Name: Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Öğrenin, E13 fare embriyolarından ganglionik eminansdan nöral kök hücre izolasyonu ve kültürü için güvenilir bir mikrocerrahi protokol. Bu yöntem, yüksek verimli hücre elde edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Royan Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

Tüm ameliyatları ve hayvan ilgili yordamlar Royan Enstitüsü, Tahran, Iran hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. cerrahi aletler, arabellek (HEPES-MEM), hücre kültürü medya ve hücre kültür tabak yıkama hazırlanması
<ol><li>Cerrahi alet (makas, neşter bıçak sapı ve forseps) tarafından onları rutin sterilizasyon yönergeleri dayalı ısıyla sterilize.</li>
	<li>HEPES-MEM arabellek yeterli bir hacmi hazırlamak (yaklaşık 100 mL her hamile fareler için yeter). Yüksek konsantrasyonda antibiyotik (%10 penisilin/streptomisin) HEPES-MEM arabelleğe ekleyin. Bu konsantrasyon antibiyotik Mikrobiyal bulaşma riskini azaltmak gereklidir.<ol>
<li>HEPES-MEM arabellek hazırlamak için 0.5958 g HEPES tozu MEM (en az önemli orta) için 100 mL ekleyin ve iyice karıştırın. 7.3 7.4 için pH ayarlama ve orta 0,22 µm filtre kullanarak filtre.</li>
	</ol>
</li>
	<li>NSC orta içeren neurobasal Orta (NB) yapmak, 20 ng/mL ile EGF, 10 ng/mL bFGF, takıma %1 100 x N2 ek veya %1 B27 ek (A vitamini), 1 U/mL Heparin, % 1'l-glutamine, % 1 gerekli olmayan amino asit (NEAA), % 1/streptomisin, penisilin ve 0,1 mM β-mercaptoethanol.</li>
</ol>2. hayvan cerrahisi ve mikro-diseksiyon
<ol><li>Hamile bir fare gebelik 13inci gününde anestezi (burada, kullanım BALB/c zorlanma 4 ay yaş) ketamin-xylazine mayi enjeksiyonu ile 100 mg/kg ve 10 mg/kg vücut ağırlığına anılan sıraya göre.<ol>
<li>Hayvanın ayak acı bir uyarıcı (Örneğin, çimdik forseps ile) uygulamakla tarafından derin anestezi onaylayın ve hiçbir ağrı refleks olduğunda, servikal çıkığı tarafından hayvan kurban.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temiz ve dezenfektan % 70 etanol püskürtme tarafından karın deri.</li>
	<li>Cilt karın üzerinde kontrol ve sonra cilt ve temel fasya karın boşluğu ve rahim boynuzları ortaya çıkarmak makasla kesme.<ol>
<li>Ve onları bir 50 mL konik tüp 25 mL soğuk HEPES-MEM arabellek içeren transfer embriyoların makas tarafından içeren rahim boynuzları çıkarın.</li>
		<li>Laminar akış başlık altında konik tüp yerleştirin ve kapağı kaputun altında açın. Rahim boynuzları tüp ve durulama taze soğuk HEPES-MEM arabellek enkaz ve kan ortadan kaldırmak için yeterli hacim ile 3 kez getirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rahim dokusu bir 10 cm 7-10 mL soğuk HEPES-MEM arabellek içeren Petri kabına aktarın. İyi makas ve transfer embriyoların 7-10 mL soğuk HEPES-MEM arabellek içeren yeni bir tabak kullanarak rahim boynuzu açın. Şimdi mikro-diseksiyon işleminin diseksiyon mikroskop altında embriyo ile 10 cm çanak koymak.</li>
	<li>25-27 G şırınga iğne ucu ucu bir çelik neşter bıçak tutamacı iterek viraj. İpucu 70-90 ° lik bir açıyla bükülmüş kadar iğne ucu viraj. İğne ucunda viraj görmek için diseksiyon mikroskop altında iğne ucu kontrol edin. Not: Elbette, embriyo çanak yatay bir konumda bulunuyor.</li>
	<li>Konumlarını değiştirmeden, boyun ve gövde embriyo iyi forseps ile tutun ve sonra iğne ucu eğri parçası embriyo kafa ön Fontanel ekleyin. Küçük kanama veya bir kan pıhtısı orada olurdu.<ol>
<li>İğne ucu yüzeysel olarak taşıyın. Bükülmüş bölümü doğru alın ve sonra kafanın arkasına doğru çıkıntı içinde olmakla birlikte, cilt ve kafatası ile kesmek için ve alttaki beyin zarar vermeyeceğine emin olun.</li>
		<li>Cilt yanal beyin ortaya çıkarmak ve iğne deri yan taraftan beyin altındaki alanı için eklemek için iğne ucu ile itin. Beyin kafatasından disseke kafatasından gelmesini iterek çıkarın.</li>
		<li>Beyin eğri forseps kullanarak sabit tutun ve ganglionic Hazretleri ortaya çıkarmak için mikro-makas kullanarak her hemisphere korteks kesti.</li>
		<li>Beyin tutun ve disseke ganglionic Hazretleri nöral kök hücre orta içeren 15 mL santrifüj tüpü içine yerleştirin. Ganglionic Hazretleri açıkça orta ve yan parçaları ile gösterilir.</li>
		<li>Tüm beyin mikro disseke olmuştur kadar bu yordamı yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Disseke ganglionic Hazretleri pipet ucu tüp alt karşı koyarak kesti. 4'e bir tek hücre süspansiyon için doku bölmek için 5 kere yukarı ve aşağı süspansiyon pipette.<ol>
<li>110 x g 5 dk. Kaldır, süspansiyon süpernatant santrifüj kapasitesi ve 1 mL % 0.05 tripsin-EDTA hücrelerde yeniden askıya alma.</li>
		<li>10 dk için 37 ° C hücre süspansiyon kuluçkaya ve tripsin etkinliğini durdurmak soya tripsin inhibitörü (25 µg/mL) eşdeğer hacmi ekleyin. Yukarı ve aşağı tripsin tamamen Inaktif oldu emin olmak için hücre süspansiyon pipette.</li>
		<li>5 dk. süpernatant kaldırmak ve tam NSC orta 1 mL hücrelerde yeniden askıya alma ve hücreleri saydırmak için 110 x g de hücre süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>NSC orta, hücreleri (2 x 105 hücre/mL) uygun boyutu doku kültürü şişesi plaka. 5 mL T25 için 20 mL T75 için ve T175 şişeler için 40 mL aktarın. Not: Neurospheres % 5 CO2ile oksijen bir kuluçka 37 ° C'de 3-gün kültür sonra görünür. 6-7 gün sonra küreler arasında 150-200 µm çapı ölçmek gerekir ve alt kültür için hazır olacak. Yedi gün sonra bir milyon birincil NSCs yetiştirilmesi tarafından 3-4 milyon hücre sayısı artacaktır.</li>
</ol>3. trypsinization ve Neurospheres Passaging
<ol><li>Alt kültür neurospheres, askıya alınmış neurospheres ile orta santrifüj tüpü aktarmak, 110 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant atmak. 1 mL % 0.05 tripsin-EDTA ekleyin ve 10 dakika 37 ° C'de kuluçkaya.<ol>
<li>Tripsin soya tripsin inhibitörü ve pipet neurospheres yavaşça kadar kullanarak devre dışı bırakabilirsiniz ve yapmak aşağı onları hücreleri tek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>110 x g 5 min için de hücre süspansiyon santrifüj kapasitesi, süpernatant atmak ve NSC orta 1 mL hücrelerde yeniden askıya alma. Bu hücreler sonraki alt kültür veya Laminin kültür için hazır ve Poly-L-Ornithine kaplı yüzeyler gelişmiş deneyler için.</li>
	<li>Sonraki alt kültür için onları NSC ortamda kültür ve NSCs yeni şişeye (takip adım 2.8) aktarabilirsiniz. NSC orta bFGF ve Laminin ve Poly-L-Ornithine EGF yokluğunda NSCs nöronal farklılaşma kültürünün indüksiyon için tabak (Şekil 1B) kaplı.</li>
	<li>Kaplama yordam için tam hücre kültür plaka için yeterli hacim seyreltilmiş poli-L-ornitin çözüm (25 µg/mL) ekleyerek hücre kültürü yüzey kat ve 2 h 37 ° C'de kuluçkaya.<ol>
<li>Poli-L-ornitin Aspire edin ve de 2 x PBS ile durulayın. 5 µg/mL laminin tamamen kültür yüzey alanı kapsayacak ve 2 h. aspiratı laminin için 37 ° C'de hücreler kaplama önce kuluçkaya veya plaka gerekinceye kadar 4 ° C'de depolamak için yeterli miktarda ekleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. akış sitometresi tahlil
Not: Ifade NSCs, sinir hücreleri ve Gliyal hücreler belirli işaretlerinin akış sitometresi tahlil13tarafından ölçülebilir. Protokol Menon vd.,13 küçük değişiklikler ile temel alır.
<ol><li>Neurospheres ayırmak veya kaplamalı plakalar üzerinden kültürlü NSCs onları tek hücreleri oluşturmak için trypsinization tarafından ayırabilirsiniz. (Yaklaşık 1 milyon hücreleri yeterince boyama ile her antikor içindir) hücre süspansiyon 100 µL fiksasyon arabelleği (%2 paraformaldehyde (PFA) PBS içinde) 500 µL eklemek ve RT, tüpler 15dk için kuluçkaya.</li>
	<li>PBS 1 mL tüp ve 5 dakika süreyle santrifüj 110 x g de ekleyerek yıkama hücreleri süpernatant atın ve yaklaşık 100 µL tüp bırakarak hücre Pelet resuspend.<ol>
<li>Ara-20 hücrelerle permeabilize (% 0,7 Ara-20 PBS) hücre süspansiyon 100 µL için 500 µL ara-20 arabelleği ekleyerek. RT, tüpler için 15 dk bir orbital çalkalayıcı (100 rpm) üzerinde kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Santrifüjü ve PBS yıkama yineleyin. Süpernatant borular tamamen geride bırakarak sadece Pelet kaldırmak. Seyreltilmiş birincil antikorlar (anti fare βtub-III, GFAP'nin ve antikorlar, 1: 200 konsantrasyon testin tavşan) 100 µL % 1 sığır serum albümin, % 10 serum (keçi serum) ve % 0,5 içeren seyreltme arabellekte eklemek ara-20 PBS ve yavaşça triturate karıştırmak için. RT, tüpler için 30 dk bir orbital çalkalayıcı üzerinde kuluçkaya.</li>
	<li>PBS bir kez hücrelerle yıkama ve süpernatant borular tamamen, geride bırakarak sadece Pelet kaldırın.<ol>
<li>Seyreltilmiş ikincil antikor 100 µL ekleyin (keçi anti tavşan 1:500 konsantrasyonu Birleşik FITC) karıştırmak için PBS hücre Pelet ve yavaşça triturate. RT, tüpler karanlıkta bir shaker üzerinde 30 dk için kuluçkaya.</li>
		<li>Örnekleri 2 yıkama x PBS ve akış arabellek ile bir kez daha sonra yıkama ile. Santrifüj kapasitesi ve akışı arabelleği Akış Sitometresi Analizi için yaklaşık 150 µL hücrelerde yeniden askıya alma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li>
<li>Choi, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Thrombin+Receptor+Restricts+Subventricular+Zone+Neural+Stem+Cell+Expansion+and+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The Thrombin Receptor Restricts Subventricular Zone Neural Stem Cell Expansion and Differentiation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9360(2018).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+novel+rat+neural+progenitor+clone+that+expresses+Dlx+family+transcription+factors+and+gives+rise+to+functional+GABAergic+neurons+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Isolation of a novel rat neural progenitor clone that expresses Dlx family transcription factors and gives rise to functional GABAergic neurons in culture.</a> Developmental Neurobiology. 72 (6), 805-820 (2012).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+phenotypically+diverse+neural+culture+from+hESC+by+combining+adherent+and+dissociation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Derivation of phenotypically diverse neural culture from hESC by combining adherent and dissociation methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2018).</li>
<li>Dhara, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+progenitor+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Human neural progenitor cells derived from embryonic stem cells in feeder-free cultures.</a> Differentiation. 76 (5), 454-464 (2008).</li>
<li>Aligholi, H., Hassanzadeh, G., Gorji, A., Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Biopsy+Method+for+Isolating+Neural+Stem+Cells+from+the+Subventricular+Zone+of+the+Adult+Rat+Brain+for+Autologous+Transplantation+in+CNS+Injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A Novel Biopsy Method for Isolating Neural Stem Cells from the Subventricular Zone of the Adult Rat Brain for Autologous Transplantation in CNS Injuries.</a> Methods in Molecular Biology. 1462, 711-731 (2016).</li>
<li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+embryonic+mouse+neural+stem+cell+culture+using+the+neurosphere+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Establishing embryonic mouse neural stem cell culture using the neurosphere assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), (2011).</li>
<li>Ferrari, D., Binda, E., De Filippis, L., Vescovi, A. L. Isolation of neural stem cells from neural tissues using the neurosphere technique. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFerrari%2C+D+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22">Current Protocols in Stem Cell Biology</a>. , Chapter 2 Unit2D.6 (2010).</li>
<li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nature Protocols. 7 (2012), (2005).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passage+Number+is+a+Major+Contributor+to+Genomic+Structural+Variations+in+Mouse+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Passage Number is a Major Contributor to Genomic Structural Variations in Mouse iPSCs.</a> Stem Cells and Development. 32 (10), 2657-2667 (2014).</li>
<li>Diaferia, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Chromosomal+Analysis+of+Cultured+Mouse+Neural+Stem+Cell+Lines%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Systematic Chromosomal Analysis of Cultured Mouse Neural Stem Cell Lines.</a> Stem Cells and Development. 20 (8), 1411-1423 (2011).</li>
<li>Hemmer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+Neural+Stem+Cells+Achieve+Long-Term+Survival+and+Functional+Integration+in+the+Adult+Mouse+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Induced Neural Stem Cells Achieve Long-Term Survival and Functional Integration in the Adult Mouse Brain.</a> Stem Cell Reports. 3 (3), 423-431 (2014).</li>
<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+Cytometry+Protocols+for+Surface+and+Intracellular+Antigen+Analyses+of+Neural+Cell+Types%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), 52241(2014).</li>
<li>Zhang, Z., Wang, Z., Rui, W., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnesium+lithospermate+B+promotes+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+in+vitro+and+enhances+neurogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Magnesium lithospermate B promotes proliferation and differentiation of neural stem cells in vitro and enhances neurogenesis in vivo.</a> Tissue and Cell. 53, 8-14 (2018).</li>
<li>Zilkha-Falb, R., Gurevich, M., Hanael, E., Achiron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prickle1+as+positive+regulator+of+oligodendrocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Prickle1 as positive regulator of oligodendrocyte differentiation.</a> Neuroscience. 364, 107-121 (2017).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells%3A+A+novel+role+for+c-Src%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li>
<li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160(2018).</li>
<li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li>
<li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li>
</ol>

Hiçbir çıkar çatışması ilan etti.

Nöral kök hücrelerin uygun bir kaynak kullanarak nörologlar için çok önemlidir. Sinir kök hücreleri embriyo beyin farklı bölgelerinden hasat edilecek ve nöronlar ve Gliyal hücreler belirli türleri oluşturabilir. İndüksiyon farklılaşma nöral kök hücrelerin olgun nöronlar ve Gliyal hücreler oluşturmak için onları ikna etmek için birkaç yöntem vardır. Belirli koşullar ve trofik faktör alayı altında onlar nöronlar14, oligodendrocytes15,16 ve a...

Sinir kök hücreleri (NSCs) Yetişkin ve embriyo beyin farklı bölgelerinde bulunan ve farklı nöronlar ve gliyal hücreye1oluşturmak için bir eğilim vardır. 2 yetişkin memeli beyin subventricular bölgeler ve embriyo beyinde ganglionic Hazretleri NSC zengin bölgeleri3olabilir. Gelişmekte olan beyin, ganglionic itibar kortikal interneurons ve özellikle GABAergic interneurons3çoğunu sağlar. Ayrıca daha az invaziv yöntem vardır embriyonik kök hücrelerden (ESCs) sinir kök hücre üretimi için veya hayvan talebi azaltmak indüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSCs) kullanın. NSCs ESCs veya iPSCs üreten olası4,5olması rağmen bazı avantajları ve dezavantajları sinir kök hücreleri yalıtım için yetişkin veya embriyo beyin6,7göre vardır, 8. ESCs ve iPSCs nöronal fenotipleri doğru farklılaşma inducing iletişim kurallarını her zaman zaman ve maliyet tüketen ve başarı (% 70-80 Nestin pozitif hücrelerinin)5 oranı düşük doğrudan NSCs izolasyonu hayvan beyin () ile karşılaştırıldığında fazla %99 Nestin pozitif hücrelerinin)9. Ayrıca, kök hücrelerin genetik onların istikrar ve farklılaşma eğilimi sonra çeşitli pasajlar10,11kaybetmek. NSCs içine somatik hücre doğrudan dönüşüm hakkında diğer yeni raporlar olsa bile, bu hücrelerin genetik mühendisliğiyle ve her laboratuvar12' kolayca erişilebilir değildir. Bu nedenle, hala izolasyon-in hayvan beyin sinir kök hücreleri için büyük bir talep var; cerrahi teknikler geliştirerek hayvan kullanımı miktarını azaltmak mümkündür. Cerrahi süresini azaltmak ve teknikleri geliştirmek, hücreler zarar uzak tutmak ve NSCs en yüksek oranı her hayvandan elde etmek mümkündür.
Burada, fare E13 embriyo beyinden yalıtım nöral kök hücrelerin teknik bir Basitleştirilmiş ve tekrarlanabilir tanıtmak.

<table><tbody><tr><td>15 mL tüpler</td><td>Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>50 mL tüpler</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Adson Forseps, 12 cm, Düz</td><td>WPI</td><td>14226</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>sığır serum albümini (BSA)</td> <td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>çanak 10cm&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Pansuman Forseps, 12,5 cm, Düz</td><td>WPI</td><td>15908</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Cımbız, 11 cm, Düz</td><td>WPI</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>100983&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>keçi anti tavşan FITC konjuge ikincil antikor</td><td>Sigma</td><td>AP307F</td><td></td></tr><tr><td>keçi serumu</td><td>Sigma</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Heparin&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>h3149</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>83264</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>90909C</td><td></td></tr><tr><td>25-27 gauge İğneli insülin şırıngası&nbsp;</td><td>SUPA medikal</td><td>A1SNL127</td><td></td></tr><tr><td>laminin</td><td>sigma&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Sigma</td><td>M2279</td><td></td></tr><tr><td>N2 takviyesi</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NB ortamı</td><td>Gibco</td><td>21103-31</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asit (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Ca ve Mg içermeyen PBS</td><td>Gibco</td><td>20012050</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>5140122</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-ornitin</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; P4957</td><td></td></tr><tr><td>tavşan anti fare beta tubulin-III antikoru</td><td>Sigma</td><td>T2200</td><td></td></tr><tr><td>tavşan anti fare GFAP antikoru</td><td>Sigma</td><td>G4546</td><td></td></tr><tr><td>tavşan anti fare Nestin antikoru</td><td>Sigma</td><td>N5413</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Kolu #3</td><td>WPI</td><td>500236</td><td></td></tr><tr><td>Makas eğrisi</td><td>WPI</td><td>14396</td><td></td></tr><tr><td>Makas keskin düz</td><td>WPI</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>Soya fasulyesi tripsin inhibitörü</td><td>Roche</td><td>10109886001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü şişeleri, T25</td><td>BD</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü şişeleri, T75</td><td>BD</td><td>353024</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Makas,&nbsp; 8 cm, Düz&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr> <tr><td>ve beta; -merkaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M6250</td><td></td></tr></tbody></table>

yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Sinir kök hücreleri (NSCs) multipotent ve merkezi sinir sistemi (MSS) üç büyük hücre tür çıkmasına neden olabilir. Vitro kültür ve NSCs genişlemesi hücrelerin nöronlar fonksiyonu çalışmaya nörologlar için ve onların etkileşim ile birlikte Gliyal hücreler uygun bir kaynak sağlar. Yetişkin veya embriyo memeli beyin sinir kök hücreleri yalıtım bildirilen bazı teknikler vardır. NSCs embriyonik CNS farklı bölgelerinden izole mikrocerrahi işlem sırasında canlı ve Genişletilebilir kök hücrelerin en yüksek oranı elde etmek için beyin hücrelerine zarar azaltmak çok önemlidir. Stres azaltma sırasında yalıtım fare embriyo beyin bu hücre için olası bir teknik cerrahi zaman azalma var. Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bu hücreler hızlı yalıtım için gelişmiş bir tekniği göstermek. Cerrahi işlemler E13 fare embriyo gelen beyin kafatasından mikrodiseksiyon ganglionic Hazretleri hasat izole beyin açılan bir bükülmüş iğne ucu ile embriyo ön Fontanel kesme rahim, hasat dahil, ayrılma NSC orta bir tek hücre süspansiyon kazanmak için hasat dokusunda ve sonunda kaplama hücre süspansiyon kültür neurospheres oluşturmak için.

Mikro-diseksiyon, hücre izolasyon ve Neurosphere kültür. Burada, biz fare E13 beyin mikrocerrahi ve nöral kök hücrelerin yalıtım için hızlı ve etkili bir yöntem sundu. Bu makalede, tüm beyin ön Fontanel iyi bir kopma bir E13 fare embriyo kafatasını kaldırmak olası gösterir. Bu yöntemle beyin daha az hasar dayandı ve hücreleri beynin farklı yerlerinden izole etmek mümkündür. Hasat hücreleri neurospheres bFGF ve EGF NSC ortamda yaratacaktır ve Kültür (...

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Bu video protokolünün amacı Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre İzolasyon ve Kültür için bir kaynak ve verimli bir protokol oluşturmaktır. Merhaba, ben Meryem Sadeghi-Zadeh. Royan Enstitüsü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji yüksek lisans öğrencisiyim.Bugün ben ve meslektaşım size 13 embriyo fare ganglionik itibar dan nöral kök hücre hasat nasıl göstermek istiyorum. Merhaba, ben Bahareh Alizadeh-Shoorjestan. Royan Biyoteknoloji Enstitüsü Kök Hücre Bölümü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji yüksek lisans öğrencisiyim.Merhaba, ben Rıza Dehghani-Varnamkhasti. Ayrıca Royan Enstitüsü'nde Hücresel ve Moleküler Biyoloji okuyorum. Cerrahi işlemler rahim her 13 fare embriyoları hasat içerir.Kafatasından beyni çıkaran bükülmüş bir iğne ucuyla embriyonun fontanel'inin ön ünü kesmek. Ganglionik saygınlığı toplamak için izole beynin mikro-diseksiyonu. Tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için nöral kök hücre orta hasat doku dissociation.Ve son olarak, sinir hücreleri oluşturmak için bir süspansiyon kültürü nde hücreleri kaplama. Temiz ve dezenfektan karın bölgesinin cilt% 70 etanol ile püskürterek. Kontrol deri yukarı karın ve daha sonra karın boşluğu ve rahim boynuzları ortaya çıkarmak için makas

isolation-and-culture-of-embryonic-mouse-neural-stem-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video embriyonik farelerin gelişmekte olan korteks neuroprecursors izolasyonu için kullanılan yöntem açıklanır. , Embriyoların rahim kaldırarak, kortikal doku diseksiyon, ve sindirerek izole serebral korteks prosedür gösterilmiştir.

Fare Nöral Kök Hücre Öncüleri Kültür

Bu video protokolü, embriyonik gün 14-fare beyninde ganglion eminences nöral kök hücrelerin izolasyonu ve genişleme için neurosphere testinin uygulama göstermektedir.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

Omurilik fare embriyonik motor nöronlar izole alternatif bir yol tarif edilir. Bu yöntem, lektin düşük afinite sinir büyüme faktörü reseptör p75NTR bağlamak için aslında dikkate alır. Bu lektin tabanlı preplating p75NTR karşı spesifik antikor ile benzer bir arınma sağlar.

Fare Embriyonik motor nöronlar lektin tabanlı İzolasyon ve Kültür

Nöral tüpten embriyonik nöral krest izolasyonu kullanımını...

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

Video, fare beyninin subkallozal bölgesinden nöral kök hücrelerin izole edilmesi ve kültürlenmesi sürecini göstermektedir. Dokuların diseksiyonunu, enzimatik dissosiyasyonu ve olgun nöral hücrelere dönüşmek için farklılaşma faktörleriyle kültürlenmesini içerir.

Fare Subkallozal Bölgesinden Erişkin Nöral Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürlenmesi

Bu video, fare embriyonik kök hücrelerinden (mESC'ler) nöral progenitör hücrelerin (NPC'ler) in vitro olarak üretilmesi için bir yöntemi göstermektedir. mESC'ler, embriyoid cisimcikleri (EB'ler) oluşturmak için süspansiyon halinde kültürlenir ve daha sonra yapışık bir kültürde retinoik asit tedavisi yoluyla NPC'lere farklılaşmaya yönlendirilir.

Fare Embriyonik Kök Hücrelerinden Nöral Progenitör Hücreler Üretmek İçin Bir Teknik

Bu video, doğum sonrası fare beyinciğinden kök hücreleri izole etmek ve bunları nöral hücrelere ayırmak için bir yöntemi göstermektedir. İzole edilmiş hücre süspansiyonundan elde edilen kök hücreler, antikor kaplı manyetik boncuklar kullanılarak saflaştırılır ve nöroküreler oluşturmak üzere kültürlenir. Nörosferler daha sonra nöral hücreler oluşturmak için bir farklılaşma ortamında tutulur.

Doğum Sonrası Fare Beyinciğinden Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Nöral Hücrelere Farklılaşması

Burada subventricular bölgesi ve bireysel yetişkin farelerin kıvrımlarının gelen yapışkan tek katman veya neurospheres ya gibi, sinir öncü hücre kültürlerinin eş zamanlı üretimi için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

Bu protokol, serum içermeyen tek katmanlı bir yöntem kullanarak embriyonik kök hücrelerden nöral progenitörler üretme yöntemini ayrıntılı olarak açıklar. Bu progenitörler, olgun nöral hücre tiplerini türetmek veya nöral spesifikasyon sürecini incelemek için kullanılabilir ve bileşik tarama için çok kuyulu format ölçeklendirmesine uygundur.

Serum serbest Tek tabakalı Kültüründe Fare Embriyonik Kök Hücre Sinir Farklılaşma

Erişkin nöral kök hücrelerin (aNSC'ler) genişletilmesi için kültür sistemlerinin kurulması, aNSC'lerin tedavi için incelenmesine ve uygulanmasına olanak sağlar. Subkallozal bölge (SCZ) son zamanlarda yetişkin farelerde yeni bir nöroblast oluşturan bölge olarak kabul edilmiştir. Burada, SCZ-aNSC'lerin izolasyonu, genişletilmesi ve farklılaştırılması için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Öğrenin, E13 fare embriyolarından ganglionik eminansdan nöral kök hücre izolasyonu ve kültürü için güvenilir bir mikrocerrahi protokol. Bu yöntem, yüksek verimli hücre elde edilmesini sağlar.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Daha fazla video keşfet