Robot sistemleri kullanarak işlemek ve histolojik analizler için kolon fare örnekleri katıştır
January 7th, 2019
Belirli fare doku işleme için fare histopatolojik analiz insan numuneler ile karşılaştırıldığında kalitesini azaltır. Burada, robot sistemleri işleme ve insan örnekleri katıştırma için rutin olarak kullanılan fizibilite göstermek için fare iltihaplı ve uninflamed kolon dokularında histopatolojik incelenmesi gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut.
Bu otomatik protokol, insan örneklerinin işlenmesi ve gömülmesi için rutin olarak kullanılan robotik sistemlerle mürin dokularının histopatolojik olarak hazırlanmasına olanak sağlar ve numunelerin kalitesini büyük ölçüde artırır. Bu tekniğin temel avantajları, metodolojik değişkenlerin sayısını azaltması ve usul adımlarının standardizasyonunu iyileştirmesidir. Prosedürü gösteren, Francesca Boggio olacak.
Francesca Boggio laboratuvarımda çalışan bir patolog. Nötr tamponlu formalinden sabit minnet kolon doku örneklerini petri kabındaki bir kesit çalışma plakasına aktarmak için küçük cımbızlar kullanarak başlayın. 0,2 ila 0,3 santimetre parçalar halinde kolon kesmek için steril bir neşter kullanın ve bir yönelimli parafin gömme kaset üç bitişik olmayan plastik çıkıntılı ipuçları her birine bir segment yerleştirmek için cımbız kullanın.
Kaseti kapatmak ve ızgarayı plastik bir destek çerçevesine yerleştirmek için dört kenarı dikkatlice itin. Ardından, örneği tanımlamak ve kaseti ızgaraya aktarmak için destek çerçevesini etiketleyin. İşlemden bir saat önce otomatik işlemciyi çevirin.
Cihaz parafinin eridiğini gösterdiğinde, metal sepeti otomatik işlemciye manuel olarak takın. Tüm kasetler takıldığında, sepeti kapatın ve retort'un kapağını açın. Sepeti işlemcinin özel gövdesine takın ve retort kapağını kapatın.
Tabloda sağlanan şemaya göre uygulanacak çözüm sırasını, zamanlamayı ve sıcaklığı seçerek çalışma protokolünü tanımlamak için gösterge bilgisayarındaki dokunmatik ekranı kullanın. Kaset sepetini içeren retort'a protokol atamak için özel bilgisayar simgesine tıklayın ve başlat düğmesini tıklatın. Cihaz protokolün sonunu özel bir simge ve alarm tonuyla onayladığında, retort kapağını açın ve sepeti işlemciden çıkarın.
Doku gömme den bir saat önce, otomatik katıştırma işlemini açın ve parafinin cihazdaki parafin banyo termometresi tarafından belirtildiği gibi tamamen erimesini bekleyin. İşlemsepetinden 32'ye kadar işlenmiş kaseti gömme rafına elle aktarın ve ana gömme kapağını açın. Robot sistemine bir raf ın yerleştirildiğini bildirmek için dokunmatik ekranı kullanın ve giriş muhafaza kapağını açın.
Giriş muhafazasına en fazla dört raf takın ve giriş muhafaza kapağını kapatın. Ardından, tabloda belirtildiği gibi katıştırma işlemini başlatmak için dokunmatik ekranı kullanın. Cihaz, ilgili simgeyle protokolün sonunu onayladığında, çıkış rafını çıkarın ve ana gömme kapağını kapatın.
Ardından, raftan katışmık blokları bir depolama kutusuna aktarın. Kolon kısalma, ve pro inflamatuar genlerin kolon ekspresyonu, yaygın dekstran sodyum sülfat veya DSS indüklenen inflamasyon varlığını puanlama için kullanılan parametrelerdir. Bağırsak lamina propria içine inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu da büyük ölçüde DSS tedavisi ile geliştirilmiştir.
Otomasyon la işlenen işlenmemiş numunelerin H&E boyanması, dss tedavi edilen hayvanlardan alınan örneklere kıyasla daha az infiltrasyon lu inflamatuar hücre, epitel değişiklikler ve mukozal mimarideki değişiklikleri ortaya koymaktadır. Otomatik aletler tarafından yapılan minür doku hazırlama ve katıştırma kalitesi CD20 ve Mallory Trikrom Boyama için immünohistokimyasal boyama ile ayrıca teyit edilebilir. Özellikle, otomatik numune işleme sürekli histolojik parametrelerin daha yüksek bir oranda değerlendirilmesi sağlar, el yöntemi ile işlenen örnekleri yapmak daha.
Otomatik işlemcinin hazır olmasını beklemek için dokuyu ızgaraya doğru şekilde yerleştirmeye ve parafinin tamamen erimesini beklemeye özen. Bu yöntem, insan patologların murine modellerinde kullanılacak insan histolojik örneklerinin niteliksel olarak, herhangi bir mürin dokusunun histolojik analizini yapmak için kullanılabilir. Bu teknik zaten inflamatuar doku iltihabı çalışma için başarılı bir çalışma olmuştur, ve kolorektal murine kanser modelleri çalışma için yararlı olacaktır.
Bu protokolde kullanılan bazı reaktifler tehlikeli olduğundan, bu işlemi gerçekleştirirken her zaman koruyucu eldiven, gözlük ve laboratuvar önlüğü giymeyi unutmayın.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu makale, genellikle insan örnekleri için kullanılan robotik sistemler kullanılarak fare dokularının histopatolojik hazırlanması için otomatik bir protokol sunmaktadır. Bu yöntem, numune kalitesini artırır ve prosedürel adımları standartlaştırır, fare dokusu işlemede standardizasyon eksikliğini giderir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Histopatoloji
- Robotik otomasyon
- Fare dokusu analizi
Arka Plan
- Fare dokusu işleme genellikle standartlaştırma eksikliğinden muzdariptir.
- Histopatolojik analizin kalitesi tehlikeye girebilir.
- Robotik sistemler rutin olarak insan örneklerinin işlenmesinde kullanılmaktadır.
- Fare dokuları için yöntemlerin iyileştirilmesi araştırma sonuçlarını artırabilir.
Çalışmanın Amacı
- Fare dokusu işleme için standartlaştırılmış bir protokol göstermek.
- Fare numunelerinin histopatolojik analizinin kalitesini artırmak.
- Robotik sistemleri daha yüksek verimlilik ve tutarlılık için kullanmak.
Kullanılan Yöntemler
- Sabitlenmiş fare kolon doku örneklerini maşa kullanarak aktarın.
- Kolonu 0,2 ila 0,3 cm parçalara steril bir neşterle kesin.
- Doku parçalarını parafin-gömü kasetinin bitişik olmayan uçlarına yerleştirin.
- İşleme ve gömme için robotik sistemleri kullanın.
Ana Sonuçlar
- Otomatik protokol numune kalitesini önemli ölçüde artırır.
- Doku işlemede metodolojik değişkenleri azaltır.
- Prosedürel adımların standartlaştırmasını geliştirir.
- Laboratuvarlarda rutin kullanım için uygulanabilirliğini göstermiştir.
Sonuçlar
- Robotik sistemler fare dokularını etkili bir şekilde işleyebilir.
- Standardizasyon, güvenilir histopatolojik analiz için kritiktir.
- Bu protokol, araştırma uygulamalarının iyileştirilmesi için benimsenebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Standardized tissue processing is critical for reliable preclinical evaluation in inflammatory bowel disease and colorectal cancer models. Automated robotic systems reduce methodological variability, enhancing reproducibility and predictive confidence in histopathological endpoints. This approach supports translational continuity by aligning murine sample quality with human histology standards.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables rigorous interrogation of therapeutic hypotheses in murine colitis models through consistent tissue preparation.
- Operational Value: Reduces observer bias and technical noise in phenotypic scoring of inflammation and epithelial damage.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Provides standardized tissue sections for quantitative immunohistochemical analysis of biomarkers like CD20.
- Operational Value: Ensures assay readiness and reproducibility across compound screening campaigns in colitis models.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports disease-relevant systems by maintaining histological fidelity from discovery through preclinical validation.
- Operational Value: Enables risk-adjusted advancement decisions based on reliable histopathological readouts of colonic shortening and inflammatory infiltration.
Pipeline & Workflow Integration
The method integrates into the discovery continuum from early target validation through preclinical efficacy testing in murine inflammation models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by reducing methodological artifacts in tissue sectioning and staining.
- Screening: Delivers assay standardization and quantitative outputs for reliable compound evaluation in DSS-induced colitis.
- Analytics: Generates consistent histopathological measurements enabling cross-condition comparison and statistical rigor.
- Translational Research: Maintains continuity from murine models to human pathology through standardized processing aligned with clinical histology workflows.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for processing murine intestinal tissues across multiple therapeutic programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduced mechanistic ambiguity in histological scoring.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of tissue processing across laboratories.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk in IBD and oncology programs.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on reliable histopathological endpoints.
Implementation Considerations
- Requires expertise in histopathology and robotic system operation.
- Dependence on automated processors and embedders compatible with murine cassette formats.
- Need for cross-team standardization of tissue trimming and cassette loading procedures.
- Adaptation considerations for non-colonic murine tissues beyond colonic inflammation models.
- Practical limitation: Manual steps remain for tissue trimming and cassette loading prior to automation.
