Name: Bütün Dağı boyama kullanarak 3D beyaz yağ doku yapısı görselleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Öğrenin, bütün dağı boyama tekniğiyle beyaz yağ dokusunun 3D yapısını görselleştirmeyi. Bu yöntem, oruç ve obezite gibi metabolik koşullarda hücreler arası etkileşimleri incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser hibe Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada, Pilot ve fizibilite çalışması Grant Banting & H-K. SickKids başlangıç Fonu'na en iyi diyabet Merkezi (BBDC) tarafından finanse edildi S., tıbbi araştırma merkezi programı (2015R1A5A2009124) aracılığıyla Ulusal Araştırma Vakfı, Kore (Bilim Bakanlığı, ICT ve gelecek planlama için J-yazar tarafından finanse edilen NMG)

Phenogenomics (TCP) Hayvan Bakımı Kanada Konseyi standartlarına standartlarla uyumlu için tüm deneysel hayvan iletişim kuralları Center hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi. Fare 12-h açık/koyu döngüleri muhafaza ve ücretsiz erişim su ve yemek için sağladı. 7 ay bütün Dağı boyama deneyde eski C57BL/6J erkek fareler kullanıldı.
Not: Bölüm 1-2 Bölüm şu Bölüm 1 sonra isteğe bağlı bir adım olmanın 3 ile kronolojik sırayla vardır. Bölüm 4 bölümü 2 tamamlanmasından sonra adipocyte boyut ve damar yoğunluğu çözümlenecek gerçekleştirilebilir.
1. malzeme hazırlama ve doku yalıtım
<ol><li>1 fosfat tamponlu tuz (PBS) doku fiksasyon için x seyreltilmiş taze %1 paraformaldehyde (PFA) hazırlayın. 1 x PBS içinde seyreltilmiş % 0,3 Nonyonik yüzey aktif hazırlamak (bundan sonra PBS anılacaktır-0.3T) sonraki doku adımları yıkama için. Not: her doku için yaklaşık 1,5 mL % 1'lik hazırlamak PFA komple daldırma emin olmak için. Fiksasyon birim artırılması veya doku boyutuna bağlı olarak azaltılması. Dikkat: PFA aşındırıcı ve zehirli olduğu gibi bu adım, zararlıdır. Aşınma kişisel koruyucu donanım (Örneğin, nitril eldiven, önlük, Ayakkabı, koruyucu gözlük) ve tanıtıcı bir duman Hood.</li>
	<li>Hayvanlar (Örneğin, servikal çıkık ve/veya karbon dioksit boğulma) onaylı bir yordam göre ötenazi. Gecikme olmadan istenen yağ dokusu depoları (Örneğin, kasık beyaz yağ dokusu veya perigonadal beyaz yağ dokusu)18incelemek.</li>
	<li>Diseksiyon makasla doku parçaları yaklaşık 0,5-1 cm boyutunda bir 100 x 15 mm2 Petri kabına oyulmuş ve onları %1 ile dolu microcentrifuge tüpler bırakın PFA. Buz üstünde tutun.</li>
</ol>2. bütün monte beyaz yağ dokusunun boyama
<ol><li>Diseksiyon tamamlandıktan sonra doku örnekleri % 1'hareket sıcaklık (RT) 1 h için oda ve 12 veya 24 iyi hücre kültür plaka daha hızlı yıkama için belgili tanımlık doku aktarmak için İngiltere'de yılın buz.</li>
	<li>PBS kurcalayarak yıkama-5 dk her bir shaker üzerinde RT 20 – 25 Eğer min hızı olarak başı ile 22 ° eğik için 3 kez 0.3T. Not: Bu Full tilt ve hız bir shaker kullanımını içeren tüm izleyen adımları için kullanın. Not: Eğer bir çok renkli muhabir fare çizgi gibi mT/mG ve ek kullanarak antikor boyama gerekli değildir, doku-den sonra adım 2.2 Mikroskopi için hazırdır.</li>
	<li>0.5-1 ekleyin mL engelleme arabellek (%5 hayvan serum PBS içinde seyreltilmiş-0.3T). Shaker üzerinde plaka koymak ve RT. 1 h için kuluçkaya</li>
	<li>Engelleme çözüm Aspire edin ve birincil antikorlar PBS içinde seyreltilmiş eklemek-% 1 hayvan serum ile 0.3T.</li>
	<li>Yer plaka üzerinde bir shaker 4 ° C'de bir gecede.</li>
	<li>Ertesi gün, PBS kurcalayarak yıkama-0.3T 3 kez için 5 dakika her RT.</li>
	<li>PBS içinde seyreltilmiş uygun ikincil antikorlar kullanın-0.3T. Eklemek 0.5-1 mL ikincil antikor çözümler her şey için. Alüminyum folyo plaka sarın ve RT. 1 saat bir shaker üzerinde kuluçkaya Not: photobleaching önlemek için karanlıkta ikincil antikor sulandırmak.</li>
	<li>İkincil antikor kuluçka sonra PBS ile yıkama-0.3T 5 dk, her dik için iki kez resim örnekleri tarafsız lipid leke değil isterseniz. Görselleştirme lipid damlacıkları ise tarafsız lipid kullanarak leke, 1 x PBS (olmadan iyonik olmayan yüzey aktif) ile iki kez, 5 min her yıkayın.</li>
	<li>Çamaşır adımları sonra 1:1500 seyreltme faktörü 1 x PBS için 30 dk içinde RT. ile seyreltilmiş tarafsız lipid leke ile kuluçkaya Dokular Mikroskopi için hazırsınız. Gelecekte görüntüleme için belgili tanımlık doku 4 ° c Bu çözümde saklanabilir Not: kalite Imaging zaman içinde azalır; Bu nedenle, en iyi görüntüleme için 1 veya 2 gün içinde zamanı.</li>
	<li>Forseps kullanarak, doku düz bir 24 x 60 mm ² cam coverslip yatıyordu ve bir ters confocal lazer mikroskop sistemde yerleştirin.</li>
	<li>Çekirdeği ile DAPI, boyama isterseniz, DAPI tamamen doku daldırın ve kurumasını önlemek için içeren montaj orta 1-2 damla ekleyin.</li>
	<li>Bütün Dağı dokuları birden çok odak düzlem, lekeli görüntüler elde etmek için Z-100-150 mikron yığınları ile 4-6 mikron adım-büyüklük istenen büyütmede derinlemesine gerçekleştirin.</li>
</ol>3. doku takas ve Immunolabeling kullanarak iDISCO +
Not: Bu protokolü daha önce yayımlanmış yordamlar9,10,19tarihinde dayanır.
<ol><li>Fiksasyon ve metanol ön arıtma<ol>
<li>%4 1 x PBS gecede 2 mL microcentrifuge tüpler içinde 4 ° C'de PFA seyreltilmiş dokularda kuluçkaya. Not: belgili tanımlık doku 2 mL tüpler aşağıdaki tedaviler için görüntüleme kadar bırakın.</li>
		<li>Ertesi gün, 1 x PBS dokularda için 1 saat her bir shaker RT., üç kez, yıkama Not: Bu adımı örneği RT veya 4 ° c'gecede bırakmak duraklatma bir noktası olabilir</li>
		<li>% 20, % 40, % 60 ve % 80 metanol, RT, dokularda daha sonra 1 h her kurutmak. RT, % 100 metanol içinde 1 saattir kurutmak sonra dokular için taze % 100 metanol aktarmak ve 4 c 1 h için kuluçkaya. Not: metanol distile su oranında seyreltin. Metanol kuluçka sırasında doku örnekleri daldırılır sürece bir shaker örnekleri koymak gerek yoktur. Dikkat: metanol zehirli olduğu gibi bu adım, zararlıdır. Açık alevler çok kolay alevlenebilir. Kişisel koruyucu donanım (Örneğin, nitril eldiven, önlük, gözlük) giymek ve duman mahallede kolu. Metanol ateşleme mesafede ve yanıcı bir emanet dolabında saklayın.</li>
		<li>%5 hidrojen peroksit (H2O2; %5 100 metanol cilt olarak seyreltilmiş % 30 H2O2 1 hacmi) kurcalayarak gecede 4 ° C'de çamaşır suyu Dikkat: %30 hidrojen peroksit cilt ve göz teması çok tehlikeli. Kişisel koruyucu donanım (Örneğin, nitril eldiven, önlük, gözlük) giymek ve duman mahallede kolu.</li>
		<li>%80, % 60, % 40 ve % 20 metanol ve 1 x PBS, RT, dokularda daha sonra her biri 1 saat için suyla temasa.</li>
		<li>1 x PBS içinde iki kez, 1 h her bir shaker RT. adlı için seyreltilmiş % 0,2 Nonyonik yüzey aktif yıkayın</li>
	</ol>
</li>
	<li>Immunolabeling Not: takas tamamlanıncaya kadar immunolabeling başlar başlamaz doku oksidasyonu önlemek için her adımda kullanılan solüsyon ile doku tüpün üst içeren 2 mL tüpler doldurmak.<ol>
<li>Dokuları onları 1 x PBS, % 0,2 Nonyonik yüzey aktif, % 20 dimetil sülfoksit (DMSO) ve 0,3 M glisin inkübe bir masa üstü orbital çalkalayıcı olarak 37 ° C'de bir çözümde iki gündür kuluçka tarafından permeabilize. Not: 2 gün 37 ° C permeabilization adımın maksimum kuluçka zamanı geldi.</li>
		<li>Bir çözüm 1 x PBS, % 0,2 Nonyonik yüzey aktif, % 10 DMSO, % 5 eşek serum ve % 1 Fc blok üzerinde bir inkübe masa üstü orbital çalkalayıcı 37 ° C'de ve dokularda 2 gündür engelleyin. Not: Maksimum kuluçka engelleme adım 2 gün zamanı.</li>
		<li>1 x PBS, % 0,2 polysorbate 20, bir çözümde ilgi birincil antikorlar dokularda kuluçkaya 10 µg/mL heparin, %5 DMSO ve 4 gün boyunca inkübe masa üstü orbital çalkalayıcı olarak 37 ° C'de % 5 eşek serum.</li>
		<li>1 x PBS, % 0,2 polysorbate 20 ve 10 µg/mL heparin vermeye bir shaker RT beş kez, her biri için 1 h, yıkayın. Not: Bu adım bir duraklama noktası örnekleri gece RT. içinde bırakın olabilir</li>
		<li>1 x PBS, % 0,2 polysorbate 20, bir çözümde ikincil antikor kurcalayarak kuluçkaya 10 µg/mL heparin ve 4 gün için bir masa üstü orbital çalkalayıcı üzerinde 37 ° C'de % 5 eşek serum. Not: 3.2.5 adımından tüm örnekleri ikincil antikor photobleaching önlemek için alüminyum folyo ile sarılmış olması gerekiyor.</li>
		<li>Bir çözüm 1 x PBS, % 0,2 polysorbate 20 ve 10 µg/mL heparin vermeye bir shaker RT dokularda 2 h her beş kere yıkayın. Not: Bu adımı örnekleri gece RT. bırakın için duraklatma bir noktası olabilir</li>
	</ol>
</li>
	<li>Doku takas beyaz yağ dokusu ve birim görüntüleme<ol>
<li>% 20, % 40, % 60 ve % 80 metanol, daha sonra her 1 saatte RT. için kuluçka tarafından 2 mL tüpler içinde bulunan doku kurutmak O zaman, % 100 metanol RT. adlı iki kez örneklerinde kurutmak Not: Bu adım'da % 100 metanol RT. adlı gecede örneklerinizi ayrılmasına izin duraklatma bir noktası olabilir</li>
		<li>DCM 2 Cilt 1 metanol RT bir shaker tarih itibariyle 3 h için hacmiyle karışımı kurcalayarak kuluçkaya. Not: DCM kırılgandır. Tüpler buharlaşma önlemek için sıkı kapalı emin olun. Dikkat: Bu tehlikeli adımdır. DCM inhalasyon zehirlidir. Uzun süre maruz potansiyel olarak kimyasal yanıklara neden. Kişisel koruyucu donanım (Örneğin, nitril eldiven, önlük, Ayakkabı, koruyucu gözlük) giymek. Bir duman başlığı kullan.</li>
		<li>% 100 DCM ve dokularda iki kez 15 dakika her bir shaker RT., üzerinde kuluçkaya.</li>
		<li>% 100 kuluçkaya DBE RT kadar görüntüleme ve örnek depolama için. Görüntüleme önce tüpler çözümleri karıştırmak için birkaç kez tersine çevirin. Not: Tüpler DBE temizlenmesi başarısız dokusunda neden olabilir oksidasyonu önlemek için ile eksiksiz doldurunuz. Tüpler DBE kuluçka sırasında sallama. Dikkat: Bu tehlikeli adımdır. DBE zehirlidir. Gözleri ve cildi tahrişe neden olabilir. Kişisel koruyucu donanım (Örneğin, nitril eldiven, önlük, gözlük) giymek ve duman mahallede kolu.</li>
		<li>Bütün doku örneği organik çözücü DBE kırılma indisini eşleşen ışık mikroskopla görüntü. Z-istifleme istediğiniz büyütme ve adım-boyu bütün doku için gerçekleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. bütün-mount gelen veri analizi örnekleri ImageJ kullanarak doku görüntüleri lekeli
Not: https://imageJ.nih.gov/ij/download.html indirme ve yükleme yönergeleri için bkz.
<ol><li>Miktar damar yoğunluğu (ek Şekil 2)<ol>
<li>Sadece kanal ile damar immunostaining ImageJ üzerine kaydedilmiş görüntüleri içe. Not: Miktar görüntülerde boyama prosedürü ve görüntü alma durumu açısından tutarlı olması gerekir. Aynı reaktifler kullanılmalıdır. Pozlama süresi, şiddeti ve büyütme da görüntüleme işlemi20dakikaya eşdeğer olmalıdır.</li>
		<li>Resmin rengini siyah-beyaz kan damarı yoğunluğu miktar için dönüştürün. "Görüntü" sekmesi altında bunun için "Ayarlama" komutu, sonra "renk eşiği" seçeneğini seçin. İçinde "eşik renk" kutusunu görüntülemek, "Koyu arka plan"20 ve "Siyah-beyaz" altında "eşik renk"seçebilirsiniz.</li>
		<li>Kan damarı sinyal alanı yüzdesini arka planı ölçmek için "Çözümlemek" etiket, o zaman "parçacıklar analiz" komutunu seçin. Parçacıkların "analiz"görüntüle'nin altında "net sonuçlar" ve "Özetleme" seçeneklerini seçin. "Tamam"düğmesini tıklatın.</li>
		<li>Kopyalayabilir ve Özet sekmesinin altındaki yüzde alan değerini analiz için bir elektronik tabloya yapıştırabilirsiniz. Damar yoğunluğu alanı yüzdesini belirtir. Adımları 4.3.1–4.3.4 bireysel her görüntü için tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Miktar adipocyte boyutu21 (ek Şekil 3)<ol>
<li>Adiposit ImageJ üzerine kaydedilmiş görüntüleri içe.</li>
		<li>Görüntü ölçeğini ayarlamak için normal amortisman seçim aracıyla görüntüde bilinen uzaktan ölçeğiyle hattına izini sürerek ölçeğin piksel cinsinden uzunluğunu ölçmek. "Analiz" sekmesinde, "Ölçeği Ayarla" komutunu seçin. Daha önce takip ettiler satırı mesafesi otomatik olarak piksel cinsinden hesaplanır.</li>
		<li>"Ölçeği Ayarla" ekran kutu-ecek gözükmek. Bilinen uzaklık ve uzunluk birimi girin. Ölçeğin tüm içe aktarılan görüntüler için ayarlama uygulamak ve tıkırtı "OK"için "Global" seçin.</li>
		<li>"Analiz" sekmesi altında ölçüm yöntemi olarak alan seçmek için "ayarla ölçümleri" komutunu seçin. Ölçümler için farklı seçenekler listesi görüntülenir. "Alan" seçeneğini seçin ve "Tamam"ı tıklatın.</li>
		<li>Serbest seçim aracını kullanarak, her adipocyte ilgi çevre izleme. "Analiz" sekmesi altında "Ölçü (Ctrl + M)" komutunu seçin ve adipocyte alanında görüntülenecek. Resimdeki diğer adiposit için bu yordamı yineleyin. Not: doğru ölçümler sağlamak için miktar için birden çok görüntüyü kullanın.</li>
		<li>Kopyalayın ve alan ölçüleri daha fazla veri analiz için bir elektronik tabloya yapıştırın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Sung, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+vascular+endothelial+growth+factor+regulates+metabolic+homeostasis+through+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Adipose vascular endothelial growth factor regulates metabolic homeostasis through angiogenesis.</a> Cell Metabolism. 17, 61-72 (2013).</li>
<li>Greenberg, A. S., Obin, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+and+the+role+of+adipose+tissue+in+inflammation+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Obesity and the role of adipose tissue in inflammation and metabolism.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 83, 461-465 (2006).</li>
<li>Martinez-Santibañez, G., Cho, K. W., Lumeng, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+White+Adipose+Tissue+With+Confocal+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Imaging White Adipose Tissue With Confocal Microscopy.</a> Methods in Enzymology. 537, 17-30 (2014).</li>
<li>Laforest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+three+human+adipocyte+size+measurement+methods+and+their+relevance+for+cardiometabolic+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+%28Silver+Spring%2C+MD%29%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of three human adipocyte size measurement methods and their relevance for cardiometabolic risk.</a> Obesity (Silver Spring, MD). 25 (1), 122-131 (2017).</li>
<li>Berry, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Imaging of adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 47-73 (2014).</li>
<li>Kim, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+fasting+promotes+adipose+thermogenesis+and+metabolic+homeostasis+via+VEGF-mediated+alternative+activation+of+macrophage%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Intermittent fasting promotes adipose thermogenesis and metabolic homeostasis via VEGF-mediated alternative activation of macrophage.</a> Cell Research. 27 (11), 1309-1326 (2017).</li>
<li>Cho, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+role+of+LYVE-1-positive+macrophages+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue.</a> Circulation Research. 100 (4), e47-e57 (2007).</li>
<li>Lee, J. H., Yeganeh, A., Konoeda, H., Moon, J. H., Sung, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+Cytometry+and+Lineage+Tracing+Study+for+Identification+of+Adipocyte+Precursor+Cell+%28APC%29+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Flow Cytometry and Lineage Tracing Study for Identification of Adipocyte Precursor Cell (APC) Populations.</a> Methods in Molecular Biology. 1752, 111-121 (2018).</li>
<li>Chi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Adipose+Tissue+Imaging+Reveals+Regional+Variation%5BTitle%5D)+AND+%22in+Beige+Fat+Biogenesis+and+PRDM16-Dependent+Sympathetic+Neurite+Density.+Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Adipose Tissue Imaging Reveals Regional Variation.</a> in Beige Fat Biogenesis and PRDM16-Dependent Sympathetic Neurite Density. Cell Metabolism. 27 (1), 226-236 (2018).</li>
<li>Jiang, H., Ding, X., Cao, Y., Wang, H., Zeng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dense+Intra-adipose+Sympathetic+Arborizations+Are+Essential+for+Cold-Induced+Beiging+of+Mouse+White+Adipose+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Dense Intra-adipose Sympathetic Arborizations Are Essential for Cold-Induced Beiging of Mouse White Adipose Tissue.</a> Cell Metabolism. 26 (4), 686-692 (2017).</li>
<li>Cao, Y., Wang, H., Wang, Q., Han, X., Zeng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+volume+fluorescence-imaging+of+vascular+plasticity+in+adipose+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional volume fluorescence-imaging of vascular plasticity in adipose tissues.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li>
<li>Cao, Y., Wang, H., Zeng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-tissue+3D+imaging+reveals+intra-adipose+sympathetic+plasticity+regulated+by+NGF-TrkA+signal+in+cold-induced+beiging%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+%26+Cell%22%5BJournal%5D)">Whole-tissue 3D imaging reveals intra-adipose sympathetic plasticity regulated by NGF-TrkA signal in cold-induced beiging.</a> Protein & Cell. 9 (6), 527-539 (2018).</li>
<li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+Brain+Activity+by+Automated+Volume+Analysis+of+Immediate+Early+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mapping of Brain Activity by Automated Volume Analysis of Immediate Early Genes.</a> Cell. 165 (7), 1789-1802 (2016).</li>
<li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iDISCO%3A+a+simple%2C+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li>
<li>Kretzschmar, K., Watt, F. M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867412000037">Lineage tracing.</a> Cell. 148 (1-2), 33-45 (2012).</li>
<li>Vorhagen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+tracing+mediated+by+cre-recombinase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Lineage tracing mediated by cre-recombinase activity.</a> Journal of Investigative Dermatology. 135 (1), 1-4 (2015).</li>
<li>Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+adipocyte+cellular+lineage+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of the adipocyte cellular lineage in vivo.</a> Nature Cell Biology. 15 (3), 302-308 (2013).</li>
<li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45 (9), 593-605 (2007).</li>
<li>Method, D. W. iDISCO+ protocol. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.idiscodotinfo.files.wordpress.com/2015/04/whole-mount-staining-bench-protocol-methanol-dec-2016.pdf">https://www.idiscodotinfo.files.wordpress.com/2015/04/whole-mount-staining-bench-protocol-methanol-dec-2016.pdf</a> (2016).</li>
<li>Jensen, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+histological+staining+and+fluorescence+using+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of histological staining and fluorescence using ImageJ.</a> The Anatomical Record (Hoboken). 296 (3), 378-381 (2013).</li>
<li>Papadopulos, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+tasks+in+microscopic+and+ultrastructural+image+analysis+using+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrastructural+Pathology%22%5BJournal%5D)">Common tasks in microscopic and ultrastructural image analysis using ImageJ.</a> Ultrastructural Pathology. 31 (6), 401-407 (2007).</li>
<li>Abcam. Whole-mount fluorescent immunohistochemistry. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://docs.abcam.com/pdf/protocols/Whole_mount_fluorescent_ihc.pdf">http://docs.abcam.com/pdf/protocols/Whole_mount_fluorescent_ihc.pdf</a> (2018).</li>
<li>Stanly, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+importance+of+appropriate+fixation+conditions+for+faithful+imaging+of+receptor+microclusters%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Open%22%5BJournal%5D)">Critical importance of appropriate fixation conditions for faithful imaging of receptor microclusters.</a> Biology Open. 5 (9), 1343-1350 (2016).</li>
<li>UHN. Autofluorescence: Causes and Cures. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://wwwfacilities.uhnresearch.ca/wcif/PDF/Autofluorescence.pdf">http://wwwfacilities.uhnresearch.ca/wcif/PDF/Autofluorescence.pdf</a> (2018).</li>
<li>Spalteholz, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSpalteholz%2C+W+%22U%CC%88ber+das+Durchsichtigmachen+von+menschlichen+und+tierischen+Pra%CC%88paraten+und+seine+theoretischen+Bedingungen%2C+nebst+Anhang%3A+U%CC%88ber+Knochenfa%CC%88rbung%22">Über das Durchsichtigmachen von menschlichen und tierischen Präparaten und seine theoretischen Bedingungen, nebst Anhang: Über Knochenfärbung</a>. , (1914).</li>
<li>Girkin, J. M., Carvalho, M. T. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/2040-8986/aab58a/meta">The light-sheet microscopy revolution.</a> Journal of Optics. 20 (5), 053002(2018).</li>
<li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+and+Whole-Organ+Clearing+and+Imaging+Techniques+with+Single-Cell+Resolution%3A+Toward+Organism-Level+Systems+Biology+in+Mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Whole-body and Whole-Organ Clearing and Imaging Techniques with Single-Cell Resolution: Toward Organism-Level Systems Biology in Mammals.</a> Cell Chemical Biology. 23 (1), 137-157 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Histoloji ve cryosection gibi geleneksel teknikleri hücre içi yapısı gözlemlemek için avantajlar, Bütün Dağı boyama cep 3D görselleştirme sağlar yağ dokusu araştırma farklı bir bakış açısı sağlar minimal işlenmiş doku mimarisi.
Bütün Dağı boyama başarıyla gerçekleştirmek için aşağıdaki önerileri dikkate alınmalıdır. Farklı yağ dokusu depoları çeşitli immunostaining sonuçlar olabilir; Bu nedenle, kullanılan yağ dokusu depo türünü ilk tespit edilmelidir. Örneğin, kahverengi yağ dokusundan (BAT) ...

Yağ dokusu enerji depolama için önemli bir organdır ve dinamik remodeling ve neredeyse sınırsız genişleme1ile karakterizedir. Enerji homeostazı yanı sıra yağ dokusu da tüm vücut metabolik fonksiyon2modüle için 50'den fazla adipokines hormon salgısı önemli bir rol oynar. Yağ dokusundan oluşan çeşitli mimari olgun adipositler, fibroblastlar, endotel hücreleri, bağışıklık hücreleri ve adipocyte progenitör hücrelerin3de dahil olmak üzere hücre türleri vardır. Son yıllarda yapılan çalışmalarda obezite ve diğer metabolik fonksiyon bozukluğu önemli ölçüde yağ dokusu işlev ve hangi içerir ancak adipositler, iltihabi hücre infiltrasyonu genişleme için sınırlı değildir onun microenvironment değiştirebilirsiniz göstermiştir (Örneğin, makrofajlar) ve vasküler disfonksiyon3.
Histoloji ve cryosectioning gibi geleneksel morfolojik teknikleri gibi doku büzülme ve yapısı bozulma3' eyol açabilir uzun kimyasal işleme adımlarını adipose biyoloji okuyan bazı sınırlamaları göstermek, 4. Ayrıca, bu 2D teknikler elde edilen bölümler tüm doku3daha küçük bölgelere sınırlı olarak hücreler arası etkileşimler tarafından farklı hücre tipleri, sarf gözlemlemek yetersizdir. Floresan görüntüleme kıyasla geleneksel yöntemleri, Bütün Dağı boyama katıştırma, kesit ve su kaybı gibi ek invaziv adımları gerektirmez; Böylece, bu antikor özgüllük azalan sorunu önler. Bu nedenle, adipocyte Morfoloji ve genel yağ doku yapısı5daha iyi korunması ile görüntüleme yağ dokusu için basit ve etkili bir yöntem olduğunu. Bu nedenle, bütün bir hızlı ve ucuz immunolabeling Teknik yağ dokusu 3D Mimarlık1,6,7,8korumak için belirlenen boyama monteli.
Ancak, Bütün Dağı boyama kullanımı ile yağ dokusu morfoloji korunması rağmen bu teknik dokusunun lipid yüzeyin altında iç yapıları görselleştirmek hala değiştiremiyor. Birkaç son çalışmalar9,10 yağ dokusu içinde kapsamlı 3D görüntüleme için izin vermek için bütün-mount immunolabeling1,6 ile birlikte teknikleri takas doku kurduk. Özellikle, yoğun nöral ve damarlara ağları son çalışmalar9,10,11,12 ile 3B cilt görüntüleme görüntülenir. Nitekim, Yağ dokusundan farklı fizyolojik koşullar altında sinir ve damar plastisite eğitim onun biyoloji çalışma için gerekli olduğunu. Immunolabeling etkin üç boyutlu görüntüleme solvent temizlenmiş organlar (iDISCO +) doku Temizleme metanol öncesi tedavisi, immunolabeling, oluşan ve organik kimyasal reaktifler diklorometan (DCM ile doku solukluk, takas bir süreçtir ) ve dibenzyl eter (DBE)13,14. Yağ dokusu tamamen saydam yaparak, kan damarları ve sinir lifleri gibi doku içinde anatomi daha doğru bir temsil9,10elde edilebilir. IDISCO + çeşitli antikor ve floresan gazetecilere11,14ile uyumlu ve birden fazla organ ve hatta embryoes14başarı göstermiş olduğu avantajları vardır. Ancak, onun ana sınırlama 18-20 gün tüm deney tamamlamak için gerekli olan bir uzun bir kuluçka zamanı geldi.
Bütün Dağı boyama başka bir önemli hücre kaderi bir soy izleme sistemi ile birlikte görselleştirme bir uygulamadır. Soy izleme tüm kızı hücrelere geçişini sağlamak ve zaman15korunmuş bir hücreye belirli bir gen/işaretleyici etiketleme olduğunu. Bu nedenle, bu bir hücrenin Döl15kaderini belirlemek için kullanılan güçlü bir araçtır. 1990'lardan beri Cre-LoxP rekombinant sistem soy izleme yaşam için güçlü bir yaklaşım haline gelmiştir organizmalar15. Ne zaman bir loxP-STOP-loxP dizisine bitişik bir muhabir ifade başka bir fare çizgi ile Cre, bir DNA recombinase enzim ifade eden fare haddini aştı, ifade15muhabir proteindir.
Bütün Dağı boyama için floresan çok renkli gazetecilere kullanımı adipocyte16hücre içi faaliyetleri ile minimal girişim için izin verdiği için yağ dokusunun görüntüleme için uygundur. Ancak, geleneksel gazeteciler genellikle sitoplazmik içerik17sınırlı beyaz adiposit soyundan izini zorlaştırır sitoplazma, leke. Bu sorunu çözmek için floresan tdTomato membran/membran bağlı eGFP (mT/mG) muhabir işaret kullanımını ideal bir araçtır. TdTomato membran hedefli Cre-negatif hücreleri18' ifade edilir. CRE eksizyon membran hedefli eGFP ifade için bir geçiş oluşur, bu muhabir adipocyte ataları17,18 (Ek şekil 1) soy izleme için uygun yapma.
Bütün Dağı boyama için detaylı bir protokol sağlar ve geliştirme ve yağ dokusu fizyolojisi çalışmaya diğer teknikleri ile birleştirilmesi göstermek için bu kağıt amacı budur. İki uygulamalar bu iletişim kuralında tanımlanan kullanımı adiposit ve 2) doku daha fazla beyaz Yağ dokusundan (WAT) sinir arborization görselleştirmek için takas çeşitli kökenleri tanımlamak için 1) çok renkli muhabir fare çizgili örnekleridir.

<table><tbody><tr><td>LipidTox</td><td>Life Technologies</td><td>H34477</td><td></td></tr><tr><td>PECAM-1 primer antikoru</td><td>Millipore</td><td>MAB1398Z(CH)</td><td></td></tr><tr><td>TH (tirozin hidroksilaz) primer antikoru</td><td>Millipore</td><td>AB152, AB1542</td><td></td></tr><tr><td>DAPI lekesi</td><td>BD Pharmingen</td><td>564907</td><td></td></tr><tr><td>Nikon A1R konfokal mikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td>Konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>Ultramikroskop I</td><td>LaVision BioTec</td><td></td><td>Işık tabakası görüntüsü floresan mikroskobu</td></tr><tr><td>Alexa Fluor ikincil antikorlar</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td></td><td>Dalga boyları 488, 594 ve 647 kullanılan</td></tr><tr><td>Saflaştırılmış Sıçan Anti-Fare CD16/CD32</td><td>BioSciences</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Diklorometan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>270997</td><td></td></tr><tr><td>Dibenzil-eter</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>33630</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>A452-1</td><td></td></tr><tr><td>%30 Hidrojen Peroksit</td><td>BIO BASIC CANADA INC</td><td>HC4060</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Glisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>J7126</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Lektin kiti I, floresein etiketli</td><td>VECTOR LABORATORIES</td><td>FLK-2100</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA497GA</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Sert Set Montaj Ortamı, DPAPI ile Vektör</td><td>Laboratuvarları</td><td>H-1500</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Fosfat Tampon Salin (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Triton-X</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hayvan serumu (keçi, eşek)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bütün dağı boyama kullanarak 3d beyaz yağ doku yapısı görselleştirme

Visualization of 3D White Adipose Tissue Structure Using Whole-mount Staining

Yağ dokusu yüksek plastisite ile önemli bir metabolik organ ve çevresel uyaranlara ve besin durum duyarlı. Bu nedenle, Morfoloji ve yağ dokusu biyoloji çalışmaya çeşitli teknikler geliştirilmiştir. Ancak, geleneksel görüntüleme yöntemleri 3D Mimarlık bütün organ yakalamak başarısız doku, 2D bölümlerde eğitim için sınırlıdır. Burada bütün-mount mevcut boyama, en az işlem adımları ile olduğu gibi yağ dokusu morfoloji korur bir immünhistokimya yöntemi. Bu nedenle, adipositler ve diğer hücresel bileşenleri yapılar dokusunun en iyi temsil eden 3 boyutlu görselleştirme elde bozulma korunur. Buna ek olarak, Bütün Dağı boyama hücre kader kararlar belirlemek için soy izleme yöntemleri ile birleştirilebilir. Ancak, bu teknik daha derin bölgelerinde yağ dokusu ile ilgili doğru bilgi sağlayan bazı sınırlamalar vardır. Bu sınırlamayı aşmak için bütün Dağı boyama daha fazla doku doku solukluk kaldırmak ve tüm yağ dokusu anatomi ışık sayfalık floresan mikroskopisi kullanılarak tam görselleştirme için izin vermek için teknikleri temizlenmesi ile kombine edilebilir. Bu nedenle, bir daha yüksek çözünürlük ve yağ dokusu yapıları daha doğru bir şekilde temsil bu tekniklerin birleşimi ile yakalanabilir.

Yağ dokusu kırılganlık nedeniyle, birden çok işlem adımları içeren ve kesit yöntemleri yağ dokusu morfoloji3 (resim 1A) şekil bozukluğu için yol açabilir. Ancak, Bütün Dağı boyama sonuçları (Şekil 1B) doğru yorumlanması sağlanması adipositler, morfoloji koruyabilirsiniz.
Aşırı yağ dokusu fiksasyonu sabitleştirici kaynaklı autofluorescence yol açar. Şekil 2Agösterildiği gibi yeşil v...

Yağ dokusu mimarisi ve hücresel bileşeni 3D görüntüleme için ideal bir yöntem olarak bütün Dağı immunostaining ve görselleştirme tekniği göstermek için çalışmanın odak noktasıdır.

Bütün Dağı boyama kullanarak 3D beyaz yağ doku yapısı görselleştirme

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various ...

Bu yöntem, oruç ve obezite gibi farklı metabolik koşullara göre hücreler arası etkileşimlerin ve yağ dokusu fizyolojisinin nasıl değiştiği gibi yağ biyolojisi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, orijinal yağ 3D yapısını en iyi şekilde koruması ve genellikle konvansiyonel immünohistokimya için gerekli olan uzun işleme adımlarından kaçınmasıdır. Bu yöntem yağ dokusunun yapısına ışık sağlasa da, beyinde tam montaj boyama ile sinir sistemi gibi diğer organ sistemlerine de uygulanabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni bireyler mülkiyet doku siteleri alma zorlukları nedeniyle mücadele edecek, uygun fiksasyon dönemi bulma, ve optimal antikor konsantrasyonları. Diseksiyon tamamlandıktan sonra, %1 paraformaldehitteki doku örneklerini içeren kabı buzdan oda sıcaklığına bir saat aktarın. Daha sonra daha hızlı yıkama için 12 veya 24-iyi hücre kültür plakası dokuları aktarın.Tüm montaj boyama işleminin diseksiyondan hemen sonra başlaması gerektiğini ve her adım arasında duraklama noktası olmadığını unutmamak önemlidir. PBS-0.3T ile dokuları 22 derecede eğilmiş bir çalkalayıcıda, oda sıcaklığında dakikada 20 ila 25 eğim hızıyla beş dakika boyunca yıkayın. Bu yıkamayı iki kez daha tekrarlayın.Bundan sonra, %5 hayvan serumu içeren yaklaşık 0,5 ila bir mililitre bloke tampon ekleyin. Bir saat için önceki koşulları kullanarak bir shaker üzerinde plaka kuluçka. Engelleme çözeltisini aspire edin ve PBS-0.3T'de seyreltilmiş primer antikorların mililitresini her kuyuya %1 hayvan serumu ile ekleyin.Plakayı bir gecede 4 santigrat derecede, 22 derece eğim ve dakikada 20 ila 25 eğim hızıyla kuluçkaya yatırın. Ertesi gün, beş dakika oda sıcaklığında dokuları yıkamak için PBS-0.3T kullanın. Bu yıkamayı iki kez daha tekrarlayın.Daha sonra, her kuyuya 0,5 ila bir mililitre uygun ve seyreltilmiş ikincil antikor çözeltileri ekleyin. Alüminyum folyo plaka sarın ve bir saat oda sıcaklığında bir shaker üzerinde kuluçka. Bundan sonra, yıkama başına beş dakika oda sıcaklığında PBS-0.3T ile iki kez plaka yıkayın.Nötr lipid lekesi sırasında sıvı damlacıklarının görüntülenmesi gerekiyorsa, her yıkama beş dakika süren 1x PBS ile iki kez yıkayın. PBS seyreltilmiş nötr lipid leke ekleyin ve oda sıcaklığında kuluçka 30 dakika. Görüntülemeye başlamak için, 24'e 60 milimetrelik cam kapak fişinin üzerine doku düz döşenmek için terpler kullanın.DAPI ile çekirdek boyama isteniyorsa, dokuyu tamamen batırmak ve kurumasını önlemek için DAPI içeren bir montaj ortamının bir ila iki damlaekleyin. Daha sonra, ters bir confocal lazer mikroskop sistemi üzerine slayt yerleştirin. Birden fazla odak düzleminde tam montajlı lekeli doku görüntülerini elde etmek için, istenilen büyütme de dört ila altı mikrometre adım boyutu ile derinliği nde 100 ila 150 mikrometre Z yığınları gerçekleştirin.Bu çalışmada yağ dokusu mimarisini korumak için tam montaj boyama kullanılmıştır. Birden fazla işleme adımları ve kesit içeren yöntemlerin aksine, hangi yağ dokusu morfolojisi şekil bozukluğuna yol açabilir, tüm montaj boyama yöntemi adipositlerin morfolojisi koruyabilir, sonuçları yorumlarken doğruluk sağlanması. Yağ dokusunun aşırı fiksasyonu fiksatif kaynaklı floresan yol açar, hangi aynı bölgeleri örtüşen tarafından endike olabilir, tirozin hidroksilaz ve PECAM-1 sinyalleri burada görülen gibi.Düzgün sabit, tam montaj leke örnekleri, ancak, bu sinyaller otofloresan olmadığını belirten ayrı ve farklı sinyaller göstermektedir. Tüm montajlı lekeli yağ dokusunun görüntülenmesi, farklı deneysel koşullar altında morfolojik değişikliklerin ölçülmesine olanak sağlar. Özellikle, yağ dokusu yüksek vaskülarize, hangi enerji düzeyinde hızlı değişiklikler üzerine metabolik homeostaz aracılık önemlidir.Örneğin, 24 saatlik oruç tutan C57 siyah 6J fareler, lipoliz olduğunu gösteren önemli ölçüde daha küçük bir adiposit boyutu ve sürekli beslenen farelerle karşılaştırıldığında kan damarı yoğunluğunda bir eğilim gösterir. iDISCO+ile yağ dokularının temizlenmesi yağ dokularının optik olarak saydam olmasını sağlar. Doku açıklığına geçmiş yağ dokusunun immünetiketleme aynı büyütme doku temizleme olmadan tam montaj boyama gözlenen göre çok daha yoğun nöral arborization gösterir.Bu yordamı denerken, PFA oda sıcaklığında bir saatten fazla numuneleri aşırı yayıltmamak için hatırlamak önemlidir, aksi takdirde, bu arka plan otofloresansını artıracaktır. Ancak, numuneler dört santigrat derecede sabitlenirse bu fiksasyon süresi uzatılabilir. Bu prosedürü takiben, ImageJ kullanarak nicelleştirme gibi diğer yöntemler, adiposit siteleri ve kan damarı yoğunluğu gibi hücresel mimari, çeşitli fizyolojik koşullara yanıt olarak nasıl değiştirmek gibi ek soruları cevaplamak için yapılabilir.

visualization-3d-white-adipose-tissue-structure-using-whole-mount

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Büyük dokular içindeki floresan etiketli hücrelerin yüksek çözünürlüklü görüntülerini elde etmek için, ideal olarak, biyolojik numuneler kesitlere ayrılmadan görüntülenmelidir. 3DISCO, organik çözücülerle sıralı inkübasyona dayanan basit bir doku temizleme prosedürüdür. Temizlendikten sonra, organlar şeffaf hale gelir ve numunenin uçtan uca lazer taramasına izin verir.

Görüntüleme 3DISCO ile Hücresel Düzeyde Sağlam Biyolojik Sistemleri Temizlendi

Bu protokol, MRI ile bütün kalp miyokard dokusu 3D karşılaştırmak için yeni bir yöntem tarif eder. Bu miyokard enfarktüsü, kronik domuz modelinde enfarktüs sınır bölgesinde intramiyokardiyal enjeksiyonları tam olarak değerlendirilmesi için tasarlanmıştır.

3D Tüm kalp Miyokard Doku Analizi

Bu çalışma, konfokal görüntüleme yöntemlerinin tam olarak kullanılmasını sağlayan kalın, üç boyutlu doku kesiti analizi için yeni bir işleme ve görüntüleme protokolü sunmaktadır. Bu protokol antijenliği korur ve cilt histolojisini ve potansiyel olarak diğer doku tiplerini analiz etmek için sağlam bir sistemi temsil eder.

Yatay Dağ Dağı: Derinin kalın, üç boyutlu doku kesitleri için yeni bir İşleme ve Görüntüleme Protokolü

Yüksek lipid içeriği nedeniyle yağ dokusu geleneksel histolojik yöntemlerle görselleştirmek için zor oldu. Adipo-temiz sağlam etiketleme ve yağ dokusu yüksek çözünürlüklü hacimsel floresan görüntüleme sağlayan tekniği temizleyerek bir dokudur. Burada, numune hazırlama, ön, boyama, takas ve montaj için görüntüleme yöntemleri açıklanmaktadır.

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Yeni kan damarı oluşumu ve sempatik innervasyon yağ dokusu remodeling içinde önemli rol oynarlar. Ancak, görselleştirme ve kantitatif yağ dokusu ölçme teknik sorunlar kalır. Burada başarılı bir şekilde etiketleyin ve kantitatif kan damarları ve sinir lifleri farklı yağ dokularında yoğunlukları karşılaştırmak için bir iletişim kuralı mevcut.

Kan damarları ve sinir lifleri yağ dokusu içinde Co boyama

Burada, hem fare hem de insan beyaz yağ dokusunun 3Boyutlu yapısını çözüme kavuşturmak için basit, ucuz ve hızlı bir temizleme yöntemi tanımlıyoruz.

Metiyatisilin Temizleme ve 3D Görüntüleme ile Yağ Dokusu Yapısının Araştırılması

Mikro-PET/MR görüntüleme tabanlı bir yaklaşım kullanılarak farelerde termojenik yağ depolarının fonksiyonel görüntülenmesi ve kantitasyonu.

[18F]FDG Micro-PET/MR Görüntüleme Kullanılarak Farelerde Kahverengi ve Bej Yağ Dokularının Görselleştirilmesi ve Ölçülmesi

Sağlıklı kas dokusunun kas içi yağ ile değiştirilmesi, insan hastalıklarının ve koşullarının belirgin bir özelliğidir. Bu protokol, kas içi yağın nasıl görselleştirileceğini, görüntüleneceğini ve ölçüleceğini ana hatlarıyla belirtir ve kas içi yağ oluşumunun altında yatan mekanizmaların titizlikle incelenmesine izin verir.

İskelet Kasında Kas İçi Yağ Oluşumunu ve Hücresel Kökenini İnceleme Kılavuzu

Preadipositler, yenidoğan farelerden alınan interskapular kahverengi yağ dokusunun stromal vasküler fraksiyonundan izole edilir ve lipid damlacıkları biriktiren, moleküler belirteçleri eksprese eden ve olgun kahverengi adipositlerin mitokondriyal morfolojisini gösteren hücrelere farklılaşır. Bu hücreler ayrıca immünofloresan ve transmisyon elektron mikroskobu ile analiz edilir.

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Burada, insan deri altı yağ dokusundan (hSATMVEC'ler) mikrovasküler endotel hücrelerinin izole edilmesi, kültürlenmesi ve fenotiplendirilmesi için bir protokol tanımlanmıştır. Ek olarak, deneysel bir hSATMVEC-adiposit çapraz konuşma modelini açıklıyoruz.

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

Öğrenin, bütün dağı boyama tekniğiyle beyaz yağ dokusunun 3D yapısını görselleştirmeyi. Bu yöntem, oruç ve obezite gibi metabolik koşullarda hücreler arası etkileşimleri incelemeye olanak tanır.

Bütün Dağı boyama kullanarak 3D beyaz yağ doku yapısı görselleştirme

Daha fazla video keşfet