Protein kinaz C-delta inhibitör peptid formülasyonu altın nano tanecikleri kullanarak

İki özel kısa peptidde 20 nanometre altın parçacıklar kullanan benzersiz ilaç dağıtım sistemimiz, fizyolojik çözeltide altın nano parçacıkları stabilize edebilir ve hücresel alımını artırabilir ve böylece peptid bazlı veya diğer ilaçları hücrelere etkin bir şekilde ulaştırabilir. Bizim GNP peptit hibrid sentezlemek kolay ve istikrarlı. Altın nanopartikül peptid hibridi ilaç taşıyıcıları olarak kullanarak peptid ilaçlarını etkin ve bol miktarda hücrelere aktarabiliriz.

Akciğerlerdeki iskemi-reperfüzyon yarasını GNP/PKCi melezi mizle tedavi ettik. GNP sitoplazmaiçine PKC inhibitör peptidler getiriyor. Bu doğum yöntemi diğer doğum yöntemlerine göre PKCi daha düşük bir doz kullanarak daha ciddi akciğer hasarı azaltmak başardı.

Bu prosedüre başlamak için, eksi 20 santigrat derecede bir dondurucudan peptidler almak ve oda sıcaklığında onları eritin. Her çözülmüş peptid 0,01 gram tartmak için bir mikro ölçek kullanın ve ayrı bir 50 mililitre konik tüp içine her peptid transfer. P2 tüpüne 18,74 mililitre deiyonize su ve P4 tüpüne 16,93 mililitre deiyonize su ekleyin.

PKC delta inhibitör tüpüne deiyonize suda seyreltilmiş %50 asetonnitit 8.21 mililitre ekleyin. Vortex peptit çözeltileri kısaca. Sonra tüpleri 40 megahertz'de bir sonicator'a beş dakika lığına yerleştirin.

Bundan sonra, bir biyogüvenlik kabine çözümleri aktarın. 50 mL konik tüpü beş dakika süreyle bir sonicator'a koymak çok önemlidir. Bu adım atlanırsa, GNP/PKCi toplamalar oluşturur.

Her peptit çözeltisinin bir mililitresini kendi yeni 50 mililitrelik konik tüpüne aktarın. P2 ve P4 içeren tüplere 19 mililitre deiyonize su ekleyin. Ve PKC delta inhibitörü içeren tüpe 19 mililitre %50 asetonitil ekleyin. 15 mililitrelik bir tüpe 475 mililitre P2 çözeltisi, 25 mikrolitre P4 çözeltisi, 500 mikrolitre PKC delta inhibitörü çözeltisi ekleyin.

Daha sonra aynı tüpe 20 nanometrelik bir GNP çözeltisinin dokuz mililitresini ekleyin. Kombine solüsyonu biyogüvenlik kabininden çıkarın ve tüpü alüminyum folyoya sarın. Tüpü bir gecede çalkalayın.

Ertesi gün, örnekleri biyogüvenlik kabinesine geri ver. 1,5 mililitrelik mikro tüpler içine GNP / PKCi çözeltisi bir mililitre aliquots aktarın. Mikro tüpleri 15294 kez g'de mikro santrifüj ve 4 santigrat derecede 30 dakika santrifüj edin.

Mikro tüpleri biyogüvenlik kabinesine geri aktarın ve GNP peletinin rahatsız olmamasını sağlarken her tüpten süpernatenti çıkarın. Istenilen çözücüde her pelet istenilen konsantrasyona göre yeniden askıya alın. GNP/PKCi hibrid çözünürlüğünü değerlendirmek için, 0,5 mililitre GNP/PKCi çözeltisini tahakkuk cuvette'e dökün.

Bir UV-Vis spektrofotometre üzerine cuvette yerleştirin ve pik emilimini test edin. Bu çalışmada, protein kiazcın C-delta inhibitörü altın nano tanecikleri ile bir GNP / PKCi hibrid oluşturmak için konjuge edilir. Altın nano tanecikleri bir çözücüde biraraya gelmekeğilimindedir gibi bakım, melez biyofiziksel özellikleri değerlendirilmesi ile alınmalıdır.

Nano tanecikleri biraraya geldiğinde, çözeltinin rengi pembeden mora dönüşür. Numuneler, yüksek hassasiyetle tespit edebilen UV-Vis spektrofotometresi ile analiz edilir. Melez toplanmış değilse, bir emme pik olmalıdır 525 nanometre.

GNP toplanırsa, emilimin zirvesi sağa kaydırılır. Görüldüğü gibi, agregalar oluştuğunda delta optik yoğunluğu azalır. GNP peptid melezleri formüle edilirken, peptidlerin GNP çözeltisine oranının 1-9 arasında olması gerektiğini hatırlamak önemlidir.

Bu GNP/PKCi formülü akciğer dışındaki organ sistemlerinde iskemi-reperfüzyon yaralanması için kullanılabilir. Bu peptidler N-terminus bir sistein kalıntısı varsa herhangi bir peptidler GNP ekleyebilirsiniz. Bu GNP peptit hibrid hücreiçine diğer peptit ilaçları taşımak için kullanılabilir anlamına gelir.

Rasyonel olarak tasarlanmış peptidler bu hücrelerin içinde spesifik protein-protein etkileşimi getirebilir yeni teknoloji vardır. Burada geliştirilen bu teknik, yeni peptit ilaçların teslimi veya mevcut ilaçların değiştirilmiş versiyonları için kullanılabilir.