Name: Lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif Terapisi için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Keşfedin lipoaspirat örneklerinden mekanik yöntemle SVF izolasyonunu. Bu kolajenaz içermeyen protokol, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmaları için yerel ekstraselüler matriksi koruyarak güvenilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser desteklenmiştir (81471881, 81601702, 81671931) Çin'in Ulusal Doğa Bilim Vakfı, Guangdong Eyaleti Çin (2014A030310155) ve Nanfang hastane yöneticisi Foundation (2014B009, doğal Bilim Vakfı tarafından 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).

Bu araştırma etik teftiş kuruluna Nanfang hastanesine, Guangzhou, Çin tarafından kabul edildi. Yağ dokusu bağışçılardan çalışma katılmak için yazılı onay veren sağlıklı toplanmıştır. Tüm hayvan deneyleri Nanfang Hastanesi kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve ulusal sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (Çin) kurallarına göre yapılır.
1. ECM/SVF-jel hazırlık
<ol><li>Hasat yağ.<ol>
<li>Liposuction bir insan 1 mm çapında,-0.75, birkaç keskin tarafı delik içeren bir 3 mm birden çok bağlantı noktalı kanül ile gerçekleştirmek atm emme baskı.</li>
		<li>200 mL steril bir torbaya lipoaspirates toplamak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coleman yağ hazırlayın.<ol>
<li>Lipoaspirates dört 50 mL tüpler içine aktarmak ve hala 10 dakikadır durmak hasat yağ sağlar.</li>
		<li>Yağ üst katmanda iki 50 mL tüpler içine aktarmak için geniş uçlu pipet kullanarak toplama ve alt katmanında sıvı kısmını atın.</li>
		<li>50 mL tüpler, centrifugate yağ katman 3 dakikadır vasıl 1200 x g oda sıcaklığında (RT) kullanarak.</li>
		<li>Üst katmanı (yaklaşık 80 mL) Coleman fat olarak tanımlayın.</li>
		<li>Geniş uçlu pipet kullanarak 20 mL tüp üst 2/3 Coleman yağ aktarmak ve bu bölümü düşük yoğunluklu fat olarak tanımlayın.</li>
		<li>Geniş uçlu pipet kullanarak başka bir 20 mL tüp alt 1/3 Coleman yağ aktarmak ve bu bölümü yüksek yoğunluklu fat olarak tanımlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ECM/SVF-jel düşük yoğunluklu yağ üretmek.<ol>
<li>Düşük yoğunluklu yağ 20 mL intershift bir erkek erkek radarı-Lock konektörü (ile 2.4 mm bir iç çapı) tarafından bağlı iki 20 mL şırınga kullanarak.</li>
		<li>Değişen hız (20 mL/s) sabit tutmak ve 6 x 8 x için yineleyin.</li>
		<li>Centrifugate 2.000 x g de RT 3 dk karisimin.</li>
		<li>Geniş uçlu pipet RT için daha fazla kullanılmasını kullanarak üstünde belgili tanımlık tepe 10 mL tüp içinde petrol bölümü toplamak.</li>
		<li>Yapışkan madde ECM/SVF-jel (şekil 1A), geniş uçlu pipet kullanmaktır, Orta tabaka içinde toplamak ve sıvı alt katmanında atın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ECM/SVF-jel yüksek yoğunluklu yağ üretmek.<ol>
<li>5 mL (--dan adım 1.3.4 toplanan) yağı 15 mL yüksek yoğunluklu yağ ekleyin.</li>
		<li>Karma yağ şırınga 6 arasında intershift x 8 x kadar bir flocculate emülsiyon içinde görülmektedir.</li>
		<li>Centrifugate 2.000 x g de RT 3 dk karisimin.</li>
		<li>Petrol kısmı üst üzerinde atmak.</li>
		<li>Orta tabaka (ECM/SVF-jel) yapışkan madde geniş uçlu pipet kullanarak toplama ve sıvı alt katmanında atın.</li>
		<li>ECM/SVF-jel adımlardan 1.3.5 ve 1.4.5 karıştırın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. çıplak fare ECM/SVF-jel greft modeli
<ol><li>Çıplak fareler anestezi (8 hafta yaşlı, kadın) ile isoflurane (% 1-%3) inhalasyon anestezi bir hayvan operasyon odasında.</li>
	<li>ECM/SVF-jel 1 mL şırınga aktarın.</li>
	<li>1 mL şırınga künt infiltrasyon kanül ile bağlayın.</li>
	<li>Kanül subkutan fare her kanat yerleştirin.</li>
	<li>ECM/SVF-jel 0.3 mL enjekte.</li>
</ol>3. doku 3, 15 ve 90 gün sonra ECM/SVF-jel enjeksiyon hasat
<ol><li>Fareler isoflurane (% 1-%3) ile anestezi inhalasyon anestezi.</li>
	<li>Fareler servikal çıkığı yöntemi tarafından kurban.</li>
	<li>Bir kesi ile Cerrahi makas fare dorsal cilt orta hat olun.</li>
	<li>İncelemek ve fare her iki tarafında yağ greft hasat. Yağ greft %4 paraformaldehyde RT, bir gecede katıştırın.</li>
	<li>Etanol konsantrasyonları artan doku kurutmak: % 70 etanol, iki değişiklik, 1 h her; % 80 etanol, bir değişiklik, 1 h; % 95 etanol, bir değişiklik, 1 h; % 100 etanol, üç değişiklik, 1,5 saat; Ksilen, üç değişiklik, 1,5 saat.</li>
	<li>Parafin balmumu (58-60 ° C), iki değişiklik, 2 h ile doku sızmak.</li>
	<li>Doku parafin blok embed. Yaklaşık 4 µm kalınlığa, bölümleri ve onları slaytlar üzerine koydu.</li>
</ol>4. Hematoksilen ve Eozin boyama
<ol><li>Parafin blok slaytlar ıslatarak onları Ksilen içinde ı, II ve III (10 dk her) deparaffinize.</li>
	<li>Onları konsantrasyonlarda (% 100, % 100, % 95, % 80'i, % 70) azalan üzerinden geçerek doku bölümleri suyla temasa 3 min için etanol hamamları.</li>
	<li>Distile su (5 dk) doku bölümlerde durulayın.</li>
	<li>Hematoksilen 5 min için doku bölümlerde leke.</li>
	<li>Musluk suyu 20 dk. Decolorize için % 1 asit alkol çalışan doku bölümleri durulama (% %1 70 alkol HCl) bölümleri tekrar maviye dönüşene kadar akan musluk su içinde 5 s. durulama için.</li>
	<li>Eozin Y boya doğrudan slayt pipet tarafından üzerine 2-3 damla ekleyin ve 10 dakikadır ayarla boya izin.</li>
	<li>Slaytları musluk suyu 1-5 dakika yıkayın.</li>
	<li>Konsantrasyonlarda (% 70, %80, % 95, % 100, % 100) artan slaytlar kurutmak 3 min için etanol.</li>
	<li>Temizleyin Ksilen içindeki slaytları ı ve II 5 dk her.</li>
	<li>Ortam takma içinde slaytlar bağlayın.</li>
</ol>5. immünfloresan boyama
<ol><li>Deparaffinize Ksilen doku bölümlerde ı, II ve III (5 dk her).</li>
	<li>Doku bölümleri farklı konsantrasyonlarda (% 100, % 100, % 95, % 95, % 70) geçerek suyla temasa 3 min için alkol hamamları.</li>
	<li>RT, metanol 10 min için bir % 3 H2O2 çözümde bölümlerde kuluçkaya.</li>
	<li>Durulama kaymak 2 x ile distile su, 5 dak.</li>
	<li>Slaytları bir slayt sepete at. 10 mM sitrat arabellek (pH 6.0) 300 mL ekleyin ve 10 min 95-100 ° C'de slaytlarını kuluçkaya.</li>
	<li>RT slayt 20 dk için ne yapıyorsun?</li>
	<li>Durulama kaymak 2 x fosfat tamponlu tuz (PBS), 5 min ile.</li>
	<li>100 µL % 10 fetal sığır serum slayda ekleyin ve 1 h için RT, oksijen bir odasında kuluçkaya.</li>
	<li>Birincil antikor çözüm (eskiden şiling şimdi domuz Anti-fare Perilipin, 1: 400) 4 ° C'de bölümlerle gecede kuluçkaya.</li>
	<li>PBS 3 kaydıraklı durulama x, 5 dak.</li>
	<li>İkincil antikor çözüm bölümlerle kuluçkaya (keçi Anti-eskiden şiling şimdi domuz-488 IgG) için 2 h RT.</li>
	<li>PBS 3 kaydıraklı durulama x, 5 dak.</li>
	<li>Temiz kağıt mendil ile bölüm etrafında su yok etmek.</li>
	<li>' 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ve Alexa Fluor 488 Birleşik isolectin kısmındaki slayt üzerinde karşılamak için çember içine bırakın.</li>
	<li>Coverslips dağ ve koyup karanlıkta kuruyuncaya kadar bırakın.</li>
	<li>Slaytlar ile floresan mikroskop gözlemlemek.</li>
</ol>

<ol><li>Bateman, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Fat+to+Fight+Disease%3A+A+Systematic+Review+of+Non-Homologous+Adipose-Derived+Stromal%2FStem+Cell+Therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies.</a> Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).</li>
<li>Baer, P. C., Geiger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stromal%2Fstem+cells%3A+tissue+localization%2C+characterization%2C+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity.</a> Stem Cells International. , 812693(2012).</li>
<li>Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells for regenerative medicine.</a> Circulation Research. 100 (9), 1249-1260 (2017).</li>
<li>Halme, D. G., Kessler, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+regulation+of+stem-cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">FDA regulation of stem-cell-based therapies.</a> New England Journal of Medicine. 355 (16), 1730-1735 (2006).</li>
<li>Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+spheroid+formation+of+human+adipose-derived+stem+cells+on+chitosan+films+on+stemness+and+differentiation+capabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities.</a> Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).</li>
<li>van Dongen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intraoperative+procedures+for+isolation+of+clinical+grade+stromal+vascular+fraction+for+regenerative+purposes%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of intraoperative procedures for isolation of clinical grade stromal vascular fraction for regenerative purposes: a systematic review.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 261-274 (2018).</li>
<li>van Dongen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractionation+of+adipose+tissue+procedure+to+obtain+stromal+vascular+fractions+for+regenerative+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">The fractionation of adipose tissue procedure to obtain stromal vascular fractions for regenerative purposes.</a> Wound Repair and Regeneration. 24 (6), 994-1003 (2016).</li>
<li>Mashiko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+Micronization+of+Lipoaspirates%3A+Squeeze+and+Emulsification+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Mechanical Micronization of Lipoaspirates: Squeeze and Emulsification Techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (1), 79-90 (2017).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micronized+cellular+adipose+matrix+as+a+therapeutic+injectable+for+diabetic+ulcer%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Micronized cellular adipose matrix as a therapeutic injectable for diabetic ulcer.</a> Regenerative Medicine. 10 (6), 699-708 (2015).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+flap+survival+improvement+by+composition-selective+fat+grafting+with+novel+adipose+tissue+derived+product+-+stromal+vascular+fraction+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+and+Biophysics+Research+Communication%22%5BJournal%5D)">Ischemic flap survival improvement by composition-selective fat grafting with novel adipose tissue derived product - stromal vascular fraction gel.</a> Biochemistry and Biophysics Research Communication. 495 (3), 2249-2256 (2018).</li>
<li>Tonnard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanofat+grafting%3A+basic+research+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Nanofat grafting: basic research and clinical applications.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 1017-1026 (2013).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Extracellular+Matrix%2FStromal+Vascular+Fraction+Gel%3A+A+Novel+Adipose+Tissue-Derived+Injectable+for+Stem+Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Adipose Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel: A Novel Adipose Tissue-Derived Injectable for Stem Cell Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (4), 867-879 (2017).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stromal+Vascular+Fraction+Gel+Grafting%3A+A+New+Method+for+Tissue+Volumization+and+Rejuvenation%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatologic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Adipose Stromal Vascular Fraction Gel Grafting: A New Method for Tissue Volumization and Rejuvenation.</a> Dermatologic Surgery. 44 (10), 1278-1286 (2018).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Long-Term+Volume+Retention+of+Stromal+Vascular+Fraction+Gel+Grafting+with+Enhanced+Angiogenesis+and+Adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved Long-Term Volume Retention of Stromal Vascular Fraction Gel Grafting with Enhanced Angiogenesis and Adipogenesis.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (5), 676-686 (2018).</li>
<li>Sun, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+stem+cell-derived+exosomes+in+tissue+engineering+and+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+the+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Applications of stem cell-derived exosomes in tissue engineering and neurological diseases.</a> Reviews in the Neurosciences. 29 (5), 531-546 (2018).</li>
<li>Allen, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grading+lipoaspirate%3A+is+there+an+optimal+density+for+fat+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Grading lipoaspirate: is there an optimal density for fat grafting.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (1), 38-45 (2013).</li>
<li>Qiu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+Centrifuged+Lipoaspirate+Fractions+Suitable+for+Postgrafting+Survival%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Identification of the Centrifuged Lipoaspirate Fractions Suitable for Postgrafting Survival.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 137 (1), 67-76 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kök hücre tabanlı rejeneratif terapisi büyük potansiyel yarar farklı hastalıklarda göstermiştir. Kolay elde etmek ve doku onarımı ve roman doku15rejenerasyon için kapasitesine sahip oldukları için ASCs en iyi tedavi adaylardır. Ancak, hücreleri ve collagenase6işlemek için izole etmek için karmaşık prosedürler gerektirdiğinden klinik uygulama, genişleyen sınırlamalar vardır. Böylece, kök hücre collagenase kullanımı olmadan elde etmek için basit bir teknik geliştirmek esastır...

Böylece çeşitli hastalıkları1için alternatif bir tedavi rejimi sunabilir kök hücre tedavileri bir paradigma kayması doku onarımı ve yenilenme için sağlar. Kök hücreleri (örneğin, İndüklenmiş pluripotent kök hücreler ve embriyonik kök hücre) büyük tedavi potansiyel ama hücre düzenleme ve etik kaygılar nedeniyle sınırlıdır. Yağ elde edilen Mezenkimal stromal/kök hücreler (ASCs) lipoaspirates ve aynı sınırlamalarına tabi değil almak kolaydır; Böylece, bu pratik rejeneratif tıp2için bir ideal hücre türü haline gelmiştir. Buna ek olarak, onlar nonimmunogenic ve Otolog yağ3bol kaynaklara sahip.
Şu anda, ASCs esas olarak collagenase-aracılı hazım yağ dokusu tarafından elde edilir. Yağ dokusu stromal vasküler kesir (SVF) ASCs, endotelyal progenitor hücre, perisitlerden ve bağışıklık hücreleri içerir. Enzimatik SVF/ASCs yüksek yoğunluğu elde etmek faydalı etkileri olduğu gösterildi rağmen birçok ülke mevzuatında kesinlikle collagenase4kullanarak hücre tabanlı ürünlerin klinik uygulama düzenlemektedir. Yağ dokusu ile collagenase 30 dk SVF hücreleri elde etmek için 1 h için sindirerek eksojen her iki malzeme hazırlama ve biyolojik kirlenme riski artar. Yapisan kültür ve gün hafta için alır, ASCs, arıtma belirli labaratuar donanımları gerektirir. Ayrıca, çoğu çalışmalarda, süspansiyon SVF hücreleri ve ASCs kullanılır. Hücre dışı Matriks (ECM) veya başka bir taşıyıcı korumasız boş hücre güvenlik açığından etkilenir, zavallı hücre saklama enjeksiyon sonra neden ve tedavi sonucu5uzlaşma. Tüm bu nedenlerle daha fazla uygulama kök hücre tedavisinin sınırlayın.
ASCs collagenase-aracılı sindirim olmadan Yağ dokusundan elde etmek için aralıklarla, doğrama, parçalama, püre ve kıyma, mekanik dahil olmak üzere çeşitli mekanik işleme yordamları gelişmiş6,7 olmuştur , 8 , 9. bu yöntem doku ve ASCs mekanik olarak olgun adiposit ve onların yağ içeren veziküller kesintiye tarafından yoğunlaşmak düşünülmektedir. Ayrıca,8,9,10hayvan rejeneratif tıp modelleri gibi ASCs, yüksek konsantrasyonda içeren bu hazırlıklar, önemli bir tedavi potansiyel gösterdi.
2013 yılında, Tonnard ve ark. emülsifiye lipoaspirates11işleme intersyringe tarafından üreten içerir tekniği aşılama nanofat tanıttı. Değişen intersyringe tarafından oluşturulan kesme Kuvvetleri seçmeli olarak olgun adiposit zarar verebilir. Onların bulgularına dayanarak, sadece SVF hücreleri ve ECM/SVF-jel12fraksiyonlara ECM bırakarak lipoaspirates, lipid ve sıvı çoğunu kaldırır bir tamamen mekanik işleme yöntemi geliştirdi. Burada, insan kaynaklı yağ dokusu ECM/SVF-jel üretmek için mekanik sürecinin ayrıntıları açıklamak.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 488-konjuge izolektin GS-IB4</td><td>Moleküler Problar</td><td>I21411</td><td></td></tr><tr><td>kobay anti-fare perilipin</td><td>Progen</td><td>GP29</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermofisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>geniş uçlu pipet</td><td>Celltreat</td><td>229211B</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop ve nbsp;</td><td>Leica&nbsp;</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr><td>çıplak güzel&nbsp;</td><td>Güney Mdical Üniversitesi</td> <td>/</td><td></td></tr> <tr><td>ışık mikroskobu&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>50 mL tüp</td><td>Cornig</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>steril torba</td><td>Laishi</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>mikrotom</td><td>Leica&nbsp;</td><td>CM1900</td><td></td></tr><tr><td>santrifüj</td><td>Heraus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif terapisi için

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Stromal vasküler kesir (SVF) çeşitli hastalıklar için yenileyici bir araç haline gelmiştir; Ancak, mevzuat kesinlikle collagenase kullanarak hücre ürünlerin klinik uygulama düzenlemektedir. Burada, SVF hücreleri ve yerel hücre dışı matriks enjekte edilebilir bir karışımı yağ dokusu tamamen mekanik bir işlem tarafından oluşturmak için bir protokol mevcut. Lipoaspirates bir santrifüj koymak ve 1200 x g 3 dk de döndü. Orta tabaka toplanır ve (yüksek yoğunluklu alt) ve düşük yoğunluklu yağlı üst iki katmanlara ayrılmış. Üst katman doğrudan intersyringe, 6 x 8 x için 20 mL/s hızında değişen emülsiyon. Emülsifiye yağ 2.000 x g 3 min için de centrifuged ve yapışkan madde yağ tabakası altında toplanan ve hücre dışı Matriks (ECM) tanımlanan / SVF-jel. Üst katmanı yağlıboya toplanır. Yaklaşık 5 mL yağı 15 mL yüksek yoğunluklu yağ eklenir ve intersyringe, 6 x 8 x için 20 mL/s hızında değişen emülsiyon. Emülsifiye yağ 2.000 x g 3 dk de centrifuged, ve yapışkan madde de ECM/SVF-jel. Çıplak fareler içine ECM/SVF-jel nakli sonra rüşvet hasat ve histolojik bir sınava tabi. Sonuçta bu ürün normal yağ dokusu yeniden oluşturmak için potansiyele sahip olduğunu gösterir. Bu yordamı rejeneratif amaçlar için onların doğal destekleyici ECM gömülü SVF hücreleri yoğunlaşmak için basit, etkili mekanik ayrışma bir işlemdir.

Coleman yağ ECM/SVF-jel için işleme sonra atılan petrol hacmi son hacim % 80'i kadar alır ve yağ dokusu korunmuş yağ tabakasının altında sadece % 20'si ECM/SVF-jel (şekil 1A) kabul edilir. ECM/SVF-jel 27 G ince iğne ile gitmesini sağlar pürüzsüz bir sıvı gibi doku vardır; Ancak, Coleman yağ büyük lifleri ile ayrılmaz bir yağ yapısının oluşur ve sadece 18 G kanül (şekil 1B) ile devam edebilirsiniz...

Burada, stromal vasküler kesir emülsifikasyon ve birden çok centrifugations kapsayan mekanik işlemler bir dizi Yağ dokusundan elde etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif Terapisi için

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...

Lipoaspirates gelen stromal vasküler fraksiyonları, veya SVFs elde etmek kollajenaz ile sindirim gerektirir, hangi biyolojik kontaminasyon riskini artırır. Kollajenaz olmadan SVF elde etmek için daha iyi bir yol geliştirilmelidir. Bu teknikler basit bir mekanik işlem le svf'yi doğal hücre dışı matrisinde elde etmemizi sağlar.Prosedürü gösteren Xihang Chen, laboratuarımızdan yüksek lisans öğrencisi olacak. Yağ örneklerini aldıktan sonra, lipoaspirates bir 50 mililitrelik tüp içine aktarın ve hasat yağ 10 dakika boyunca dengelemek için izin. Daha sonra, yeni bir 50 mililitrelik tüp içine tüpün üst tabakasından yağ çekmek ve santrifüj ile yağ aşağı spin için geniş bir ucu pipet kullanın.Tüpün üst tabakası Coleman yağ fraksiyonudur. Coleman yağının üst 2/3'ünü 15 mililitrelik yeni bir tüpe aktarın. Bu kısmı düşük yoğunluklu yağ olarak kabul edilir.Coleman yağının alt üçte birini ikinci bir 15 mililitrelik tüpe aktarın. Bu kısmı yüksek yoğunluklu yağ olarak kabul edilir. Düşük yoğunluklu yağ bir ekstrasellüler matris stromal vasküler fraksiyon jel üretmek için, iki 20 mililitre şırınga düşük yoğunluklu yağ intershift 10 mililitre kadın luer kilit konektörü bir kadın tarafından bağlı kullanın.Bu adipositleri yok etmek için önemli bir adımdır. İnterşinga kaymasının hızı ve saati nihai ürünün kalitesine katkıda bulunur. Son intershift seanstan sonra, santrifüj ile yağ toplamak ve 15 mililitrelik tüp üst yağ tabakası aktarın.Sonra yeni bir 15 mililitre konik tüp içine yapışkan orta ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyonu jel tabakası aktarın. Yüksek yoğunluklu yağ bir ekstrasellüler matris stromal vasküler fraksiyon jel üretmek için, yüksek yoğunluklu yağ örnek beş mililitre düşük yoğunluklu yağ fraksiyonu iki mililitre ekleyin. Bir flokküle emülsiyon içinde gözlenenkadar gösterildiği gibi karışık yağ intershift.Santrifüj ile flocculate toplamak ve üst yağ tabakası atın. Sonra yapışkan orta tabaka toplamak ve düşük yoğunluklu ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyon u jel örnek ile bu kesir karıştırın. Ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyon jel Coleman yağ işledikten sonra, atılan yağ hacmi son hacminin% 80 kadar alır, ve yağ tabakası altında korunan yağ dokusunun sadece% 20 ekstrasellüler matris stromal vasküler fraksiyonu jel olarak kabul edilir.Ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyon jel bir 27 gauge ince iğne geçmesine olanak sağlayan pürüzsüz bir sıvı gibi dokuya sahiptir. Ancak, Coleman yağ sadece bir 18 gauge kanül geçebilir büyük lifleri ile integral bir yağ yapısı oluşur. Transplantasyondan sonraki üçüncü gün, birden fazla hücre içi lipid damlacıkları, geniş iyi vaskülarize bağ dokusu ve infiltrasyonlu inflamatuar hücreler ile küçük boyutlu pre-adipositler çok sayıda görünür.15. günden itibaren inflamatuar hücrelerin sayısı yavaş yavaş azalmaya başlar ve adipositler olgunlaşmaya başlar. 90. güne gelindiğinde, greftlerde vaskülarize bağ dokusunun çoğu olgun adipositler ile değiştirilmiştir. Ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyon jel greftleri de transplantasyondan üç gün sonra birkaç perilipin pozitif adiposit içerir, küçük boyutlu pre-adipositler ile, birden fazla hücre içi lipid damlacıkları gün görünmeye başlar 15.Günün her alanında 90 ekstrasellüler matriks stromal vasküler fraksiyon jel greft bölümleri çok sayıda perilipin pozitif adipositler ve yeni oluşan kan damarları sergiler. Akış sitometriürün hücresel popülasyonunu belirlemek için yapılabilir. Ve tarama elektron mikroskobu ürünün mikroyapısını görselleştirmek için yapılabilir.Bu teknik, cerrahlar ve araştırmacılar için yağ dokusundan yerli ekstrasellüler matriks lifleri ile SVF hücrelerinin yüksek konsantrasyonlu bir ürün elde etmek için basit bir yöntem sağlar.

mechanical-micronization-of-lipoaspirates-for-regenerative-therapy

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol izolasyonu açıklar adipoz-türetilmiş lipoaspirate ve iskelet rejenerasyon değerlendirmek için 4 mm kritik ölçüdeki kalvaryal defekt oluşturmadan stromal hücreler.

Lipoaspirate itibaren hasat Yağ kaynaklı stromal hücreler kullanarak Kritik ölçekli Kalvaryum Defekt Model tamiri

2001 yılında, UCLA araştırmacılar erişkin kök hücrelerin bir nüfus izolasyon, adipoz dokudan, Yağ elde edilen kök hücreler veya TSK adlandırılan nitelendirdi. Bu makale kolajenazı kullanarak manuel, enzimatik sindirim protokolü kullanılarak lipoaspirates gelen TSK izolasyonunu özetliyor.

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

Lenf düğümleri immün yanıtı düzenleyen immünolojik dokulardır ve aşılar için kritik bir hedeftir. Lenf düğümlerini daha iyi hedeflemek ve antijenlerin veya yardımcıların doğumlarını kontrol etmek için biyomalzemeler bunların uzaması haline getirildi. Bu makalede, lenf düğümlerine biyouyumlu polimer parçacıkları enjekte etmek için bu fikirleri birleştiren bir teknik açıklanmaktadır.

Biyobozunur Polimer Parçacıklarının Lenf İçi Düğüm Enjeksiyonu

Burada, bir Yağ dokusundan elde edilen stromal vasküler fraksiyonu ve osteoartrit olan insan hastalarda kıkırdak benzeri doku Yenileyici tarafından diz işlevlerini geliştirmek için uygulama üretmek için bir protokol mevcut.

Yağ dokusundan elde edilen Stromal vasküler kesir için potansiyel kıkırdak rejenerasyon üreten klinik protokol

Yöntemlerin ve protokollerin kesin olarak açıklanması, kök hücre tedavilerinin büyük ölçekli alımı için çok önemlidir. Burada, radikal prostatektomi (RP) sonrası erektil disfonksiyon (ED) tedavisi olarak tek bir intrakavernöz enjeksiyon için kullanılan adipoz kaynaklı rejeneratif hücreleri izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Radikal Prostatektomi Sonrası Erektil Disfonksiyon Tedavisinde Yağ Kaynaklı Rejeneratif Hücrelerin İzolasyonu

Burada, kapalı bir sistem cihazı kullanarak insan yağ dokusu enzimsiz mikro-parçalanma sıyoruz. Bu yeni yöntem, in vivo transplantasyon, in vitro kültür ve daha fazla hücre izolasyonu ve karakterizasyonu için uygun yağ dokusunun milimetre altı kümelerinin elde edilmesine olanak sağlar.

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

Mevcut protokol, literatüre kıyasla zaman kazanımı ile muazzam bir hücresel verim ile sonuçlanan ADSC izolasyonu için geliştirilmiş bir metodolojiyi açıklamaktadır. Bu çalışma aynı zamanda uzun süreli kriyoprezervasyondan sonra nispeten çok sayıda canlı hücre elde etmek için basit bir yöntem sunmaktadır.

Uzun Süreli Kriyoprezervasyonda Yağ Dokusundan Mezenkimal Kök Hücre Elde Etme Tekniği ve Stromal Vasküler Fraksiyon Karakterizasyonu

Mekanik olarak izole edilmiş stromal vasküler fraksiyon (SVF), bir fibrin hidrojel ile kombinasyon halinde, doku mühendisliği ve/veya yara iyileşmesi amaçları dahil olmak üzere çeşitli endikasyonlar için canlı adipoz türevli stromal hücreler için kolay ve verimli bir taşıyıcı sunar. Burada, translasyonel araştırma ve klinik uygulama için mekanik bir SVF (mSVF)-fibrin hidrojel yapısının hazırlanmasını sunuyoruz.

Mekanik Olarak İzole Edilmiş Stromal Vasküler Fraksiyon ve Fibrin Hidrojel Kombinasyonu: Bir İşleme Protokolü

Burada, otolog yağ dokusunu farklı fizikokimyasal özelliklere ve fonksiyonlara sahip çeşitli yağ bileşeni maddelere dönüştürebilen bir protokol sunuyoruz.

Yağları Özel Bileşenlere Dönüştürmek için Yenilikçi Yağ Dokusu Fraksiyonasyonu

Bu protokol, kapsaisin ile yüklü α-laktalbumin nanomisellerini içeren çözünebilir mikroiğne yamalarının üretimini tanımlar. Bu yöntem, hidrofobik biyoaktiflerin yağ dokusuna hedefli transdermal ilımı için tekrarlanabilir, minimal invaziv bir yaklaşım sunar; bu da etkili yerel yağ azaltımını kolaylaştırır ve obezite yönetiminde potansiyel olarak uygulama alanlarını genişletir.

Transdermal Kapsaisin Teslimatı ve Yağ Dokusu Indirgemesi için α-Laktalbumin Nanomiselleri Yüklü Çözünebilir Mikro İğne Yamalarının Üretimi

Keşfedin lipoaspirat örneklerinden mekanik yöntemle SVF izolasyonunu. Bu kolajenaz içermeyen protokol, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmaları için yerel ekstraselüler matriksi koruyarak güvenilir sonuçlar sunar.

Lipoaspirates mekanik mikronize rejeneratif Terapisi için

Daha fazla video keşfet