Name: Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Öğrenin arsenik etkilerini in vitro scratch assay yöntemiyle cilt hücre göçünde inceleyin. Bu yöntem, yara iyileşmesi mekanizmalarını ve toksikolojik etkileri hızlıca değerlendirmek için değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayında bildirilen araştırma azınlık sağlık ve sağlık eşitsizliklerin Ulusal Sağlık Enstitüleri Ödülü numarası U54MD012388 altında Ulusal Enstitüsü tarafından desteklenmiştir. İçeriği yalnızca yazarlar sorumludur ve mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmiyor.

<ol><li>Diegelmann, R., Evans, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing%3A+an+overview+of+acute%2C+fibrotic+and+delayed+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+BioScience%22%5BJournal%5D)">Wound healing: an overview of acute, fibrotic and delayed healing.</a> Frontiers in BioScience. 9, 283-289 (2004).</li>
<li>Braiman-Wiksman, L., Solomonik, I., Spira, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+into+wound+healing+sequence+of+events%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Novel insights into wound healing sequence of events.</a> Toxicologic Pathology. 35, 767-779 (2007).</li>
<li>Michelson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMichelson%2C+A+%22Platelets%22">Platelets</a>. , 3rd edition, Waltham, Massachusetts. (2013).</li>
<li>Aikawa, M., Schoenbechler, M. J., Barbaro, J. F., Sadun, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+rabbit+platelets+and+leukocytes+in+the+release+of+histamine.+Electron+microscopic+observations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Interaction of rabbit platelets and leukocytes in the release of histamine. Electron microscopic observations.</a> American Journal of Pathology. 63 (1), 85-98 (1971).</li>
<li>Liang, C., Park, A., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+scratch+assay%3A+A+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro scratch assay: A convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. , 329-333 (2007).</li>
<li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bench-top+in+vitro+wound+assay+to+evaluate+wound+closure.+Applied%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A bench-top in vitro wound assay to evaluate wound closure. Applied.</a> In Vitro Toxicology. 2 (3), 151-156 (2016).</li>
<li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+mitigates+the+negative+effects+of+arsenic+contamination+in+an+in+vitro+wound+model%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+In+Vitro+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Estrogen mitigates the negative effects of arsenic contamination in an in vitro wound model.</a> Applied In Vitro Toxicology. 4 (1), 24-29 (2018).</li>
<li>Roubelakis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+%28PRP%29+promotes+fetal+mesenchymal+stem%2Fstromal+cell+migration+and+wound+healing+process%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma (PRP) promotes fetal mesenchymal stem/stromal cell migration and wound healing process.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 417-428 (2014).</li>
<li>Shibata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adiponectin+regulates+cutaneous+wound+healing+by+promoting+keratinocyte+proliferation+and+migration+via+the+ERK+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Adiponectin regulates cutaneous wound healing by promoting keratinocyte proliferation and migration via the ERK signaling pathway.</a> Journal of Immunology. 189 (6), 3231-3241 (2012).</li>
<li>Mendonca, R. J., Coutinho-Netto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+aspects+of+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Anais+Brasileiros+de+Dermatologia%22%5BJournal%5D)">Cellular aspects of wound healing.</a> Anais Brasileiros de Dermatologia. 84 (3), 257-262 (2009).</li>
<li>Beem, E., Segal, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+stability+and+sensitivity+of+cell+fluorescent+labels+when+used+for+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fluorescence%22%5BJournal%5D)">Evaluation of stability and sensitivity of cell fluorescent labels when used for cell migration.</a> Journal of Fluorescence. 23 (5), 975-987 (2013).</li>
<li>Gentry, P. R., Clewell, H. J. III, Greene, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+recent+advances+in+research+on+arsenic+cancer+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The impact of recent advances in research on arsenic cancer risk assessment.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 69, 91-104 (2014).</li>
<li>Beamer, P. I., Klimecki, W. T., Loh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+children%27s+urinary+CC16+levels+with+arsenic+concentrations+in+multiple+environmental+media%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health.pii%3A+E521.2016%3A13%22%5BJournal%5D)">Association of children's urinary CC16 levels with arsenic concentrations in multiple environmental media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health.pii: E521.2016:13. , (2016).</li>
<li>Robertson, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+in+ground-water+under+oxidizing+conditions%2C+southwest+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Geochemistry+and+Health%22%5BJournal%5D)">Arsenic in ground-water under oxidizing conditions, southwest United States.</a> Environmental Geochemistry and Health. 11, 3-4 (1989).</li>
<li>Foust, R. D., Mohapatra, P., Compton-O'Brian, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Groundwater+arsenic+in+the+Verde+Valley+in+central+Arizona%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Geochemistry%22%5BJournal%5D)">Groundwater arsenic in the Verde Valley in central Arizona, USA.</a> Applied Geochemistry. 19, 251-255 (2004).</li>
<li>Uhlman, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aUhlman%2C+K+%22Arsenic+in+Arizona+Ground+Water%3A+Source+and+Transport+Characteristics%22">Arsenic in Arizona Ground Water: Source and Transport Characteristics</a>. , The University of Arizona. Tucson, AZ. Arizona Cooperative Extension, AZ 1453 (2008).</li>
<li>Agusa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+arsenic+from+drinking+water+in+Vietnam%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Human exposure to arsenic from drinking water in Vietnam.</a> Science of the Total Environment. , 488-489, 562-569 (2014).</li>
<li>Ayotte, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+temporal+variability+of+arsenic+in+groundwater+used+for+drinking+water+supply+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Factors affecting temporal variability of arsenic in groundwater used for drinking water supply in the United States.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li>
<li>Dummer, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geostatistical+modeling+of+arsenic+in+drinking+water+wells+and+related+toenail+arsenic+concentrations+across+Nova+Scotia%2C+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Geostatistical modeling of arsenic in drinking water wells and related toenail arsenic concentrations across Nova Scotia, Canada.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li>
<li>Sorg, T. J., Chen, A. S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+species+in+drinking+water+wells+in+the+USA+with+high+arsenic+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Research%22%5BJournal%5D)">Arsenic species in drinking water wells in the USA with high arsenic concentrations.</a> Water Research. 48, 156-169 (2014).</li>
<li>Beamer, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+Children%27s+Urinary+CC16+Levels+with+Arsenic+Concentrations+in+Multiple+Environmental+Media%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Association of Children's Urinary CC16 Levels with Arsenic Concentrations in Multiple Environmental Media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 13, (2016).</li>
<li>Pomari, E., Dalla Valle, L., Pertile, P., Colombo, L., Thornton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracrine+sex+steroid+synthesis+and+signaling+in+human+epidermal+keratinocytes+and+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Intracrine sex steroid synthesis and signaling in human epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts.</a> The FASEB Journal. 29 (2), 508-524 (2015).</li>
<li>Gotsulyak, Y., Kosach, R., Cherednyk, V., Tykhonkova, O., Khoruzhenka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+cell+motility+evaluation+in+scratch+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Optimization of cell motility evaluation in scratch assay.</a> Biopolymers and Cell. 30, 223-228 (2014).</li>
<li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Analytical Biochemistry. 411, 158-160 (2011).</li>
<li>Harishkumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revealing+the+mechanism+of+in+vitro+wound+healing+properties+of+citrus+tamurana+extract%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Revealing the mechanism of in vitro wound healing properties of citrus tamurana extract.</a> BioMed Research International. 13, Article ID 963457, 8 pages (2013).</li>
<li>Johnston, S. T., Simpson, M. J., McElwain, D. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+information+can+be+obtained+from+tracking+the+position+of+the+leading+edge+in+a+scratch+assay%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">How much information can be obtained from tracking the position of the leading edge in a scratch assay?</a> Journal of the Royal Society Interface. 11, 1-9 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu testin uygulama hücresel geçiş yüksek üretilen iş ve zamanında bir değerlendirme sağlar ve doğrudan karmaşık fizyolojik sistemleri5,6,7' ye çevirmek. Bu nedenle, önerilen tezgah üstü model ayarlı ve6şifa yara çeşitli terapötik ajanlar ve çevresel toksinler etkilerini değerlendirmek için çalışmıştır. Mevcut çalışmada kullanılan arsenik konsantrasyonu çevre bilinen maruz kalma seviyeleri geniş edebiyat arama ile ilgili kabul edildi ve çeşitli veri retrospektif incelenmesi14,15, üsleri 16,17,18,19,20,21. Bu vitro sıfırdan tahlil kullanımı bu maruz kalma bir arsenik konsantrasyonu yüksek, ama çevre ilgili aralığı içinde gösterdi, gecikmiş yara kapatma (hücresel geçiş).
Bu tezgah üst model ayrıca yalıtmak ve daha fibroblast geçiş şifa sonuçları yara nasıl katkıda bulunduğunu anlamak için bir tek hücre satırı (fibroblast) çalışma için istihdam edildi. Ayrıca, bu analizi ile engelleyebilir bir tek hücre satır karmaşık vivo içinde sistemleri ile diğer birçok hücre ve dokulara mevcut işlevleri çalışma zordur. Ayrıca, tahlil hangi aracılığıyla yara iyileşmesi bileşikler etkileyebilecek belirli hücresel mekanizmaları hedef için kullanılan yarı kantitatif yüzde yara kapatma verileri elde etmek için bir yol sağlar. Örneğin, sıfırdan assay olarak kullanılan hücre toplanan ve istenen bir reaktif saklanabilir ve gen ifadesinde kullanılan (mRNA sinyal) veya protein ifade deneyleri22. Bu bilgi ne sinyalleri veya proteinler büyük ölçüde değişik tedaviler (Yani, arsenik)22huzurunda hücresel geçiş değişikliklere katkı olabilir anlamak aradıkları araştırmacı için yararlı olabilir.
İnsan yenidoğan dermal fibroblastlar yara iyileşmesinde önemli rollerine dayanarak bu iş için seçildi. Ancak, bu karalama tahlil protokolü kullanarak çeşitli hücre tiplerinin uygulamaya konmuştur ve araştırma amaçlı bir dizi için. Örneğin, sıfırdan tahlil türleri çalışmak için göç inhibisyonu kemoterapi ilaçları23Onkoloji alanında içine kabul edilmiştir; iskelet kas hücre göç, yayılması ve Difüzyon24için; hücresel geçiş25bitki özleri etkisini incelemek için; ve anlamak için nasıl keratinosit geçiş ve nükleer silahların yayılmasına karşı şifa9yara katkıda bulunur. Ayrıca, Pinto ve ark. tarafından önceki bir kağıt uranyum (U) ve trombosit açısından zengin plazma (PRP) sıfırdan tahlil6kullanarak hDFn geçişi olarak etkileri değerlendirilir. Bu çalışmanın amacı için bu tahlil hücresel geçiş (U) yavaş düşünülen bir ajan gibi hücresel göç (PRP) kadar hızlandırmak için düşündüm bir ajan etkisini test olabilir ölçüde anlamak oldu. Olarak anılan çalışmalarında görülebilir ve araştırma diğer müfettişler, kazı-kazan testin uygulama tarafından çeşitli modeller26yılında kullanım için yüksek potansiyele sahiptir. Yöntemleri içinde sağlanan ayrıntı rağmen müfettişler ve deneyler farkı beklenmelidir. Örneğin, hücresel geçiş oranları büyük olasılıkla bağlı hücre kültürünü benzersiz hücre türleri için gerekli gerekli mikro ek olarak kullanımda olarak dalgalanma olacaktır. Birçok hücre verim ve canlılığı ve yardım için önemli gözlemler bu protokolü notlar olarak listelenir. Ancak, müfettişler en uygun büyüme koşulları için ve bu yöntemi takıma giren öğretim genel hücre kültür iş için kullanmak için üreticinin önerilerini izleyin önerilir.
Kazı-kazan tahlil hücresel hareketlilik çalışma için son derece çok yönlü olmasına rağmen; beklenmedik önyargıları ölçme teknikleri ortaya çıkabilir. Örneğin, ImageJ el ile hücre göç cephede izlemek için kullanırken, varyasyon doğruluk ve temsilcisi veri toplama sınırlayabilirsiniz kullanıcıları arasında var olabilir. Ayrıca geçiş cephede kör kullanıcı önyargı en aza indirmek için tedavi için okumanız gereken dikkat edilmelidir. Ayrıca, el ile geçiş cephede tanımlayan hesap hatası hücreleri ve görsel olarak yanıltıcı olabilir form odak yapışıklıklar için ulaşmak için yeteneklerini tarafından pseudopod oluşumu nedeniyle seyahat ortalama mesafe neden olabilir. Gibi bir şekilde, floresan "hücre izci" kullanımı hücre yüzeyine boya veya geçiş algılamak için nükleer proteinler istemeden hücreler zamanla hücresel geçiş ölçerken yanlışlıklar kaynaklanan giderebilir. Bu uygun olumlu ve/veya negatif kontrolleri tamamen eşek için deneme içinde kayıtlı önerilir hücre satırlarındaki tedavinin etkisi. Bu testin uygulama sınırları tanınması tamamlanması gerekir. Bu tahlil içinde vitro deneyler elde edilen hücresel geçiş sonuçlarını doğrudan vivo sonuçları. tercüme edecek garanti etmez Yara iyileştirici ve hücresel geçiş karmaşık canlı bir sistem içinde hücre tipleri ve moleküler sinyaller çok sayıda içerir; her biri şifa yanıt etkileme potansiyeline sahip.
Özet olarak, kazı-kazan tahlil hücresel geçiş yanıt ortamlar6,25değişen yüksek üretilen iş tarama sağlamak için bulundu. Biz özellikle başarıyla hücresel geçiş işleminin çeşitli çevre ilgili dozda arsenik maruz kalma sonucu olarak yapılan değişiklikleri algılamak için bu iletişim kuralı kullanıldığında. Bu veriler çalışma daha fazla ve bu tahlil ve nasıl bu yollar arsenik poz tarafından değiştirilmiş hücresel geçişinde mekanik yollar değerlendirmek için sıfırdan tahlil kullanmak için gerekçe hazırladık.

Yara iyileşmesi çeşitli hücre tipleri, sinyal molekülleri ve hücre dışı matriks bileşenlerinin1ilgili adımları çakışan karmaşık bir dizi oluşur. Birlikte, bu bileşenler konserinde yara çözünürlük veya onarım, sonuçta travma1derecesine bağlı olarak koruyucu bir fibrotik yara oluşumuna yol açan elde etmek için çalışır. Bireysel süreçleri ve fonksiyonlar yara yakalamak için bir deneyde şifa zordur; bireysel adım süreci şifa yara içinde tanımlanan ve ayrı ayrı test gerekir. Yara iyileşmesi birçok adımları arasında hücresel geçiş sürecinin iyileşme oranları2değerlendirirken kritik olarak kabul edilmiştir. Hücresel geçiş yara iyileşme tüm aşamalarında dikkat edilmesi ve böylece daha fazla hücre geçiş için değişiklik yara kapatma nasıl etkileyebilir anlayış gerektirir. Örneğin, hücresel geçiş kan pıhtılaşması ve trombosit toplama yara sitesi3ile hem erken ve geç faz iltihabı görülmektedir. Bu olaylar yoksun doku3yaralı alanları doldurmak için geçici bir tıkanma oluşturarak aşırı kan kaybını önlemek. Trombosit dolaşımda sentez ve kemotaktik faktör, birlikte hangi sinyal inflamatuar lökosit göç (beyaz kan hücreleri) için yaralı doku tamir4ile birlikte vazoaktif arabulucu salgılar. Yeniden epithelialization doku yaralanması saat içinde oluşur ve yara site üzerinden etkinlik ve daha fazla kirlenmesini önlemek için epitel keratinositler geçirilmesi veya yara site2yabancı parçacıklar işgali kapsayan içerir. Yaranın normal iyileşmesi birkaç işlevleri ile ilişkili birçok hücre göç sadece bu örnekler yakalamak.
Kazı-kazan tahlil açıklanan ve hücre göç ve5,6şifa yara içinde birçok rolleri daha iyi anlamak için kullanılır. Bu tahlil basit olarak kabul edilir, yüksek üretilen iş sağlar ve temsilcisi hücre göç veri toplamak için Dedektif sağlar. Geçiş deneyleri başarılı bir şekilde bazı bileşikler hücresel geçiş6oranı yavaşlatmak veya hızlandırmak olabilir gösterdi. Ayrıca, bu tahlil sonuçlar hedef tedaviler, konsantrasyonları ve genler vivo içinde deneme önce ilgi dozaj formüle için kullanılan translasyonel fizyolojik bilgi sağlar. Tahlil gerektiren temel hücre kültürü teknikleri ve malzemeleri, seçim ve görüntüleme teknolojisi zamana veya hareket tedavilere yanıt hareketi yakalamak için bir hücre satırı.
Tahlil kolayca manipüle veya araştırmacı gereksinimlerine uyacak şekilde özel olarak tasarlanmış. Ancak, önce deneme dikkate dört temel soru vardır. Ne genel veya belirli soru (lar) olduğundan/cevap vermeye investigator(s) misin? Bu araştırma odaklı çoğu hipotezler için geçerlidir; Ancak, birçok parametreleri doğru gerekiyordu ve tamamen cevap soru (lar) belirleyecek çünkü bu tahlil için kritik öyle. Ne hücre satırı veya satırları (birden fazla) hücresinde okudu olmak fizyolojik sistemini temsil için kullanılmalıdır? Kutanöz bir yara Örneğin, şifa çalışması, dermal fibroblast5,6,7, kök hücre8veya epidermal keratinosit9 normalde bulunan hücre popülasyonlarının temsil etmek için kabul edilebilir Cilt doku10bolluk içinde. Alternatif olarak, nötrofiller, makrofajlar veya diğer inflamatuar hücre hücre göç cilt doku10içinde yara iyileşmesi bir diğer bileşenleri temsil etmek için bu sistemde değerlendirilmiş. Ayrıca, değerlendirilen belirli hücre kültürünü tanıtan hangi reaktifler hücre metabolik aktivite tanıtmak için kullanılacak en uygun alanları tespit etmek için yardımcı olacaktır. Nasıl hücre göç izlenen/yansıma olacak mı? Hücre geçiş bir tabak ya da cep şişesi içinde gözlemlemek için kullanılan teknikler vardır. Örneğin, boyama veya fluorescently hücreleri etiketleme ve hücre izlemek için floresan veya confocal Imaging kullanarak hücresel vs hücresel olmayan yerleri ve hücresel hareketi11 açıkça tanımlamak için Dedektif sağlar güçlü bir kontrast sağlar . Bu çalışmada, açıklanan başka bir ortak teknik faz kontrast6,7ile ters ışık mikroskobu kullanmaktır. Hücre boyalar ve floresan bu alternatif ölümcül hücreleri görüntüleme önce düzeltmek zorunda kalmadan parça hücreleri yaşamak kullanıcı ve ayrıca bireysel wells zaman puan arasında yaralı monolayers hücre içeren aynı görüntüleri yakalamak için izin verir. Ne sonuç ölçer çözümlemesi için kullanılan? Görüntüleri kullanarak, çalışma, veri değişiklikleri hücresel geçiş oranları için anlaşılabilir oluşturulabilir toplandı. Laboratuarımıza ters ışık mikroskobunun yakalanan mikroskobik görüntüleri görüntü analiz yazılımı için yüklenir ve yüzde yaranın kapanması ve eğri (AUC) altındaki Toplam alan hesaplanır.
Biz özel kullanım dermal fibroblast geçiş bilinen çevre kirletici, arsenik huzurunda yapılan değişiklikler aydınlatmak için bu testin vurgular. Arsenik Yerkabuğu içinde bulunan doğal olarak meydana gelen bir madene var. Çeşitli yerlerde bu konumlar yaşayan bireyler için riski arsenik düzeyleri ile tespit edilmiştir. Sonuç olarak, yiyecek ve su kaynakları için arsenik maruz olur bireyler için olasılığını artırır arsenik kirlenme düzeyleri artmıştır gösterilmiştir. Çevre arsenik maruz kalma insan nüfusu yukarıda veya bile aşağıda mevcut ABD Çevre Koruma Ajansı (USEPA) Max geçen madde düzeyi (MCL) 10 app (10 µg/L)12, içinde uzun vadeli sağlık sonuçları için gösterilen 13. USEPA bu MCL ayarla ve sınırları içmek için güvenli olarak kabul rağmen bu sınırı aşmasına arsenik konsantrasyonu Su kaynaklarında dünya çapında nadir değildir. Güneybatı Amerika Birleşik Devletleri'nde çok sayıda toprak-su, kuyu suyu ve yaylar arsenik14düzeyde ile ilgili içeren için belgelenmiştir. Örneğin, Verde Valley, AZ, Montezuma iyi 210 µg/L arsenik15içerir. Yeraltı suyu Verde River, AZ çevresinde 16 µg/L arsenik ortalama 1.3 mg/L15,16ulaşan en yüksek değerlerle içerir. Özellikle, birçok Wells Verde nehir su döken arsenik konsantrasyonu 50 µg/L15,16uzun. Bu bilgiyle, çevre ilgili arsenik konsantrasyonu edildi14,15,16 MCL 10 µM (750 App) mevcut, yukarıda çalışmaya o Aralık MCL 0,1 µM (7,5 App), yönü aşağıdan seçerek , 17 , 18 , 19 , 20 .
Bu deneylerden toplanan bilgiler arsenik ile kontamine yara bir vivo içinde hücresel geçiş oranları için olası değişiklikler erken bir göstergesi olarak kullanılacaktır. Daha sonra yara iyileşmesi ve hücresel geçiş kolaylaştıran rollerini temel sinyal molekülleri seçilebilir ve geçerli tamamlandıktan sonra gelecek nicel Polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) dayalı gen ifade deneyler ayarlanabilir çalışmalar. Bu tahlil geçiş oranları huzurunda arsenik değiştirirseniz, hücresel geçişinde belirli bir gen düşman hedefi arsenik zararlı etkileri için hedef olabilir ve böylece bozulma mekanizması olabilir.

<table><tbody><tr><td>Sınıf II A/B3 Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>Forma Scientific</td><td>15201-816</td><td></td></tr><tr><td>Nitril Eldivenler</td><td>Kimberly-Clark</td><td>55082</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Hassas</td><td>Model 182</td><td></td></tr><tr><td>Ters Mikroskop</td><td>Leica</td><td>Q080318</td><td></td></tr><tr><td>CPR Santrifüj</td><td>Beckman</td><td>349702</td><td></td></tr><tr><td>Analitik Ölçek</td><td>Ohaus</td><td>I093 1125062111P</td><td></td></tr><tr><td>Ağırlıklandırma kağıdı</td><td>VWR</td><td>H351125781212A</td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik tehlike torbaları</td><td>Fisherbran</td><td>01-830A</td><td></td></tr><tr><td>Su Ceketli CO2 </alt>İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td>309739-31053</td><td></td></tr><tr><td>Hanks Dengeli Tuz Çözeltisi</td><td>Gibco</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Ortamı</td><td>Gibco</td><td>10566-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Pipetleyici</td><td>Drummond</td><td>140685</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p20 Pipet</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Payda</td><td>Fisher Scientific</td><td>D59707</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi Leke</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>T75 doku şişesi</td><td>Corning</td><td>430725U</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Konik Tüp</td><td>Fisherbrand</td><td>05-539-5</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konik Boru</td><td>VWR</td><td>21008-178</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Doku İşaretleyici</td><td>Securline</td><td>92167</td><td></td></tr><tr><td>Mendil</td><td>Kintech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>%70 Etanol</td><td>Fisher</td><td>63-67-0</td><td></td></tr><tr><td>Filtresiz Pipet Uçları</td><td>Fisherbrand</td><td>16160210</td><td></td></tr><tr><td>Çamaşır Suyu</td><td>Büyük Değer</td><td>220-04</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu</td><td>Falcon</td><td>353915</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoviyal Raf</td><td>Nalgene</td><td>5030-0505</td><td></td></tr><tr><td>Hemasitometre</td><td>Gizmo Besleme</td><td>B00SCOGY56</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12605-028</td><td></td></tr><tr><td>Konik Boru Rafı</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>12 kuyulu plaka</td><td>Corning</td><td>3598</td><td></td></tr><tr><td>Atık Beher</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Pipet</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11B</td><td></td></tr><tr><td>Düz Kenar Cetveli</td><td>n/ a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>İnsan neonatal dermal fibroblastları (hDFn)</td><td>lot: 1734, 2902</td><td>106-05n</td><td></td></tr><tr><td>Rstudio İstatistik Yazılımı</td><td></td><td>ver: 3.5.1</td><td></td></tr><tr><td>Resim J</td><td>NIH</td><td>ver: 1.8.0_112</td><td></td></tr></tbody></table>

vitro cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Yara iyileşmesi fizyolojik mekanizmaları anlama uzun yıllar devam eden araştırma odağı olmuştur. Bu araştırma doğrudan yaraları tedavi ve hastalar için azalan morbidite ve mortalite için kullanılan klinik standartlar değişimler dönüştürecektir. Yara iyileşmesi stratejik hücre ve doku etkileşimi ve işlev gerektiren karmaşık bir süreçtir. Yara iyileşmesi pek çok kritik düzeyde önemli işlevlerinden biri, bireysel ve kolektif hücresel geçiş değil. Yaralanma çeşitli hücreler kandan bağ ve epitel doku hızla çevreleyen kimyasal ve/veya fiziksel uyaranlara yoluyla yara bölgesine göç eder. Bu geçiş yanıt büyük ölçüde sonuçları ve başarı bir şifa yara dikte edebilirsiniz. Bu belirli hücresel işlev anlama sonuçları şifa geliştirilmiş yara açabilir translasyonel tıp için önemlidir. Burada, biz gibi yara iyileşmesi ve nasıl hücresel ortamındaki değişiklikleri önemli ölçüde bu işlem değiştirebilir ilgilidir hücresel geçiş daha iyi anlamak için kullanılan bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu örnek çalışmada, dermal fibroblastlar fetal sığır serum (FBS) ile desteklenen medya doku kültürü şişeler kültürlerde monolayer olarak yetiştirilmiştir. Hücreleri aseptik doku kültürü tedavi 12-şey kalıplara aktarılır ve % 100 izdiham için büyüdü. İzdiham ulaşan üzerine monolayer hücrelerde dikey p200 damlalıklı ucu kullanarak çizik. Kültür FBS ile desteklenen medya seyreltilmiş arsenik bireysel wells çevre 0.1-10 M. görüntüler arasında değişen uygun doz her 4 saatte (s) hücresel geçiş gözlemlemek için (yara bir ters ışık mikroskobu kullanılarak bir 24 Saat süre içinde ele geçirildi eklendi kapanış). Görüntüleri tek tek görüntü analiz yazılımı kullanarak analiz ve yüzde yara kapatma hesaplanmıştır. Arsenik yara iyileşmesi aşağı yavaşlatır sonuçlar gösterilmektedir. Bu teknik, yara iyileşmesi üzerinde kirletici etkilerinin için hızlı ve ucuz ilk ekran sağlar.

Örneklerin boyutu (n) tüm tedavi grupları oldu n = 28. Hücreleri başarıyla kültürlü aşağıdaki aseptik teknikler ve laboratuvar protokolleri (şekil 1) idi. Tek tip çizik tüm tedavi gruplarında ölçülür 0.8 mm 0.4 mm (Şekil 2) ortalama sıfırdan genişliği ile tespit edildi. Kontrol grubu bir ortalama toplam alanı 1,355.83 eğrisi değerinin altında vardı; Tedavi grupları olarak 0,01 µM vardı ortalama alan 1,366.21; eğri değerinin altında toplanır Tedavi grupları olarak 0,1 µM ortalama alanı 1,326.24 eğrisi değerinin altında toplanır, tedavi grubunda olarak 1.0 µM vardı ortalama alan 1,295.10; eğri değerinin altında toplanır ve son olarak tedavi grubunda istatistiksel olarak daha düşük 535.12, eğri değeri ortalama bir toplam alanında olduğu gibi tüm diğer gruplar için (p &lt; 0,05) 10 µM karşılaştırıldığında (şekil 3). R-program istatistiksel analiz için bir tek yönlü ANOVA ile tedavi grupları (p &lt; 0,05) arasında istatistiksel farkları belirlemek için Tukey post hoc tadil çalıştırmak için kullanılan.
<img alt="Arsenik maruziyeti altında hücre büyümesi; mikroskopi sonuçları; kontrol, 1.0 μM ve 10 μM olarak 20 saatin üzerinde." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Şekil 2: temsilcisi çizik tahlil görüntüleri bir 20 h dönemdeki. Görüntüleri A-D kontrol hücreleri hücresel geçişini temsil eder; görüntüleri E-H 1.0 µM kontamine hücre hücresel geçiş temsil eder; Resim ı-L 10 µM kontamine hücre hücresel geçişi temsil eder. Bu görüntülerden hücresel geçiş arsenik huzurunda yavaşladı açıktır. Diğer iki tedavi olarak grup değil "iyileşmiş vardı" kontrol görüntüleri tamamen "iyileşmiş" sıfırdan 20 h sonra gösterir. 10 µM tedavi olarak inhibe tamamen kapanmayla 24 h sonra tamamen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Arsenik doz yanıtını gösteren çubuk grafik; değişen konsantrasyonlarda toplam AUC; deneysel sonuçlar." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Şekil 3: arsenik sıfırdan tahlil hücresel geçiş yavaşlatır. Görüntüleri hücresel geçiş oranları değişen arsenik konsantrasyonları huzurunda yapılan değişiklikleri gözlemlemek için 24 Saat süre içinde ele geçirildi. Pişmemiş imge (örneğin, MATLAB içinde), hangi başlangıçta ölçülen yaranın genişliği sonra hesaplanan yüzde kapanması ve son olarak (AUC) eğri altındaki alan otomatik bir yazılım kullanarak analiz edildi. Hata çubukları standart hata ortalamaya temsil eder. 10 µM olarak tedavi grubunda istatistiksel olarak bir tek yönlü ANOVA bir Tukey post hoc ayarlama ile (p kullanarak diğer tüm tedavi grupları karşılaştırıldığında istatistiksel olarak daha düşük bir AUC değer tarafından gösterilen insan dermal fibroblastlar yenidoğan (hDFn), hücresel göç yavaşladı &lt; 0,05). İstatistiksel farklar harf "A" ve "B", R-programda mevcut kompakt mektup görüntüleme yöntemi kullanarak aracılığıyla elde edildi tarafından temsil edilir. Ortak bir mektup paylaşmayın tedaviler birbirinden istatistiksel olarak anlamlı (p &lt; 0,05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Bu çalışmada bir vitro modeli (arsenik etkisi hücresel geçiş gibi nasıl çevre kirletici maddeleri belirlemek için yara iyileşme sıfırdan testin) bir mekanizma olarak odaklanır. Bu içinde vitro tahlil değişiklikleri için in vivo deneyler önce hücresel göç hızlı ve erken belirtileri sağlar sonuçlar gösterilmektedir.

Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Hücresel göç büyük ölçüde bir iyileşme yara nın sonucunu değiştirebilir kritik bir yara iyileşme sürecidir. Bu protokol araştırmacılar daha iyi yara iyileşmesi sırasında hücresel göç üzerinde çeşitli bileşiklerin etkisini anlamak için izin verir. Hangi sık sık klinik tıp için hedefli tedavi stratejileri yol açabilir.Çizik testi, pahalı ve zaman yoğun in vivo testlerinden önce anlamlı yara iyileştirici verileri oluşturmak için uygun maliyetli ve yüksek iş yaratma yaklaşımıdır. Bir yöntem olarak çizik tsay özellikle yara iyileştirici uygulamalarda ilgilidir. Özellikle, deri.Ancak, tsay gerçekten bir geçiş tsay ve hücrelerin geçiş ölçmek veya yakalamak için ilgi olduğu herhangi bir hücre türüne uygulanabilir. Klasik hücre ve doku kültürü, standart çalışma prosedürleri, eğitim, teknik ve uygulama, uygulama, uygulama benzer. Bunlar sıfırdan yapılan bir teşpile başarının anahtarıdır.Prosedürü gösteren Nathan Cruz, bir yüksek lisans öğrencisi ve Oscar Lujan, bir lisans araştırmacısı olacaktır. Bu prosedürü başlatmak için, arka ve yan duvarlardan başlayarak ve taban plakasına kadar çalışan bir sanitasyon silme gerçekleştirmek için %70 izopropil sulu bir solüsyon kullanarak biyogüvenlik II kabinesini hazırlayın. Ayrıca dolap tasnİf in kullanılacak tüm malzemeleri silin.Daha sonra, istenilen kriyokorunmuş hücre hattını içeren şişeler elde edin ve çözülmek için 37 santigrat derecede bir santimetre derinliğinde bir su banyosu yerleştirin. Bir T75 doku kültürü şişesiiçine% 10 FBS ile desteklenen orta 10 mililitre ekleyin. Hücre stoğunu içeren şişeyi açın ve çözeltiyi dikkatlice aspire edin.Sonra hücreleri T75 şişesine aktarın. Şişeden bir mililitre lik ortamı çıkarın ve şişeye geri aktarın ve şişedeki hücre verimini en üst düzeye çıkarmak için şişeye geri aktarın. Şişenin kapağını sıkın ve süspansiyondaki hücreleri tüm yüzeye eşit olarak dağıtmak için hafifçe sallayın.Bundan sonra, burada gösterilen bilgilerle şişeyi etiketle ve 72 saat boyunca 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit le nemlendirilmiş bir kuvöze yerleştirin. İlk olarak, doku kültürü şişesini kuvözden alın ve metin protokolünde belirtildiği gibi yapışan hücreleri gözlemleyin. Şişeden tüm ortam hacmini aspire edin ve bir atık kabına aktarın.Şişeye beş mililitre dengeli tuz çözeltisi ekleyin ve fazla ortamları, ölü hücreleri veya atık ürünü durulamak için hafifçe sallayın. Daha sonra şişeden tuz çözeltisinin tüm hacmini çıkarın ve bir atık kabına atın. Sonra, şişeye iki mililitre tripsin ekleyin ve enzimi yapışan hücrelerin üzerine dağıtmak için hafifçe sallayın.Yapışık yüzeyin tamamen doymuş olduğundan emin olun ve doku şişesini 2-3 dakika kuvöze yerleştirin. Bundan sonra, hücre ayrışmasını kolaylaştırmak için şişenin kenarına yavaşça 3-5 kez dokunun. Şişeyi %70 alkolle silin ve biyogüvenlik kabinesini yerleştirin.Enzim substrat reaksiyonu durdurmak için doku şişesine beş mililitre stok ortam ekleyin. Şişedeki sıvının tüm hacmini aspire edin ve steril 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Santrifüj 200 kez g ve 25 santigrat derecede beş dakika.Daha sonra peletli hücreleri içeren tüpü silmek ve biyogüvenlik kabininin içine yerleştirmek için %70 alkol kullanın. Pipet medya kapalı, hücre pelet ile sıvı yaklaşık 250 mikrolitre geride bırakarak. Hızlı bir titreşim oluşturmak ve hücre peletini rahatsız etmek ve yeniden askıya almak için konik tüpün altını mikrosantrifüj tüp rafının şişe yuvaları nda çalıştırın.Doğru tamamlandığında, yeni hücre çözeltisi kalan pelet ile bulutlu bir karışım olarak görünür. Hücre nin yeniden askıya alınmasına iki mililitre ortam ekleyin. Pipet hücreleri yavaşça yukarı ve aşağı tüp tarafında 20 kez herhangi bir kümeleri kırmak için.Ve toplam hücre süspansiyon hacmini kaydedin. Daha sonra, 96 kuyulu bir plakanın boş bir kuyuya 20 mikrolitre trypan mavisi stok eklemek için steril bir pipet kullanın. Steril pipet ucu kullanarak, 15 mililitrelik tüpten 20 mikrolitre hücre stoğunu trypan mavisi solüsyonunu içeren kuyuya aktarın.Pipet yavaşça içeriğini karıştırmak ve bir hemositometre üzerinde kapak kayma ve sayma odası arasında karışımın 10 mikrolitre transfer. Tanımlanan beş kare için hem toplam hücre sayısını hem de geçerli olmayan hücre sayısını ayrı ayrı sayarak yalnızca merkezdeki hücreleri ve dört köşe karesini sayın. Uygun hücre sayısını hesapladıktan sonra, görüntüleme sırasında referans işareti olarak hizmet vermek için 12 kuyulu bir plakanın alt kısmında yatay bir çizgi işaretleyin.Hücre stoğunu medya ile mililitre başına 19.000 hücre yoğunluğuna seyreltin. Daha sonra seyreltilmiş hücre stokunun bir mililitre ile 12-iyi plaka her kuyu tohum, periyodik olarak tüm 12 kuyu boyunca bile hücre tohumlama sağlamak için hücre stoku karıştırma. Her plakayı burada gösterilen bilgilerle etiketlayın.Ve hücreler %100 biraraya gelene kadar 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitte bir kuvöze yerleştirin. Kuvözdeki hücrelerle birlikte 12 kuyulu bir plaka alın. 10x hedefi olan bir mikroskop kullanarak, hücreleri gözlemleyin ve her kuyunun birleşimini belirleyin.Sonra, aspire ve her kuyudan büyüme medya bertaraf. 1-200 mikrolitre steril ucu ile bir P200 pipetter monte edin. Her kuyuda, pipet ucunu 12:00'den 6:00 konumuna kadar hücre yüzeyinde süzülerek sahte bir yara üretin.Aşırı enkaz ve hücre kümeleri temizlemek için dengeli tuz çözeltisi bir mililitre ile her iyi durulayın. Yıkamayı kolaylaştırmak için tabağı bir taraftan diğer yana sallayın. Daha sonra dengeli tuz çözeltisini her kuyudan çıkarın ve atın.1,000 mikrolitre ucu olan bir P1000 pipetter kullanarak, bir tedavi grubu ile rasgele atanmış kuyulara hazırlanan arsenik stoklarından 1.000 mikrolitre ekleyin. Her kuyu için yeni bir pipet ucu kullanın ve tedavilerin eklendiğinde zamanı kaydedin. Plakaları %5 karbondioksitle 37 derecede kuluçkaya yatırın.Plakaları görüntülemek için, 24 saatlik bir süre içinde her dört saatte bir 10x nesnel büyütme de her kuyunun görüntülerini yakalayın. Her zaman noktasında her kuyu içinde çizik boyunca aynı konumu görüntülemek için daha önce plakanın altına çizilen çizgiye başvurun. Bu çalışmada arseniğin hücre göçü üzerindeki etkilerini gözlemlemek için in vivo scratch testi testi kullanılmıştır.Tüm tedavi gruplarında yaklaşık 0,8 milimetrelik ortalama çizilme genişliğine sahip tek tip çizikler gözlenmektedir. Kontrol hücreleri 20 saat sonra tamamen iyileşmiş bir çizik gösteriyor. İki arsenik grubu bu iyileşme düzeyini göstermez.10 mikromolar tedavi ile tamamen 24 saat boyunca kapatma inhibe. Bu sonuçlar arsenik varlığının hücresel göçü yavaşlattığını göstermektedir. Test sırasında yakalanan ham görüntüler, yara genişliğini ölçmek, sonra yüzde kapanışı hesaplamak ve son olarak eğrinin altındaki alanı hesaplamak için otomatik yazılım kullanılarak analiz edilir.10 mikromolar tedavi grubu, diğer tüm tedavi gruplarına göre insan neonatal dermal fibroblastlarının istatistiksel olarak yavaşladıgını göstermektedir. Hücreleri çizerken tutarlılığı artırmak için bu tekniği iyice uygulamak önemlidir. Tahliller arasındaki kasıtsız değişkenlik verileri çarpıtabilir ve sonuçları değiştirebilir.Kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu ve enzime bağlı immünosorbent tahlilleri gibi diğer moleküler teknikler, tahlilde gözlenen hücre göçünde yapılan değişikliklere hedef olabilecek haberci sinyalleri ve proteinleri tanımlamak için sıfırdan sonra tahlil de kullanılabilir. Bu araştırma, araştırmacıların kanser metastazı, yeni ortaya çıkan kanser tedavileri, kök hücreler ve rejeneratif tıp ve diğer birçok bilimsel kilometre taşını anlamalarına katkıda bulunmuştur.

in-vitro-scratch-assay-to-demonstrate-effects-arsenic-on-skin-cell

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Göç etme kapasitesi, mezenkimal stromal hücreler (MSC'ler) dahil olmak üzere birçok farklı hücre tipinin temel bir işlevidir. Bununla birlikte, hasardan sonra göç kapasitesindeki değişiklikleri ölçmek zordur. Bu protokol, hasardan sonra MSC göç kapasitesindeki değişiklikleri ölçmek için titiz istatistikler kullanan, kolayca uyarlanabilir bir geçiş testini açıklar.

Yara Scratch Testi optimizasyonu Çözünür Sigara Duman Özü ile Hasar sonrası Fare Mezenkimal Stromal Hücre Göç Değişiklik Algılama

Bu çalışmada cep işgali ve geçiş analizi için iki farklı yöntem raporları: Boyden odası tahlil ve vitro video mikroskobu tabanlı yara iyileşmesi tahlil. Bu iki deney protokollerde açıklanmış ve kendi yararları ve dezavantajları karşılaştırılır.

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

Hücre göç geliştirme, doku bakım ve onarım ve tumorigenesis için çok önemlidir ve büyüme faktörleri, kemokinler ve sitokinler tarafından düzenlenmiştir. Bu iletişim kuralı nokta yöntemi, ekli, uyumlu cep yaprak yanıt microenvironmental ipuçlarını göçmen fenotip değerlendirmek için bir iki boyutlu, serbest geçiş tahlil açıklar.

Geçiş hücre yaprak analiz etmek için nokta tahlil kullanarak

Bu el yazması kültürlü epitel hücre monolayers üzerinde yapılan nasıl kesi benzeri lezyonlar elverişli bir konuma sahip modeli şifa vitrogörüntüleme için tarafından confocal sağlayan, yarası. açıklar veya lazer tarama mikroskobu ve yüksek kaliteli sağlayabilir nicel ve nitel veri hücre davranış ve mekanizmaları geçişinde dahil çalışmak için.

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Burada, peptidler etkisi bronş epitel hücrelerinin geçiş değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntemi Nicel veri hücre göç ve yara kapatma hızı üzerinde hızlı ve son derece tekrarlanabilir elde olanak sağlar.

Roman Vitro hücre göç değerlendirmek için şifa tahlil yara

Burada bir otomatik optik kamera mikroskopla hücre göç vitro test etmek için bir yordam açıklanmaktadır. Kazı-kazan tahlil nerede çizik kapatılması için bir süre takip yaygın olarak kullanılmış. Optik mikroskop hücre göç güvenilir ve ucuz tespiti sağlar.

Kazı-kazan tahlil Vitro hücre göç bir otomatik optik kamera ile test etmek için en iyi duruma getirilmiş

Geçerli protokol kanser hücre göç ve gerçek zamanlı olarak tek bir platformda işgali araştırma, kolayca tekrarlanabilir ve zamanı verimli bir seçenek hücre hareketlilik ve morfoloji çalışmaya sağlayan entegre bir yöntemini açıklar.

Otomatik bir canlı hücre Imager kullanarak basit geçiş/işgali iş akışı

Burada, primer fibroblastlar kullanarak in vitro çizik testve farelerde in vivo deri yara iyileşmesi test için bir protokol salıyoruz. Her iki tahliller in vitro ve in vivo yara iyileşmesini değerlendirmek için basit yöntemlerdir.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Ekipman yoğun yöntemler kullanılmadan hücre göçünün belirlenmesinde yeni bir yaklaşım sağlayan sıfırdan geçiş testini uygun maliyetli bir yöntem savuruyoruz. Bu protokolde fibroblastlar kullanılırken, ek hücre tipleri ve hücre göçü üzerindeki etkileri incelemek için uyarlanabilir ve kullanılabilir.

Maliyet Etkin ve Uyarlanabilir Çizilme Göçü Tsası

Etkileşim deneyimi tasarımı ve kullanıcı gereksinimleri analizinin dahil edilmesiyle, tekrarlanabilirlik, güvenilirlik, pratiklik, hücresel bütünlük ve kullanıcı deneyimi açısından hücresel yara iyileşme testlerini geliştiren yenilikçi bir hücre kazıyıcı sunuyoruz.

Hücre yara iyileşme testinin güvenilirliğini artırmak için otomatik olarak stabil ve tekrarlanabilir hücresiz boşluklar oluşturan bir araç

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Öğrenin arsenik etkilerini in vitro scratch assay yöntemiyle cilt hücre göçünde inceleyin. Bu yöntem, yara iyileşmesi mekanizmalarını ve toksikolojik etkileri hızlıca değerlendirmek için değerli bir araçtır.

Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

Daha fazla video keşfet