvanlar hayatta. Kilo kaybı arasında günümüze kadar sona erdi fareler ve did değil bu bir çakışma olduğu ağırlık veya kilo kaybı bir eşik değişikliği bir ölçüt olarak insana ilişkin son nokta için hala doğru bir şekilde hayatta kalan bölme amacı koruyarak kullanılamaz nonsurvivors.
Fareler davranışını protokol ve Tablo 2özetlenen takip. Anlık görüntülerini kategorilerdir sağlık (Şekil 3A-C) görüntülenir. Bu fotoğrafları kim başarısız kendilerini onların arkasına yerleştirilen sonra sağ ve FTR-Mobile ve FTR-uyuşuk, arasındaki fark önemli bir fark olduğu anahat fareler farklı sağlık kategorilerini göster. Bu çağın tartışmasız sağlıklı fareler FTR uyuşuk faaliyet gösterme; Bu nedenle, bu sağlık kategori hastalık ve bir yanıt-e doğru meydan okumak bir belirtecidir. Hasta fareler FTR uyuşuk belirtiler (Şekil 3B) görüntülenen ve FTR-nereye üst bacak alt bacak ile paralel olarak kalır, Nonmobile doğru (Şekil 3 c), gerileme az sıfır kalça hareketi, sallanan ile ölçütlerini biri olan insana ilişkin son nokta. Fareler de, artan kalça hareketi kazanıyor ve haline geri alabilirim FTR-Mobile (Şekil 3A). İyileştiren refleks ve hareketlilik puanları hem sol hem de sağ tarafında her fare için belirlenmiştir ve en yüksek puanı fare insancıl bir bitiş noktası ulaşmış olup olmadığını belirlemek için kullanılmıştır. Davranışsal bilgi 240 hayvanlar cecal Bulamaç öldürücü dozu 60 (LD60) ile meydan yerinden toplanan ve 144 insana ilişkin bitiş noktaları (şekil 3D-F ve Tablo 1) gözlendi. Bu kanıt temelli yaklaşım tanımlamak ve hayatta kalan ve nonsurvivors arasında her iki davranış farklılıkları bağlı Denemecileri göre kategorize ve insana ilişkin bitiş noktaları ulaştı sayısına göre dört hastalık aşaması boyunca insana ilişkin son nokta rafine için kullanılan her zaman dilimi içinde. Erken deneyler sırasında kalça hiçbir hareket vardı FTR-Nonmobile fareler sürekli olarak varlık dikkat etmek bu davranış içinde ölü 4-6 h bulundu. Sunulan bilgi toplama, FTR-Nonmobile sistem durumu puanı insancıl bir son nokta için ölçüt olarak kullanıldı. 12-21 h postchallenge, FTR-Nonmobile fareler euthanized iken, hayatta kalan ve nonsurviving hayvanlar çok benzer davranış kalıpları görüntülenen ve başka bir şekilde (3D şekil) ayırt edici olamazdı. 21-48 h postchallenge, onların iyileştiren refleks fareler hayatta çoğunluğu ele geçirdi, gitmek hayvanlarda gözlenen FTR davranışları % 1'den az iken deneme (3E rakam<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig2large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig3large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig4large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="3"></td><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="2"></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="3"></td><td></td><td rowspan="6"></td><td rowspan="3"></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="3"></td><td></td><td rowspan="3"></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Bu iletişim kuralı kurmak ve 7 günlük eski farelerde neonatal sepsis değerlendirmek için gerekli adımları sağlar.

Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Polimikrobiyal sepsis için cekal bulamaç modeli benzersiz neonatal patofizyolojisi incelemek için güçlü bir araçtır. Değişken olabilir ve insancıl uç noktalar iyi açıklanmamıştır. Burada bir cecal bulamaç hazırlamak ve deneysel hayvanlariçine enjekte etmek için son derece standart prosedürü sıyoruz.Ayrıca, moribund yavrularını mümkün olan en erken zaman noktasında tanımlamak için veri odaklı bir yaklaşım kullanıyoruz. Dondurulmuş cecal bulamaç stoku hazırlayarak başlayalım. Bu, en az beş yetişkin fareden cecal concent havuzlama, steril dekstroz suyu askıya ve eksi 80 daha sonra kullanmak için depolama yapılır.Erkek veya dişik kullanabilirsiniz, ancak deneylerinizde farelerin cinsiyeti, yaşı ve arka planı sabit tutulmalıdır. İlk olarak, diseksiyon için bizim araçları hazırlayalım. Bu cilt için makas ve forseps bir dizi ve iç organlar için ikinci bir set içerir.Kullanmadan en az 30 dakika önce sıcak boncuk sterilizatörü açın. Aletleri %70 etanole batırın ve ardından en az bir dakika sıcak boncuk sterilizatöre batırın. % 70 etanol ile kağıt havlu bir paspas sprey, sonra diğer araçların sterilize kısmı dokunmadan sterilize araçları çıkarın.Soğuması için kağıt havluüzerine yerleştirin. Fareleri biyolojik güvenlik kabininde inceleyin. Farenin karın kadar 23 gauge iğneler kullanarak bir strafor tahtası için farenin bacaklarını pin.% 70 etanol ile karın sprey. Steril çiller ve makas kullanarak, deri ile kesilmiş, makas ile periton astar deri gevşetin ve göğüs kasık ve sol tarafında sağ tarafına dikdörtgen bir bölge açık kesti. Periton çevresindeki herhangi bir kürk çıkarın.Periton kesmek için steril araçlar yeni bir çift geçiş, ayrıca dikdörtgen bir açılış yapma. Cecum tanımlayın, hangi vücut boyunca sol tarafında sağ tarafında çalışıyor olmalıdır. Bağırsaklardan çekum dalları tanımlamak ve bağırsaklardan uzak çekum kesmek için bağ dokusu bozun.Sterilize edilmiş bir tartım kağıdına yerleştirin. Steril araçları kullanarak, çekumun her iki ucunu da kesin. Çekumun ortasını forceps ile tutun ve cecal içeriğini yavaşça bir yuvarlanma hareketi kullanarak uçlardan dışarı itmek için düz bir metal spatula kullanın.İçeriği toplayın ve önceden tartılmış 15 mililitrelik santrifüj tüpüne yerleştirin. Aynı tüp içine en fazla beş fare havuz cecal içeriği. Tüm içerikler eklendikten sonra tüpü tekrar ağırlıklandırın.Dekstroz suyunun hacmini hesaplamak için her tüpteki sekal içeriğine ekleyin, tüpteki sekal içeriğinin ağırlığını mililitre başına miligram cinsinden istediğiniz konsantrasyona bölün. Cecal içeriğinin yeniden askıya alınması için buz üzerinde dekstroz suyu aliquot tutun. Cecal içeriği içeren 15 mililitrelik centrifuge tüp için dekstroz suyu gerekli miktarda ekleyin.Yaklaşık 30 saniye boyunca tüpü dikey ve yatay olarak girdaplayın. Çapı birkaç milimetre üzerinde partikül varlığı için gözlemlemek, ve varsa, tüm partikül gözle görülür kayboldu kadar girdap devam edin. Filtrasyon toplamak ve üst üzerinde steril bir 70 mikrometre hücresüz yüklemek için buz üzerinde 50 mililitrelik bir santrifüj tüp yerleştirin.Pipet hücre süzgeci üzerinde bir 15 mililitrelik tüp ten ve toplama tüpü içine yeniden askıya bulamaç dört mililitre. 2-3 kez yukarı ve aşağı boru lar oluşturarak partikülü yeniden askıya alın. Filtrelenen sıvı kalmadan içindekileri pipet ucuyla karıştırırken filtreleme hızını artırmak için kabarcıkları hafifçe ekstrüzyonu.Bu yaklaşık 30 saniye sürer. Cecal bulamaç her tüp arasında hücre süzgeçleri değiştirin, ancak aynı 50 mililitre toplama tüpü içine tüm içeriğini havuz. Stok40 mililitreyi aşarsa, 15 saniye boyunca girdap ve yeni bir santrifüj tüpü içine 20 mililitre yerleştirin.Her biri 500 mikrolitre lik kriyojenik şişelere bulamacı bölün. Her üç şişe arasındaki bulamacı girdap. Ana stoku buzdaki şişelerde saklayın.Eksi 80'de aliquots depolayarak, bir cekal bulamaç hazırlanmasında birim konsantrasyon oluşturan aerobik koloni altı aylık bir süre içinde değişmez. Şimdi cecal bulamaç hazırlanır, biz cecal bulamaç bir ağırlık ayarlanmış doz ile yedi ila sekiz günlük fareler in bir çöp meydan okumak için kullanabilirsiniz. Bulamacın öldürücülüğü doza bağlıdır.Yeni bir doz titrasyon ile her yeni stok için tesisinde istenilen ölümcül dozu belirlemek zorunda kalacak. Bir cecal bulamaç enjeksiyon aliquot çöp başına hazırlanır. Inoculumu 100 mikrolitrelik bir hacimle normalleştiriyoruz, çöpteki her hayvan için en yakın 10 mikrolitreye yuvarlaıyoruz.Meydan okuma aliquot hazırlanması üç hesaplamalar gerektirir, bulamaç stok hacmi gerekli, dekstroz su ek hacmi, ve çöp her yavru için yuvarlatılmış hacim. Her hesaplamanın nasıl gerçekleştirileceğinin ayrıntıları protokolün üçüncü bölümünde bulunabilir. Her deney için bu hesaplamaları elle yapmak zaman alıcı olabilir ve deneysel hataya katkıda bulunabilir, böylece stok konsantrasyonunuzu, istenilen dozu ve çöpünüzün ağırlığını ve bulamaç stokunun miktarı, dekstroz suyu hacmi ve yavru başına gerçek hacmiotomatik olarak iade ettiğiniz protokolle birlikte bir elektronik tablo indirilebilir.Bu sayfayı yazdırıp hayvanlarınıza meydan okumaya hazır olduğunuzda da yanında götürebilirsiniz. Enjeksiyon aliquot'u biyolojik bir güvenlik kabininde hazırlayın ve buzda tutun. Şırıngayı yüklemeden önce, mikrosantrifüj tüpünü 20 kez hareket ettirerek karıştırın.Yavrular 28 gauge insülin şırınga ile meydan okunur. Bulamaç hazırlamadan önce, ilham ve mikrocentrifuge tüp içinde ve dışında meydan aliquot 300 ila 500 mikrolitre çıkararak aliquot karıştırın. Sonra, meydan aliquot yaklaşık 150 mikrolitre çizin.Bu herhangi bir yedi ila sekiz günlük yavru için enjeksiyon hacmi daha büyük olmalıdır. Dalgıç kabarcıkları çıkarmak için şırınga da flick ve herhangi bir hava kabarcıkları çıkarmak için şırınga biraz geri çekin. Bu işlem sırasında iğneye veya piston şaftına dokunmayın.Fare için hesaplanan cecal bulamaç miktarı şırınga içine yüklenene kadar mikrocentrifuge tüp içine geri aşırı cecal bulamaç dağıtın. Çekal bulamacı intraperitoneal enjeksiyon ile uygulanır. Bunu hayvan bakım kurumundaki protokole göre gerçekleştirin.Sızıntıları en aza indirmek için, yavruyu aşağı ya sayılsın ve iğneyi bacak ile cinsel organ arasına takın, iğneyi sığ ve deri altı olarak takın. İğneyi yaklaşık bir santimetre ye soktuktan sonra, iğnenin peritonu delinmiş olduğunu hissedene kadar aşağı ve ileri doğru bastırın, sonra yavaşça pistonu bastırın. Girdiğiniz rotayı takip ederek iğneyi dikkatlice çekin ve bunu yaparken orta parmağınızı gevşetin.Laboratuvar defterinizdeki sızıntıları not edin ve nihai sonucunuzdan önemli sızıntılarla hayvanları atlamayı düşünün. Bu bölümde polimikrobiyal sepsis ile meydan farelerde gözlemlediğimiz farklı sağlık düzeylerini ve bunların insani bitiş noktasını ana hatlaşacağız. Yenidoğan fareleri içeren herhangi bir işlem için yatak malzemesini yeni bir kafese aktarıyoruz.Bu, bayanın kokusunu eldivenlerinize aktarıyor ve kafesine tekrar tekrar girmesinden kaynaklanan kadın üzerindeki stresi azaltır. İzlenen yavruları prosedürün sonuna kadar tutmak ya da tüm çöpler kadın kafesine geri dönmeye hazır olduğunda izleme yapmak için yeni kafeste ikinci bir yuva yapıyoruz. Bir fareyi sırtına yerleştirin ve dört saniye içinde sağa dönebilme yeteneğini izleyin.Eğer doğru olabilir, o zaman hareketlilik düzeyini belirlemek için sekiz saniye daha bekleyin. Rakipsiz veya kurtarışlı bir fare, genellikle üst üste birden çok adım atarak ortamını doğru ve keşfedebilir. Kendilerini haklı çıkarabilen ve çevresini hak sahibi olarak keşfetmek için birkaç adım atabilen fareleri yeniden gruplandırma.Bu fareler bir adım atarken üzerine düşebilir ve ayakları üzerinde titrek görünebilir. Sağa dönememiş ve kalça hareketi yataydan 90 dereceyi aşan bir fare dir. Bu fare sonunda sağa dönecektir, ancak dört saniye içinde kullanılamaz.Kalça hareketleri nedeniyle sağ mobil de başarısız olarak gruplandırılır. Sağa dönemeyen ve kalça hareketini yataydan 90 derecenin altında olan yavrular sağ-uyuşukolarak gruplandırılır. Bu, kalçaları yataydan 90 dereceyi geçmeyen ve sağ-uyuşuklukta başarısız olarak gruplanan bir farenin başka bir örneğidir.Sağ-hareketsiz yavru başarısız sallamak veya titreşebilir ama kalça hareketi var bacaklar olacaktır. Ekstremiteler uzatılabilir ve geri çekilebilir ancak lateral hareket olmaz. Yavru gözle görülür derecede hasta ve insancıl bir son noktaya ulaştı.Bu sağ-mobil olmayan yavru başarısız başka bir örnektir. Kalçaları soldan sağa sallamaz, ama pençeleri titreşir. Kadın kafesi ile çalışırken, emziren kadın koşarsa yavrular yuvadan dışarı sürüklenebilir.Bunları değiştiriyoruz ve yuva arkadaşlarından uzakta olan diğer dağınık yavruları kontrol ediyoruz. Eğer bu dağınık yavrular sağ uyuşukluk ta başaramazlarsa, insancıl bir noktadalar. İşte sepsis modelimizin Kaplan-Meier hayatta kalma eğrisi.İzleme zaman noktaları ekli SOP bulunabilir. Hayatta kalma eğrisi boyunca herhangi bir noktada bir fare sağ-nonmobile başarısız olduğu tespit edilirse, onun insancıl bitiş noktasında ve ötenazi olduğunu. 12 ila 21 saat sonra, fareler hasta görünür ve farelerin yaklaşık yarısı bir tarafta sağa, diğer yarısı ise yanlarında sağa başarısız olacaktır.Bu, farelerin sağlık puanında digress ve sağ-nonmobile başarısız insancıl bitiş noktasına ulaşmak başlayacak zaman dilimidir. Bunlar bu zaman diliminde gözlenen sağlık puanlarının temsili sonuçlarıdır. Hayatta kalan ve hayatta kalan gruplar sağlık puanlarına göre bu noktada farklılaştırılamazlar.Hastalığın bu evresinde, 21 ila 48 saat sonra, insancıl uç noktaların en yüksek oranını gözlemliyoruz. Ayrıca, her iki tarafta da sağa dönemeyen farelerin büyük çoğunluğunun hastalıktan kurtulamayacağını gözlemledik, bu da doğru mobil olmayan kriterlere ek olarak insancıl uç nokta için yeni bir kriter haline geliyor. Hastalığın bu evresinde gözlenen sağlık skorları, hayatta kalanların hayatta olmayanlardan ayrılmasıyla sonuçlandı.Her iki tarafta da sağa dönemeden farelerin büyük çoğunluğu hastalıktan kurtulamadı. Bu veriler, 21 saat sonrası meydan okumadan başlayarak insancıl uç nokta için yeni bir kriterin, her iki tarafta da sağa yamayan fareleri ötenazi yemesi gerektiğini desteklemektedir. 48 saat sonra birçok fare daha fazla aktivite ve daha iyi bir düzeltme refleks görüntülemeye başlayacaktır.Bu dönemde insancıl uç noktaların oranı daha düşük olsa da, fareler hala digress ve hasta hale gelebilir, ve yine de insancıl uç noktası için izleme gerektirir. Bu zaman diliminde, hayatta kalan olmayan fareler olarak gruplandırılan farelerden bazıları bir noktada artan aktivite göstermiş, ancak daha sonra daha kötüsünü göstermiş ve insancıl bir bitiş noktasına ulaşmıştır. Bu, daha kötü sağlık sonuçları göstermeye başlarlarsa, hasta hayvanların sıklığı nın artmasıyla sürekli izlenmesini gerektirir.Şahsen eğitim almamış ve sadece bu öğretim videosunu gözlemleyen bağımsız deneyciler, kayıtlı test videolarını kullanarak araştırmacılarla aynı puanı atama yetenekleri açısından test edildi. Bu öğretim videosu doğru davranış sınıflandırması ile sonuçlanır. İnsancıl uç noktanın bir ölçüsü olan doğru mobil olmayan neonatal farelere doğru skoru atama yeteneği 60 yenidoğan fareden belirlendi ve davranışların ortalama %97'si doğru olarak ayırt edildi ve sadece %3'ü yanlış tanımlandı.Daha sonra, doğru ya da dört saniye içinde doğru başardık neonatal fareler ayırt yeteneği test edildi. Bu insancıl uç noktanın başka bir ölçüsüdür ve doğru neonatal farelerin% 97 atandı, yavruların% 3 yanlış doğru olarak atandı. Burada farelerin yüzde ağırlık değişimi için temsili sonuçlar meydan okuma zamanlarına göre vardır.Hayatta kalanlar ve hayatta olmayanlar arasındaki ortalama ağırlık değişimi meydan okumadan 24 saat sonra ayrılmaya başladı, ancak gruplar arasında çok fazla örtüşme var. %20'den fazla kilo veren ama yine de hastalıktan kurtulanlar vardı. Ağırlık değişimi, sağlık skorları arasındaki farklılıklarla karşılaştırıldığında sonucu tahmin etmede o kadar etkili değildi, bu nedenle farelerin insancıl bir uç noktada olup olmadığını belirlemede kriter olarak kullanılmamaktadır.Sonuç olarak, şimdi dondurulmuş cecal bulamaç bir stok hazırlamak gerekir, ağırlık ayarlı dozu hesaplamak. Ve insancıl uç noktalar için yeni doğan farelere enjekte edin ve izleyin. Bunun fare araştırmanız için değerli bir kaynak olacağını umuyoruz.

a-controlled-mouse-model-for-neonatal-polymicrobial-sepsis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Seman, B. G. ve diğerleri. Gram-negatif bakteriyel sepsisin neonatal görüntüleme modeli. J. Vis. Exp. (2020)Video, kapsüllü biyolüminesans bakteriler kullanılarak sistemik enfeksiyonu incelemek için yeni doğumlu fare modelini gösteriyor. Yenidoğan yavrulara yüksek veya düşük dozlu bakteriyel askı enjeksiyonu yapılır ve doğum sonrası bakım için annelerine geri verilir. Kapsüllü bakteriler erken bağışıklık tespitinden kaçınır, sistematik olarak yayılır ve zamanla lüminesans görüntüleme...

Kapsüllenmiş Biyolüminesans Bakterilerle Yenidoğan Farelerde Enfeksiyonun Modellenmesi

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli Escherichia coli Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Bu çalışmada yenidoğan fareler için Probiyotikler gavaging kesin miktarda işlem ayrıntıları. Deneysel ayarı içerecek şekilde optimize edildi ama dozaj, yönetim yöntemleri ve bakterilerin bağırsak quantification probiyotik sınırlı değildir.

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

FEMI'nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis'i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Neonatal farelerin biyolüminesans E. coli O1:K1:H7 ile enfeksiyonu, önemli pulmoner inflamasyon ve akciğer patolojisi ile septik enfeksiyona neden olur. Burada, sistemik bakteriyel yüklerin numaralandırılmasına paralel olarak uzunlamasına intravital görüntüleme, inflamatuar profilleme ve akciğer histopatolojisi ile birlikte neonatal sepsisin modellenmesi ve incelenmesi için yapılan prosedürleri açıklıyoruz.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren...

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu protokol, nekrotizan enterokolitin (NEC) yenidoğan fare modelini ve ardından yenidoğan murin ince bağırsağından lamina propria bağışıklık hücrelerinin izolasyonunu özetlemektedir.

İmmün Hücre Profili Oluşturma için Nekrotizan Enterokolit ve Lamina Propria İzolasyonunun Yenidoğan Fare Modeli

Kolon Ascendens Peritonit Stent (CASP) kemirgenlerde polimikrobiyal abdominal sepsis için oldukça iyi standardize edilmiş bir model. Bu makale CASP cerrahi prosedürü açıklar. CASP model ve türevleri, sepsis konu ile ilgili çeşitli sorunlar sistematik soruşturma izin verir.

Kolon Peritonit Stent Ascendens (CASP) - polimikrobik Abdominal Sepsis için bir Standart Model

Öğrenin, yeni doğan farelerde polimikrobiyal sepsis oluşturmak için standartlaştırılmış sekum süspansiyonu hazırlama ve enjeksiyon yöntemlerini. Bu protokol, erken dönemde moribund yavruları belirlemeye yardımcı olur.

Yenidoğan Polymicrobial Sepsis için kontrollü fare modeli

Daha fazla video keşfet