Yeni nesne tanıma ve nesnenin konumunu bir bütçe farelerde test davranış
November 20th, 2018
Burada tasarım, maliyet ve gerekli ekipman inşası gibi fare nesnenin konumunu ve Roman nesne tanıma davranış test, ekonomik kurulması için kapsamlı yönergeler içeren bir protokolü sağlamak olarak yürütme davranış testleri, veri toplama ve analiz.
Bu yöntem, bellek düzenlemesi ile ilgili anahtar soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Örneğin, bu görevlerde transgenik nakavt fareleri test ederek bellekteki belirli proteinlerin rolünü belirleriz. Bu tekniğin en büyük avantajı, herhangi bir laboratuvarda bellek testi yapmak için hızlı ve uygun maliyetli bir yol olmasıdır.
Solvent kaynak sadece özenle yapılırsa güçlü sonuçlar verecektir, çünkü arena inşaat gösterileştirilmesi önemlidir. Beş yaprak akrilik, akrilik çimento ve 16-gauge hipo aplikatör alarak başlayın. Koruyucu kağıt kaplamayı akrilik levhalardan çıkarın.
Daha sonra boyutları doğru olduğunu onaylamak için tüm malzemeleri kuru-fit. Sonra, monte ve akrilik çimento ile şırınga yükleyin. Dış duvarın uzun kenarını tabanın üst kenarıyla hizala ve bir kombinasyon veya makinist kare kullanarak birbirine dik olduğundan emin olun.
Sonra doğrudan iki adet birleşen köşesine çimento küçük ve istikrarlı bir boncuk uygulamak için şırınga kullanın. İki parçayı ilk olarak ayarlanana kadar beş dakika yerinde tutun. Diğer dış duvarı tabanına takmak için aynı adımları tekrarlayın.
Sonra, iki iç duvar, birer birer, akrilik çimento ile taban takın. Son olarak, şimdi dış duvar ve iç duvar tarafından oluşturulan köşeye doğrudan çimento küçük ve istikrarlı bir boncuk uygulamak için şırınga kullanın. Dört gruplara fareler bölerek alışkanlık oturumu na başlayın ve bireysel temiz tutma kafesleri onları ev.
Daha sonra, test odasına bir grup fare getirin ve en az 30 dakika boyunca alışmalarını bekleyin. Alıştıktan sonra, videoyu kaydetmeye başlayın. Serbest bırakma köşesinin duvarlarına bakan arenada her fare yerleştirin ve fareler altı dakika boyunca serbestçe arenaları keşfetmek için izin.
Ardından, videoyu kaydetmeyi bırakın ve fareleri deneme ler arası aralıkta temiz tutma kafeslerine geri döndürün. Koku alma ipuçlarını en aza indirmek için %70 etanolle silme gibi önerilen temizlik yöntemlerini hayvan tesisi ile tüm arenaları temizleyin. Son olarak, üç alışkanlık oturumları toplam tamamladıktan sonra, kendi kafesleri için tüm fareler dönmek.
24 saat sonra, aynı fare grubunu test odasına getirin ve bir önceki gün alışma seanslarından önce olduğu gibi en az 30 dakika boyunca test odasına uyum sağlar. Eğitim denemesini arenaya yerleştirilen iki nesneyi kullanarak gerçekleştirin. İki serbest bırakmaz köşeden altı ila altı santimetre uzaklıkta çift taraflı bantlı nesneleri, arenada dengelenmiş olmaları gibi yapıştırın.
Farelerin arenayı ve nesneleri 10 dakika boyunca serbestçe araştırmalarına izin verin. O zaman video kaydını durdur. Fareleri 20 dakika boyunca temiz kafeslerine yerleştirin ve alanları etanol ile temizleyin.
Ardından, nesne konumu görevi OLT'yi gerçekleştirmek için, eğitim denemesinde kullanılan nesnelerden birini yeni bir serbest bırakmama köşesine taşıyın ve nesneyi o köşenin her duvarından çift taraflı bantla altı santimetre yapıştırın. Daha önce açıklandığı gibi, 10 dakika boyunca bölgedeki farelerin aynı video kaydını tekrarlayın. Son olarak, yeni nesne tanıma görevi NORT gerçekleştirmek için, yeni bir nesne ile OLT sırasında hareket ettirilmeyen nesne değiştirin ve çift taraflı bant ile köşenin iki duvardan altı santimetre roman nesnesi yapıştırın.
Daha önce açıklandığı gibi, 10 dakika boyunca bölgedeki farelerin aynı video kaydını tekrarlayın. OLT sırasında, nesne konumu için bellek bir grup fare harcaması tarafından yansıtılır, ortalama olarak, hareket ettikten sonra bir nesneyle önemli ölçüde daha fazla zaman geçirir. Bu da ayrımcılık endeksinde bir artış olarak temsil edilebilir.
NORT'de, nesne konumu için bellek, bir grup fare harcaması tarafından, ortalama olarak, yeni nesneyle araştırma süresinin %50'sinden fazla veya sıfırdan önemli ölçüde daha büyük bir ayrımcılık indeksi gösteren bir grup tarafından yansıtılır. Farelerin doğal tercihi olmayan nesneleri seçmek anahtardır. Örneğin, dört örnek boyutu olan bir pilot testte, fareler, B nesnesi ile eşleştiğinde A nesnesi ile araştırma süresinin %50'sinden daha azını harcama eğilimi gösterdi.A nesnesi daha sonra nort'da yeni nesne olarak kullanıldığında, daha büyük bir örneklem boyutu16 olan fareler, a nesnesi ile araştırma süresinin %50'sinden önemli ölçüde daha az harcamış.Bu veriler bu işlem sırasında A nesnesine karşı doğal olarak isteksizolduğunu göstermektedir. , kullanım arasındaki tüm nesneleri ve arenaları iyice temizlemeyi unutmamak önemlidir.
Bu yöntemde, nesne araştırma araştırmacılar tarafından el ile veya ticari yazılım kullanılarak puanlanabilir. Yazılım daha yüksek ön maliyetleri vardır, ancak, bir kez kalibre, uzun vadede zaman ve finansal kaynaklardan tasarruf edebilir.
Genel Bakış
Bu makale, farelerde nesne yer bulma ve yeni nesne tanıma davranışsal testlerinin yürütülmesi için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Etkili veri toplama ve analiz için gerekli ekipman ve prosedürlerin tasarımını, yapımını ve uygulanmasını kapsamaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Davranışsal Testler
- Hafıza Araştırmaları
Arka Plan
- Hafıza düzenlemesini anlamak, nörobilimdeki en önemli konulardan biridir.
- Transgenik nakavt fareler, hafızadaki belirli proteinlerin rolünü incelemek için kullanılır.
- Laboratuvarda yaygın kullanım için uygun maliyetli yöntemler şarttır.
- Test alanlarının uygun şekilde inşası, güvenilir sonuçlar için hayati öneme sahiptir.
Çalışmanın Amacı
- Fare hafıza testi için bir protokol oluşturmak.
- Hafızayı değerlendirmede davranışsal görevlerin etkinliğini değerlendirmek.
- Test ekipmanlarının yapımı için kılavuzlar sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Akrilik levhalar ve çimento kullanılarak test alanlarının inşası.
- Fareleri test ortamına alıştırmak için habituasyon seansları.
- Hafıza değerlendirmesi için nesne yer bulma görevi (OLT) ve yeni nesne tanıma görevi (NORT).
- Testler sırasında fare davranışının video kaydı ile veri toplama.
Ana Sonuçlar
- Fare, OLT'de taşınan nesnelere daha fazla inceleme süresi gösterir.
- NORT'da, fareler yeni nesnelerle tanıdık olanlara göre daha fazla zaman geçirir.
- Geçerli sonuçlar için nesnelerin ve alanların uygun şekilde temizlenmesi şarttır.
- Nesne incelemesini puanlamak için yazılım kullanılabilir ve bu analizde zaman kazandırır.
Sonuçlar
- Protokol, farelerde hafızayı değerlendirmek için güvenilir bir yöntem sağlar.
- Test ekipmanlarının dikkatli yapımı ve temizlenmesi sonuç geçerliliğini artırır.
- Bu yöntem, çeşitli araştırma laboratuvarları için erişilebilir ve uygun maliyetlidir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Cost-effective behavioral assays enable scalable memory phenotyping in mouse models, supporting early-stage target validation for CNS therapeutics. By reducing financial barriers to robust cognitive testing, this method enhances predictive confidence in preclinical de-risking strategies. It facilitates translational continuity from target engagement to functional outcomes in discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses regarding memory-related protein function in transgenic models.
- Operational Value: Enables rapid, low-cost assessment of cognitive phenotypes across multiple genetic backgrounds.
- Predictive Value: Supports target de-risking by linking molecular perturbations to measurable memory deficits.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Provides standardized, reproducible arenas for consistent object exploration metrics.
- Quantitative Output: Generates discrimination indices and investigation time ratios for objective data analysis.
- Scalability: Compatible with video tracking software for high-throughput behavioral scoring.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Evaluates hippocampal-dependent spatial learning and prefrontal/cortical non-spatial memory systems.
- Translational Continuity: Bridges target validation with phenotypic assessment in preclinical models.
- Risk-Adjusted Decisions: Informs go/no-go criteria based on memory performance in genetic or pharmacological models.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into discovery biology workflows as a functional readout following target modulation, enabling hypothesis-driven screening before lead optimization.
- Discovery Biology: Tests memory-related hypotheses by assessing spatial and object recognition memory after genetic or pharmacological intervention.
- Screening: Delivers standardized, quantifiable behavioral outputs suitable for assay validation and compound screening readiness.
- Analytics: Produces discrimination indices and time-based metrics that support comparative condition analysis and effect size determination.
- Translational Research: Aligns with biomarker strategies by linking behavioral outcomes to neural circuit function in disease-relevant systems.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable, cost-efficient platform for longitudinal memory assessment across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in memory-related target validation through ethologically relevant behavioral phenotyping.
- Operational Value: Ensures standardization, reproducibility, and low per-assay cost via accessible materials and straightforward construction.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision confidence by providing reliable cognitive endpoints early in the discovery process.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of targets based on validated memory phenotypes in mouse models.
Implementation Considerations
- Requires expertise in behavioral neuroscience and proper handling of mice to minimize stress and bias.
- Depends on acrylic fabrication skills, video recording equipment, and cleaning protocols to control olfactory cues.
- Necessitates cross-team standardization of object selection, arena setup, and scoring methods for reproducible results.
- Involves adaptation considerations when translating protocols across different mouse strains or environmental conditions.
- Limited by manual scoring variability unless paired with calibrated tracking software for objective, long-term analysis.
