3D dinamik kültür sistemi ile bir çok katmanlı mezenkimal kök hücre levha inşaatı

Kök hücre tedavisi yaygın birçok hastalık için umut verici bir tedavi olarak bildirilmiştir. Ve hücre sayfası teknikleri, hücrenin tutulma ve hedefler içinde hayatta kalma geliştirmek için geliştirilmiştir, çok. Hücre levhaları yapımı sırasında, yetersiz beslenme kaynağı kök hücre nin işlevinin kaybı için önemli bir sorun olmaya devam etmektedir, ve yetersiz bir kök hücre özelliği nihayet in vivo terapötik etkileri etkileyecektir.

Mevcut çok katmanlı kök hücre sac ürün hazırlamak için amacımız, ekibimiz hücreselleştirilmiş polen, perikard ve hücre levha iskele geliştirdi. İskeleye göre çok katmanlı hücre marşı hızlı bir şekilde nonapeptid Hidrojen ile inşa edilecek ve kök hücrenin beslenme kaynağını in vitro sağlamak için dinamik perfüzyon sistemi kullanılır. Kurutulmuş dbp iskele almak ve siyah tabanın merkezine koyun.

DBP iskelesi üzerine beyaz bir gerilim halkası koyun ve doku taşıyıcısı yapıştırın. DBP iskelesinin doku taşıyıcısında tamamen sabit olduğundan emin olun. DBP iskeleüzerinde 100 mikrolitre kültür ortamları ekleyin.

İskeleyi 37 santigrat derecelik kuvöze koyun ve 15 dakika bekletin. Hücreleri kuvözden çıkarın, kültür ortamlarını kültür kabından çıkarın, hücreleri iki mililitre sıcak PBS ile nazikçe yıkayın. Kültür çanaktan tüm PBS çıkarın ve hiçbir sıvı kalır emin olun.

Çanak için% 1.25 tripsin çözeltisi için iki mililitre ekleyin ve üç dakika boyunca hücreleri kuluçka. İki mililitre kültür ortamı ekleyerek tripsin etkisini durdurun. Hücreleri yavaşça yıkayın.

Hücre süspansiyonlarını yeni bir 15 mililitrelik santrifüj tüple aktarın. Hücreleri 220 kat yer çekiminde beş dakika santrifüj edin ve hücre tortularını elde edin. Süpernatant'ı çıkarın ve hücre tortularını yok edin.

Üç mililitre %10 sakaroz çözeltisi ile hücreleri tekrar askıya alın. Aspirate 10 mikrolitre hücre süspansiyon, ve içerik hücre numarası bir hemositometre okur, üç milyon hücre ayıklamak ve yeni 1.5 mililitrelik santrifüj tüp transfer. Hücreleri 220 kez kare kökte beş dakika santrifüj edin, süpernatantları tamamen çıkarın ve hücrelerin tortularını elde edin.

20 mikrolitre %10 sakaroz çözeltisi hazırlayın. Hücreleri yavaşça yeniden askıya alın ve tek tip bir süspansiyon elde edin. Süspansiyon üstüne 20 mikrolitre peptid hidro jel ekleyin yavaşça peptid hidro jel karıştırın, ve T ile hücreleri süspansiyon, DBP iskele çıkarmak, doku taşıyıcı bırakarak, ve sonra yavaşça bir T.Aspirate karışımı karışımı ile kalkülüs median aspire ve eşit DBP iskele eklemek.

Doku taşıyıcının altına bir mililitre kalsiyum ekleyin. Yavaşça kültür çanak dört mililitre kültürel ortam ekleyin ve daha sonra hücre sayfası ortaya. Hücreleri iki saat boyunca kuvöze koyun.

Dinamik perfüzyon sistemi bir perfüzyon kültür konteyner gaz alışverişi recrement ve bir cam şişe içerir. Montajlar, şekil gösterildiği gibi dinamik perfüzyon sistemleridir. Cam şişe iki hidro mililitre kültür medyans ekleyin.

Hücre sayfasını kültür kabının odasına yerleştirin, konteynerin içine üç mililitre kültür medyanları ekleyin, dinamik perfüzyon sistemlerini kuvözlere yerleştirin ve pompalamaya başlayın. Bipozitif recumbent kültür konteyner açın. Kültür kabından hücre kağıdını çıkar ve kültür kabına koy.

Doku taşıyıcı hareketsiz ve siyah tabanından beyaz gerilim halka ayırmak için başka bir iki forceps kullanmak için bir forceps kullanın. Son olarak, çok katmanlı hücre sayfasını edinin. DBP iskelesi saydamdır.

SEM resells kolejler yakalanan ve bileşenleri tamamen ayrılmış olduğunu gösterir. Hücre tabakaları kısa koruma için forseps ile elde edilebilir ve tutulabilir. Bu hücre tabakası 1.5 mililitrelik silindirik tüpe aktarılabilir.

Örneğin bir model olarak BMFC's kök hücre marker CD 9O ve CD 29 için son derece pozitif hücre gösterimleri ile başlayan. Hücre yapımından sonra BMFC hücre sayfası bırakarak CD 90 ve CD 29 yüksek genişleme düzeyleri kalır. Çok katmanlı hücre yapısının oluşturulması protokolün kritik adımıdır.

Ph değeri SA'dan nötre değiştiğinde tava süresi dört hidro jel gerektirir, bu nedenle, yüzey iyonlarını çıkarmak için hücreyi sakaroz çözeltisi ile yıkamak önemlidir. Ayrıca, hücre süspansiyon ve panthihydrogel hacim oranı geçici çok katmanlı yapısı oluşturmak için iyi bir arkadaş değildir. 3D kök hücre yapısının oluşumundan sonra, dinamik perfüzyon sisteminin çok katmanlı yapının stabilizasyonu ve kök hücre viabilities korumak için önemli olduğunu göreceksiniz.

Kültür medyan dinamik infiltrasyon çok katmanlı yapı içinde hücre bağlamında çoğalmak ve ekstrapolate kök hücrelerin kolaylaştırmak da dinamik kültür termometreler farklı kök hücre türlerine göre ayarlanmalıdır.