Name: Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Keşfedin asit maserasyon yöntemiyle tüm böbrek nefron sayısını hızlı ve güvenilir şekilde tahmin etmeyi. Bu teknik, genetik ve çevresel faktörlerin nefron gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (R01HL107632) tarafından kısmen destekleniyordu.

Aşağıda listelenen sarf malzemeleri ve reaktifler, tek bir fareyle tüm böbrek netron numarasının belirlenmesi için, yani iki böbrek. Sıçan için asit maserasyon yönteminin kullanımı için değişiklikler yıldız ile tanımlanır. Tüm deneysel protokoller, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Kılavuzu Enstitüleri 'ne konmuştur ve Mississippi Tıp Merkezi Üniversitesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. böbrek yalıtım prosedürü
<ol><li>Fare (veya diğer türler) tartmak ve bir izofluran ile ötenize (% 5-8%) doz aşımı veya pentobarbital (150 mg/kg intraperitoneal enjeksiyon).</li>
	<li>Fare ötenize edildikten sonra, orta çizgi boyunca ince cerrahi makas kullanarak karın boşluğunu açın.</li>
	<li>Dikkatle bağırsak ve üreme adipoz karın boşluğunun sağ tarafına kaldırın. Brüt diseksiyon, sol böbrek izole. İnce cerrahi makas kullanarak, sol böbrek arter ve ven kesmek ve dikkatle sol böbrek kaldırmak, uygun etiketli bir (fare numarası/tanımlayıcı) içine böbrek yerleştirerek fosfor-tamponlu tuzlu (PBS) içeren ağırlık tekne.</li>
	<li>Doğru böbrek için prosedürü tekrarlayın.</li>
	<li>Her böbreğini ilgili tartım teknesinden çıkarın ve PBS ile önceden nemlendirilmiş bir cerrahi gazlı bez üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Böbrek cerrahi gazlı bez üzerinde bırakarak, hızlı bir şekilde herhangi bir yapışan böbrek dışı doku kaldırmak (örneğin perirenal anjiyomiksoma adipoz veya adrenal bezi) böbrek kapsülünün kaldırılması ile takip. Her böbreği bireysel olarak tartın, sol ve sağ böbreğin ağırlığını laboratuvar defterinde ayrı olarak kaydetme.</li>
</ol>2. homojenizasyon, Inkübasyon ve süzme prosedürleri
<ol><li>Her böbrek tartılır sonra, PBS her ağırlık tekne drenaj ve uygun etiketli tartım teknesine geri böbrekler yerleştirin. Temiz bir jilet kullanarak böbreğini ikiye kesebilir, uzunlamasına. Her böbrek yarısını aşağı bakacak şekilde yerleştirin ve her yarısını 2 mm veya daha küçük parçalara kesin.</li>
	<li>Aynı Razorblade kullanarak, dikkatle toplamak ve etiketli 15 mL konik tüp içine doğranmış böbrek parçaları yerleştirmek (fare numarası/tanımlayıcı; sol karşı sağ böbrek).</li>
	<li>Yeni bir jilet kullanarak, ters böbrek için prosedürü tekrarlayın. Ayrı etiketli 15 mL konik tüp içine doğranmış böbrek yerleştirin.</li>
	<li>İyi havalandırılmış bir duman kapında, her 15 mL konik tüpte 5 mL 6 M hidroklorik (HCl) asit ekleyin.</li>
	<li>Konik tüp için kapağı değiştirin, yavaşça böbrek/HCl karışımı karıştırın ve 15 mL konik tüp 37 °C ' de 90 dk (sıçan böbrekleri için * 120 dk) olarak ayarlanan bir ısıtılmış su banyosuna yerleştirin.</li>
	<li>Kısaca her 15-mL tüp her 15 dakikada kuluçdak sırasında tüm doku HCl asit maruz kalmasını sağlamak için karıştırılır.</li>
	<li>5 mL şırıngaya 18-G iğne takın (sıçan için * 10 mL şırınga) ve şırınga pistonu dikkatle çıkarın. Şırınga bir 50 mL konik tüp (tüp #1) bir duman kaputu yerleştirin.</li>
	<li>Su banyosundan böbrek/HCl çözeltisi çıkarın ve şırınga açık ucuna doku solüsyonu dökün ve bir test tüp raf içinde 15 mL konik tüp kenara ayarlayın. Dikkatle piston değiştirin ve yavaşça iğne yoluyla çözüm ekstrüzyon ve tüp #1 gibi piston itin.</li>
	<li>15 mL konik tüpü 5 mL PBS çözeltisi ile yıkayın. Girdap PBS 15-mL konik tüp böylece herhangi bir kalan böbrek dokusu çözünmek için.</li>
	<li>Yine, dikkatle 18-G iğne içeren 5 mL şırıngadan pistonu kaldırmak ve şırınga açık ucuna 15 mL konik tüp içeriğini dökün. Pistonu dikkatlice değiştirin ve şırıngayı hafifçe aşağı doğru tüp #1 içine itmek suretiyle enjektörü temizleyin. Bu işlemi 2x olarak tekrarlayın (Toplam 3x yapılır).</li>
	<li>Yeni 5 mL şırıngaya 21-G iğne takın (sıçan için * 10 mL şırınga) ve şırınga pistonu dikkatle çıkarın. Şırıngayı, 21-G iğne ile yeni bir 50-mL konik tüpüne (tüp #2) yerleştirin.</li>
	<li>21-G iğne içeren şırınga açık ucuna tüp #1 içeriğini dökün. Şırıngayı dikkatlice takın ve şırınga pistonu hafifçe itmek ve ekstrüze solüsyonu tüp #2 içine koyarak şırıngayı temizleyin.</li>
	<li>5 mL PBS çözeltisi ile yıkama tüpü #1. Girdap PBS tüp #1 böylece kalan böbrek dokusu çözünmek için.</li>
	<li>Yine, dikkatle 18-G iğne içeren 5 mL şırıngadan pistonu kaldırmak ve şırınga açık ucuna tüp #1 içeriğini dökün. Dikkatli bir şekilde pistonu yerine takın ve şırıngayı hafifçe aşağı doğru iterek, boru #2 ekstrüzyon çözeltisi ile temizleyin. Bu işlemi 2x olarak tekrarlayın (Toplam 3x yapılır).</li>
	<li>Tüp #2 50-mL hattına kadar ek PBS ekleyerek 50 mL 'ye kadar boru #2 toplam hacmini getirin.</li>
	<li>Bir buzdolabı içinde bir rocker plaka üzerinde bir tüp raf içinde böbrek dokusu çözeltisi içeren tüp #2 inkük 4 °C gece (minimum 8-10 h).</li>
</ol>3. Glomeruli sayımı ve nephron numarasının Extrapolasyonu
<ol><li>Soğutucudan tüp #2 çıkarın ve homojen bir çözüm oluşturmak için tüpün birkaç kez hafifçe ters çevirme ile pelleted doku pelletini. İşlendikten sonra 5 d içinde glomerül sayma öneririz.</li>
	<li>Dikkatle kısım 500 μL böbrek çözeltisi 12-kuyu plaka tek bir kuyu içine. Bu 2x tekrarlayın, her bir kısım ayrı bir kuyuya yerleştirerek böylece böbrek başına böbrek çözeltisi üç kuyuları vardır, triplicate analizi için.</li>
	<li>1:1 seyreltme için böbrek çözeltisi içeren üç kuyunun her biri için 500 μL PBS ekleyin.</li>
	<li>Ters bir mikroskop kullanarak, iyi başına glomerül sayısını saymak. Sayım, her bir kuyunun altına yerleştirilen 16 ayrı bölümden oluşan bir ızgara kullanılarak desteklenir. Her gridded bölüm başına glomerül sayısını saymak ve sonra iyi başına glomerül toplam sayısını almak için ızgara başına sayım toplamı. Glomeruli küresel yapısı ile kolayca tanımlanabilir. Ek tanımlayıcılar, kan dolu kılcal damarların yanı sıra, bireysel glomerüllerin gövdesine bağlı kalan ön veya sonrası arterioller nedeniyle kırmızımsı bir ton içeriyordu (Şekil 1).</li>
	<li>Glomerül toplam sayısı üç kuyuların her biri olarak sayılan ekleyin ve daha sonra üç tarafından glomerül ortalama sayısı için ikiye böler böbrek çözeltisi 500 μL başına. Eğer iyi başına glomerül ortalama sayısının farkı% 10 ' dan büyükse, ne, sayım prosedürü tekrarlayın, böbrek çözeltisi homojen doğası yakın dikkat. Çoğalan glomerül sayısı iyi kez 100 böbrek başına glomerül ortalama sayısı için sayılır. Toplam netron sayısı böbrek başına veya böbrek ağırlığı, mg veya g dokusu kullanılarak ifade edilebilir.</li>
</ol>

<ol><li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHall%2C+JE+%22Guyton+and+Hall+Textbook+of+Medical+Physiology%22">Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology</a>. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).</li>
<li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number%2C+hypertension%2C+and+CKD%3A+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li>
<li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis%3A+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li>
<li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li>
<li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052(2016).</li>
<li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+importance+of+nephron+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li>
<li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fewer+nephrons+at+birth%3A+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension%3F%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Kidney+Diseases%22%5BJournal%5D)">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li>
<li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age%2C+kidney+weight%2C+and+body+surface+in+normal+man%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li>
<li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Chronic+Kidney+Disease%22%5BJournal%5D)">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li>
<li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li>
<li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22+The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li>
<li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number%2C+glomerular+volume%2C+renal+disease+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy%3A+association+with+age%2C+nephron+number%2C+birth+weight+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li>
<li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension%2C+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis%3A+the+effect+of+race%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li>
<li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li>
<li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one%2C+more+of+the+other%3F%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li>
<li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+nephron+endowment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li>
<li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li>
<li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li>
<li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li>
<li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+number%2C+renal+function%2C+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li>
<li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number%2C+hypertension+and+proteinuria%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li>
<li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li>
<li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+and+how+we+determine+nephron+number%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li>
<li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li>
<li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li>
<li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+and+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li>
<li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li>
<li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li>
<li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li>
<li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume%3A+a+pig+study%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li>
<li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li>
<li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+nephron+number+in+adult+sheep%2C+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li>
<li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735(2012).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

İyi deneysel teknikle, asit maserasyon yöntemi tüm böbreklerde netron numarasını tahmin etmek için idealdir. Böbrek asit içinde çözünmüş olsa da, glomerül büyük ölçüde bozulmamış kalır ve kolayca tanımlanabilir, bireysel glomerül sayımı nispeten kolay ve basit hale. Asit maserasyon tekniği özellikle çeşitli nedenlerle avantajlıdır. İlk olarak, asit maserasyon yöntemi gider ve fiziksel çaba açısından nispeten az gerektiren hızlı ve kullanışlı bir yöntemdir. Asit maserasyon yöntemini gerçekleştirmek için gereken tüm reakti...

Netron hem temel yapısal hem de böbrek1' in fonksiyonel birimidir. Yapısal olarak, netron Bowman kapsülü içinde bulunan glomerülden (kapiller ve podositler) ve böbrek tübülü oluşur, proksimal tübül oluşan, Henle döngü, ve toplama kanalına sona erer distal tubüs. Fonksiyonel olarak, netron rolü su ve elektrolit filtrasyon ve reemilimi ve atıkların salgılanmasını olduğunu. Genel olarak, nefrogenis tamamlanan 36 gebelik hafta insanlarda ve kısa bir süre sonra fare ve sıçan2gibi çeşitli türler doğumdan sonra. Nefron bağış, bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, zira netron sayısı her zaman Doğum sonrası3olarak ölçülen nefron toplam sayısıdır. Netron numarası ve glomerüler sayı terimi sıklıkla birbirinin yerine kullanılır. Çünkü netron başına sadece bir glomerülden vardır, glomerül numarasının değerlendirilmesi ne, sayısı tahmin için önemli bir vekil olduğunu.
Netron bağış ve netron sayısının değerlendirilmesi, klinik ilginin değerlendirilmesinin netron bağış ve azalmış netron numaraları arasında bir ilişki gösterdiği gibi kardiyovasküler hastalığın daha fazla görülme sıklığı4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. otopsi sırasında böbreklerdeki bulgulara dayanarak, Brenner hipertansif bireylerin normotensif bireyler16daha düşük toplam nefron sayısı ile sunulan görüldü. Böylece, Brenner ne, sayısı ve daha sonra yaşam içinde hipertansiyon gelişimi riski arasında ters bir ilişki olduğunu hipotez. Brenner aynı zamanda, netron sayısında bir azalma olan nöfrisi tarafından telafi edildiğini hipotez. Böbrek normal filtrasyon hızını korumak için, kalıntı nefron onların glomerüler yüzey alanını artırarak telafi (glomerüler hipertrofisi), böylece Renal fonksiyon netron kaybı herhangi bir olumsuz etkisini azaltmak için çalışıyor4 ,16.
Kısa vadede koruyucu iken, glomerüler hipertrofisi, uzun vadede, artan sodyum ve sıvı tutma yol açar, artan ekstrellüler sıvı hacmi, ve arter kan basıncında artar, daha fazla artan bir kısır döngüye yol glomerüler kapiller basıncı, glomerüler Hiperfiltrasyon ve netron skarlık (skleroz) ve yaralanma4,16.
Tahminlerin veya netron numarasının sayılarının alınması, birkaç deneysel avantaj sunar: 1) nefrogenit süreci ile ilgili bilgi sağlar, bu da embriyo veya maternal-fetal ortamda belirli genler veya faktörlerle bağlantılı olabilir ve 2) kalp-damar hastalığı olan bir ne, sayısı ilişkisi vardır ve böylece, ne, sayısının tahminlerinin gelecekteki kardiyovasküler riski tahmin etmek için kullanılabileceği potansiyeli vardır2,17,18, 19 , 20 tane , 21 , 22. maternal-fetal çevreye ek olarak, çeşitli hastalıklar doğrudan netron numarası ve böbrek fonksiyonunu etkiler, ateroskleroz dahil, diyabet, hipertansiyon, ve hatta normal yaşlanma2,9, 10,11,12,22,23. Bu nedenle, tüm böbrek netron sayısının değerlendirilmesi, bir kişinin hayatı boyunca nefrogeninin (i.e.netron Endowment) ve netron numarasını etkileyen genetik ve çevresel faktörleri ve ortaya çıkan etkileri anlamak önemlidir böbrek fonksiyonu ve kardiyovasküler sağlık üzerinde.
Şu anda, her biri kendi avantajları ve sınırlamaları24,25,26,27,28 olan netron numarasının belirlenmesi ve ölçülmesine yönelik çeşitli yöntemler mevcuttur ,29,30. Tüm böbrek netron sayısını belirlemek için sofistike Yöntemler, disloji/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme25,26gibi stereolojik yöntemler içerir. Genellikle tüm böbrek ne, sayısını belirlemek için altın standardı olarak kabul, disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem pahalı hem de zaman alıcı. Manyetik rezonans görüntüleme ve işlemede son gelişmeler ve iyileştirme, her netron bireysel olarak saymak için Araçlar sağladı. Ancak, manyetik rezonans görüntüleme sadece zaman alıcı değil, aynı zamanda son derece pahalıdır. Buna ek olarak, hem disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem de manyetik rezonans görüntüleme, gelişmiş teknik uzmanlık gerektirir, böylece araştırma laboratuvarlarının çoğunda bu tür yöntemlerin kullanımını kısıtlamaktadır.
Ne, sayısının belirlenmesinde çoğu Yöntem, glomerüllerin tanımlanmasını temel alarak sayar veya tahminler yapar, böylece yapısal olarak kolayca tanımlanabilir. Bu yazıda tüm böbreklerde ne, sayısını tahmin etmek için asit maserasyon yöntemi tarif edilir ve27' dir. Asit maserasyon yöntemi hızlı, güvenilir ve diğer yöntemlerden daha az pahalıdır, örneğin disik/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme gibi. Dahası, asit maserasyon yöntemi, manyetik rezonans görüntüleme26kullanılarak belirlenen aralıktaki içinde olduğu bildirilmiştir netron numarasının son derece tekrarlanabilir tahminler sağlar.

<table><tbody><tr><td>İzofluran anestezi</td><td>Abbott Laboratuvarları</td><td>05260-05</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran buharlaştırıcı sistemi ve akış ölçer</td><td>Braintree Scientific</td><td>VP I</td><td>Tıbbi sınıf oksijen kaynağını içerir</td></tr><tr><td>Leica Ters Mikroskop DMIL LED</td><td>Leica Microsystems</td><td>DMIL LED</td><td>Herhangi bir marka ayrıca uygun</td></tr><tr><td>Dijital su banyosu</td><td>Fisher Scientific</td><td>2239</td><td>Herhangi bir marka uygun</td></tr><tr><td>ToughCut İnce cerrahi makas</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>14058-11</td><td>25 mm kesme kenarı, 11,5 cm uzunluk; İpuçları: keskin-keskin; Uç şekli: düz</td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon forseps 4 1/4 inç.</td><td>Biomed Res Instruments, Inc</td><td>10-1760</td><td>Kavisli uçlu</td></tr><tr><td>Pleksiglas levha 5 inç x 7 inç</td><td>Uygun herhangi bir kaynak</td><td>n/a</td><td>Herhangi biri ayrıca uygun Altıgen</td></tr><tr><td>polistiren tartı kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-2002-100</td><td>Herhangi biri de uygun</td></tr><tr><td>Tıraş bıçağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td>Tek kenarlı karbon çeliği 0.009</td></tr><tr><td>Gazlı bez sünger 4 x 4 inç. 8 katlı</td><td>Fisher Scientific</td><td>MSD-1400250</td><td></td></tr><tr><td>10x konsantre fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-4L</td><td>1x&nbsp'ye seyreltin;</td></tr><tr><td>6 N Hidrokolik asit çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3750-32</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-70C</td><td>Herhangi biri de uygun</td></tr><tr><td>50 mL konik santrifüj tüpü</td><td>yapmak Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td>Herhangi bir marka ayrıca uygun</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık 5 mL şırınga</td><td>Cole Palmer</td><td>EW-07944-06</td><td>Herhangi bir marka da uygun</td></tr><tr><td>18G1.5 tek kullanımlık iğne</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5D</td><td>Herhangi bir marka da uygun</td></tr><tr><td>21G1.5 tek kullanımlık iğne</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5B</td><td>Herhangi biri de uygun hale getirir</td></tr><tr><td>Kapaklı 12 kuyulu çok kuyulu hücre kültürü plakaları</td><td>Cole Palmer</td><td>#FW-01959-06</td><td>Herhangi biri de uygun</td></tr><tr><td>Polipropilen modüler test tüpü rafı</td><td>Cole Palmer</td><td>#EW-06733-00</td><td>15 ve 50 mL konik boruları barındırabilir; herhangi bir de uygun yapmak</td></tr></tbody></table>

asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Nephron bağış bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, insanlarda nefrogenit gebelik 36 hafta tarafından tamamlanmış ve yeni nefron Doğum sonrası oluşturulur. Netron numarası, Doğum sonrası zaman içinde herhangi bir noktada ölçülen nefron toplam sayısını ifade eder. Hem genetik hem de çevresel faktörler hem netron bağış hem de sayıyı etkiler. Daha düşük netron tedavisi veya sayısına sahip bireyler böbrek veya kardiyovasküler hastalık gelişimi açısından daha yüksek bir risk altında olduğu düşünülmektedir gibi belirli genler veya faktörlerin nefrogenik ve netron kaybı veya ölümü sürecini nasıl etkilediğini anlamak önemlidir. Bir kişinin ömür boyu boyunca çevresel pozlarının netron numarasını nasıl etkilediğini anlamak, gelecekteki hastalık riskinin belirlenmesinde de hayati önem taşır. Böylece, tüm böbrek netron numarasını hızlı ve güvenilir bir şekilde değerlendirmek yeteneği, nefrogenit veya netron kaybına katkı sağlayan veya teşvik eden mekanizmaları daha iyi anlamak için temel bir deneysel gerekliliktir. Burada, Damadian, Shawayri ve Bricker tarafından açıklanan prosedüre göre tüm böbrek netron numarasının tahmin edilmesi için asit maserasyon yöntemini tarif ediyoruz, hafif modifikasyonlar ile. Asit maserasyon yöntemi, daha gelişmiş, pahalı olsa da, manyetik rezonans görüntüleme gibi yöntemler kullanılarak Belirlenenlerin% 5 ' i içinde olan netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminler (glomeruli sayma tarafından değerlendirilir) sağlar. Dahası, asit maserasyon yöntemi çok sayıda numune veya deneysel koşullarda ne, sayısını değerlendirmek için mükemmel bir yüksek verimlilik yöntemidir.

Aşağıda hipertansiyon kurulan bir fare modeli ve yaş ile ilgili kronik böbrek hastalığı bir genetik sıçan modeli tüm böbrek netron numarasının temsili tahminleri vardır. Glomerüllerin anahtar tanımlayıcı özellikleri, örneğin ön veya post-arteriolar veya tübüler yapıları ile veya bağlı olmayan küresel bir yapı gibi, asit maserasyon yöntemine yeni olanlar için vurgulanır (Şekil 1).
İlk deneysel örnekt...

Bütün böbrek netron sayısının tahminleri klinik ve deneysel olarak önemli olup, ne, sayısı ile böbrek ve kardiyovasküler hastalık riski arasında ters bir ilişki olduğu için. Burada, tüm böbrek netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminlerini sağlayan asit maserasyon yönteminin kullanımı gösterilmiştir.

Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Asit maceration yöntemi böbrek hakkında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir ve nasıl belirli genler katkıda bulunmak veya nefron gelişimini etkilemek yanı sıra nasıl belirli koşullar, diyabet veya hipertansiyon gibi, nefron sayısını etkiler. Fetal gelişim sırasında doğan bir bireyin toplam nefron sayısı belirlendiği ve nefron kaybının böbrek patolojisi ile ilişkili olduğu için bu önemlidir. Asit maceration yönteminin başlıca avantajları manyetik rezonans görüntüleme gibi diğer nefron sayma yöntemlerine göre daha hızlı, daha fazla tekrarlanabilir, ucuz ve daha az zaman alıcı olmasıdır.Bu teknik, nefron sayısındaki etkinin böbrek fonksiyonu üzerindeki etkisini niçin daha iyi anlamamızı kolaylaştırıyor, bu da belirli genlerin nefron fonksiyonunu ve gelişimini nasıl etkilediğini daha iyi anlamamız için önemlidir. Genel nefron sayısını etkileyen genlerin veya faktörlerin incelenmesi, hastalıkla ilişkili nefron kaybını sınırlamak için tasarlanmış farmakolojik veya genetik yaklaşımların geliştirilmesinde etkili olacaktır. İyi deneysel teknik ve uygulama ile, bu yönteme yeni bireyler kolayca tüm böbrek nefron numaraları güvenilir ve tekrarlanabilir tahminler sağlayan asit maceration yöntemi ustalık kazanmalıdır.Orta hat boyunca fare karın boşluğu açmak için ince cerrahi makas kullanarak başlayın. Dikkatle hayvanın sağ tarafına bağırsak ve üreme yağ kaydırın. Brüt diseksiyon kullanarak, sol böbrek izole ve dikkatle PBS uygun etiketli tartmak tekne içine organ yerleştirerek böbrek kaldırmak için sol böbrek arter ve damar kesti.Aynı şekilde sağ böbrek toplamak ve pbs ile önceden nemlendirilmiş bir cerrahi gazlı bez üzerine her iki böbrek yerleştirin. Hızlı bir şekilde herhangi bir yapışık olmayan böbrek dokusu ve böbrek kapsülleri kaldırın. Sonra ayrı ayrı sol ve sağ organın ağırlığı kayıt her böbrek ağırlık.Tarttıktan sonra, her böbreği pbs olmadan uygun şekilde etiketlenmiş bir tartı teknesine geri yerleştirin ve her organı yarım uzunlamasına kesmek için temiz bir jilet kullanın. Her böbrek yarım aşağı kesilmiş ve iki milimetre veya daha küçük parçalar halinde her yarım kesti yerleştirin. Aynı jilet kullanarak, dikkatlice uygun etiketli 15 mililitre konik tüp içine doğranmış böbrek parçaları aktarın.Iyi havalandırılan bir duman kaputunda, her tüpe beş mililitre altı azı dişi hidroklorik asit ekleyin. Daha sonra, 90 dakika boyunca 37 derece santigrat su banyosu içine tüpler yerleştirmeden önce yavaşça böbrek asidi karışımları ajite. Asit maceration sonunda, böbrek başına bir beş mililitreşile şırınga bir 18 gauge iğne takın ve dikkatle şırınga dalgıçlar çıkarın.Şırıngaları tek tek 50 mililitrelik konik tüplere duman kaputuna yerleştirin ve böbrek çözümlerini her şırınganın açık ucuna dökün ve boş tüpleri bir test tüpü rafına koyun. Daha sonra 50 mililitrelik tüpler içine iğneler aracılığıyla her çözeltinin yavaş ekstrüzyon için dikkatlice dalma değiştirin. Kalan böbrek dokusunu yatıştırmak için PBS dönen tüp başına pbs çözeltisi beş mililitre ile 15 mililitre konik tüpleryı yıkayın.Sadece gösterildiği gibi uygun 50 mililitrelik tüp içine yıkama içeriğini ekstrüzyon. Üçüncü yıkama ekstrüzyon sonra, bir 21 gauge iğne ile her şırınga donatmak. 50 mililitrelik tüplerin içeriğini, daha küçük delikli iğne yıkama ve ilk 50 mililitrelik tüpün içeriğini üç kez taze PBS ile ekstrüzyon yoluyla 50 mililitrelik tüplerin ikinci bir setine geçirin.Üçüncü yıkama ve ekstrüzyon sonra, ek PBS ile 50 mililitreye kadar her tüp toplam hacmi getirmek ve dört derece santigrat bir gecede bir rocker plaka üzerinde bir raf tüpleri yerleştirin. İşlemden sonraki beş gün içinde, 12 kuyuplakasının altı kuyunun altına 16 ayrı bölümden oluşan bir ızgara yerleştirin. Yavaşça peletli dokuları resuspend böbrek çözeltisi tüpleri birkaç kez ters.Dikkatle 12 kuyu plaka üç kuyuher böbrek başına her homojenize çözelti üç 500 mikrolitre aliquots ekleyin. Her kuyunun içeriğini eşit miktarda PBS ile seyreltin. Plakayı ters bir mikroskobun sahnesine yerleştirin.Glomeruli'yi küresel yapıları, kırmızımsı tonları ve bireysel glomeruli'nin vücutlarına bağlı arteriyalöncesi veya sonrası ile tanımlayın. Kuyu başına glomeruli toplam sayısının hesaplanması için ızgara başına sayımı toplamı için her ızgaralı bölüm başına glomeruli sayısını sayMak. Sonra böbrek başına glomeruli ortalama sayısını elde etmek için iyi kez 100 başına glomeruli sayısını çarpın.Bu temsili deneyde, 14 gün boyunca araçla aşılanmış farelerde toplam nefron sayısı böbrek başına yaklaşık 12,500 nefron idi. Anjiyotensin iki infüzyon ancak, cıva yaklaşık 40 milimetre atriyal basıncı arttı ve toplam nefron sayısında önemli bir yaklaşık% 26 azalma ile ilişkili bulundu. Sıçan böbrek agenezisi bu genetik modelde, iki böbrekle doğan hayvanların asit esinasyonu ndan sonra böbrek başına yaklaşık 27, 500 nefron içerdiği hesaplanmış, yalnız böbrekle doğan sıçanların ise toplam nefron sayılarının önemli ölçüde daha düşük olduğu saptandı.Her iki deneyden elde edilen tahminler, daha önce sıçanlarda bildirilen aralıklarla uyumludur. Asit serpme yöntemi, özellikle disector fraksiyonator yöntemi veya manyetik rezonans görüntüleme gibi nefronları saymak için daha fazla emek yoğun ve maliyet engelleyici tekniklerle donatılmış olmayan laboratuvarlarda, tüm böbreklerde nefron sayılarını tahmin etmek için idealdir. Bu yöntem, manyetik rezonans görüntüleme ile belirlenen sayıların %5'inde olan tüm böbrek nefron sayısının yüksek, verimli ve tekrarlanabilir bir şekilde tahmin edilmesine olanak sağlar.Azaltılmış nefron sayılarının kronik böbrek hastalığı gibi kardiyovasküler hastalık riski ile ilişkili olduğu için nefron sayısının değerlendirilmesi klinik bir önemi vardır. Hidroklorik asitle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven, koruyucu gözlük ve laboratuvar paltosu gibi önlemler alınması gerektiğini unutmayın.

estimation-nephron-number-whole-kidney-using-acid-maceration

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, CUBIC (şeffaf, engelsiz beyin/vücut görüntüleme kokteylleri ve hesaplamalı analiz) adı verilen bir doku temizleme yöntemi ve immünofloresan boyama kullanılarak murin böbreklerinin tam montajlı boyanması için bir testi göstermektedir. Böbrek, doku temizlemeye tabi tutulur, burada böbreğin yağı alınır, rengi giderilir ve optimum üç boyutlu görüntüleme için dokuyu şeffaf hale getirmek için bir kırılma indisi eşleştirme solüsyonu ile tedavi edilir. Doku, ışık tabakası mikroskobu altında...

Böbreğin üç boyutlu görüntülenmesi için tam montajlı organ boyama tekniği

2-foton mikroskopi yüksek çözünürlüklü intavital kullanan bir teknik doğrudan görselleştirmek ve yüzey glomerüllerde gloemrular filtrasyon ölçmek için. Bu yöntem, normal ve hastalıklı hem Devletler makromoleküllerin geçirgenlik özelliklerinin doğrudan belirlenmesi için olanak sağlar.

Münih Wistar Sıçanlarda 2-Foton Mikroskopi kullanarak Floresan Makromoleküllerin Glomerüler geçirgenliği miktarının

Zebra balığı yetişkin böbrek böbrek yenilenmesi ve hastalık çalışmalar için mükemmel bir sistemdir. Böyle bir araştırmanın önemli bir yönü nefron yapısı ve fonksiyonu değerlendirmesidir. Bu protokol nefron borucuk kompozisyonunun ve böbrek geri emiliminin değerlendirilmesi için uygulanabilecek çeşitli yöntemler anlatılmaktadır.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi

Böbrek bağışıklık hücrelerinin izolasyonu için güvenilir ve verimli teknikler, sonraki uygulamalar için gereklidir. Bu, az sayıda böbrek bağışıklık hücresinin yüzey antikoru etiketlemesini gerektirir. Burada, görünüşte bu amaca ulaşan böbrek bağışıklık hücrelerinin izolasyonu için özlü bir yöntem açıklıyoruz.

Böbrek Bağışıklık Hücreleri Güvenilir ve Yüksek Verimlilik Ekstraksiyon

Bu iletişim kuralı bir tam böbrek iş-up glomerular hastalığı fare modellerinde yürütülmesi gereken açıklar. Yöntemler glomerular hastalığı tüm fare modelleri uygulanabilir glomerular işlevinin ayrıntılı işlevsel, yapısal ve mekanik analiz için olanak sağlar.

Fare modelleri Glomerular hastalığı böbrek fonksiyonlarının değerlendirilmesi

Bu protokol ana odak verimli bir şekilde uygun birincil glomeruli kültürlerin çeşitli aşağı akım uygulamaları kullanmak için en az kirletici maddeleri ile izole etmektir. İzole glomeruli bileşeni hücre tipleri arasındaki yapısal ilişkileri korumak ve kültürlü ex vivo kısa bir süre için olabilir.

Yetişkin sıçan böbrek üzerinden olduğu gibi Glomeruli yalıtmak için verimli bir eleme yöntemi

Burada, uzun süreli üreter tıkanıklığının glomerüler dinamikler ve fonksiyon üzerindeki etkilerini ölçmek için Münih Wistar Fromter sıçanlarında yüzey glomerüllü 2-foton mikroskobu kullanan bir protokol sunuyoruz.

Kronik Tek Taraflı Üreter Tıkanıklığının Glomerüler Prosesler Üzerindeki Etkilerini Ölçmek için 2-Foton Mikroskobu Kullanılması

Yakı deney platformu, sıçanları kısıtlama olmaksızın sabitleyebilir ve sıçanlar, uyanık durumda, sıçanların refahını sağlayarak, operatörlerin güvenliğini koruyarak, terapötik etkinliği sağlayarak ve deneyin verimliliğini artırarak çok akupunktur noktalı yakı geçirebilir.

Kronik Böbrek Yetmezliği Olan Sıçanların Tedavisinde Bitkisel-Kek ile Ayrılmış Yakı Kullanımı

Bu çalışma, CUBIC temizlenmiş fare böbreklerinden glomerülleri etiketlemek ve analiz etmek için kullanımı kolay, eksiksiz ve basit bir dizi yöntem sunmaktadır. Glomerulus sayısı ve hacmi gibi veriler, floresein izotiyosiyanat (FITC)-Dekstran, ışık tabakası floresan mikroskobu (LSFM) veya yaygın konfokal mikroskopi ve Imaris gibi yazılımlar kullanılarak kolay ve güvenilir bir şekilde elde edilebilir.

Fare Glomerüllerini Etiketlemek ve Analiz Etmek için Etkili ve Hızlı Bir Yöntem

Mevcut protokol, bir membranöz nefropati (MN) hayvan modelinin kurulmasını ve Kemeng Fang'ın inhibisyonunun PI3K / AKT sinyal yolunu aktive ederek MN sıçan podosit apoptozunu nasıl azalttığını açıklamaktadır.

Kemeng Fang'ın PI3K / AKT Sinyal Yolu ile Membranöz Nefropatili Sıçanlarda Podosit Apoptozunu İnhibisyon Mekanizması

Keşfedin asit maserasyon yöntemiyle tüm böbrek nefron sayısını hızlı ve güvenilir şekilde tahmin etmeyi. Bu teknik, genetik ve çevresel faktörlerin nefron gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için değerlidir.

Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Daha fazla video keşfet