Name: Reniform Nematode direnci için pamuk Genotürleri eleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Keşfedin pamuk genotürlerinde Rotylenchulus reniformis direnci için hızlı, yıkıcı olmayan tarama yöntemini. Bu protokol büyük populasyonları verimli şekilde değerlendirir ve bitkilerin ıslah için kurtarılmasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma ABD Tarım Bakanlığı, Tarımsal Araştırma hizmeti tarafından finanse edildi. Bu makaledeki ticari isimler ve ticaret ürünleri söz sadece belirli bilgi sağlamak amacıyla ve öneriler veya ABD Tarım Bakanlığı tarafından onayları anlamına gelmez. USDA bir eşit fırsat sağlayıcı ve işveren. Yazarların hiç bir ilgisi yok. Teknik yardım Kristi Jordan tarafından sağlandı.

1. Rkaynağının korunması. reniformis İnokulumunu
<ol><li>1 parçalı kumlu killi ve 2 parça kumun Buhar pastörize karışımı ile Terra Cotta kil kaplar (çapı 15 cm, 13,5 cm yükseklikte) doldurun. Her pot bir duyarlı domates (Solanum Lycopersicon) çeşitli bitki ve bir Glasshouse içinde tencere yerleştirin. Not: pamuk gibi diğer duyarlı bitki çeşitleri, domates yerine kullanılabilir.</li>
	<li>Vermiform reniform nematdes ile domates bitkileri inoculate (bkz. Adım 3,3). Yaklaşık 28 °C sıcaklıkta buzluk içindeki bitkileri koruyun.</li>
</ol>2. R. Için Pamuk Genotypes dikim reniformis Direnç değerlendirmesi
<ol><li>Tarladan toplanan 1 parçalı kumlu killi ile 2 parçalı ince kumu birleştirerek toprağı hazırlayın.</li>
	<li>Buhar toprak nematdes ve toprak kaynaklı bitki patojenleri ücretsiz olduğundan emin olmak için toprak karışımı pastörize.</li>
	<li>Konik plastik kaplar (çapı 4 cm, yüksekliği 21 cm) toprak karışımı ekleyin. Önce tencere doldurma, toprak kaybı önlemek için pot alt pamuk bir top yerleştirin. Kısmen üst yaklaşık 2 cm toprak ile tencere doldurun.</li>
	<li>Her pot için bir plastik bahis hazırlamak genotip yerleştirilir atamak için.</li>
	<li>Pamuk genotiplerinin bitki tohumları değerlendirme için seçildi.<ol>
<li>Her bir tohumun benzersiz bir genotipi temsil ettiği, ayrı nüfusların değerlendirilmesi için her bir tencerede tek bir tohum bitki.</li>
		<li>Pamuk çeşitleri veya Germplazm Erişmeler için, bitki 2-3 tohum tek bir tencerede diğer fide ile en az bir bitkinin germinasyon nematod inoculation önce tencere kaldırıldı. Not: Alternatif olarak, tohumlar uygun olmayan tohumlar ile tencere sayısını en aza indirmek için Ekim öncesinde 24 ila 72 h için çimlenme olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Seçilen dayanıklı ve duyarlı kontrol genotypes bitki tohumları. Not: kontrol genotipleri, tarama metodolojisine özgü doğal varyasyonları değerlendirmek için 5 ila 10 kez çoğaltılır.</li>
	<li>Her Pot tohum kapsayacak şekilde ek toprak ile kaplar doldurun.</li>
	<li>Kaplar büyüme odasına yerleştirin. Büyüme odası için bir ortam hava sıcaklığı, 28 °C sabit sıcaklık koruyun. Floresan ve akkor lambalar bir karışımı ile yapay aydınlatma sağlamak 16 h photoperiod.</li>
	<li>Her tencerede su emitörleri yerleştirin ve otomatik sulama sistemi kullanarak günde iki kez tencere su. Bitki büyüdükçe ek su sağlamak için sulama sistemi ayarlayın.</li>
</ol>3. pamuk tesislerinin Nematot Inoculation ve kök numunelerin hazırlanması
<ol><li>Hassas domates bitkiler üzerinde tutulan vermiform reniform nematdes Extract (adım 1) elutrasyon kullanarak19 ve Santrifüjlü flotasyon20 metodolojileri inoculation önce gün. Çıkarılan nematdes 4 °C ' de saklayın. Not: Baermann huni ekstraksiyon21 nematod ekstraksiyon için alternatif bir yöntemdir.</li>
	<li>100 μL alt örnekteki nematid sayısını sayarak çıkarılan nematid sayısını belirleyin ve inoculations için musluk suyunda 1.000 nematdes/mL süspansiyonu hazırlayın.</li>
	<li>Nematot süspansiyonu ile diktikten sonra pamuk fidanları 7 d inoculate. Bitkinin yanındaki toprakta küçük bir depresyon oluşturun ve 1 ml reniform nematod süspansiyonunun depresyon içine pipet.</li>
	<li>Nematod değerlendirme için aşı sonra tencere 28 d bitkiler çıkarın. Not: Bu aşamada, bitkiler 4 ila 6 tam genişletilmiş yaprakları ile yaklaşık 15 cm yüksekliğinde.<ol>
<li>Tencere bitkiler çıkarmadan önce makas kullanarak bitkilerin tamamen genişletilmiş yaprakları çoğunu çıkarın.</li>
		<li>Tencere bitkileri kaldırmak için, pot sıkmak ve el içine toprak kaydırın.</li>
		<li>10 L Konteynırdaki musluk suyunda kök sistemini ajitasyon ederek toprağı kökleri yavaşça çıkarın. Kök sistemi temiz musluk suyunun bir kapsayıcısında kısaca durulayın.</li>
		<li>Root sistemini, makas kullanarak toprak hattının yaklaşık 1 cm altında bulunan bitkinden çıkarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kök sistemi bir 120 mL plastik, steril olmayan, tek kullanımlık numune konteynırı ile birlikte kimlik için kullanılan pot plastik payına yerleştirin. Not: birden çok örnek 3,7 adıma geçmeden önce işlenir. Bitki çekimi vejetatif yayılması için adım 4 ' e geçin.</li>
	<li>Hazırlamak bir 12,5% (v/v) kırmızı Gıda çözüm17 renk musluk suyu kök sisteme bağlı nematdes leke için.</li>
	<li>Kök sistemi tamamen kapsayacak şekilde numune konteynerinde kök örneğe yaklaşık 30 mL kırmızı gıda boyama çözümünü ekleyin.</li>
	<li>Numune kabı bir mikrodalga fırında yerleştirin ve boyama solüsyonu kaynatmaya başlayana kadar kök numuneyi ısıtın. Numuneyi mikrodalga fırınından çıkarın ve numunenin oda sıcaklığında soğumasını bekleyin.</li>
	<li>Kök örnekten kırmızı gıda boyama çözümü decant ve aşırı leke kaldırmak için numune kabı yaklaşık 100 mL musluk suyu ekleyin. Kapağı numune konteynerine yerleştirin ve numuneyi 4 °C ' de bir buzdolabında saklayın. Kök enfeksiyonunun değerlendirilmesi için adım 5 ' e geçin. Not: protokol, 5. adıma geçmeden önce burada duraklatılabilir.</li>
</ol>4. tohum üretimi için bitkiler kurtarmak için vejetatif yayılma
<ol><li>Bir konik plastik pot alt pamuk bir top yerleştirin (bkz. Adım 2,3) ve kısmen turba yosun çömlekçilik medya ile pot doldurun. Sonra, tencereye vejetatif ateş yerleştirin ve sıkıca pot doldurmak için çömlekçilik medya ekleyin. Pamuk genotipi atamak için her pot yeni bir etiketli plastik bahis yerleştirin.</li>
	<li>Tencere tepsisini plastik bir kapta (73,6 cm uzunluğunda x 45,7 cm genişlik x 15,2 cm yükseklikte) su ile yerleştirin ve bitkiler, çömlekçilik medyasını nemlendirerek kısa bir süre su kaplar. 16 h fotoperiod kullanılarak 28 °C sabit sıcaklığa sahip bir büyüme odasına tencere yerleştirin. Toprak nemi korumak için gerektiğinde Plastik kabına ek su ekleyin.</li>
	<li>Yaklaşık 30 d sonra tohum üretimi için daha büyük tencere ekimi bitkiler. kısmen çömlekçilik medya ile 6 l plastik pot doldurmak (adım 4,1 bakınız), küçük pot bitki kaldırmak, 6 L pot içine bitki yerleştirmek, ve sıkıca pot doldurmak için çömlekçilik medya ekleyin.</li>
	<li>Bir Glasshouse içinde bitkiler yerleştirin ve çömlekçilik medya nemlendiren su ekleyin. Yaklaşık 28 °C ' de (yapay aydınlatma gerekli değildir) buzaktaki sıcaklığı koruyun.<ol>
<li>Yaklaşık 30 d için gerektiğinde el ile su santralleri.</li>
		<li>Bitkin yaklaşık% 75 ' si günlük sulama, günlük su santralleri, otomatik sulama sistemi kullanarak her gün gereklidir. Otomatik sulama sistemini bitki büyümesi için gerektiğinde daha sık suya ayarlayın.</li>
		<li>Çiçek başlatılması başlamadan önce her pot için yavaş serbest gübre yaklaşık 10 gr ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Olgunlukta hasat bitkiler ve daha fazla değerlendirme için tohum elde etmek için pamuk çekirdeği örneklerini işlemek.<ol>
<li>Pamuk tohumlarını hasat etmek için, pamuğu bitkinin açık bollarından elle çıkarın ve etiketli bir kağıt çantaya yerleştirin. Tohumlar aşağıdaki adımlarla kaldırılır pamuk lifleri, iliştirilir.</li>
		<li>10 testere laboratuvar cin kullanarak tohum örneklerinden tüy bırakmayan lifleri çıkarın.</li>
		<li>Konsantre sülfürik asit kullanarak tohum örneklerinden Fuzz lifleri çıkarın. Tohumlu numuneleri% 15 (v/v) sodyum karbonat çözeltisi ile nötralize eder, numuneleri musluk suyuyla durulayın ve numuneleri zorla hava kurutıcısı halinde kurutun.</li>
		<li>Çekirdek örneklerini depolama için etiketli zarflara yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. R. değerlendirilmesi reniformis Kök enfeksiyon
<ol><li>Kök numuneyi numune konteynerinden çıkarın ve mikroskoptan (20X büyütme) kullanarak kök sisteme bağlı dişi nematid sayısını saymak. Not: sadece kadın reniform nematdes bitki kökleri bulaşmasını yeteneğine sahiptir.</li>
	<li>Aşırı nemi kaldırmak için yaklaşık 10 dakika boyunca kağıt havlulara kök sistemi yerleştirin. Taze kök ağırlığı belirlemek için kök sistemi tartın.</li>
	<li>Bir bilgisayar elektronik tablo programına nematod sayımı ve taze kök ağırlık verileri girin ve kök gram başına kadın sayısını hesaplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Heald, C. M., Robinson, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survey+of+current+distribution+of+Rotylenchulus+reniformis.+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Survey of current distribution of Rotylenchulus reniformis. in the United States.</a> Journal of Nematology. 22 (4), 695-699 (1990).</li>
<li>Koenning, S. R., Wrather, J. A., Kirkpatrick, T. L., Walker, N. R., Starr, J. L., Mueller, J. D. <a target="_blank" href="http://www.apsnet.org/publications/plantdisease/2004/February/Pages/88_2_100.aspx">Plant-parasitic nematodes attacking cotton in the United States: old and emerging production challenges.</a> Plant Disease. 88 (2), 100-113 (2004).</li>
<li>Robinson, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reniform+in+U.S.+cotton%3A+when%2C+where%2C+why%2C+and+some+remedies%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Reniform in U.S. cotton: when, where, why, and some remedies.</a> Annual Review of Phytopathology. 45, 263-288 (2007).</li>
<li>Robinson, A. F., Inserra, R. N., Caswell-Chen, E. P., Vovlas, N., Troccoli, A. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287486592_Rotylenchulus_species_Identification_distribution_host_ranges_and_crop_plant_resistance">Rotylenchulus species: identification, distribution, host ranges, and crop plant resistance.</a> Nematropica. 27 (2), 127-180 (1997).</li>
<li>Davis, R. F., Koenning, S. R., Kemerait, R. C., Cummings, T. D., Hurley, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotylenchulus+reniformis+management+in+cotton+with+crop+rotation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Rotylenchulus reniformis management in cotton with crop rotation.</a> Journal of Nematology. 35 (1), 58-64 (2003).</li>
<li>Starr, J. L., Koenning, S. R., Kirkpatrick, T. L., Robinson, A. F., Roberts, P. A., Nichols, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+nematode+management+in+cotton%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">The future of nematode management in cotton.</a> Journal of Nematology. 39 (4), 283-294 (2007).</li>
<li>Weaver, D. B., Lawrence, K. S., van Santen, E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/255648326_Reniform_Nematode_Resistance_in_Upland_Cotton_Germplasm">Reniform nematode resistance in upland cotton germplasm.</a> Crop Science. 47 (1), 19-24 (2007).</li>
<li>Robinson, A. F., Cook, C. G., Percival, A. E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/250117962_Resistance_to_Rotylenchulus_reniformis_and_Meloidogyne_incognita_Race_3_in_the_Major_Cotton_Cultivars_Planted_Since_1950">Resistance to Rotylenchulus reniformis and Meloidogyne incognita race 3 in the major cotton cultivars planted since 1950.</a> Crop Science. 39 (3), 850-858 (1999).</li>
<li>Carter, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+and+resistant+reaction+of+Gossypium+arboreum+to+the+reniform+nematode%2C+Rotylenchulus+reniformis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Resistance and resistant reaction of Gossypium arboreum to the reniform nematode, Rotylenchulus reniformis.</a> Journal of Nematology. 13 (3), 368-374 (1981).</li>
<li>Erpelding, J. E., Stetina, S. R. <a target="_blank" href="https://scinapse.io/papers/2101431983">Genetics of reniform nematode resistance in Gossypium arboreum germplasm line PI 529728.</a> World Journal of Agricultural Research. 1 (4), 48-53 (2013).</li>
<li>Robinson, A. F., Bridges, A. C., Percival, A. E. <a target="_blank" href="https://www.cotton.org/journal/2004-08/3/upload/jcs08-191.pdf">New sources of resistance to the reniform (Rotylenchulus reniformis) and root-knot (Meloidogyne incognita) nematode in upland (Gossypium hirsutum L.) and sea island (G. barbadense L.) cotton.</a> Journal of Cotton Science. 8 (3), 191-197 (2004).</li>
<li>Robinson, A. F., Percival, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+Meloidogyne+incognita+race+3+and+Rotylenchulus+reniformis+in+wild+accessions+of+Gossypium+hirsutum+and+G.+barbadense+from+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Resistance to Meloidogyne incognita race 3 and Rotylenchulus reniformis in wild accessions of Gossypium hirsutum and G. barbadense from Mexico.</a> Journal of Nematology. 29 (4), 746-755 (1997).</li>
<li>Stetina, S. R., Young, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparisons+of+female+and+egg+assays+to+identify+Rotylenchulus+reniformis+resistance+in+cotton%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Comparisons of female and egg assays to identify Rotylenchulus reniformis resistance in cotton.</a> Journal of Nematology. 38 (3), 326-332 (2006).</li>
<li>Usery, S. R. Jr, Lawrence, K. S., Lawrence, G. W., Burmester, C. H. <a target="_blank" href="http://journals.fcla.edu/nematropica/article/view/69719">Evaluation of cotton cultivars for resistance and tolerance to Rotylenchulus reniformis.</a> Nematropica. 35 (2), 121-133 (2005).</li>
<li>Yik, C. -P., Birchfield, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistant+germplasm+in+Gossypium+species+and+related+plants+to+Rotylenchulus+reniformis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Resistant germplasm in Gossypium species and related plants to Rotylenchulus reniformis.</a> Journal of Nematology. 16 (2), 146-153 (1984).</li>
<li>Stetina, S. R., Erpelding, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gossypium+arboreum+accessions+resistant+to+Rotylenchulus+reniformis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Gossypium arboreum accessions resistant to Rotylenchulus reniformis.</a> Journal of Nematology. 48 (4), 223-230 (2016).</li>
<li>Thies, J. A., Merrill, S. B., Corley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Red+food+coloring+stain%3A+new%2C+safer+procedures+for+staining+nematodes+in+roots+and+egg+masses+on+root+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Red food coloring stain: new, safer procedures for staining nematodes in roots and egg masses on root surfaces.</a> Journal of Nematology. 34 (2), 179-181 (2002).</li>
<li>Erpelding, J. E., Stetina, S. R. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/pbr.12560">Genetic characterization of reniform nematode resistance for Gossypium arboreum accession PI 417895.</a> Plant Breeding. 137 (1), 81-88 (2018).</li>
<li>Byrd, D. W. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+semi-automatic+elutriators+for+extracting+nematodes+and+certain+fungi+from+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nematology%22%5BJournal%5D)">Two semi-automatic elutriators for extracting nematodes and certain fungi from soil.</a> Journal of Nematology. 8 (3), 206-212 (1976).</li>
<li>Jenkins, W. R. <a target="_blank" href="https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19650801105">A rapid centrifugal-flotation technique for separating nematodes from soil.</a> Plant Disease Reporter. 48 (9), 692(1964).</li>
<li>Robinson, A. F., Heald, C. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/m/pubmed/19283091/">Carbon dioxide and temperature gradients in Baermann funnel extraction of Rotylenchulus reniformis.</a> Journal of Nematology. 23 (1), 28-38 (1991).</li>
<li>Williams, C., Gilman, D. F., Fontenot, D. S., Birchfield, W. A rapid technique for screening soybeans for reniform nematode resistance. Plant Disease Reporter. 63 (10), 827-829 (1979).</li>
<li>Schmitt, D. P., Shannon, G. <a target="_blank" href="https://dl.sciencesocieties.org/publications/cs/abstracts/32/1/CS0320010275">Differentiating soybean responses to Heterodera glycines races.</a> Crop Science. 32 (1), 275-277 (1992).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

1 için etkili bir tarama protokolü gereklidir) Rtanımlaması. direnç genetik değerlendirmek için reniformis dayanıklı pamuk genotip ve 2) dayanıklı çeşitlerin üreme. Çoğu protokol Rdeğerlendirmek. reniformis nüfus yoğunlukları veya üreme oranları vermiform nematdes veya yumurta pamuk kök sisteminden veya Çömlekçilik toprak8,11,12,14,<sup class="xref...

Rotylenchulus reniformis (Linford ve Oliveira), genellikle reniform nematod olarak anılacaktır, Güneydoğu Amerika Birleşik Devletleri 'nin topraklarda mevcut büyük parazitik nematod türlerinden biridir1,2,3. Nematod bir obligate, sedanter yarı endoparazit yaşam döngüsü tamamlamak için bir ev sahibi bitki gerektiren2,4. Vermiform preadult kadın nematodlar stel2,3bir beslenme sitesi kurmak için ana kök sistemi nüfuz. Nematod beslemeleri ve olgunlaşır gibi, ana kök dışında kalan posterior kısmı yumurta üretimi üzerine şişecek, karakteristik bir böbrek şekli oluşturan (Şekil 1). Rotylenchulus reniformis pamuk4dahil olmak üzere 300 ' den fazla bitki türlerinin kök sisteminde beslenme yeteneğine sahiptir. Upland pamuk (Gossypium hirsutum L.) yaygın Güneydoğu Amerika Birleşik Devletleri 'nde yetiştirilir, ancak Reksikliği. reniformis dirençli çeşitleri nematod Management2,3' ü engelliyor. Nematisit tedavisi ve ev sahibi olmayan kırpma türleri ile rotasyon gibi yönetim stratejileri toprak Razaltmak için kullanılmıştır. reniformis nüfus yoğunlukları5,6, ancak tohum pamuk verim kayıpları genellikle 1 ila 5%2arasında değişir. Rbelirtileri. reniformis enfeksiyonu, bitki afet, bastırılmış kök büyüme, beslenme eksiklikleri, meyve kürtaj ve Gecikmeli olgunlaşma2içerebilir. Ancak, belirtiler alan genelinde semptomların tekdüzelik nedeniyle belirgin olmayabilir; Bu nedenle, Rdeğerlendirmek için yaklaşımlar. reniformis enfeksiyonu tespit ve dirençli Upland pamuk çeşitleri geliştirmek için gereklidir. Değerlendirme R. Pamuk reniformis direnci zor kabul edilir7, enfekte kök sistemi olsa bile bitki enfeksiyon belirtileri gösterebilir normal görünebilir8.
R'nin tanımlanması için etkili bir nematod tarama protokolü gereklidir. Pamuk Germplazm koleksiyonundan reniformis dirençli Erişmeler ve bu katılımların direnç genetik belirlenmesi için. Böyle bir protokol, direnç genlerinin Upland pamuğa aktarılması konusunda yardımcı olacaktır. Çeşitli Biyotahlil yöntemleri Rdeğerlendirmek için kullanılmıştır. pamuktan reniformis enfeksiyonu8,9,10,11,12,13,14,15. Genel olarak, R'nin tanımlanması için iki büyük yaklaşım kullanılmıştır. reniformis dayanıklı pamuk genotypes. En sık kullanılan yaklaşım enfekte bitkiler veya toprak8,11,12,14,15yumurta ve/veya vermiform nematdes ayıklamak içerir. Bu yaklaşım için genel metodoloji ayrı tencerelerde bireysel pamuk genotip için tohum Ekim içerir, fide 7 ila 14 gün geliştirmek için izin, Rvermiform aşamalarında bir karışımı ekleyerek fide Birmanya. toprak reniformis ve nematlerin 30 ila 60 gün kök sistemi bulaştırmak için izin. Sonra, vermiform nematdes ve/veya yumurta her bitkinin virüslü kök sisteminden veya Çömlekçilik topraktan ayıklanır. Ayıklanan nematdes veya yumurta sayısı, daha sonra dirençli genotiplerin belirlenmesi için kontrol genotipleri ile karşılaştırıldığında nüfus yoğunluğu ve üreme hızını tahmin etmek için belirlenir.
Alternatif bir yaklaşım, burada açıklandığı gibi, mikroskobik olarak nematdes ile enfekte olan pamuk kökü sistemi inceleyerek içerir kökleri parazitize kadın nematid sayısını belirlemek için10,16. Diğer yaklaşımlara benzer şekilde, pamuk genotipler ayrı tencere içinde dikilir ve Ekim sonrası yaklaşık 7 gün boyunca vermiform nematid ile aşı edilir. İnoculation sonra 30 gün içinde, kök sistemi bireysel bitkilerin kaldırılır ve toprak kökleri durulanır. Sonra, kök sisteme bağlı nematdes kırmızı gıda17boyama ile lekelenmiş ve kökleri mikroskopik olarak dirençli pamuk genotip ile enfeksiyon sitelerin sayısını belirlemek için incelenmiştir (gram başına nematid sayısına göre tespit duyarlı kontrol16ile karşılaştırıldığında). Bu ikinci yaklaşım, değerlendirme için gereken gün sayısını azaltarak ve tek bir denemede değerlendirilen bireysel genotiplerin sayısını artırarak artan verimlilik avantajına sahiptir. Nüfus yoğunluğunu veya üreme oranını değerlendirecek tarama metodolojileri genellikle enfeksiyon belirtileri7' nin görsel gözlemlerine dayalı olandan daha zaman alıcı bir işlemdir. Bununla birlikte, bu yaklaşımın bir sınırlama, yumurta üretimi ile belirlenen nematod üreme engelleyen konak-bitki direnci değerlendirilmemiştir13.
R. için tarama protokolleri reniformis direnci genellikle değerlendirme7 sırasında kök sistemi yok ve atılan vejetatif ateş içerir. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, tohum üretimi için bitkilerin kurtarılmasına izin vermek üzere bir vejetatif yayılma yöntemi geliştirilmiştir18. Nematod değerlendirme için kök sisteminin kaldırılmasından sonra, vejetatif ateş kök sistemi regrow izin vermek için toprak Çömlekçilik dikilir. Bu yöntem çoğu Riçin geniş uygulamalara sahiptir. reniformis tarama protokolleri. Vejetatif yayılma basit ve hızlı bir yöntem Rüreme için kritik öneme sahiptir. reniformis dirençli Upland pamuk çeşitleri, nerede Döl kurtarma yeni nesil dirençli genotip ilerlemek için gereklidir.
Reniform nematod direnci için pamuk genotiplerinin büyük ölçekli taraması için bir protokol sunulmuştur. Amaç, dayanıklı Upland pamuk çeşitlerinin üreme yardımcı olmak için nematod direnci için pamuk üreme nüfus değerlendirmek için basit ve hızlı yıkıcı olmayan tarama yöntemi geliştirmektir. Bu protokol kullanılarak, veriler genellikle 35 gün içinde elde edilir ve tek bir denemede 300 ' den fazla genotip değerlendirilir. Veriler, bu yöntemler kullanılarak sıklıkla gözlenen varyasyonu göstermek için dayanıklı ve duyarlı genotiplerde sunulur.

<table><tbody><tr><td>Ray Leach Koni Tutucu</td><td>Stuewe ve Oğulları A.Ş.</td><td>SC10U</td><td></td></tr><tr><td>Koni tutma tepsisi</td><td>Stuewe and Sons Inc.</td><td>RL98</td><td></td></tr><tr><td>Kum</td>, <td>çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuk topları</td>, <td>çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pilon, 4 inç bitki etiketleri (4 inç U x 5/8 inç W),</td> <td>Pilon Platics</td><td>L-4-W</td>: <td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir.</td></tr><tr><td>4 oz. numune kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-320-731</td><td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir.</td></tr><tr><td>Kırmızı gıda boyası</td><td>McCormick & Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL Pipet uçları</td><td>çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 L'lik kap</td><td>çeşitli</td><td></td><td>Ucuz kovalar iyi çalışır.</td></tr><tr><td>6 L tencere</td><td>Kreş Malzemeleri A.Ş.</td><td>Poli-Tainer-Can No2A</td><td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir. Farklı boyutlarda saksılar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Saksı ortamı</td><td>Sun Gro Bahçe Bitkileri</td><td>Metro-Mix 360</td><td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir.</td></tr><tr><td>Gübre</td><td>Everris NA Inc.</td><td>Osmocote Plus</td><td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir.</td></tr><tr><td>Plastik kap (73,6 cm U x 45,7 cm G x 15,2 cm D)</td><td>Rubbermaid</td><td>3O29&nbsp;</td><td>Herhangi bir marka veya satıcı kabul edilebilir.</td></tr></tbody></table>

reniform nematode direnci için pamuk genotürleri eleme

Screening Cotton Genotypes for Reniform Nematode Resistance

Nematot yönetimini iyileştirmek için dayanıklı pamuk (Gossypium hirsutum) çeşitlerinin geliştirilmesi için hızlı bir şekilde yıkıcı olmayan reniform nematod (rotylenchulus reniformis) tarama protokolü gereklidir. Çoğu protokol, nüfus yoğunluğunu veya üreme hızını belirlemek için pamuk kökü sisteminden veya toprak Çömlekçilik tarafından vermiform nematdes veya yumurta ayıklamak içerir. Bu yaklaşımlar genellikle az sayıda genotipin değerlendirilmesi ile zaman alıcı bir işlemdir. Burada, kök sisteminin nematod enfeksiyonu için görsel olarak incelendiği alternatif bir yaklaşım açıklanmıştır. Protokol, pamuk fide Birmanya içerir 7 gün vermiform nematdes ile dikim ve kök sisteme bağlı kadın sayısını belirlemekten sonra 28 inoculation gün sonra. Veri kök büyüme varyasyonu için ayarlamak için taze kök ağırlığı gram başına kadın sayısı olarak ifade edilir. Protokol, Nematot 'un bir enfeksiyon sitesi kurması ile ilişkili konak-bitki direncini değerlendirmek için mükemmel bir yöntem sağlar; Ancak, nematod üreme engelleyen direnç değerlendirilmez. Diğer tarama protokollerinde olduğu gibi, deney içinde ve arasındaki bireysel genotürleri arasında nematod enfeksiyonunda varyasyon sıklıkla görülür. Veri Protokolü kullanılarak gözlenen varyasyon aralığını göstermek için sunulur. Bu varyasyon için ayarlamak için, kontrol genotip deneyler dahil edilir. Yine de protokol, konak-bitki direncini değerlendirmek için basit ve hızlı bir yöntem sağlar. Protokol, G'den dayanıklı katılımların tanımlanması için başarıyla kullanılmıştır. arboreum Germplazm toplama ve direnç genetiği belirlemek için 300 ' den fazla birey ayırma nüfus değerlendirmek. Direnç üreme için bitkiler kurtarmak için bir vejetatif yayılma yöntemi de geliştirilmiştir. Nematod değerlendirme için kök sisteminin kaldırılmasından sonra, vejetatif ateş yeni bir kök sisteminin gelişmesine izin vermek için yeniden dikilir. Çeklerin% 95 daha fazla genellikle olgunluğa ulaşan bitkiler ile yeni bir kök sistemi geliştirmek.

İki çeşit için kök sisteminin Rotylenchulus reniformis enfeksiyonu Şekil 1' de sunulmuştur. Nispeten daha az kadın reniform nematid duyarlı genotürü ile karşılaştırıldığında dayanıklı pamuk genotipi için bir beslenme sitesi kurmak edebiliyoruz. Şekil 2' de gösterildiği gibi kök büyümede varyasyon, katılımların arasında yaygındır. Taze kök ağırlığı ile ölçülen bu varyasyon aynı genotipteki bitkiler arasında da gözlenebili...

Burada, reniform Nematot direnci için pamuk genotiplerinin hızlı yıkıcı olmayan taramasında bir protokol sunulmuştur. Protokol, enfeksiyon tepkisi belirlemek için Nematode enfekte pamuk fide kökleri görsel olarak inceleyerek içerir. Her bitkinin vejetatif çekimi daha sonra tohum üretimi için bitkiler kurtarmak için yayılır.

Reniform Nematode direnci için pamuk Genotürleri eleme

A rapid non-destructive reniform nematode (Rotylenchulus reniformis) screening protocol is needed for the development of resistant cotton (Gossypium ...

Bu yöntem, nematode dirençli pamuk çeşitlerinin yenilenmis gelişiminde yardımcı olabilir. Diğer pamuk türlerine dirençli genotiplerin belirlenmesi ve üreme popülasyonlarının değerlendirilmesi yoluyla. Bu tekniğin en büyük avantajı, nematod taraması için basit ve zararsız bir yöntem sunmasıdır.Bir dört santimetre çapında, tohum başına 21 merkezi yüksekliği konik plastik tencerenin altına pamuk bir top yerleştirerek başlayın. Ve tencerenin üst kısmından yaklaşık iki santimetre buhar pastörize toprak karışımı ile tencere doldurma. Dikilecek genotip atfederek her pota plastik bir kazık yerleştirin ve her pota uygun pamuk genotip bir tohum bitki.Tohum kapsayacak şekilde ek toprak ile her pot doldurun ve 16 saat floresan ve akkor lamba fotoğraf dönemi ile 28 santigrat derece sabit sıcaklık tagibi ayarlanmış bir büyüme odasında tencere yerleştirin. Sonra her tencereye su yayıcılar yerleştirin ve günde iki kez tencere su için otomatik bir sulama sistemi kullanın. Dikimden yedi gün sonra, her bitkinin yanındaki toprakta küçük bir depresyon oluşturun ve her depresyona bir mililitre reniform nematod süspansiyon ekleyin.Aşılamadan sonra, kök bölgesinden nematodların yıkanmasını önlemek için pot suyunun dikkatlice kontrol edilmesi gerekir. Aşılamadan 28 gün sonra, her bir tencereyi sıkmadan ve toprağı tek bir elde kaydırarak bitkileri çıkarmadan önce bitkilerden tamamen genişletilmiş yaprakların çoğunu çıkarmak için makas kullanın. Yavaşça kök sistemi musluk suyu 10 litrelik bir kapta kökleri toprak kaldırmak için, temiz musluk suyu bir kapta kısa bir durulama takip çalkalayın.Temizlenmiş kök sistemini toprak çizgisinin yaklaşık bir santimetre altında bitkiden çıkarmak için makas kullanın. Kökleri plastik 120 mililitre steril olmayan tek kullanımlık numune kabına yerleştirin. Daha sonra, yaklaşık 30 mililitre kırmızı gıda boyama çözeltisi ile kök sistemini tamamen kapatın ve numune kabını kaynamaya başlayana kadar boyama çözeltisinin ısıtılması için mikrodalga fırına yerleştirin.Numune oda sıcaklığına soğuduğunda, fazla lekeyi gidermek için kırmızı gıda boyama solüsyonunu 100 mililitre musluk suyuyla değiştirin. Daha sonra kapağı numune kabına yerleştirin ve kök enfeksiyonu analizine kadar numuneyi dört derece santigrat derecede saklayın. Tohum üretimi için bitkiler kurtarmak için, yeni bir konik plastik tencerenin altına pamuk bir top yerleştirin ve kısmen turba yosun çömlekçilik orta ile pot doldurun.Tencerede hasat ve bitkisel ateş bir kök sistemi yerleştirin ve sıkıca pota doldurmak için çömlekçilik orta ekleyin. Pamuk genotip belirlemek için her tencereiçine yeni bir etiketli plastik kazık yerleştirin ve su plastik bir kap içine tencere tepsi yerleştirin. Kısaca içme ortamı nemlendirmek için bitkiler su ve 28 derece santigrat sabit bir sıcaklık ve 16 saatlik fotoğraf süresi ayarlanmış bir büyüme odasında tencere yerleştirin.Yaklaşık 30 gün sonra, kısmen çömlekçilik orta ile bitki başına bir altı litre plastik pot doldurun. Her bitkiyi altı litrelik bir tencereye aktarın, her bir fide dikilirken her tencereye çömlekçilik ortamı ekleyin. Sonra cam bir evde bitkiler yerleştirin ve çömlekçilik orta nemlendirmek için su ekleyin.R.reniformis kök enfeksiyonunu değerlendirmek için numune kabından bir kök örneği çıkarın. 20X büyütme altında kök sistemine bağlı kadın nematodlarının sayısını saymak için stereo mikroskop kullanın. Başarılı bir nematod kök sistemi enfeksiyonu, nematodların kış aylarında daha az aktif olması nedeniyle aşılama ve mevsimsel varyasyon için kullanılan nematodun canlılığı da dahil olmak üzere çeşitli faktörlerden etkilenebilir.Daha sonra fazla nemi gidermek için yaklaşık 10 dakika kağıt havlu üzerine kök sistemi yerleştirin. Taze kök ağırlığını belirlemek için kök sistemini tartın. Kök büyümesindeki değişimler eksizyonlar arasında yaygındır.Bu varyasyonlar, taze kök ağırlığı ile ölçüldüğü gibi, aynı genotipteki bitkiler arasında da görülebilir. Nispeten daha az kadın reniform nematods duyarlı genotip göre dirençli pamuk genotip için bir besleme sitesi kurmak edebiliyoruz. Taze kök ağırlığı verileri her genotip için kök dokusunun gram başına kadın reniform nematodsayısını hesaplamak için kullanılabilir.Dirençli genotipler için kök gram başına kadın reniform nematodların sayısı genellikle 10'dan az, duyarlı genotipler ise genellikle kök gram başına 30 nematod daha fazla var. Burada, 300 bitkiiçeren ayrı bir F2 popülasyonundan elde edilen bir veri alt kümesi gösterilmiştir. Kök büyümesi ve kök sistemlerinin nematod enfeksiyonu için varyasyon bu aralıkları yaygın nematod değerlendirmeler için gözlenen, tek bir deneyde bitkilerin çok sayıda tarama için kullanılacak bu prosedürün yeteneğini gösteren, bu varyasyonu en aza indirmek için, ve direnç genetik doğru bir değerlendirme kolaylaştırmak için.Bu işlemden sonra, reniform nematod direnci genetik direnç ile ilişkili DNA belirteçleri belirlemek için tespit edilebilir. Bu belirteçler daha sonra marker destekli ıslah ıslahı ve nematod direncinin yayla pamuğuna aktarılması için kullanılabilir. Bu teknik, geliştirilmesinden sonra, araştırmacıların nematod re-screening sonrası dirençli pamuk çeşitlerinin ıslahına yardımcı olmak için bitkileri kurtarmalarına olanak sağlayan tahribatsız bir yöntem sunmayı sağlamıştır.

screening-cotton-genotypes-for-reniform-nematode-resistance

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Biz protein ekspresyonu ve lokalizasyonu postembryonic düzenleyiciler tanımlamak için duyarlı bir yöntem...

Içinde Postembryonic Fenotiplerin Belirleme RNAi Tarama C. elegans</em

Kök-ur nematodları ile ekran bitkiler için iki farklı yöntem tarif edilmiştir. Açıklanan yaklaşımlar ıslah programlarında bu bitkilerin kullanımı kolaylaştıran bir zarar vermeden nematodlar ile yüksek verimlilik ekranlar yer alıyor.

Kök-ur Nematod ile Yüksek ve Düşük Throughput Ekranlar Meloidogyne spp.</em

Bu videoda, küçük moleküllü nematisitlerin nematodlara karşı etkinliğini belirlemek için bir tarama testi gösteriyoruz. Nematisitler, maruziyetten sonra numunedeki mobil nematod sayısında bir azalmaya neden olurlarsa etkili kabul edilirler.

Küçük Moleküllü Nematisit Tarama Deneyi: Potansiyel Nematisitleri Ditylenchus dipsaci'ye Karşı Taramak İçin Orta Verimli Bir Yöntem

Biyotrofik patojen Ustilago maydis ile mısır ve teozinte bitkileri aşılamak için iğne enjeksiyon yönteminin kullanımı açıklanmıştır.  İğne enjeksiyonu aşılama yöntemi, mantar patojeninin, patojenin eksrezi oluşumu yoluyla bitkiye girdiği bitki yaprakları arasında kontrollü bir şekilde teslimini kolaylaştırır. Bu yöntem son derece verimlidir, U. maydisile tekrarlanabilir aşılar sağlar.

Ustilago maydis'in Mısır ve Teosinte Hatlarında Patojenitesini Değerlendirmek İçin Hızlı ve Verimli Bir Yöntem

Virüsün neden olduğu gen susturma, bitkilerin konakçı olmayan direncinde yer alan genleri tanımlamak için yararlı bir araçtır. Konakçı olmayan patojenlere duyarlı gen susturuculu bitkilerin tanımlanmasında GFPuv eksprese eden bakteriyel patojenlerin kullanımını gösteriyoruz. Bu yaklaşım kolay, hızlıdır ve büyük ölçekli taramayı kolaylaştırır ve diğer çeşitli bitki-mikrop etkileşimlerini incelemek için benzer bir protokol uygulanabilir.

Genler belirlenmesi için VIGS-aracılığı ile İleri Genetik Tarama konakçı olmayan Direnç ilgilendim

Bu protokol, üreme programları ile birlikte altta yatan kuraklığa tolerans özelliklerini belirlemek için fizyolojik, moleküler ve genetik çalışmalarda kullanılmak üzere küçük bir aday marul havuzunu belirlemek amacıyla, yapraklı sebze marulunun (Lactuca sativa L.) büyük bir germplazm koleksiyonunu kuraklık toleransı açısından taramak için geliştirilmiştir.

Marul Potansiyel Kuraklığa tolerans Yarı-Yüksek Verim Tarama (<em&gt; Lactuca sativa</em&gt;) Germplazm Koleksiyonlar

Burada, fidelerde Phytophthora nicotianae direnci için tütün genotiplerinin etkili ve doğru bir şekilde taranması için bir protokol sunulmaktadır. Bu, hassas ıslahın yanı sıra moleküler mekanizma araştırması için pratik bir yaklaşımdır.

Phytophthora nicotianae Direnci için Tütün Genotiplerinin Taranması

Karpuzun Fusarium solgunluğunu yönetmek, mevcut patojen ırkları hakkında bilgi gerektirir. Burada, patojenik mantar Fusarium oxysporum f. sp niveum'un (Fon) ırk tiplemesindeki etkinliklerini göstermek için kök daldırma, istila edilmiş çekirdek tohumlama ve modifiye tepsi daldırma aşılama yöntemlerini açıklıyoruz.

Bilinmeyen Fusarium oxysporum f.sp. Irkını Belirlemek İçin Kullanılan Üç Aşılama Tekniğinin Kontrastı. niveum Yalı -tır

Mevcut protokol, Ditylenchus dipsaci'nin kültürlenmesi, toplanması ve taranması için güvenilir ve basit bir yöntem tanımlamaktadır.

Bitki Parazitik Nematodu Ditylenchus dipsaci Kültürleme ve Eleme

Burada, pamuk bitkilerinde yaprak ve bracteal nektarların fenotiplenmesi için dijital mikroskopi ile oluşturulan görüntülerle adım adım süreçleri gösteriyoruz. Bu, pamuk yapraklarının ve braktlarının nektarlarını ölçmek için etkili bir yöntemdir; çünkü bilgiler dijital görüntüler şeklinde toplanıp korunabilir.

Pamuk Yaprak ve Bracteal Nektarlarının Dijital Mikroskopi Kullanılarak Puanlama Doğruluğunu ve Veri Korunmasını Artırmak İçin Görselleştirme

Keşfedin pamuk genotürlerinde Rotylenchulus reniformis direnci için hızlı, yıkıcı olmayan tarama yöntemini. Bu protokol büyük populasyonları verimli şekilde değerlendirir ve bitkilerin ıslah için kurtarılmasını sağlar.

Reniform Nematode direnci için pamuk Genotürleri eleme

Daha fazla video keşfet