Name: Fare beynindeki Locus Coeruleus lokalizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Keşfedin fare beyninde Locus Coeruleus lokalizasyonu için kesit hazırlama ve immünohistokimya protokolünü. Bu yöntem protein ekspresyonu ve metal homeostazı analizlerini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Abigael Muchenditsi fare koloni bakımı için teşekkür ederim. ABD Enerji Bakanlığı, bilim Office, Office temel Enerji Bilimler, sözleşme numarası altında tarafından desteklenen Argonne Ulusal Laboratuvarı Gelişmiş foton kaynak kullanımı: DE-AC02-06CH11357. Biz Olga Antipova ve Dr. Stefan Vogt kullanıcı desteği ve gelişmiş foton kaynağında yardım için teşekkür ederiz. Bu eser SL için Ulusal Sağlık Enstitüsü grant 2R01GM101502 tarafından finanse edildi.

Çalışmalar hayvanların Johns Hopkins Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı (ACUC) iletişim kuralı numarası M017M385 tarafından onaylanmış.
1. beyin Dilimleme
<ol><li>Hareketsiz için % 3 isoflurane uygulama tarafından fareler anestezi.<ol>
<li>Bir pamuk topağı isoflurane damlaları ile ıslatın ve bir 15 mL microcentrifuge tüpü yerleştirin. Hayvanın burun tüp içine yerleştirin ve isoflurane nefes sağlar. Anestezi derinliği için yanıt-e doğru ayak parmağı-çimdik eksikliği tarafından kontrol.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvan sırtında yerleştirin ve yoluyla onun kol ve bacaklar bir T iğne ile onun karın erişimine süre hareketsiz.</li>
	<li>Ekran alıntısını karın deriden yaparak hayvan Cerrahi makas ile kesme ve göğüs bölgesinde deri yoluyla kesti. Cilt T iğne kullanarak pin. Peritoneal membran Toraks kadar çiğnemek. Kalp, göğüs boşluğuna çatlama ve diyafram kesme maruz.</li>
	<li>Kan hayvan dışarı akışını sağlamak için sağ atrium kesti. Bir 10 mL şırınga ile 25'lik iğne sol ventrikül yerleştirin ve fosfat tamponlu tuz (PBS) ile 10 mL sıvı. Not: Bu çözüm sistemik dolaşım ve çıkış akış sağlar Sağ atrium sayesinde.</li>
	<li>10 mL şırınga çıkarıp 60 mL şırınga bağlı 25 lik bir iğne yerleştirin. Buz soğuk %4 paraformaldehyde (PFA) 50 mL ile sol ventrikül arasında sıvı.<ol>
<li>% 10 PFA H2O çözümde sulandrarak ve nihai % 4 İngiltere'de yılın çözüm 4 ° C'de soğuk buz soğuk % 4 İngiltere'de yılın çözüm hazırlayın</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fare başkanı yalıtmak ve beyin kafatasından kaldırın.<ol>
<li>Boynuna deriden kesilmiş ve kafatası ortaya çıkarmak için gözleri doğru kesti. Kafatası burnuna boyun ve o zaman diğer bir gözü çatlamak. Kafatası dışarı kabuğu ve tüm beyin tüketim.</li>
	</ol>
</li>
	<li>%4 beyinde kuluçkaya PFA 4 ° C'de 24 h için</li>
	<li>Beyin Forseps ile 25 mL % 30 Sükroz çözeltisi ile dolu bir 50 mL konik tüp içine aktarın. Beyin tüp altına batar kadar 48-72 saat için 4 ° C'de sakla.</li>
	<li>Bir yetişkin fare beyin dilimleyici ile beyin matris koronal orta (bregma in ~ 3 mm arka) aracılığıyla kesilmiş. Beyin içeren beyin bölümü tutma. Not: Bu iki beyin bölümde-korteks (kesme anterior) ve bir beyin sapı/beyincik (kesme arka) içeren bir içeren çoğu neden olur. Beyin sapı bölümü için aşağıdaki adımları kullanın.</li>
	<li>En uygun kesme sıcaklığı ile bileşik (Ekim); çevrili bir gömme kalıp altına yerleştirilir kesme yüzeyi ile beyin sapı bölüm katıştırma Katıştırılmış beyin-80 ° C dondurucu taşımak ve en az 12 h için-daha fazla kullanılmasını kadar dondurma.</li>
	<li>Cryostat kesme: gömme kalıp beyin Ekim cryostat; içeren yer cryostat cryostat olan için beyin blok sıcaklığını ayarlamak birkaç saat içinde kuluçkaya.</li>
	<li>Beyin içeren OCT blok duyurmak için gömme kalıp peel Away.</li>
	<li>Tıraş bıçağı, Ekim aşırı beyin dokunmadan blok yüzeyinden kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>OCT blok beyin önüne doğru kesme yüzeyinin açığa cryostat, chuck bağlama.</li>
	<li>Beyin kesilmiş yüzeyine paralel olarak cryostat razorblades yönelik şekilde ayarlayın.</li>
	<li>Rostrally 100 µm bölümleri kesme medulla başlayan beyin kırpın.</li>
	<li>Serebellum ve beyin sapı sürekli bir dilim kesmek kadar rostrally kırpın. Dilimler, 50 µm kalınlık toplama başlar. Not: bir rostrally medulla kırpar gibi beyin ve beyincik iki ayrı bölümde kesecek. Rostral bölümlerde, beyin ve beyincik sonunda 4th ventrikül düzeyinde birleştirir. 4th ventrikül lateral kenarlarına doğru biçimli olduğunda, sonra serebellum ve beyin sapı bir sürekli dilim ortaya çıkar.<ol>
<li>Forseps ile OCT çevrili beyin dilim toplamak ve bir de PBS (şekil 2a) ile dolu bir 24-şey plaka yerleştirebilirsiniz. Serebellum ve aşağı olacaklar ~-5.52 mm bregma (Şekil 1b) posterior tanılmaktadır LC en önemli olacaktır. Not: bir kez beyincik tam kesitli ve artık ~-5.34 mm bregma (şekil 1 c) posterior, aşağı olacaklar çevreleyen LC en ön bölümü kaybolacaktır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. immünhistokimya dopamin β-hidroksilaz veya tirozin hidroksilaz (Şekil 2) için
<ol><li>Gün 1<ol>
<li>Seçili dilimleri 5 min için üç kez PBS içinde yıkayın.</li>
		<li>Deterjan (PBSD) 4 ° C'de % 0.5 tamponlanmış fosfat serum içinde 24 h için permeabilize<ol>
<li>125 µL deterjan PBS 25 ml seyreltik.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>2. gün<ol>
<li>Dilimleri 5 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.</li>
		<li>1:500 %0,5 seyreltme birincil antikor, anti-DBH veya anti-TH 18 h için ekleyin PBSD 4 ° C'de</li>
	</ol>
</li>
	<li>3. gün<ol>
<li>Dilimleri 10 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.</li>
		<li>1: 1000 %0,5 seyreltme istediğiniz ikincil antikor (488 eşek Anti-tavşan yeşil floresan için) eklemek için 16 h PBSD.</li>
		<li>Alüminyum ve yer 4 ° C'de 24 iyi plaka şal</li>
		<li>Dilimleri 5 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.</li>
		<li>5 dakika içinde PBS için yıkama.</li>
		<li>Dilimleri bir kalem fırça ile bir su kabı aktarın.</li>
		<li>Şarj edilmiş slaytlarda suda yüzen dilimleri bağlayın.</li>
		<li>Coverslip bölümleri hard-set montaj medya (olmadan DAPI) ile.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 30 dk için bağlı beyin bölümleri kuru.</li>
		<li>Görüntü ayarları uygun ikincil antikor fluorophore dalga boyu sinyalini tespit etmek için confocal veya floresan mikroskop, beyin dilimleri.</li>
		<li>Mikroskop için beyin dilim odak düzlemi ayarlamak ve 10 X büyütme tek bir görüntü alır.</li>
		<li>Olası bir LC bölgenin beyin dilimi bulmak için kullandığı yöndür 4th ventrikül kullanın; beyincik ventrikül yer alır, pons ve beyin sapı30altında bulunur.</li>
		<li>LC bulmak için 4th ventrikül lateral kenarlarında odak; 4th ventrikül ve pons doğru puan kenarlarını LC kaynaklandığı / beyin bölgesi (şekil 2b, 2 c).</li>
		<li>Aşağıdaki görüntüleme ve yerelleştirme belirli beyin dilimleri içinde Akkreditivin depolamak 4 ° C'de beyin dilimler içeren slayt</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. beyin dilimleri içinde LC tespiti
<ol><li>LC içeren beyin bölümü bulun, yukarıda açıklandığı gibi fare beyin dilim ve PBS bölümlerde toplamak için 24 iyi yemekler, şekil 2agösterildiği gibi dolu.<ol>
<li>Bir beyin bölümü LC uygun yerelleştirme için izin vermek için iyi başına yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İmmunostained beyin başına olacak 48 beyin dilimleri toplam toplamak. Not: Tüm kuyu şekil 2a gösterildiği iki tabak beyin dilimleri bir hayvan içerir.</li>
	<li>Immunostain her üçüncü beşinci dilim DBH veya TH. Tercihen, immünhistokimya denetlesinler o bitişik olan bu beyin dilimleri gerçekleştirmek (yolu ile x-ışını Floresans mikroskobu, XFM) daha fazla. Not: Bu yordam son tahlil dilimleri içinde Akkreditivin tam yerelleştirme için izin verir (şekil 2a; sayılar kuyular arasında taşır).</li>
	<li>Merkezi ve LC veya kaba bir yaklaşım kenarı tam konumunu ihtiyaçları olup olmadığını immunostained örneğin, uygulamaya bağlı olan beyin dilim sayısını ayarlayın.</li>
	<li>İmmünhistokimya, her iki ifade 4th ventrikül (şekil 2b, 2 c) karakteristik bir desen ile LC içeren beyin dilimleri tespit. Büyütme ardışık beyin dilimleri LC DBH sinyal şekil 2B, 2eiçinde gösterilir; TH gösterildiği için bu lekeli LC büyütülmüş görüntü şekil 2f.
</li>
	<li>Daha fazla çalışmalar - içeren bu LC bitişik bölümleri XFM için metal düzeyleri (şekil 3) ölçmek için bu durumda kullanın.</li>
	<li>XFM gerçekleştirmek için 10-30 µm (Kurulum) bağlı olarak ince koronal beyin dilimleri ile hangi onlar örnek tutucular monte edilebilir ve sinkrotron yansıma ince polimer film toplamak.</li>
	<li>Mağaza beyin dilimleri üzerinde hazırlanan polimer film XFM için oda sıcaklığında ince ve XFM gerçekleştirmek.</li>
</ol>4. LC XFM üzerinden metal görüntüleme
<ol><li>Yukarıda açıklandığı gibi örnek fare beyin dilim, LC belirlemek ve metal düzeylerinden LC içeren bu beyin dilimler XFM üzerinden ölçmek.</li>
	<li>Görüntü beamline 2-ID-E gelişmiş foton kaynak (Argonne Ulusal Laboratuvarı, Argonne Il), elemental dağıtımlarında.</li>
	<li>Kaydetmek veri 'anında'31daha önce açıklandığı gibi.</li>
	<li>Beyin dilimleri kullanarak program haritalar32,33LC içeren Elemental konsantrasyonlarda belirlemek.</li>
</ol>

<ol><li>Robertson, S. D., Plummer, N. W., de Marchena, J., Jensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origins+of+central+norepinephrine+neuron+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Developmental origins of central norepinephrine neuron diversity.</a> Nature neuroscience. 16, 1016-1023 (2013).</li>
<li>Kobayashi, R. M., Palkovits, M., Jacobowitz, D. M., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+mapping+of+the+noradrenergic+projection+from+the+locus+coeruleus.+A+model+for+studies+of+brain+neuronal+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Biochemical mapping of the noradrenergic projection from the locus coeruleus. A model for studies of brain neuronal pathways.</a> Neurology. 25, 223-233 (1975).</li>
<li>Olson, L., Fuxe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+projections+from+the+locus+coeruleus+noradrealine+neurons%3A+the+cerebellar+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">On the projections from the locus coeruleus noradrealine neurons: the cerebellar innervation.</a> Brain research. 28, 165-171 (1971).</li>
<li>Costa, A., Castro-Zaballa, S., Lagos, P., Chase, M. H., Torterolo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+MCH-containing+fibers+in+the+feline+brainstem%3A+Relevance+for+REM+sleep+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Distribution of MCH-containing fibers in the feline brainstem: Relevance for REM sleep regulation.</a> Peptides. , 50-61 (2018).</li>
<li>Semba, J., Toru, M., Mataga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty-four+hour+rhythms+of+norepinephrine+and+serotonin+in+nucleus+suprachiasmaticus%2C+raphe+nuclei%2C+and+locus+coeruleus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep%22%5BJournal%5D)">Twenty-four hour rhythms of norepinephrine and serotonin in nucleus suprachiasmaticus, raphe nuclei, and locus coeruleus in the rat.</a> Sleep. 7, 211-218 (1984).</li>
<li>Takeuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locus+coeruleus+and+dopaminergic+consolidation+of+everyday+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Locus coeruleus and dopaminergic consolidation of everyday memory.</a> Nature. 537, 357-362 (2016).</li>
<li>Korf, J., Aghajanian, G. K., Roth, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+turnover+of+norepinephrine+in+the+rat+cerebral+cortex+during+stress%3A+role+of+the+locus+coeruleus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Increased turnover of norepinephrine in the rat cerebral cortex during stress: role of the locus coeruleus.</a> Neuropharmacology. 12, 933-938 (1973).</li>
<li>Sara, S. J., Segal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+sensory+responses+of+locus+coeruleus+neurons+in+the+behaving+rat%3A+implications+for+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Plasticity of sensory responses of locus coeruleus neurons in the behaving rat: implications for cognition.</a> Progress in brain research. 88, 571-585 (1991).</li>
<li>Markevich, V. A., Voronin, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+reactions+of+sensomotor+cortex+neurons+to+stimulation+of+emotionally+significant+brain+structures%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhurnal+vysshei+nervnoi+deiatelnosti+imeni+I+P+Pavlova%22%5BJournal%5D)">Synaptic reactions of sensomotor cortex neurons to stimulation of emotionally significant brain structures].</a> Zhurnal vysshei nervnoi deiatelnosti imeni I P Pavlova. 29, 1248-1257 (1979).</li>
<li>File, S. E., Deakin, J. F., Longden, A., Crow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+the+role+of+the+locus+coeruleus+in+anxiety+and+agonistic+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">An investigation of the role of the locus coeruleus in anxiety and agonistic behaviour.</a> Brain research. 169, 411-420 (1979).</li>
<li>Pamphlett, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+of+environmental+toxicants+by+the+locus+ceruleus%3A+a+potential+trigger+for+neurodegenerative%2C+demyelinating+and+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+hypotheses%22%5BJournal%5D)">Uptake of environmental toxicants by the locus ceruleus: a potential trigger for neurodegenerative, demyelinating and psychiatric disorders.</a> Medical hypotheses. 82, 97-104 (2014).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromelanin-sensitive+magnetic+resonance+imaging+features+of+the+substantia+nigra+and+locus+coeruleus+in+de+novo+Parkinson%27s+disease+and+its+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Neuromelanin-sensitive magnetic resonance imaging features of the substantia nigra and locus coeruleus in de novo Parkinson's disease and its phenotypes.</a> European journal of neurology. 25, 949-973 (2018).</li>
<li>Oliveira, L. M., Tuppy, M., Moreira, T. S., Takakura, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+locus+coeruleus+catecholaminergic+neurons+in+the+chemosensory+control+of+breathing+in+a+Parkinson%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+neurology%22%5BJournal%5D)">Role of the locus coeruleus catecholaminergic neurons in the chemosensory control of breathing in a Parkinson's disease model.</a> Experimental neurology. , 172-180 (2017).</li>
<li>Zarow, C., Lyness, S. A., Mortimer, J. A., Chui, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+loss+is+greater+in+the+locus+coeruleus+than+nucleus+basalis+and+substantia+nigra+in+Alzheimer+and+Parkinson+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+neurology%22%5BJournal%5D)">Neuronal loss is greater in the locus coeruleus than nucleus basalis and substantia nigra in Alzheimer and Parkinson diseases.</a> Archives of neurology. 60, 337-341 (2003).</li>
<li>Chandley, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+deficits+in+pontine+locus+coeruleus+astrocytes+in+men+with+major+depressive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+psychiatry+%26+neuroscience+%3A+JPN%22%5BJournal%5D)">Gene expression deficits in pontine locus coeruleus astrocytes in men with major depressive disorder.</a> Journal of psychiatry & neuroscience : JPN. 38, 276-284 (2013).</li>
<li>Bernard, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+expression+of+glutamate+signaling%2C+growth+factor%2C+and+glia+genes+in+the+locus+coeruleus+of+patients+with+major+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+psychiatry%22%5BJournal%5D)">Altered expression of glutamate signaling, growth factor, and glia genes in the locus coeruleus of patients with major depression.</a> Molecular psychiatry. 16, 634-646 (2011).</li>
<li>Gos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+hydroxylase+immunoreactivity+in+the+locus+coeruleus+is+elevated+in+violent+suicidal+depressive+patients%5BTitle%5D)+AND+%22European+archives+of+psychiatry+and+clinical+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tyrosine hydroxylase immunoreactivity in the locus coeruleus is elevated in violent suicidal depressive patients.</a> European archives of psychiatry and clinical neuroscience. 258, 513-520 (2008).</li>
<li>Bielau, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+evidence+for+impaired+nitric+oxide+signaling+of+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical evidence for impaired nitric oxide signaling of the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Brain research. 1459, 91-99 (2012).</li>
<li>Wiste, A. K., Arango, V., Ellis, S. P., Mann, J. J., Underwood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Norepinephrine+and+serotonin+imbalance+in+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Bipolar+disorders%22%5BJournal%5D)">Norepinephrine and serotonin imbalance in the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Bipolar disorders. 10, 349-359 (2008).</li>
<li>Borodovitsyna, O., Flamini, M. D., Chandler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Stress+Persistently+Alters+Locus+Coeruleus+Function+and+Anxiety-like+Behavior+in+Adolescent+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Acute Stress Persistently Alters Locus Coeruleus Function and Anxiety-like Behavior in Adolescent Rats.</a> Neuroscience. 373, 7-19 (2018).</li>
<li>Hirschberg, S., Li, Y., Randall, A., Kremer, E. J., Pickering, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+dichotomy+in+spinal-+vs+prefrontal-projecting+locus+coeruleus+modules+splits+descending+noradrenergic+analgesia+from+ascending+aversion+and+anxiety+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Functional dichotomy in spinal- vs prefrontal-projecting locus coeruleus modules splits descending noradrenergic analgesia from ascending aversion and anxiety in rats.</a> eLife. 6, (2017).</li>
<li>McCall, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRH+Engagement+of+the+Locus+Coeruleus+Noradrenergic+System+Mediates+Stress-Induced+Anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">CRH Engagement of the Locus Coeruleus Noradrenergic System Mediates Stress-Induced Anxiety.</a> Neuron. 87, 605-620 (2015).</li>
<li>Borges, G. P., Mico, J. A., Neto, F. L., Berrocoso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticotropin-Releasing+Factor+Mediates+Pain-Induced+Anxiety+through+the+ERK1%2F2+Signaling+Cascade+in+Locus+Coeruleus+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+international+journal+of+neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticotropin-Releasing Factor Mediates Pain-Induced Anxiety through the ERK1/2 Signaling Cascade in Locus Coeruleus Neurons.</a> The international journal of neuropsychopharmacology. 18, (2015).</li>
<li>Simone, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethinyl+estradiol+and+levonorgestrel+alter+cognition+and+anxiety+in+rats+concurrent+with+a+decrease+in+tyrosine+hydroxylase+expression+in+the+locus+coeruleus+and+brain-derived+neurotrophic+factor+expression+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Ethinyl estradiol and levonorgestrel alter cognition and anxiety in rats concurrent with a decrease in tyrosine hydroxylase expression in the locus coeruleus and brain-derived neurotrophic factor expression in the hippocampus.</a> Psychoneuroendocrinology. 62, 265-278 (2015).</li>
<li>Carter, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+arousal+with+optogenetic+modulation+of+locus+coeruleus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tuning arousal with optogenetic modulation of locus coeruleus neurons.</a> Nature. 13, 1526-1533 (2010).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosterone+administration+up-regulated+expression+of+norepinephrine+transporter+and+dopamine+beta-hydroxylase+in+rat+locus+coeruleus+and+its+terminal+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Corticosterone administration up-regulated expression of norepinephrine transporter and dopamine beta-hydroxylase in rat locus coeruleus and its terminal regions.</a> Journal of neurochemistry. 128, 445-458 (2014).</li>
<li>Xiao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+regulates+rest-activity+cycles+through+the+locus+coeruleus-norepinephrine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+chemical+biology%22%5BJournal%5D)">Copper regulates rest-activity cycles through the locus coeruleus-norepinephrine system.</a> Nature chemical biology. 14, 655-663 (2018).</li>
<li>Amaral, D. G., Sinnamon, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+locus+coeruleus%3A+neurobiology+of+a+central+noradrenergic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">The locus coeruleus: neurobiology of a central noradrenergic nucleus.</a> Progress in neurobiology. 9, 147-196 (1977).</li>
<li>Ralle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease+at+a+Single+Cell+Level%3A+intracellular+copper+trafficking+activates+compartment-specific+responses+in+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Disease at a Single Cell Level: intracellular copper trafficking activates compartment-specific responses in hepatocytes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285, 30875-30883 (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. Franklin, K. B. J. , Boston, Amsterdam. (2013).</li>
<li>Bonnemaison, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper%2C+zinc+and+calcium%3A+imaging+and+quantification+in+anterior+pituitary+secretory+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics+%3A+integrated+biometal+science%22%5BJournal%5D)">Copper, zinc and calcium: imaging and quantification in anterior pituitary secretory granules.</a> Metallomics : integrated biometal science. 8, 1012-1022 (2016).</li>
<li>Nietzold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+X-Ray+Fluorescence+Data+Using+MAPS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2018).</li>
<li>Vogt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPS%3A+A+set+of+software+tools+for+analysis+and+visualization+of+3D+X-ray+fluorescence+data+sets%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+IV+France%22%5BJournal%5D)">MAPS: A set of software tools for analysis and visualization of 3D X-ray fluorescence data sets.</a> J. Phys. IV France. 104, 635-638 (2003).</li>
<li>Davies, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+pathology+in+vulnerable+brain+regions+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+aging%22%5BJournal%5D)">Copper pathology in vulnerable brain regions in Parkinson's disease.</a> Neurobiology of aging. 35, 858-866 (2014).</li>
<li>Davies, K. M., Mercer, J. F., Chen, N., Double, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+dyshomoeostasis+in+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+indications+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+science%22%5BJournal%5D)">Copper dyshomoeostasis in Parkinson's disease: implications for pathogenesis and indications for novel therapeutics.</a> Clinical science. 130, London, England. 565-574 (2016).</li>
<li>James, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+comparison+of+preparation+methodologies+for+X-ray+fluorescence+microscopy+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+bioanalytical+chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantitative comparison of preparation methodologies for X-ray fluorescence microscopy of brain tissue.</a> Analytical and bioanalytical chemistry. , 853-864 (2011).</li>
</ol>

Düzgün örnek yönlendirme bu iletişim kuralı çok önemli bir adımdır. LC (beyincik ve aşağı olacaklar arasında sınır) bulmak için beyin dorsal yüzeyi anatomik özellikleri kullanmakta olduğunuz için bölümleri düzgün uyumlu önemlidir. Bu fare beyin dilimleyici matris beyin arızalı özen gerektirir. Anterior ve posteiror LC çekirdek eksik önlemek için daha fazla doku ~ 500 mikron kesme tavsiye ediyoruz. En yaygın hata LC tamamen eksik sonuçları çok az bölümleri azaltmak olduğunu. Böylece, bu protokol sonrası kişinin ilk kez, g...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58652/localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain">Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.
The affiliation for Evan Maxey was updated from:
Department of Neuroscience, Johns Hopkins University
to:
X-ray science division, Advanced Photon Source, Argonne National Laboratory

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/58652/localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain">Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain</a>.&#160; An author affiliation&#160;was updated.

Erratum: Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

Locus coeruleus (LC) beyin sapı ve norepinefrin (NE) üretim1büyük bir sitenin önemli bir ülkedir. LC korteks, Hipokampus ve beyincik3 projeksiyonlar beyin2 boyunca gönderir ve sirkadiyen ritim4,5, dikkat ve bellek6dahil olmak üzere önemli fizyolojik süreçleri düzenler, 7, Bilişsel süreçler8ve duygu9,10stres. Disfonksiyon Akkreditivin Parkinson hastalığı12,13,14, Alzheimer hastalığı14, depresyon15 de dahil olmak üzere nörolojik ve nöropsikiyatrik bozukluklar11' de karıştığı olmuştur ,16,17, bipolar bozukluk18,19ve anksiyete20,21,22,23, 24. bu roller göz önüne alındığında, LC analizleri kendi işlev ve disfonksiyon eğitim için çok önemlidir.
Fareler fizyolojik ve Etyopatogenezi süreçleri çalışmaları için yaygın olarak kullanılır. Kendi küçük boyutu nedeniyle fareyi LC ~ 300 mikron, yapısı bulma zorluk için önde gelen bir ortalama çapındadır. Beyin kesit sırasında LC kolayca koronal veya sagittal bölümlerindeki özledim. Mevcut çalışmalar LC tanımlaması hayvanlarda açıklayan adım adım bir protokol sağlamıyorsa olmayan bir uzman1,25takip edebilirsiniz. Böylece, LC lokalizasyonu için rehberlik sunmak, biz çeşitli uygulamalar (şekil 1, Şekil 2, şekil 3) için fare beynindeki bu bölgeyi bulmak için geliştirdiğimiz bir protokol tanımlamak. Protokol dikkatle incelenmiş beyin kesit ve immunohistokimyasal olarak algılanmasını DBH26,27, ya da alternatif olarak TH24, son derece içinde LC28zenginleştirilmiş her iki enzim geçerlidir. LC immünhistokimya tarafından bulunan sonra bitişik beyin dilimleri için daha fazla çalışmalar, morfolojik ve metabolik analizleri, aynı zamanda x-ışını Floresans mikroskobu (XFM)29ile metal görüntüleme çalışmaları da dahil olmak üzere kullanılabilir. Bir örnek olarak bu Protokolü (şekil 3) XFM açıklar.

<table><tbody><tr><td>Yetişkin fare beyin dilimleyici matrisi</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS001-1</td><td></td></tr><tr><td>Anti-tavşan ikincil antikoru, Alexa Fluor 488 (kaynak - eşek)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>Şarjlı cam slaytlar</td><td>Genesee</td><td>29-107</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Microm GmbH</td><td>HM 505E</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat kesme bıçakları</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MX35</td><td></td></tr><tr><td>Makas Mini, 9.5cm</td><td>Antech Teşhisler</td><td>503241</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-diamidino-2-fenilindol)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-10MG</td><td></td></tr><tr><td>Dopamin ve beta;-hidroksilaz (DBH) antikoru - kurum içi üretim (kaynak - tavşan)</td><td>B. Eipper</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Dopamin ve beta;-hidroksilaz (DBH) antikoru - ticari olarak kullanılabilir (kaynak - tavşan)</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>8586</td><td></td></tr><tr><td>Falcon tüpleri, 50ml</td><td>ABD Bilimsel</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Foran (izofloran)</td><td>Baxter</td><td>NDC 1019-360-60</td><td></td></tr><tr><td>Forseps Mikro Adson</td><td>Antech Teşhis</td><td>501245</td><td></td></tr><tr><td>Sert set montaj ortamı</td><td>EM bilimleri</td><td>17984-24</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Pascal</td><td>LSM 5</td><td></td></tr><tr><td>Çok kuyulu plakalar, 24 kuyu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>930186</td><td></td></tr><tr><td>Optimum kesme sıcaklığı bileşiği (OCT)</td> <td>VWR / doku teknolojisi</td><td>102094-106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA) / formalin% 10</td> <td>Fisher Scientific</td><td>SF98-4</td><td></td></tr><tr><td>Peel-A-Way tek kullanımlık gömme kalıpları</td><td>Polysciences Inc. </td><td>18646A</td><td></td></tr><tr><td>Kalem fırçası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)</td><td>Life Tech</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş bıçakları</td><td>Amazon</td><td>ASIN: B000CMFJZ2</td><td></td></tr><tr><td>Spatula</td><td>Antech Teşhis</td><td>14374</td><td></td></tr><tr><td>T pinleri</td><td>Ofis Deposu</td><td>344615</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksik Koordinatlarda Fare Beyni, Paxinos ve Franklin, 3rd Edition</td><td>Amazon</td><td>ISBN: 978-0123694607</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100 (PBSD'yi hazırlamak için)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7949-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Tirozin hidroksilaz (TH) antikoru (kaynak - tavşan)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr>XRF <td>SPEX Sample Prep</td><td>3525</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>için Ultralene ince filmGeniş alan floresan mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Axio Zoom.V16</td><td></td></tr></tbody></table>

fare beynindeki locus coeruleus lokalizasyonu

Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

Locus coeruleus (LC) fizyolojik fonksiyonları bir dizi modüle nöronlar üreten norepinefrin önemli bir merkezidir. LC yapısal veya fonksiyonel anormallikleri korteks, Hipokampus ve beyincik de dahil olmak üzere çeşitli beyin bölgeleri etkileyen ve depresyon, bipolar bozukluk, anksiyete, hem de Parkinson hastalığı ve Alzheimer hastalığı için katkıda bulunabilir. Bu bozuklukların genellikle metal dengesizliğe ile ilişkili, ama metaller LC rolü yalnızca kısmen anlaşılmaktadır. Akkreditivin morfolojik ve fonksiyonel çalışmalar insan patolojiler ve metaller katkısını daha iyi anlamak için ihtiyaç vardır. Fareler yaygın olarak kullanılan bir deneysel model, ancak fare LC küçük (~0.3 mm çap) ve sigara bir uzman için tanımlamak zor. Burada, biz fare beynindeki LC yerelleştirmek için adım adım bir immünhistokimya tabanlı protokol tanımlamak. Dopamin-β-hidroksilaz (DBH) ve alternatif olarak, tirozin hidroksilaz (TH), son derece LC ifade edilen her iki enzim immunohistokimyasal işaretleyicilerini beyin dilimler olarak kullanılır. LC içeren bölümler için bitişik bölümleri Histoloji morfolojik araştırmalar, metabolik test, hem de metal görüntüleme için de dahil olmak üzere daha fazla analiz, x-ışını Floresans mikroskobu (XFM) tarafından kullanılabilir.

Değişiklikleri (örneğin, Cu, Fe, Zn ve Mn) metal homeostazı kez LC34,35değişiklikler dahil olmak üzere nörolojik hastalıklarda gözlenir. Böylece, beyindeki metal düzeylerini belirleme hastalığı mekanizmaları anlamak için gereklidir. Açıklanan protokolü kullanılarak oluşturulan beyin bölümleri LC diğer metaller ve Cu seviyesini ölçmek ve onları LC dışındaki bölgelerde düzeylere karşılaştırmak için kullanılabilir. (<strong class="xf...

Locus coeruleus nöronlar fizyolojik süreçleri çeşitli ilgili küçük bir kümesidir. Burada, biz fare beyin bölümleri çalışmalar proteinler ve bu çekirdek metal analizleri hazırlamak için bir protokol tanımlamak.

Fare beynindeki Locus Coeruleus lokalizasyonu

The locus coeruleus (LC) is a major hub of norepinephrine producing neurons that modulate a number of physiological functions. Structural or functional ...

Lokus coeruleus disfonksiyonu nörolojik ve nöropsikiyatrik bozukluklar, Parkinson hastalığı dahil olmak üzere, Alzheimer hastalığı, depresyon, bipolar bozukluk, ve anksiyete karıştığı olmuştur. Bu roller göz önüne alındığında, locus coeruleus analizi fonksiyonu ve disfonksiyon çalışma için çok önemlidir. Fare beyin kesiti sırasında, lokus coeruleus kolayca küçük boyutu nedeniyle koronal veya sagital kesitlerde cevapsız olabilir.Bu nedenle, locus coeruleus lokalizasyonu için rehberlik sunmak için, biz çeşitli uygulamalar için fare beyninde bu bölgeyi bulmak için geliştirilen bir protokol açıklar. Anestezive sonra 50 mililitrelik bir tüp% 4 PFA içinde fare perfüzyon taze izole beyin yerleştirerek başlayın. Beyni 24 saat boyunca 4 santigrat derecede kuluçkaya yatırın.Beyni %30 sakaroz çözeltisinin 25 mililitrelik kısmıyla dolu 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarmak için forseps kullanın. Beyin tüpün dibine batana kadar 48 ila 72 saat boyunca 4 derecede kuluçkaya yatırın. Beyin sapı bölümünü yerleştirmek için, kesme yüzeyini gömme kalıbının altına yerleştirin ve beyin sapını çevreleyen optimum kesme sıcaklık bileşiği ekleyin.Gömülü beyni eksi 80 derecelik bir dondurucuda en az 12 saat daha fazla kullanılana kadar dondurun. Kriyostat içine beyin ile kalıp yerleştirin ve kriyostat bu sıcaklığını ayarlamak için birkaç saat kuluçka. Beyni içeren OCT bloğunu ortaya çıkarmak için, kalıbın dört kenarını dibe kadar kesmek için bir jilet kullanın ve sonra kalıbı soyun.Kalire dokunmamak için blok yüzeyinden OCT fazlalığını kaldırmak için jilet kullanın. Sonra kriyostat chuck OCT blok monte, ön doğru beynin kesik yüzeyi açığa. Beyni ayarlamak için, kesilmiş yüzeyi kriyostat'ın jiletlerine paralel olarak yönlendirin.Numuneyi düzgün bir şekilde yönlendirmek bu protokolde çok önemli bir adımdır. Beyincik ve inferior kolikulus arasındaki sınır gibi LC'yi bulmak için beynin dorsal yüzeyinin anatomik özelliklerini kullandığımız için, kesitlerin düzgün bir şekilde hizalanmış olması önemlidir. Bu düzgün fare beyin dilimleyici matris içine beyin ayarı bakım gerektirir.Beyni medulladan başlayarak 100 mikrometrelik kesitleri kes. Beyincik ve beyin sapı dördüncü ventrikül seviyesinde sürekli bir dilim olarak kesmeye başladıktan sonra, 50 mikrometre kalınlığında dilim toplamaya başlar. Her beyin dilimitoplamak ve PBS ile dolu 24 kuyulu bir tabak içinde yerleştirmek için forceps kullanın.Lokus coeruleus en çok serebellum ve inferior kolikulusun birbiriyle buluştuğu bir dilimde hissedilir. İlk gün, 24 kuyulu plaka üç kez beş dakika her PBS beyin dilimleri yıkayın. Daha sonra deterjanla %0.5 PBS ekleyin ve 24 saat boyunca dört derece santigrat derecede geçirin.Ertesi gün, dilimleri her biri %0,5 PBSD ile beş dakika boyunca üç kez yıkayın. Daha sonra 0,5% PBSD bir ila 500 seyreltme ve 18 saat boyunca dört derece santigrat de kuluçka birincil antikor ekleyin. Üçüncü gün, dilimleri her biri %0,5 PBSD ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın ve %0,5 PBSD'de 1ila 1000 arasında seyreltme de ikincil antikor ekleyin.16 saat boyunca dört derece santigrat de alüminyum folyo ve kuluçka ile plaka sarın. Kuluçkadan sonra dilimleri her biri %0,5 PBSD ile beş dakika boyunca üç kez yıkayın ve ardından PBS'de beş dakika yıkayın. DAPI olmadan sert montaj ortamı kullanarak bölümleri kaplayın.Bir cam kapak ile kapak ve oda sıcaklığında 30 dakika kuru. Daha sonra, uygun floresan dalga boyundan görüntü beyin dilimlerine gelen sinyali tespit etmek için ayarları olan bir konfokal mikroskop kullanın. Mikroskobu beyin diliminin odak düzlemine ayarladıktan sonra, tek bir görüntü almak için 10 kat büyütme kullanın.Beyin sapı altında bulunan dördüncü ventrikül kullanın ve pons ve beyin sapı üzerinde beyin dilimi olası bir LC bölge bulmak için. Dördüncü ventrikül lateral kenarlarına odaklanmak ve LC dördüncü ventrikül kenarlarından başlayarak ve pons beyin sapı bölgeye doğru işaret yer alacak. LC'de ifade edilen bir protein olan dopamin beta-hidroksilaz'ın hücre içi dağılımı, LC morfolojisi ve nöronal yoğunluğu incelemek için bu protokol kullanılarak değerlendirildi.LC ifade başka bir protein, tirozin hidroksilaz, ayrıca metal homeostaz LC.Changes içeren beyin dilimlerinde güçlü bir yeşil floresan sinyal gösterdi genellikle nörolojik bozukluklar gözlenen, bu örnekte LC.In değişiklikler de dahil olmak üzere, LC ile kesilmiş bir beyin dilimi fosfat için ölçüldüğünde, potasyum, çinko, ve bakır, sadece bakır sinyal belirli bir artış gösterdi. Çekirdeğin eksik olmasını önlemek için yaklaşık 500 mikron daha fazla doku ön ve lc posterior kesmenizi ve özellikle bu protokolü ilk kez yerine getirirken gerekenden daha fazla kesit kesmenizi öneririz. Boyama önce beyin atlası görüntüleri dikkatli çalışma çok yararlıdır.LC immünohistokimya ile bulunduğunda, komşu beyin dilimleri morfolojik ve metabolik analiz ler ve x-ışını floresan mikroskobu ile metal görüntüleme çalışmaları da dahil olmak üzere ileri çalışmalar için kullanılabilir. Açıklanan protokol kullanılarak oluşturulan beyin bölümleri LC bakır ve diğer metallerin düzeylerini ölçmek ve lc dışındaki bölgelerde düzeyleri karşılaştırmak için kullanılabilir, hangi hastalık mekanizmasının anlaşılması için gereklidir. Bu protokolün diğer olası uygulamaları arasında dopamin beta-hidroksilaz, tirozin hidroksilaz ve lc'de tek tek ifade edilen diğer proteinlerin bolluğunun ve hücre içi dağılımının saptanması veya lc morfolojisi ve nöronal yoğunluk çalışmaları yer almaktadır.

localization-of-the-locus-coeruleus-in-the-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz beyin bölümlerinin kesit alma fareler, kaldırma ve kesit beynin yanı sıra immunoperoksidaz boyama, reçine gömme ve ultra ince transcardiac perfüzyon için bir protokol tanımlamaktadır. Bu prosedürlerin tamamlanmasının ardından, ile immunohistokimyasal malzeme transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmesi için hazırdır.

Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması

Kaynak: Xavier, A. L. R., et al. Kemirgenlerin Sarnıç Magna'sına Kanül İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magna'sına bir kanül yerleştirme prosedürünü göstermektedir. Teknik, iğneye monte edilmiş bir kanülün duradan ters üçgen cisterna magna'ya yönlendirilmesini ve beyin omurilik sıvısına hedeflenen iletim için sabitlenmesini içerir.

Bir Fare Modelinde Cisterna Magna'ya Kanül İmplantasyonu

Bu video, fare beyninin iki taraflı M2 alanlarından yerel alan potansiyelinin (LFP) in vivo kaydını göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir fare sabitlenir ve prosedür için hazırlanır. LFP'leri kaydetmek için, karmaşık motor hareketlerinden sorumlu olan ikili M2 alanlarının hedef koordinatlarına mikroelektrotlar yerleştirin.

Fare Beyninin Her İki Yarımküresinden Yerel Alan Potansiyelinin Kaydedilmesi

Bu protokol, fare beyin bölümlerindeki locus coeruleus bölgelerini tanımlamak için immünohistokimyanın kullanımını ana hatlarıyla belirtir. Dopamin β-hidroksilazı yeşil florofor işaretli antikorlarla hedefleyerek, norepinefrin üreten nöronlar mikroskop altında yeşil floresan olarak görselleştirilir.

Fare Beyin Kesitlerinde Locus Coeruleus Bölgesini Tanımlamak için İmmünohistokimya

Bu video, fare beyninin bölümlerinin Meynert bölgesinin çekirdek bazalisindeki kolinerjik liflerin immünohistokimyasal boyanmasını göstermektedir. Bölümler bloke edilir ve kolin asetiltransferaza karşı primer ile tedavi edilir, ardından biyotinile edilmiş sekonder antikorlar takip edilir. İkincil antikorlara bağlanan avidin-biotin-peroksidaz kompleksleri eklenir, ardından kromojenik substrat gelir. Kesitler daha sonra kurutulur ve mikroskop altında görselleştirmeden önce monte edilir.

Fare Beyninin Meyner Çekirdeği Basalis'teki Sinir Liflerinin İmmünohistokimyasal Boyanması

Burada biz bir doku takas, floresan etiketleme ve büyük ölçekli görüntüleme sağlayan, böylece, görselleştirme yeni korteksimiz hücre tiplerinin üç boyutlu kuruluşun fare beyin dokusunun açıklayınız.

Hücresel Örgütü fare yeni korteksimiz yılında büyük ölçekli üç boyutlu görüntüleme

Biz iki taraflı ikincil motor korteks (m2) fareler, Yarımküre lateralizasyonu değerlendirmek için uygulanabilir yerel alan potansiyeli (LFP) içinde vivo elektrofizyolojik kayıt sunuyoruz. Çalışmada WT kontrolleri ile karşılaştırıldığında APP/PS1 fareler sol ve sağ m2 arasında senkronizasyon değişen seviyeleri ortaya çıktı.

Fareler Ikincil motor korteks bilateral lokal saha potansiyel kayıt ile Yarımküre lateralizasyon değerlendirilmesi

Bilişsel performans üzerindeki trigeminal etkilerin locus coeruleus aktivitesini içerip içermediğini doğrulamak için, çiğnemenin neden olduğu performans ve görevle ilgili gözbebeği boyutu değişiklikleri arasındaki olası korelasyonları değerlendirmeyi amaçlayan iki protokol sunulmuştur. Bu protokoller locus coeruleus katkısından şüphelenilen durumlara uygulanabilir.

Trigeminal Stimülasyon tarafından Ortaya Çıkan Locus Coeruleus aracılı Uyarılma'da Gözbebeği Ile Bağlantılı Değişikliklerin Değerlendirilmesi

Belirli nöronal popülasyonların veya beyin bölgelerinin optogenetik manipülasyonu ile, davranış serbestçe hareket eden hayvanlarda yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile değiştirilebilir. Kronik implante optik lifler ile birlikte farklı optogenetik araçlar kullanılarak, nöronal modülasyonlar ve davranışsal testler çeşitli yapılabilir.

SerbestÇe Hareket Eden Farelerde Davranışı Modüle Etmek Için Nöronal Aktivitenin Optogenetik Manipülasyonu

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası kemiklerinden erişimi içerir ve kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Burada, beyin sapı yer işaretlerinin doğrudan görselleştirilmesine dayanan sarnıç magna aracılığıyla kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği hedeflemek için alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz.

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Bu protokol, vahşi tip farelerde korteksi bozulmadan bırakırken iki foton mikroskobu ile tek nöron aktivitesinin görüntülenmesi ve kısmi korteks mutant farelerde geniş alan mikroskobu ile tüm SC'nin görüntülenmesi dahil olmak üzere, uyanık farelerin superior colliculus'unda (SC) kalsiyum yanıtlarını görüntüleme prosedürünü detaylandırır.

Fare Superior Colliculus'ta Kalsiyum Görüntüleme

Keşfedin fare beyninde Locus Coeruleus lokalizasyonu için kesit hazırlama ve immünohistokimya protokolünü. Bu yöntem protein ekspresyonu ve metal homeostazı analizlerini kolaylaştırır.

Fare beynindeki Locus Coeruleus lokalizasyonu

Daha fazla video keşfet