Name: Ölçme ve oksijen Tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Keşfedin tam kafa oksijen tüketimi ölçüm tekniğini yaşlanma ve metabolizma değişikliklerini incelemek için. Bu yöntem fizyolojik koşullara yakın veriler sağlar ve mitokondriyal fonksiyon üzerindeki ilaç etkilerini araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Andreas Ladurner, Carla Margulis'in ve takımları kapsamlı deneysel destek için teşekkür ederiz. Caitlin Ondracek el yazması üzerine onun yorum için teşekkür. Sofia Vikstrom bize bu tekniği erken aşamalarında oluşturmada yardım için teşekkür etmek istiyorum. Biz de onun teknik yardım için olabilir Sanderhoff teşekkür ederim. LB Alman Federal Bakanlığı Eğitim ve araştırma (Infrafrontier grant 01KX1012) tarafından finanse edilmektedir. SP AXA araştırma fonu doktora sonrası Bursu ve NSFC (Grant numarası 81870900) tarafından finanse edildi. AVV QBM tarafından finanse edilmektedir.

1. araç hazırlama
Not: Bu deneme için biz bir deniz atı XF24 aygıt "adacık plakalı" kullandık. Teknik operasyon karıştırma, bekliyor ve ölçümler hem de olasılığını farklı döngüleri ölçüm bölmenin maddeler eklemek için kullanır.
<ol><li>Böylece istenilen sıcaklık ulaşmak ve kararlı kalmak için yeterli zaman makine de deneye başlamadan önce açın.</li>
	<li>Yazılım kurulumu (yönetim modu), kartuşu kalibrasyon uzunluğunu seçin (burada, 20 dk seçildi) ve istenilen sıcaklık. Not: mitokondri veya memeli doku ölçümleri genellikle yapılır iken dışarı 37 ° C'de, sinek kafa ortam sıcaklığı 25 ° C ama 31 ° c ölçüm sonuçlarını yayınladı. Bu cihazın, oda sıcaklığında en düşük sıcaklık ayarı olduğu için biz 31 ° C kullanılır. Sıcaklık 25 ° C veya daha düşük ulaşmak için makine soğuk bir odada veya 11 ° c kadar kısa bir süre önce21koyun.</li>
	<li>Yazılım, aşağıdaki iletişim kuralını kullanan: 3-2 dk bekleme – 2 dk ölçme karıştırma dak. Deneysel tasarımına bağlı olarak, A-D noktalarından seçilen ölçüm adımdan sonra enjeksiyon adımları ekleyebilirsiniz.<ol>
<li>Kalite kontrol ve bazal OCR belirlenmesi için ilk ilaç üzerinden bağlantı noktası A. enjekte önce en az üç ölçüm devir bekleyin Becker ve ark. için ayrıntılı zaman çizelgesi iletişim kuralı, lütfen bkz: başvuru 13 .
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Kartuş hazırlık
<ol><li>Kartuşu bir gün (ya da en az 4 h) öncesinde test önceden kalibre. Her şey için Calibrant (pH 7,4) 1.0 mL ekleyin ve ezelî CO2 için bir gecede ya da o daha 24 h için sulu kadar 72 h. parafilm kartuşla buharlaşma engellemek sensör kartuş plaka ve mağaza en üstünde 37 ° C'de yer.</li>
	<li>Deneysel ilaçlar de deneye başlamadan önce (taze Orta + % 2.5 glikoz) ortamda çözülür olun.</li>
	<li>Ölçmek ve aracın herhangi bir pH fark uyuşturucu enjekte sırasında önlemek için istenen sıcaklıkta pH için uyuşturucu çözüm pH ayarlayın.</li>
	<li>Damlalıklı ayrılmış enjeksiyon liman uyuşturucu çözümü. Örneğin, 1:10 elde etmek için bağlantı noktası A 77 μL kullanın seyreltme 770 μL çözüm ve daha sonra 85 μL bağlantı noktası b</li>
	<li>Kartuş makineye yüklemek ve kalibrasyon başlar.</li>
</ol>3. tabak hazırlama
Not: İki kişi aynı anda plaka hazırlamak önerilir. İki kişi başına bir tabak hazırlık süresi ~ 45-60 gerektiriyor olabilir dakika.
<ol><li>Taze hazırlanmış ayarlamak medya + % 2.5 glikoz 1 istenen pH için sıcaklık değişiklikleri N HCl. pH tarafından etkilenen değil emin olun.</li>
	<li>Bir buz kutusu hazırlamak ve buz üzerinde metal bir plaka yer.</li>
	<li>Adacık plaka (24-şey plaka) paketi açın ve medya ile Petri kabına (92 mm x 16 mm) ağları bırakın.</li>
	<li>Yerleştirici (net sıkıca kuyuda yerlerde küçük bir enstrüman) ile net bir toplamak ve yanında mikroskop ayağa yerleştirici var. Yerleştirici için bağlı net medya küçük bir damla ekleyin.</li>
	<li>(Bir hafta ya da 2 hafta eski Kanton erkekler burada kullanılmıştır) sinekler buz gibi metal plaka üzerinde sinekler yerleştirerek anestezi.</li>
	<li>Forseps kullanarak, bir sinek karın kapmak ve mikroskop altında bir petri medyada bırakın.</li>
	<li>Forseps ikinci bir çifti kullanarak, anında Başkanı yavaşça çıkarın. Yerleştirici için bağlı net ortasında yer ve baş medyada dalmış doğrulayın.</li>
	<li>Merkezi olduğu zaman 16 tanesi net başkanları. Gereksiz sıvı kuyuda yerleştirerek süre kafa kaybını önlemek için belgili tanımlık mezartaşı merkezleme önce kaldırın. Not: plaka hazırlık yöntemi kuruluş sırasında makul bir süre içinde yeterli ve dengeli veri bu numarayı verdi gibi 16 sinek kafa kullanılmıştır.</li>
	<li>Yerleştirici kullanarak, net kuyuda yerleştirin. Kafaları net altında tuzak vardır emin olun. Yavaş medya + % 2.5 glikoz (Şekil 1) 700 μL ekleyin. Her kuyuları için tekrarlayın. Not: 20 kuyu baş örnekleri sinek ve plaka başına arka plan kalibrasyonunun 4 boş kuyu tavsiye edilir. Boş wells de 700 μL arabellek + % 2.5 glikoz ile net içerdiğinden emin olun.</li>
	<li>Wells ağlar yolu ile mikroskop altında hava kabarcığı için kontrol edin. Damlalıklı yavaşça yukarı ve aşağı herhangi bir kabarcıklar kaldırmak için 1 mL damlalıklı kullanma. Okuma güvenilir bir OCR için merkezli kafa tutmak.</li>
	<li>Ve ölçüm başlangıç plaka makineye ekleyebilirsiniz.</li>
</ol>4. analiz OCR ölçümler
<ol><li>Protokol sonunda kartuşunu çıkarın.</li>
	<li>Kalite kontrolü, bağlantı noktası dolgular içinde görünür herhangi bir yemek artıkları gözlemlemek. Eğer belgili tanımlık mezartaşı protein çıkarma için Örneğin, kullanılmak üzere kartuş ve plaka (seçenek 1) atmak (seçenek 2 bakınız).</li>
	<li>Elektronik tablo dosyalarını ayıklamak için ve kalite kontrol her oksijen ve pH düzeyleri için iyi. Arka plan wells yok OCR Haritayı ve oksijen seviyesi kararlı olduğundan emin olun.<ol>
<li>Veri analizi, bazıları ilgili yazılım seçilebilir için bir algoritma kullanıyoruz. Kullanım AKOS algoritması (alt ölçüm =) ilk ve son onay arasındaki tüm ölçüm sırasında oksijen dizi düzeyleri Eğer OCR değerleri2 için iki biyolojik örnekleri arasında benzer ve son keneler oksijen düzeyleri 95 () düşük değildir mmHg) (heads'OCR bu oksijen düzeyinde, belirgin düşüktür), (Şekil 2).</li>
		<li>Bazı koşullar hızlı bir OCR oluşturmak örnek neden olur ve düşük oksijen seviyeleri 1st kene sırasında ve/veya son kene (kanda oksijen azlığı) (Şekil 3A) görüntüleyebilir. Böyle bir senaryoda, sabit algoritması gibi bir alternatif ölçüm yöntemini kullanın. Kanda oksijen azlığı, OCR çözüm oksijen seviyesinin düşük nedeniyle önemli ölçüde azalır. Bu nedenle, yanıltıcı okuma AKOS algoritması verir. Not: Daha yeni makine sabit algoritması eksik. Bu nedenle, toplam oksijen düzeyleri ayıklamak ve ilk kez başına oranı 3-5 keneler (Şekil 3) çizmek için tercih edilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. (seçenek 2) biyokimyasal analiz kafa segmentin
<ol><li>Biyokimyasal ölçmek için (metabolitleri, Proteom, vb), bir baş kesim özelliklerini ayarlamak çalıştırma gereksinimi; Ancak, herhangi bir zamanda Protokolü iptal ve plaka çıkarmak mümkündür.</li>
	<li>Bir kez plaka çıkarmak, Sigara bilenmiş forseps net bir delik açmak ve böylece serbest kayan nokta için belgili tanımlık mezartaşı kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>Bir kesim ile 1 mL damlalıklı kullanarak ipucu ve kafaları bir şişe için transfer.</li>
	<li>Hızlı bir şekilde arabellek atın ve ek-kafaları sıvı azot kıpırdama. Belgili tanımlık mezartaşı ilerideki analizleri için-80 ° C'de depolayın.</li>
</ol>

<ol><li>Wallace, D. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWallace%2C+DC+%22Mitochondrial+diseases+in+man+and+mouse%22">Mitochondrial diseases in man and mouse</a>. 283 (5407), Science. New York, N.Y. 1482-1488 (1999).</li>
<li>Gerencser, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+microplate-based+respirometry+with+correction+for+oxygen+diffusion%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantitative microplate-based respirometry with correction for oxygen diffusion.</a> Analytical chemistry. 81 (16), 6868-6878 (2009).</li>
<li>Cunnane, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+fuel+metabolism%2C+aging%2C+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">Brain fuel metabolism, aging, and Alzheimer's disease.</a> Nutrition. 27 (1), Burbank, Los Angeles County, Calif. 3-20 (2011).</li>
<li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+Y+%22Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals%3A+Untangling+the+knot%22">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot</a>. 350 (6265), Science. New York, N.Y. 1204-1207 (2015).</li>
<li>Wallace, D. C., Fan, W., Procaccio, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+energetics+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial energetics and therapeutics.</a> Annual review of pathology. 5, 297-348 (2010).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mitochondrial+dysfunction+as+a+strategy+for+targeting+tumour+cells+in+metabolically+compromised+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Induction of mitochondrial dysfunction as a strategy for targeting tumour cells in metabolically compromised microenvironments.</a> Nature communications. 5, 3295(2014).</li>
<li>Wheaton, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metformin+inhibits+mitochondrial+complex+I+of+cancer+cells+to+reduce+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Metformin inhibits mitochondrial complex I of cancer cells to reduce tumorigenesis.</a> eLife. 3, e02242(2014).</li>
<li>Picard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+structure+and+function+are+disrupted+by+standard+isolation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial structure and function are disrupted by standard isolation methods.</a> PloS one. 6 (3), e18317(2011).</li>
<li>Baker, D. J., Peleg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+Modeling+of+Mitochondrial+Metabolism+Dysregulation+during+Aging%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+biochemical+sciences%22%5BJournal%5D)">Biphasic Modeling of Mitochondrial Metabolism Dysregulation during Aging.</a> Trends in biochemical sciences. 42 (9), 702-711 (2017).</li>
<li>Zhao, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhao%2C+S+%22Regulation+of+cellular+metabolism+by+protein+lysine+acetylation%22">Regulation of cellular metabolism by protein lysine acetylation</a>. 327 (5968), Science. New York, N.Y. 1000-1004 (2010).</li>
<li>Baeza, J., Smallegan, M. J., Denu, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+Dynamics+of+Protein+Acetylation+in+Mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+biochemical+sciences%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and Dynamics of Protein Acetylation in Mitochondria.</a> Trends in biochemical sciences. 41 (3), 231-244 (2016).</li>
<li>Picard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+functional+impairment+with+aging+is+exaggerated+in+isolated+mitochondria+compared+to+permeabilized+myofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+cell%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial functional impairment with aging is exaggerated in isolated mitochondria compared to permeabilized myofibers.</a> Aging cell. 9 (6), 1032-1046 (2010).</li>
<li>Becker, L., Nogueira, M. S., Klima, C., de Angelis, M. H., Peleg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+transient+oxygen+consumption+increase+following+acute+HDAC%2FKDAC+inhibition+in+Drosophila+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Rapid and transient oxygen consumption increase following acute HDAC/KDAC inhibition in Drosophila tissue.</a> Scientific reports. 8 (1), 4199(2018).</li>
<li>Volkenhoff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+Glycolysis+Is+Essential+for+Neuronal+Survival+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+metabolism%22%5BJournal%5D)">Glial Glycolysis Is Essential for Neuronal Survival in Drosophila.</a> Cell metabolism. 22 (3), 437-447 (2015).</li>
<li>Newell, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNewell%2C+C+%22Physiological+Entomology%22">Physiological Entomology</a>. 41, 96-102 (2016).</li>
<li>Rogers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+microplate+respiratory+measurements+using+minimal+quantities+of+isolated+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">High throughput microplate respiratory measurements using minimal quantities of isolated mitochondria.</a> PloS one. 6 (7), e21746(2011).</li>
<li>Wikstrom, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+high-throughput+assay+for+islet+respiration+reveals+uncoupling+of+rodent+and+human+islets%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">A novel high-throughput assay for islet respiration reveals uncoupling of rodent and human islets.</a> PloS one. 7 (5), e33023(2012).</li>
<li>Koopman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+screening-based+platform+for+the+assessment+of+cellular+respiration+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A screening-based platform for the assessment of cellular respiration in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 11 (10), 1798-1816 (2016).</li>
<li>Kumar, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Glycolysis+and+Mitochondrial+Respiration+in+a+Zebrafish+Model+of+Dravet+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Altered Glycolysis and Mitochondrial Respiration in a Zebrafish Model of Dravet Syndrome.</a> eNeuro. 3 (2), (2016).</li>
<li>Neville, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+ex+vivo+method+for+measuring+whole+brain+metabolism+in+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">A novel ex vivo method for measuring whole brain metabolism in model systems.</a> Journal of neuroscience. 296, 32-43 (2018).</li>
<li>Neville, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+Analysis+of+Drosophila+melanogaster+Larval+and+Adult+Brains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (138), (2018).</li>
<li>Peleg, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+span+extension+by+targeting+a+link+between+metabolism+and+histone+acetylation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+reports%22%5BJournal%5D)">Life span extension by targeting a link between metabolism and histone acetylation in Drosophila.</a> EMBO reports. 17 (3), 455-469 (2016).</li>
<li>Peleg, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeleg%2C+S+%22Altered+histone+acetylation+is+associated+with+age-dependent+memory+impairment+in+mice%22">Altered histone acetylation is associated with age-dependent memory impairment in mice</a>. 328 (5979), Science. New York, N.Y. 753-756 (2010).</li>
<li>Drazic, A., Myklebust, L. M., Ree, R., Arnesen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+world+of+protein+acetylation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+biophysica+acta%22%5BJournal%5D)">The world of protein acetylation.</a> Biochimica et biophysica acta. 1864 (10), 1372-1401 (2016).</li>
<li>Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+temperature+on+the+life+span%2C+vitality+and+fine+structure+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+ageing+and+development%22%5BJournal%5D)">Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster.</a> Mechanisms of ageing and development. 5 (5), 347-370 (1976).</li>
<li>Banh, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTP1B+controls+non-mitochondrial+oxygen+consumption+by+regulating+RNF213+to+promote+tumour+survival+during+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">PTP1B controls non-mitochondrial oxygen consumption by regulating RNF213 to promote tumour survival during hypoxia.</a> Nature cell biology. 18 (7), 803-813 (2016).</li>
<li>Falkenberg, K. J., Johnstone, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylases+and+their+inhibitors+in+cancer%2C+neurological+diseases+and+immune+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Drug+discovery%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylases and their inhibitors in cancer, neurological diseases and immune disorders.</a> Nature reviews. Drug discovery. 13 (9), 673-691 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Bizim yeni teknik yaşlanma metabolik değişiklikler ve hastalık bütün sinek kafa kesimleri22bağlamında incelemek için yeni bir yaklaşım sunar. Yöntem de KDAC sodyum bütrat oksijen tüketimi etkisini incelemek için uygun olması. Biz gösterildiği lizin deacetlyase inhibitörleri (HDACs/KDACs) OCR değişiklikleri neden. Esasen, böyle inhibitörleri hedefler (Bu inhibitörleri Sınıf III uyku, Sirtuins değil etkisi) mitokondri içinde lokalize normalde olmayan24, tür ilaçlar sadece test edilebilir üzerinde bir en az doku düzeyi. Gerçekten de, çeşitli ilaçlar doğrudan beyne böylece sindirim sistemi tarafından olası işleme/değiştirme/inactivation atlayarak, enjekte edilir. Bu nedenle, bizim teknik baş kesimi nasıl böyle doğrudan etkisi uyuşturucu içine yeni bilgiler sunar.
Birkaç önemli adım vardır. İlk olarak, iletişim kuralında belirtildiği gibi iki kişinin plaka hazırlanması ile küçük bir saat, bir tabak hazırlama önerilir. Bizim deneyim, kalite ve istikrar OCR ölçümlerin zaman zamanında hazırlanan daha iyi. Ne zaman çok uzun sürdü, istikrarlı OCR daha kısa süre yanı sıra düşük OCR alıcı kuyu oluşumu artmaktadır. İkinci olarak, kalite kontrol yapmak ve çeşitli örnekleri arasında deneysel koşullar benzer (pH, oksijen seviyesi) olduğundan emin olmak önemlidir. Son olarak, önemli bir adım doğru algoritma örnekleri analiz etmek için seçmektir. Biz gösterildiği varsayılan AKOS algoritma oksijen yüksek oranları13tüketilen örnekleri yanıltıcı ve bazen karşıt hesaplamalarda vermiştir. Biz bu nedenle oksijen düzeyleri için ham veri kontrolü ve elde edilen OCR karşılaştırarak önemini vurgulamak.
Şu anda, bu teknik ile bazı sınırlamaları vardır. Oda sıcaklığında makine ilâ 31 ° (Bu en az ölçüm sıcaklığı makine oda sıcaklığında ise) C, ısıtır sinek kafa25bir stres durumu temsil. Bu ancak 25 ° c ölçümleri sağlayacak bir soğuk oda makine yerleştirerek üstesinden gelebilir ve dolayısıyla sinek başkanları için olası ısı stres olmadan. Son rapor böylece sinekler 25 ° C21OCR kaydını etkinleştirme 11 ° C'de makine yerleştirerek göstermiştir. Yine de, sinek kafa ayrılık oda sıcaklığında yapılmalıdır. Ayrıca, sıcaklık derecesi fluctuations zorlu denetim pH değişiklikleri yapmak ve bu nedenle oldukça benzer deneysel kurulumları kullanarak OCR fizyolojik koşullar/ilaç etkisini test etmek için tavsiye edilir. Buna ek olarak, katkı oksijen tüketimi olmayan-mitokondrial-bağımsız mekanizmalar tarafından kurulan26henüz olmamıştır. Sinek kafasına verimli çeşitli solunum inhibitörleri kullanarak, böyle mitokondrial Sigara oksijen Tüketim oranları kurmak mümkün olacaktır.
Bu çeşitli memeli maladies değişiklikler enerji metabolizması ile karakterize dikkat çekicidir. Bunlar arasında kanser gibi her iki metabolik azaltma Alzheimer hastalığı gibi veya metabolik tarafından karakterize hastalıklar uyumlanma. İlginçtir, KDAC inhibitörleri Alzheimer hastalığı ve kanser tedavi27için kullanılır. Hangi KDAC tarafından inhibitörleri ve tedavi edici yönü ulaşmada vardır kesin mekanizmaları belirsiz kalırken, bizim teknik verilerden böyle inhibitörleri metabolizma modüle roman kavramı destekler.
Özet olarak, bu yöntem genel oksijen tüketimini ölçme vivo içinde oranları ve daha doğru bir şekilde izole mitokondri protokolleri12' gözden genel metabolizma üzerinde uyuşturucu etkileri görüntüler için değerlidir. Örneğin, bu yöntemi, yerine önceki teknikleri, elde edilen sonuçlar yaş ilişkili metabolik değişmezlik KDAC tedavi üzerine yeni trendleri karıştığı. Ek iş en iyi duruma getirmek için gerekli ise deneysel koşullar için kafaları uç, bizim teknik ve uygun analiz ile birlikte tüm yaşam dokuları bağlamında mitokondrial aktivitesinin daha fazla aydınlatma neden olabilir.

Düzenlenmiş metabolik aktivite hücreleri yaşama ve sağlıklı fonksiyonu bir doku için önemlidir. Kuralsız metabolik aktivite kapsamlı başlangıçlı ve ilerleme çeşitli maladies1bağlanacak şekilde gösterilmiştir. Örneğin, düşük metabolik aktivite daha önce Alzheimer gibi nörodejeneratif hastalıklarda tanımlanmıştır ve yaş ilişkili bellek bozukluğu2,3. Ayrıca, mitokondrial disfonksiyon nedensel yaşlanma süreci4,5' te yer olduğuna inanılıyor. Öte yandan, yüksek mitokondrial ve metabolik oranları nerede tumorigenesis7mitokondrial inhibitörleri kullanımı azaltılmış kanser hücreleri6' da tarif edildi.
Metabolik aktivite bir okuma mitokondri oksijen tüketim oranı (OCR) olduğunu. İlginçtir, bu tür okuma öncelikle izole mitokondri elde edilir veya hücreleri, böylece ne literatürde açıklanan çoğunluğu fizyolojik devlet benzemez bir okuma ağırlıklı. Ancak, bu teknik bazı dezavantajları vardır. İlk olarak, mitokondrial tecrit Protokolü ilgili bir yapay doku genç karşı büyük doku9dan izole mitokondri karşılaştırırken olabilir onun bütünlük8, zarar verebilir. Ayrıca, yalıtım süreç uzun ve mitokondriyal işlev9,10,11düzenleyen ilgili protein ardından değişikliklerin kaybolmasına neden. Ayrıca, izole mitokondri sürekli olarak tüm doku metabolik oranları12,13temsil etmemektedir gösterilmiştir. Böyle hücresel biyolojik karmaşıklık olarak görülebilir, 'bütün, parçaların toplamından daha büyüktür', Yani, mitokondri izole zaman onların metabolizma hızı ile karşılaştırıldığında karmaşık hücre içinde farklı metabolik oranları görüntüleyebilir.
Hücreleri izole mitokondri daha daha iyi bir OCR okuma sunabilir iken, bütün bir doku hücre-hücre iletişim bağlamında kaybolabilir. Örneğin, beyindeki nöronların metabolik aktivite komşu Gliyal hücreler14metabolik faaliyete son derece bağımlı olur. Bu nedenle, tüm doku veya tüm organizmalar OCR araştırmak için yeni teknikler kurulması başlangıçlı ve çeşitli hastalıkların ilerleme için daha anlayışlı kanıtlayabilir.
Son zamanlarda, yeni teknikler bu sorunlar ve OCR ölçüm bütün doku, segment veya canlı organizmalar etkinleştirmek için ortaya çıkmıştır. Örneğin, son bir çalışma ile respirometer15permeabilized fiber yaklaşımı kullanarak bir böceği uçuş kas Oksijen ölçüm bildirdi. Yeni makineleri, mikro-basınçlırespirometri için OCR pankreas adacıkları16,17ölçümü izin. Sonuç olarak, bu teknoloji, OCR ölçüm tüm solucanlar18 ve Zebra balığı19sağlar bildirilmiştir. Ancak, sindirim bariyer varlığı çeşitli ilaçlar OCR değişiklikler bağlamında test etmek için bir sorun teşkil. İlginçtir, son raporları Neville ve arkadaşları ile iyi plaka20,21tek drosophila larva beyin ölçmek için yeni bir teknik göstermiştir.
Bu çalışmada, tüm yaşam ve mobil olmayan Drosophila22tüm OCR ölçümü etkinleştirmek için benzer bir kurulum kullandık. Bu teknik sindirim sistemi bariyer13,22geçmek zorunda kalmadan tüm segment metabolik aktivite üzerinde çeşitli ilaçlar etkisini ölçme ikincil bir avantaj sunuyor. Örneğin, daha önce bu lizin deacetylase inhibitörü (KDACi), enjeksiyon bir uyuşturucu inanılan bir geliştirilmiş anılar oluşumu23' sonuçlandı beyin, epigenetik yönteminde değiştirmek için doğrudan gösterilmiştir. Ancak, bizim roman tekniği kullanarak, hangi nöronal faaliyette tek başına bir faktör olabilir KDAC inhibisyon OCR, hızlı bir artış sonuçlandı keşfetti. Bizim iletişim kuralı çeşitli ilaçlar, genetik manipülasyon veya fizyolojik Devletler (hastalık, yaşlanma) etkisi üzerinde OCR bir bütün kafa bağlamında değerlendirmek için basit ve yeni bir yöntem sağlar.

<table><tbody><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8644</td><td>D-(+)-H2O içinde 100 g/L glikoz çözeltisi, steril filtreli</td></tr><tr><td>XF testi Orta</td><td>Agilent</td><td>103575-100</td><td>Denizatı XF DMEM Ortamı, pH 7.4</td></tr><tr><td>Sodyum bütirat</td><td>Merck</td><td>817500</td><td>XF tahlil tamponunda çözünmüş</td></tr><tr><td>Denizatı XF24/e24 analizörü</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>XF24/e24 Hücre Dışı Test Kiti</td><td>Agilent</td><td>100850-001</td><td>Kartuş</td></tr><tr><td>XF24/e24 Adacık Yakalama Mikroplakaları</td><td>Agilent</td><td>101122-100</td><td>Plakalı Denizatı</td></tr><tr><td>Yakalama Ekranı Ekleme Aracı</td><td>Agilent</td><td>101135-10</td><td>Yerleştirici</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Sarstedt</td><td>821,472</td><td>Petri kabı 92 x 16 mm</td></tr></tbody></table>

Ölçme ve oksijen tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Düzenlenmiş metabolik etkinliğini oturma hücrelerinin normal çalışması için önemlidir. Nitekim, değiştirilmiş metabolik aktivite nedensel kanser, diyabet, ateş ve bir kaç isim için yaşlanma ilerleme ile bağlantılıdır. Örneğin, mitokondrial etkinlik, hücrenin metabolik güç merkezi, değişimler birçok gibi hastalıklar nitelendirmiştir. Genel olarak, mitokondri ve oksijen Tüketim oranları mitokondrial faaliyet güvenilir bir okuma kabul edildi ve bu çalışmaların bazı ölçümlerde izole mitokondri veya hücreleri temel alan. Ancak, bu koşullar bütün doku karmaşıklığı temsil etmeyebilir. Son zamanlarda, biz tamamen izole sinek kafa dan oksijen Tüketim oranları dinamik ölçüm sağlar yeni bir yöntem geliştirdik. Bu yöntemi kullanarak, düşük oksijen Tüketim oranları tüm baş segmentin yaşlı genç karşı sinekli kaydettik. İkinci olarak, lizin deacetylase inhibitörleri hızla oksijen tüketimi bütün başından alter keşfettim. Bizim roman tekniği bu nedenle ortaya çıkarılması, yeni özellikler metabolik oranları etkisi olabilir çeşitli ilaçların yardımcı olabilir. Ayrıca, bizim yöntemi daha çok fizyolojik Birleşik benzeyen bir deneysel kurulumunda metabolik davranış daha iyi anlaşılmasını verebilir.

Yüksek kaliteli OCR ölçüm kayıt yeteneği başından (Şekil 1) net ortasında merkezleme dayanır. Bu sensör daha büyük olan daha yeni XFe24 makineye göre oldukça küçük oksijen sensörü spot XF24 makine için önemlidir. Daha önce gösterilen, merkezleme kafaları genç sinekler13' te sabit bir OCR için en az 20 ardışık ölçümleri görüntülemek.
Makinelerin kullanılması bir kritik yönü doğru analiz uygulamaktır. Bu deneyler sırasında oksijen seviyesini kontrol etmek için tavsiye edilir. Her 2 dk ölçüm 10 alt ölçümleri (keneler) bölünmüştür. Bir de 16 sağlıklı kafalı genellikle 140-170 (mmHg) ilk kene için bir oksijen kısmi basınç (pO2) görüntüler. İlk örnekte, biz genç orta yaştan sinek kafa (Şekil 2A ve 2B) vs göre. Oksijen seviyesi daha hızlı orta yaşlı kafasına bırak, gözlenen fark küçük iken (Şekil 2A). Ayrıca, oksijen düzeylerinin aralığı ile 165 120 son onay sırasında ilk kene sırasında koşulları arasındaki benzer. Böyle bir durumda, güvenilir bir şekilde oksijen düzeyi açılan genç karşı orta yaştan başkanları (2B rakam) arasında aynalar OCR (pmol/dak)2otomatik olarak oluşturmak için AKOS algoritmasını kullanmak için tercih edilir. Not, makine tarafından analiz programı AKOS algoritma otomatik olarak seçer.
Ancak, bizim gözlem dayalı, AKOS algoritması kullanılarak otomatik olarak yanıltıcı verebilir, eğer değil tam tersi doğru OCR için sonuçlar. Bu tür eserlerin kanda oksijen azlığı13,22ulaştığı yüksek alıcı bir örnek koşullarda oluşturulabilir. Örneğin, sodyum bütrat (SB), bir KDAC inhibitörü eklenmesi geçici oksijen düzeyleri (Şekil 3A) dinamikleri değiştirir. Oysa araç denetimleri sırasında ilk ve son keneler oksijen sürekli düzeylerini görüntülemek, SB yanı sıra oksijen seviyesi önemli ve geçici damla bu keneler (Şekil 3A) neden olur. SB tek başına hiçbir başkanları (veri gösterilmez) nerede eklenir arka plan Wells, oksijen seviyesi değiştirmez. Verileri SB oksijen tüketimi artar kavramı destekler. İlk kene koleksiyonu (12 saniye ilk kene ölçüm aşamasında kaydedilir kadar) ertelendiği gibi ilk veri noktası zaten SB tedavi wells düşüktür. Bu nedenle, bu HDAC inhibitörü eklenmesi aşağıdaki oksijen tüketimi erken değişiklikleri yakalamak zordur. Ayrıca, SB tedavi örnekleri oksijen düzeyleri son keneler topluluğu tarafından belirtildiği gibi zaten düşük düzeylere (kanda oksijen azlığı) azaltılır. Kanda oksijen azlığı kendi oksijen tüketimini son dilimleri (Şekil 3A) başları yavaş. AKOS hesaplama tüm keneler dikkate alır ve bir anoksik duruma yoksayar çünkü yanıltıcı bir OCR oluşturur. Nitekim, olmayan normalleştirilmiş AKOS OCR düzeyleri göster küçük bir (Veh/SB) (3B rakam) bağlantı noktasının enjeksiyon (kesik çizgi) göre değişen.
AKOS üzerinde dayalı öncesi enjeksiyon ölçüm OCR düzeylere normalize OCR çok benzer düzeyde öncesi ve does değil çekmek oksijen düzeyi değişiklikleri (Şekil 3A) bağlantı noktası A, enjeksiyon sonrası ortaya koymaktadır. Bu şartlar altında daha çok modelleri/OCR ve oksijen düzeyi değişiklikleri benzeyen sabit algoritma (Şekil 3 c) önerilir. Sonuç olarak, alan sabit algoritma ölçüm ortaya artan bir OCR SB tedavi (Şekil 3 c) üzerine normalleştirilmiş.
SABİT algoritması yokluğu ile yeni makine bir dezavantajıdır. Bu nedenle, son derece örnek/tedavi tüketen kullanıldığı deneyler, bu el ile OCR ölçümleri hesaplamak için tavsiye edilir ve oksijen azalmaya hesaplama 3-5 keneler her ölçüm birim zamanda ilk seviye.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58601/58601fig1.jpg"> Resim 1 . Bir de erkek sinek 16 tane - hafta eski başkanları içeren örneği. Kafaları bir net altında ortalanmış ve medya kayan. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58601/58601fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58601/58601fig2.jpg"> Resim 2 . OCR ölçüm karşılaştırma bir - hafta eski sinek kafa (genç) arasında temsili örneği ve dört - hafta eski sinek kafa (orta-yaş). (A) oksijen düzeyleri için üç farklı ölçümleri gösterilir; Her 2 dk ölçüm on alt ölçümleri (keneler) bölünmüştür. (B) (a) bir miktar. Orta yaş örnek düzeyde biraz daha düşük olmasına rağmen ilk ve son keneler düzeyde benzer. Bir miktar oksijen düzeyleri azalma eğimi, OCR düzeyleri oluşturmak için kullanılır. Yukarıda açıklanan22, % 10- genç sinek yüksek orta yaşlı sinekler OCR var. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58601/58601fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58601/58601fig3.jpg"> Şekil 3 . OCR değişiklik sodyum bütrat (SB) genç sinek başlarını tarafından örneği. (A) oksijen seviyesi 15 mM SB eklenmesi aşağıdaki yedi ölçümleri kaydedildi. Kesikli çizgi enjeksiyon uyuşturucu (veya araç) bağlantı noktası A. işaretler. Keneler 1 ve 10 oksijen düzeyleri (mavi), kontrol grubunda sabit kalırken belirtmek gerekirse bu keneler sırasında oksijen düzeyleri geçici şunlardır (altı ölçüler enjeksiyon takip) azaltılmış SB tedavi örnekleri (turuncu). Buna ek olarak, oksijen düzeyleri azalma SB tedavi örnekleri son keneler sırasında önemli ölçüde azalır. N = 3 (B) grubu [sol] sigara normalleştirilmiş OCR düzeyleri başına AKOS algoritma hesaplanır. Hesaplama yanlış önce ve sonra bağlantı noktası bağlantı noktası A. (C) [sol] 'Sabit' algoritma hesaplama (A) olmayan normalleştirilmiş OCR gösteren enjeksiyon önce ölçüm için OCR A. [sağ] normalleştirme tarafından SB enjeksiyon OCR benzer düzeyde gösterir . Burada, OCR yakından oksijen kullanımı SB tedavi üzerine kafa geçici artış temsil eder; [Sağ] A. hata çubukları bağlantı noktasının enjeksiyon önce ölçüm için OCR normalleştirme S.E.M. tüm grafiklerde gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58601/58601fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Metabolik oranları değişiklikler ölçme ilerleme çeşitli hastalıklar ve yaşlanma anlamak için merkezi bir noktada bulunuyor. Burada, daha yakından fizyolojik devlet benzer ve mitokondrial etkinliği değiştirmek roman uyuşturucu açığa yardımcı olabilir tüm baş oksijen tüketimi ölçmek için bir roman tekniği mevcut.

Ölçme ve oksijen Tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Bu yöntem metabolizma alanında temel soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir, nasıl metabolik aktivite yaşlanma sürecinde değiştirilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, klasik mitokondriyal izolasyona kıyasla doğal ve fizyolojik duruma çok benzeyen verilere sahip sağlam bir vücut segmentinin kullanılmasıdır. Prosedürü gösteren Anuroop ve Annika, benim laboratuvarda yüksek lisans öğrencisi olacaktır.Protokolü başlatmak için, deneye başlamadan bir saat önce makineyi açın, böylece istenilen sıcaklığa ulaşmak ve sabit kalmak için yeterli zaman vardır. Daha sonra, yazılım kurulumunda, yönetim modu altında, kartuş kalibrasyonunun uzunluğunu ve istenilen sıcaklığı seçin. Ardından, aşağıdaki protokolü girin:Deneysel tasarıma bağlı olarak, seçilen bir ölçüm adımından sonra A'dan D'ye enjeksiyon adımları ekleyin.Kaliteyi ve bazal OCR'nin belirlenmesini kontrol etmek için, protokolü a.Pre-calibratile bağlantı noktası üzerinden ilk ilacın enjeksiyonuna ayarlamadan önce en az üç ölçüm döngüsü için ayarlayın, kartuşun testten en az dört saat önce, her kuyuya 1,0 mililitre camil ekleyerek ve sensör kartuşunu plakanın üzerine yerleştirin. Buharlaşmayı önlemek için 24 saatten fazla nemlendirmek için planlanmışsa kartuşun üzerini Parafilm ile kapatın. Kartuşu bir gecede CO2 olmadan 37 derecede saklayın.Daha sonra, deneysel ilaçların taze ortamda ve %2,5 glikozda iyice çözünmesini sağlayın. İlaç çözeltisinin pH'ını istenilen sıcaklıkta aracın pH'ına göre ölçün ve ayarlayın. Pipet ilaç çözeltisi içine ayrılmış enjeksiyon portu.Daha sonra kartuşun makineye yüklenmesini ve kalibrasyona başlayabilirsiniz. Taze hazırlanmış ortam artı %2,5 glikozu istenilen pH'a normal bir HCl ile ayarlayın. Sonra, bir buz kutusu hazırlayın ve buz üzerine metal bir plaka yerleştirin.Göz bebeği plaka paketini açın. 16 milimetre Petri çanak tarafından medya ağları batırın. Kesici ile bir ağ toplayın ve inserter mikroskop yanında stand up var.Kesici uçlayıcıya bağlı ağa küçük bir ortam damlası ekleyin. Daha sonra, buz gibi metal bir plaka üzerine yerleştirerek sinekanestezi. Forceps kullanarak, bir sinek karın kapmak ve mikroskop altında bir Petri kabında medya batırın.İkinci bir çift forceps kullanarak, yavaşça sinek başını çıkarın. Başlığı kesiciye bağlı ağın ortasına yerleştirin ve başın ortama daldırıldığından doğrulayın. Kuyuya yerleştirirken kafaları kaybetmemek için kafaları ortalamadan önce gereksiz sıvıyı çıkarın.İnternette 16 kafa olduğunda, onları merkeze ver. Kesici yi kullanarak, ağı kuyuya yerleştirin. Kafaları net altında sıkışıp olduğundan emin olun ve yavaş yavaş medya 700 mikrolitre artı% 2.5 glikoz ekleyin.Arka plan için kullanılan boş kuyuların tamponun 700 mikrolitresi artı %2,5 glikoz içeren bir ağ içerdiğinden emin olun. Mikroskop aracılığıyla ağların altındaki hava kabarcıkları için kuyuları kontrol edin. Pipet yavaşça yukarı ve aşağı herhangi bir kabarcıklar kaldırmak için bir milimetrelik pipet kullanarak.Kafaları güvenilir bir OCR okuması için ortalayın. Sonra makineye plaka ekleyin ve ölçüm başlar. Protokolün sonunda, kartuşunu çıkarın.Port dolgularında görünür artık olmadığını görsel olarak doğrulayın. Daha sonra, kafaları protein çıkarma için kullanılmaz ise kartuş ve plaka atın. Analiz den önce herhangi bir anormal kuyu tespit etmek için oksijen ve pH düzeylerine bakmayı unutmayın.Ayrıca, oksijen düzeylerine göre uygun oksijen tüketim oranı hesaplaması seçmek önemlidir. Protokolün yapıldıktan sonra orta yaş kafalarının oksijen seviyesinin genç sinek kafalardan daha hızlı düştüğü gözlenmiştir. Oksijen düzeylerinin aralığı koşullar arasında benzer olduğunda, oksijen tüketim hızını otomatik olarak oluşturmak için AKOS algoritmasını kullanmak daha iyidir veya genç ve orta yaş kafaları arasındaki ölçüm sırasında oksijen seviyesi değişikliklerini güvenilir bir şekilde yansıtan OCR.Sodyum bütirat eklenmesi, veya SB, Bir KDAC inhibitörü, geçici oksijen düzeylerinin dinamikleri değiştirir. Araç kontrolleri ilk ve son keneler sırasında sabit oksijen seviyeleri gösterirken, SB ilavesi bu kenelerdeki oksijen seviyelerinde önemli ve geçici bir düşüşe neden olur. AKOS hesaplaması tüm keneleri göz önünde bulundurup anoksik durumu göz ardı ettiği için, normalleşmemiş AKOS tabanlı OCR seviyelerinde gözlendiği gibi yanıltıcı bir OCR oluşturur ve bu da A.The bağlantı noktasının enjeksiyonu yla çok az değişiklik gösterir ve OCR ve oksijen seviyesi değişikliklerini daha yakından modelleyen ve andıran sabit algoritma, SB tedavisi üzerine artan bir OCR'yi ortaya çıkarır.Bu yordamı denerken, tek bir plaka hazırlamak için göreceli kısa bir süre sağlamak için birlikte iki kişi ile çalışmak önemlidir. Bu prosedürü takiben, Batı Blot ve kütle spektrometresi gibi diğer biyokimyasal yöntemler moleküler mekanizmalar ile ilgili soruları cevaplamak için yapılabilir, örneğin, bu Orta metabolik değişiklikler.

measuring-interpreting-oxygen-consumption-rates-whole-fly-head

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Metabolik bozukluklar, insanlarda en yaygın hastalıklardan biri arasında yer alıyor. Genetik uysal bir model organizma D. melanogaster metabolizmasını düzenleyen yeni genleri tanımlamak için kullanılabilir. Bu çalışma da CO 2 üretimini ölçerek sinekler metabolizma hızı okuyan sağlayan nispeten basit bir yöntem tarif etmektedir.

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Bu yazıda, oksijen tüketimi yüksek çözünürlüklü basınçlırespirometri Drosophila permeabilized thoraxes içinde kullanarak ölçmek için bir yöntem açıklanır. Bu teknik doku klasik mitokondrial yalıtım tekniği için karşılaştırıldığında çok az bir miktar gerektirir ve elde edilen sonuçlar daha fizyolojik ilgilidir.

Doku çok az miktarda kullanarak Drosophila Permeabilized liflerinin mitokondrial oksijen harcama ölçme noktalar

Biz oksijen tüketimi ve Drosophila melanogaster larva ve yetişkin Beynindeki hücre dışı asitleştirme ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bir metabolik analyzer adapte ve en iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralı ile kullanılmaktadır. Mikro-doku bağlar bu protokolü kritik bileşenidir ve tasarlanmış ve bunların kullanımı bu analizi için özel olarak yaratılmıştır.

Drosophila melanogaster Larval ve yetişkin beyin metabolik Analizi

Mitokondrial solunum organizmalar hayatta kalmak için önemlidir; Bu nedenle, oksijen tüketim oranını mitokondrial sağlık mükemmel bir göstergesidir. Bu iletişim kuralı, Bazal ölçmek için piyasada bulunan bir respirometer nasıl kullanılacağını açıklar ve maksimal oksijen tüketimi oranlarında yaşa, sağlam ve serbestçe hareketli Caenorhabditis elegans.

Oksijen tüketimi oranlarında sağlam Caenorhabditis elegans ölçümü

Oksijen tüketim hızı (OCR), mitokondriyal fonksiyon için yaygın bir vekildir ve farklı hastalık modellerini incelemek için kullanılabilir. Yetişkin farelerden akut striatal dilimlerdeki OCR'yi doğrudan ölçmek için bir Seahorse XF analizörü kullanarak yeni bir yöntem geliştirdik ve bu da fizyolojik olarak diğer yöntemlerden daha alakalı.

Yetişkin Farelerden Akut Striatal Dilimlerde Oksijen Tüketim Hızının Ölçülmesi

Kulometrik respirometri, küçük organizmaların metabolik hızını ölçmek için idealdir. Bu çalışmada Drosophila melanogaster için uyarlandığında, ölçülenO2 tüketimi, önceki çalışmalarda vahşi tip D. melanogaster için bildirilen aralık içindeydi. Daha küçük ve daha az aktif olan CASK mutantları tarafından sinek başınaO2 tüketimi, vahşi tipten önemli ölçüde daha düşüktü.

Kulometrik Mikrorespirometri Kullanılarak Drosophila melanogaster'de O2 Tüketiminin Ölçülmesi

Burada, fotoafinite etiketlemesi kullanarak küçük molekül bağlayıcı proteinlerin tanımlanması için bir yöntem açıklıyoruz. Bu tekniğin avantajı, hedef proteinlerin bağlanma ve kovalent etiketlemesinin canlı hücresel ortamda gerçekleşmesi ve hücre lizizi üzerine doğal protein yapısını ve bağlanma koşullarını bozma riskini ortadan kaldırmasıdır.

Canlı hücre fotoafinite Etiketleme tarafından Yerli Hücresel Ortamında Küçük Molekül bağlayıcı proteinlerin belirlenmesi

RNA N 6 -methyladenosine (m 6 A) değişiklikleri ölçmek için bir değiştirilmiş Northern lekeleme yöntemi tarif edilmektedir. Geçerli yöntem çeşitli deneysel tasarımlar altında çeşitli RNA'lar modifikasyonlar ve kontrolleri tespit edebilir.

RNA ölçülmesi için bir yöntem<em&gt; K</em<sup&gt; 6</supHücre ve dokularda&gt; -methyladenosine Değişiklikler

Biz demir içeriği bitki dokularında Renkölçer Prusya Mavisi yöntemini kullanarak ölçmek için basit ve güvenilir bir iletişim kuralı mevcut.

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

İnsan ve hayvan diş minesini karbonat stabil karbon ve oksijen izotop analizi bireysel diyet ve çevresel yeniden inşa için bir proxy olarak kullanılmıştır. Burada ayrıntılı bir açıklama sağlamak ve görsel belgeleri toplu ve sıralı diş mine örnekleme yanı sıra Önarıtma arkeolojik ve paleontolojik örnekleri.

Örnekleme ve diş minesini Önarıtma kararlı karbon ve oksijen izotop analizi için karbonat

Keşfedin tam kafa oksijen tüketimi ölçüm tekniğini yaşlanma ve metabolizma değişikliklerini incelemek için. Bu yöntem fizyolojik koşullara yakın veriler sağlar ve mitokondriyal fonksiyon üzerindeki ilaç etkilerini araştırmaya yardımcı olur.

Ölçme ve oksijen Tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek

Daha fazla video keşfet