Name: Colletotrichum fioriniae Su ve kloroform tabanlı yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kalkınma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 32 s
Description: Keşfedin, yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kullanarak bitki patojeni Colletotrichum fioriniae'nin gelişimini nasıl izleyeceğinizi. Bu yöntem, su ve kloroform bazlı ekstraksiyon teknikleriyle fungal büyüme dinamiklerini değerlendirmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

William S. Haines, Sr. donatılmış kızılcık Araştırma Fonu ve New Jersey Blueberry ve kızılcık Araştırma Konseyi, Inc destek için teşekkür ederiz. Biz de teşekkür ederiz Jennifer Vaiciunas (rehberlik ve çiçek hazırlıklar), Christine Constantelos (mantar kültürü ve çiçek hazırlıkları), David Jones (çiçek ürünleri ve çekimi), Langley Oudemans (çiçek hazırlıklar, filme/fotoğraf), Jesse Lynch (çiçek hazırlıklar), Roxanne Tumnalis (genel destek) ve çok sayıda öğrenci/yaz stajyer.

<ol><li>Pszczółkowska, A., Okorski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+of+anthracnose+disease+caused+by+Colletotrichum+fioriniae+on+blueberry+in+western+Poland%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">First report of anthracnose disease caused by Colletotrichum fioriniae on blueberry in western Poland.</a> Plant Disease. 100, 2167(2016).</li>
<li>Oudemans, P. V., Caruso, F. L., Stretch, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranberry+fruit+rot+in+the+northeast%3A+a+complex+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Cranberry fruit rot in the northeast: a complex disease.</a> Plant Disease. 82, 1176-1184 (1998).</li>
<li>Damm, U., Cannon, P. F., Woudenberg, J. H. C., Crous, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Colletotrichum+acutatum+species+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Studies+in+Mycology%22%5BJournal%5D)">The Colletotrichum acutatum species complex.</a> Studies in Mycology. 73, 37-113 (2012).</li>
<li>Marcelino, J., Giordano, R., Gouli, S., Gouli, V., Parker, B. L., Skinner, M., TeBeest, D., Cesnik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colletotrichum+acutatum+var.+fioriniae+%28teleomorph%3A+Glomerella+acutata+var.+flioriniae+var.+nov.%29+infection+of+a+scale+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">Colletotrichum acutatum var. fioriniae (teleomorph: Glomerella acutata var. flioriniae var. nov.) infection of a scale insect.</a> Mycologia. 100, 353-374 (2008).</li>
<li>Pennycook, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colletotrichum+fioriniae+comb.+%26+stat.+nov.%2C+resolving+a+nomenclatural+muddle%5BTitle%5D)+AND+%22Mycotaxon%22%5BJournal%5D)">Colletotrichum fioriniae comb. & stat. nov., resolving a nomenclatural muddle.</a> Mycotaxon. 132, 149-154 (2017).</li>
<li>Shivas, R. G., Tan, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+taxonomic+re-assessment+of+Colletotrichum+acutatum%2C+introducing+C.+fioriniae+comb.+et+stat.+nov+and+C.+simmondsii+sp+nov%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Diversity%22%5BJournal%5D)">A taxonomic re-assessment of Colletotrichum acutatum, introducing C. fioriniae comb. et stat. nov and C. simmondsii sp nov.</a> Fungal Diversity. 39, 111-122 (2009).</li>
<li>Wharton, P. S., Diéguez-Uribeondo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Anales+del+Jard%C3%ADn+Bot%C3%A1nico+de+Madrid%22%5BJournal%5D)">The biology of Colletotrichum acutatum.</a> Anales del Jardín Botánico de Madrid. 61, 3-22 (2004).</li>
<li>Prusky, D., Alkan, N., Mengiste, T., Fluhr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescent+and+necrotrophic+lifestyle+choice+during+postharvest+disease+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Quiescent and necrotrophic lifestyle choice during postharvest disease development.</a> Annual Review of Phytopathology. 51, 155-176 (2013).</li>
<li>Milholland, R. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMilholland%2C+RD+%22Compendium+of+Blueberry+and+Cranberry+Diseases%22">Compendium of Blueberry and Cranberry Diseases</a>. , American Phytopathological Society. St. Paul, MN. (1995).</li>
<li>DeMarsay, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Anthracnose+fruit+rot+of+highbush+blueberry%3A+biology+and+epidemiology%22">Anthracnose fruit rot of highbush blueberry: biology and epidemiology</a>. , Rutgers University. New Brunswick, NJ. Dissertation (2005).</li>
<li>Madden, L. V., Yang, X. S., Wilson, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+rain+intensity+on+splash+dispersal+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Effects of rain intensity on splash dispersal of Colletotrichum acutatum.</a> Phytopathology. 86, 864-874 (1996).</li>
<li>Yang, X., Madden, L. V., Wilson, L. L., Ellis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+surface-topography+and+rain+intensity+on+splash+dispersal+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Effects of surface-topography and rain intensity on splash dispersal of Colletotrichum acutatum.</a> Phytopathology. 80, 1115-1120 (1990).</li>
<li>Wharton, P. S., Dickman, J. S., Schilder, A. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+spore+release+by+Colletotrichum+acutatum+in+Michigan+blueberry+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Timing of spore release by Colletotrichum acutatum in Michigan blueberry fields.</a> Phytopathology. 92, 86(2002).</li>
<li>MacKenzie, S. J., Peres, N. A., Timmer, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+citrus+leaves+and+secondary+conidiation+response+to+citrus+flower+extracts+by+non-postbloom+fruit+drop+strains+of+Colletotrichum+acutatum%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Colonization of citrus leaves and secondary conidiation response to citrus flower extracts by non-postbloom fruit drop strains of Colletotrichum acutatum.</a> Tropical Plant Pathology. 35, 333-342 (2010).</li>
<li>Leandro, L. F. S., Gleason, M. L., Nutter, F. W., Wegulo, S. N., Dixon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strawberry+plant+extracts+stimulate+secondary+conidiation+by+Colletotrichum+acutatum+on+symptomless+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Strawberry plant extracts stimulate secondary conidiation by Colletotrichum acutatum on symptomless leaves.</a> Phytopathology. 93, 1285-1291 (2003).</li>
<li>Waller, T. J., Vaiciunas, J., Constantelos, C., Oudemans, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+the+blueberry+floral+extracts+influence+secondary+conidiation+and+appressorial+formation+of+Colletotrichum+fioriniae%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Evidence the blueberry floral extracts influence secondary conidiation and appressorial formation of Colletotrichum fioriniae.</a> Phytopathology. 108, 561-567 (2017).</li>
<li>Gager, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+influence+of+cranberry+floral+wax+on+appressorium+formation+in+Colletotrichum+fioriniae%22">The influence of cranberry floral wax on appressorium formation in Colletotrichum fioriniae</a>. , Rutgers University. New Brunswick, NJ. Masters thesis (2015).</li>
<li>Podila, G. K., Rogers, L. M., Kolattukudy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+signals+from+avocado+surface+wax+trigger+germination+and+appressorium+formation+in+Colletotrichum+gloeosporioides%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Chemical signals from avocado surface wax trigger germination and appressorium formation in Colletotrichum gloeosporioides.</a> Plant Physiology. 103, 267-272 (1993).</li>
<li>Polashock, J. J., Caruso, F. L., Oudemans, P. V., McManus, P. S., Crouch, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+North+American+cranberry+fruit+rot+fungal+community%3A+a+systematic+overview+using+morphological+and+phylogenetic+affinities%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The North American cranberry fruit rot fungal community: a systematic overview using morphological and phylogenetic affinities.</a> Plant Pathology. 58, 1116-1127 (2009).</li>
<li>Miller, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((V-8+juice+agar+as+a+general+purpose+medium+for+fungi+and+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">V-8 juice agar as a general purpose medium for fungi and bacteria.</a> Phytopathology. 45, 461-462 (1955).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

C. fioriniae yanıt çiçek özleri (FEs) olarak tespit BİYOANALİZLER için blueberry ve yaban mersini meyve çürüklüğü pathosystems geliştirilen ama diğer bahçe bitkileri için kolayca adapte edilebilir. Yukarıda ayrıntılı iletişim kuralı da dahil olmak üzere birçok önemli veri kümeleri alınıyor değerli edilmiş, fakat bunlarla sınırlı olmamak üzere: FE etkileri çok sayıda patojenlerin, mantar büyüme aşamalarında çeşitli FEs, huzurunda zamanlı Kurs bilgileri birden çok yalıtır Ekstraksiyon teknikleri karşılaştırılması, muayene C. fioriniae büyüme ve farklılaşma, bireysel çiçek organ değerlendirilmesi bireysel kimyasalların ayıklar, C. fioriniae FE iken, etkileri huzurunda sıcaklık etkileri fenoloji bağımlı balmumu çekimi ve çiçek yağmur suyu etkileri. C. fioriniae hayat çok daha net anlaşılmasını sahneler ve çiçeklenme dönemi birçok meyve patojenler çürüyen denetimine çok önemlidir bu yüzden kısmen elucidates sağlanan bu teknikler kullanılarak oluşturulan veri da vardır.
Başlangıçta, tüm çiçekler aynı şekilde etkinolarak işlenmiş olan-FE ama ayıklama işlemi tüm çiçekler kullanarak doğru taşındı. Çiçek diseksiyon zaman alıcı ve elde edilen FEs bioactivity üzerinde çok az etkisi vardı. Ancak, bireysel çiçek organlarını ve varsa olabilir be değerlendirilmiş kullanarak bu iletişim kuralı, ama büyük bir özenle götürülmeli tamamen çiçek dokuları (tamamlayıcı film 1, 2,3 adımda ayrıntılı önlemler ile), macerate için bu kadar neden olup serbest bırakmak mikroskobik Değerlendirmeler deforme FE içine mantarlar-toksik/statik bileşikler. Daha az invaziv çekimi gibi pass -FE (tamamlayıcı film 2) ve rw-FE şimdi edinme kolaylığı nedeniyle daha uygun. Ayrıca, bu ayıklama teknikleri biyolojik olarak aktif çiçek kimyasal ipuçlarını elde etmek için yalnızca vakum filtrasyon gerektirir.
Tüm çekimi kullanılan çiçekler genellikle 0-3 için buzdolabında gün kala özü hazırlık. Bu iletişim kuralı zaman yönetimi FE ciro (alan koleksiyonu depolama yoluyla özler) mücadeledir. Bu birden çok kaynak ve tarihleri çok sayıda örnekleri şiddetlenir. Bozulan ve renksiz çözdürülen çiçek göründükleri gibi donmuş çiçekler herhangi bir gerçek ölçüde, değerlendirilmemiştir. Ancak, bir kez su bazlı FEs hazırdı, buz gibi tekrarlanan ve çözülme etkisi üzerinde göstermiştir FE FE hoşça bioactivity hızlı bir şekilde refrozen bioassay hazırlık (uygun 3 yaşındaki FE) sonra.
Kloroform tabanlı ayıklama patojen yanıt için üç boyutlu çiçek/meyve yüzey Vakslar ch-FE buharlaşma cam coverslips doğum via iki boyutlu düzlemde incelenmesi sağlar. Ancak, bu ch FE'den yatırılır mumlar gerçek kristal yapılarının hangi onlar toplanmıştır yüzeye aynıdır düşüktür. Belirli balmumu yapıları vivo içinde mantar yanıt soruşturmanın ana odak varsa niyetli, tamamlayıcı teknikleri uygulanmalıdır. Kloroform tabanlı özleri su bazlı çekimi daha daha fazla depolama bakım gerekir. Ch-FE özleri karanlıkta tutmak, yanı sıra PTFE kaplı hücre kültürü kapaklar ve şal Evaporatif kaçakları için düzenli olarak kontrol edilmesi gerek mühürleme parafilm tüp ve gerektiği gibi yerine.
Çiçek yağmur suyu akış kontrolü kavramı siteye özgü hastalık izleme araçları tarihini erkene alma fikrini yatmaktadır. Çiçek kapalı tükendi yağmur suyu toplama aygıt yakalar sürece yağmur suyu toplama cihazlar diğer birçok bitki mimarileri için adapte edilebilir. Bu yaklaşım olsun veya olmasın çiçek stimülasyon herhangi bir zamanda alanında mevcut ve sezon boyunca izlenebilir hakkında bilgi sağlar. Alternatif olarak, koleksiyon cihazlar ne kadar çiçek cues verilen herhangi sırasında ıslatma-olay yıkanmış belirlemek için birden fazla gölgelik yerlerde dağıtılabilir. Gelecekte deneyler, mantar ilacı uygulamaları ne zaman başlaması gerektiğini ve ne zaman güvenli bir şekilde sona erebilir rw-FE belirleyecektir. Ayrıca, fenoloji bağımlı balmumu çekimi (iletişim kuralı Bölüm 9) izleyerek, çiçeklenme dönemi patojen Biyoloji için önemi daha da belirgin haline gelmiştir. Bu bölüm Ayrıca geçici ayrılır ana yüzey Vakslar yan yana karşılaştırma için izin yöntemleri sağlayan bu BİYOANALİZLER esnekliğini göstermek için eklenmiştir. Çiçek çıkarma teknikleri ve BİYOANALİZLER kullanılarak oluşturulan verilerin patojen stimülasyon, somut göstergeleri belirli kimyasal sınıfları patojen Biyoloji ve gelecekteki kontrol stratejileri için hedefler için temsil eder.

Colletotrichum fioriniae bir meyve çürüklüğü Highbush yaban mersini (Vaccinium corymbosum L.) ve büyük Amerikan kızılcık (macrocarpon V. Aiton)1,2neden olur. Bu patojen son zamanlarda C. acutatum tür karmaşık3,4,5,6 belirlendi ve yaban mersini Antraknoz nedensel bir ajan ve kızılcık meyve çürüklüğü üyesi karmaşık, yanı sıra çok sayıda diğer bitki hastalıkları dünya çapında7neden. C. fioriniae bir gizli, hemibiotrophic yaşam tarzı8, meyve olgunlaşma9son aşamasında kadar belirgin hale değil bloom ve belirti geliştirme sırasında ortaya çıkan enfeksiyonlar ile vardır. Yaban mersini ve yaban mersini meyve çürüklüğü sadece yeterince çiçeklenme döneminde yapılmış mantar ilacı uygulamaları ile kontrol edilir. Patojen uyuyan yaban mersini çiçek tomurcuk ölçekler10 ' overwinters ve çiçeklenme sırasında sporulates. Conidia gölgelik via yağmur-splash dağılma11,12 taşınır ve inoculum birikimi güçlü çiçeklenme dönemi13ile ilişkili. Çiçek narenciye yazı bloom meyve bileşenleri (PFD)14 yanı sıra çilek Antraknoz15, neden her iki durumda da bırak önemli olduğu gibi ana çiçek Colletotrichum türlerin yanıt Vacciniumiçin benzersiz değil sporulate patojen. Tüm bu durumlarda çiçek kimyasal yardımlar C. fioriniae ve çiçeklenme sırasında enfekte diğer patojenleri üzerinde zamansal dinamiği değerlendirmek etkili yöntemler ihtiyacını vurgulamak. Burada açıklanan yöntemler tarafından sağlanan anlayışlar giderek daha değerli hale gelmektedir.
Bu iletişim kuralı çiçek özü (FE) satın alma yöntemleri detayları ve FE C. fioriniae yanıt değerlendirilmesi via cam coverslip BİYOANALİZLER15,16kılavuzları. Çiçek çıkarma teknikleri iki ana tipe ayrılır; su bazlı çekimi (etkin-FE, pasif (pass -FE) ve alan yağmur suyu tabanlı (rw-FE)) ve kloroform tabanlı (ch-FE)17 çekimi. Su bazlı çekimi seferber su çiçek kimyasal cues incelenmesi için izin. FE, büyük ölçüde enfeksiyon enfeksiyon gerçekleşmesi gerekli nem sağlayan ek16, hızını artırır bu yana seferber bu ipuçları büyük olasılıkla önemli enfeksiyon mahkemenin bileşenleridir. Ayrıca, temsil ettikleri çiçek stimülasyon-ebilmek var olmak yıkamak gölgelik ıslatma-olaylar daha önce gözlenen yaban mersini ve diğer kırpma sistemleri14,16olarak sırasında gibi daha doğal bir durum. Çiçek çekimi (ch-FE) kloroform tabanlı bir sağlamak aynı zamanda değerli bilgileri patojen yanıt-e doğru ev sahibi yüzey17,18conidia bir kez duyarlı üzerine yatırılır erken büyüme dönemlerinde elucidating, mumlar Ana organlar (Yani çiçekler, yumurtalıklar ve gelişmekte olan meyve). Patojen yanıt-e doğru ev sahibi yüzey Vakslar mevsimsel değişimler de bu iletişim kuralını kullanan izlenebilir. Buna göre BİYOANALİZLER su bazlı FE veya kloroform tabanlı FE bu iki malzeme arasında içsel farklılıklar azaltmak için olan çalışma için düzenlenmiştir.
Su bazlı çekimi ikincil conidiation yüksek düzeyde kloroform tabanlı çekimi daha uyarmak BİYOANALİZLER oluşturulan verilerin ortaya olduğu yere kesin appressorial yanıt, bu nedenle birden çok bileşikleri göstermek için FE mevcut. İlginçtir, bu büyüme yanıt-e doğru her ikisi de ne zaman birden fazla uyarıcı bileşikler gösteren yaban mersini ve kızılcık çiçek kapalı çalıştırmak vardı yağmur suyu kullanarak çiçek yüzeyinden yıkanabilir tespit edildi. Böylece, çiçek uyarılması için izleme patojen başarı bir tarım sisteminde görmemizi sağlar.
Bu iletişim kuralı, nihai hedefi mantar bitki patojenleri çiçek kimyasal ipuçlarını yanıt getirici temel biyolojik bilgi için bir metodoloji yanı sıra yardım çiçek bu bilgi-ebilmek kullanmak Başlatan metodolojileri sağlamaktır siteye özel hastalık yönetimi ve karar alma süreçleri.

<table><tbody><tr><td>0.22 ve mikro; m gözenek boyutu, asetat sterilizasyon filtresi</td><td>VWR</td><td>101102-280</td><td>Yaban mersini çiçek özü (FE) açıklama&nbsp;</td></tr><tr><td>200-1000 ve mikro; l uçlu pipet</td> <td>-</td><td></td> <td>Ekipman, aralık içindeki herhangi bir marka yeterli</td></tr><tr><td>olacaktır 40-200 ve mikro; l uçlu pipet</td> <td>-</td><td></td> <td>Ekipman, aralık içindeki herhangi bir marka yeterli</td></tr><tr><td>olacaktır 5-40 ve mikro; l uçlu pipet</td> <td>-</td><td></td> <td>Ekipman, menzil içindeki herhangi bir marka yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>Hava püskürtme tabancası tek kullanımlık boya püskürtme kabı, bağlantı adaptörü ile&nbsp;</td><td>Liman Taşımacılığı</td><td>97098</td><td>Yaban mersini yağmur suyu (rw-)FE toplama</td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Amsco</td><td>3011</td><td>Ekipman, medya hazırlama</td></tr><tr><td>Çubuk örgü paspas (plastik örgü levha)</td><td>Winco</td><td>BL-240</td><td>Pasif (pass)-FE toplama</td></tr><tr><td>Tezgah üstü zamanlayıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-662-47</td><td>Ekipman, FE hazırlama</td></tr><tr><td>Siyah basınç/vakum hortumu</td><td>VWR</td><td>62994-795</td><td>Vakum filtresi bileşeni</td></tr><tr><td>Buchner hunisi</td><td>Coors USA</td><td>60240</td><td>Vakum filtresi bileşeni, 55 mm filtre kağıdı disklerini kabul eder</td></tr><tr><td>Bunsen brülörü&nbsp; &nbsp;</td><td>-</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Ekipman Kalsiyum karbonat</td><td>Fisher Scientific</td><td>C64-500</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Sorvall ve nbsp;</td><td>RC 5B Plus</td><td></td></tr><tr><td>Ekipman Santrifüj tüpleri (15 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-527-90</td><td>Ekipman</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri (50 ml)</td><td>VWR</td><td>10025-694</td><td>Ekipman, rw-FE toplama</td></tr><tr><td>Tülbent (sınıf 50)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS240</td><td>Ekipman, FE hazırlama</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>VWR</td><td>JT9175-3</td><td>Kimyasal, triklorometan: tahlil derecesi, > %99 saf, moleküler biyoloji için, peroksit içermeyen</td></tr><tr><td>Mısır Unu Agar (CMA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11132</td><td>&nbsp; Ön karışım ortamı, eğimlerde depolamayı izole edin</td></tr><tr><td>Pamuk mavisi leke</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>61335</td><td>Laktofenol pamuk mavisi leke</td></tr><tr><td>Difco Agar</td><td>VWR</td><td>90004-032</td><td>Medya bileşeni</td></tr><tr><td>Matkap presi</td><td>Delta</td><td></td> <td>Ekipmanı, rw-FE koleksiyonu</td></tr><tr><td>EASYpure LF Ultra saf su</td><td>Barnstead</td><td>D738</td><td>Ekipman, deiyonize su kaynağı</td></tr><tr><td>Etanol (%95)</td><td>-</td><td>-</td><td>Kimyasal</td></tr><tr><td>Filtre şişesi (500 ml)</td><td>Pyrex</td><td>No. 5340</td><td>Vakum filtresi bileşeni</td></tr><tr><td>Çeker ocak</td><td>Hamilton-Ekipman</td><td></td><td>, kloroform kullanımı</td></tr><tr><td>Huni (7 X 7 cm)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60820-110</td><td>Kızılcık rw-FE koleksiyonu, FE hazırlama</td></tr><tr><td>Jenerik cam slayt&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-038-101</td><td>Biyotahlil iletkenliği</td></tr><tr><td>Jenerik plastik pompa sprey şişesi</td><td>VWR</td><td>16126-454</td><td>pass-FE koleksiyonu, en az 250 ml kapasiteli</td></tr><tr><td>Cam hücre kültürü tüpleri</td> <td>-</td><td></td> <td>ch-FE</td></tr><tr><td>Cam lamellerin saklanması (22 x 22 mm)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td><td>Biyotahlil iletkenliği</td></tr><tr><td>Cam Van Tieghem hücreleri (elle kesilmiş cam tüpler)</td> <td>- </td><td>-</td><td>Kloroform (ch)-FE biyo-tahlil, (8 mm OD 6 mm ID)</td></tr> <tr><td>Cam pipet (1-100 & mikro; l)</td> <td>Hamilton Co. Inc.</td><td># 710</td><td>ch-FE biyotahlil</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td>Laktofenol pamuk mavisi leke</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Bright-Line</td><td>5971R10</td><td>Ekipman</td></tr><tr><td>Laktik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W261106</td><td>Laktofenol pamuk-mavi leke</td></tr><tr><td>Laminer akış başlığı</td><td>Labconco</td><td>3730400</td><td>Ekipman, steril çalışma ortamı</td></tr><tr><td>Metal prob (jenerik)&nbsp;</td><td>-</td><td>-</td><td>Ekipman&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri (2 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td>Sulu arıtma karışımı saklama ve hazırlama</td></tr><tr><td>Mikroskobu, Leica DMLB</td><td>Leica</td><td>020-519.010</td><td>Ekipman</td></tr><tr><td>Harç (seramik)</td><td>Coors USA</td><td>60313</td><td>Vakum filtre bileşeni</td></tr><tr><td>Nitril eldivenler&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-130-1597D</td><td>Çiçek koleksiyonu</td></tr><tr><td>Kağıt diskler (kesilmiş kağıt havlular)</td><td>Biyotahlilde nem kontrolü</td><td>KCC01510</td> <td>Ofis Temelleri</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td>Plastik parafin filmi&nbsp;</td></tr><tr><td>Havaneli (seramik)</td> <td>Coors USA</td><td>60314</td><td>Vakum filtre bileşeni</td></tr><tr><td>Fenol kristalleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>A92-100</td><td>Laktofenol pamuk-mavi leke</td></tr><tr><td>Plastik torbalar (~ 100 mm X 152 mm)</td> <td>Uline</td><td>S1294</td><td>Ekipman, çiçek soğutma</td></tr><tr><td>Plastik hücre kültürü kapları (9 cm çap) &nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td> <td>(Petri kabı), biyotahlil iletkenliği</td></tr><tr><td>Politetrafloroetilen (PTFE) kaplı kapaklar&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60927-228</td><td>Ch-FE</td></tr><tr><td>Pyrex beherlerinin saklanması (100 ml)</td><td>Pyrex</td><td>No. 1000</td><td>ch-FE</td></tr><tr><td>Pyrex ekmek tavasının</td><td></td> hazırlanması-<td>-</td><td>pass-FE toplama</td></tr><tr><td>Pyrex dereceli silindir</td><td>-</td><td>-</td><td>Ekipman, FE hazırlığı</td></tr><tr><td>Kapalı plastik kap (30 mm X 13 mm X 7 mm)&nbsp;</td><td>-</td><td></td> <td>Biyotahlil iletkenliği</td></tr><tr><td>Keskin uçlu diseksiyon makası</td><td>Fisher Scientific</td><td>8940</td><td>Tülbent ve kağıt diskleri kesmek için ekipman</td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik hasır süzgeç</td><td>VWR</td><td>470149-756</td><td>ch-FE</td></tr><tr><td>Kademeli matkap ucunun hazırlanması (step-bit)</td><td>Dewalt-Equipment</td><td></td><td>, rw-FE toplama</td></tr><tr><td>Steril döngü (combi-loop)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-602&nbsp;</td><td>Kültür hazırlama</td></tr><tr><td>Telefon kablosu (iç teller)</td> <td>-</td><td></td> <td>Yabanmersini rw-FE toplama</td></tr><tr><td>Test tüpü sepeti ve nbsp;</td><td>VWR</td><td>470137-792</td><td>Plastik örgü [çilek] sepeti için hazır ikame&nbsp;</td></tr><tr><td>V8 Juice</td><td>Campbell's Soup</td> <td>Company-Fungal</td> <td>medya bileşeni</td></tr><tr><td>Vintage plastik örgü [çilek] sepetleri</td><td>Donation-pass-FE</td><td></td> <td>koleksiyonu, test tüpü sepetinin yerini alabilir (470137-792)</td></tr><tr><td>Vortex Genie (Vortex)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-812</td><td>Spor süspansiyon hazırlığı</td></tr><tr><td>Whatman No. 1 Kalitatif 55 mm daireler</td><td>Whatman</td><td>1001-055</td><td>Vakum filtresi bileşeni</td></tr>: <tr><td>Beyaz plastik bükümlü bağlar (100 mm)</td><td>Uline</td><td>S-566W</td><td>, Cranberry rw-FE koleksiyonu</td></tr></tbody></table>

colletotrichum fioriniae su ve kloroform tabanlı yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kalkınma

Colletotrichum fioriniae Development in Water and Chloroform-based Blueberry and Cranberry Floral Extracts

Çiçeklenme dönemi fenoloji ve çiçek kimyasal yardımlar üzerinde mantar meyve patojenler çürüyen zamansal dinamiği doğru bir şekilde izlemek için çiçek çıkarma yöntemleri ve coverslip BİYOANALİZLER Colletotrichum fioriniaekullanarak geliştirilmiştir. Yaban mersini ve kızılcık, bu patojen nedeniyle enfeksiyon, ilk evrelerinde rol çiçek çiçeklenme döneminde mantar ilaçları uygulayarak en uygun şekilde denetlenir. Burada ayrıntılı protokolünü açıklar nasıl çiçek özleri (FE) karşılık gelen cam coverslip BİYOANALİZLER daha sonra kullanmak için su, kloroform ve alan yağmur suyu tabanlı yöntemleri kullanarak elde edilmiştir. Farklı bilgi sağlamak için her FE hizmet: C. fioriniae yanıt seferber çiçek kimyasal için ipuçları su (su bazlı), çiçek ve meyve yüzey mumlar (kloroform tabanlı) ve alan bazlı izlenmesi patojen yanıt vitro gözlemler bir tarım ayarı için hareketli çiçek yağmur suyu, toplanan. FE geniş ya su veya kloroform tabanlı olarak, uygun bir bioassay telafi etmek için bu iki malzeme arasında içsel farklılıklar açıklanan ile tanımlanır. Çiçek çalıştırmak vardı yağmur suyu içinde benzersiz aygıt her ürün için toplanan esneklik ve uygulama diğer ürün sistemleri için bu yaklaşımın ima. BİYOANALİZLER hızlı, ucuz, basit ve uyarıcı Çiçek bileşikleri varlığı hakkında kronolojik zamanmekansal ve siteye özgü bilgileri çeşitli kaynaklardan oluşturma yeteneği sağlar. FE azaltmak gibi enfeksiyon gerçekleşmesi gereken süreyi bu bilgileri sonuçta daha iyi hastalık yönetimi stratejileri, böylece içine büyüyen sezon boyunca patojen enfeksiyon riskleri değişen bilgiler sağlayan bilgi verecektir.

Sonuçları burada sunulan bu metodoloji kullanarak gerçekleştirilen birçok deneyleri birkaç örnektir. Şekil 1 su bazlı FE bioassay resimli bir kılavuzdur ve kloroform tabanlı FE bioassay izleyen Şekil 2 desteklenmiştir. Şekil 3 ne C. fioriniae mikroskobik değerlendirilmesi, 24 h, her iki su ve kloroform tabanlı BİYOANALİZLER (göre SDW denetimleri) üzerine beklenebilir için görsel bir kılavuz sağlar. Şekil 4 kızılcık çeşitli 'Stevens' ch-FE huzurunda C. fioriniae ile 24 h saat ders çalışma detayları ve bu araştırma bir alma sonucu için görsel referans verir: FE azalmıştır zaman formu enfeksiyon yapıları için gerekli SDW için karşılaştırıldı. Şekil 5 kızılcık çiçek yağmur suyu akış (CB "Çiçek" rw-FE) kullanarak bir coverslip bioassay toplanan verileri gösteren bir örnek sağlar. Şekil 6 temsil eden başka bir önemli sonuç: çiçek yumurtalık ch-FE meyve ch-FE, çiçekler yaşam döngüsü içinde önemini gösteren daha çok daha uyarıcı C. fioriniae. Ek fotoğraf ve film çekimi ve çiçek yağmur suyu toplama cihazlar/dağıtım, görselleştirmek aktif - ve pasif - ayıklama (film ek olarak kullanılan çiçek önemli görsel sağlamak su bazlı) süreçleri.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig1.jpg"> Resim 1 : Genel su bazlı bir çiçek özü (FE) bioassay. Bu tahlil su bazlı çiçek özleri ile yaban mersini ve kızılcık çiçekler için kullanılmıştır: etkin -çiçek özleri (etkin-FE), pasif -çiçek özleri (geçmek-FE) ve çiçek yağmur suyu akış (rw-FE). - FE bölümü deneysel/değişken faktör genellikle kabul ettiğiniz anlamına gelir. Diğer taraftan - FE bölümü sabit kalır ve zaman Puan/saat sonrası aşılama değerlendirilir. Tercih doğru 200 X büyütme, 4 alan analizi yapılmıştır. Kısaltmalar: Steril deiyonize su, SDW; Alan başına görüş alanı, A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig2.jpg"> Resim 2 : Genel kloroform tabanlı bir çiçek özü (ch-FE) bioassay. Bu tahlil yaban mersini ve kızılcık (çiçek, yumurtalıklar ve meyve) için kullanılmıştır. Tek tip bir sulu tedavi karışımı bu tahlil, 1 Bölüm spor süspansiyon (conidial konsantrasyonu ch-FE buharlaşma nedeniyle tutarlı tutmak için) 2 parça SDW için kullanıldı. Bu tahlil birden fazla ch-FE (balmumu çeşitli bitki yüzeyler) veya birden çok kez Puan/saat sonrası aşılama tek bir ch-FE kullanarak karşılaştırmak için kullanılabilir. Kısaltmalar: Steril deiyonize su, SDW; Van Tieghem [cam] hücre VanT. hücre. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig3.jpg"> Şekil 3 : Görsel Colletotrichum fioriniae su bazlı FE ve ch-FE karşılaştırılması. Bu tahlil blueberry 'Bluecrop' içinde (etkin-FE, su bazlı) (mantar izole: BB #10) ve kızılcık 'Stevens' kloroform tabanlı (ch-FE) (mantar izole: CB-PMAP182) çiçek özleri SDW denetimlere karşılaştırıldığında. Conidia SDW (kontrol) (A) etkinhuzurunda karşılaştırırken ikincil conidiation (yüzük) ve appressorium oluşumu (ok uçları) dramatik bir artış gözlendi-FE (B) 24 saat sonrası aşılama. Ancak, ikincil conidiation ne zaman karşılaştırma-ch-FE (D)kloroform bioassay SDW denetimi (C) kadar belirgin değildi; daha doğrusu, C. fioriniae büyüme appressorial oluşumu doğru kaymıştır. Kloroform tabanlı, ana bilgisayar/çiçek türleri ne olursa olsun açıklanan ve gösterilen her ayıklama türü, su bazlı için ortak bir yanıttır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig4.jpg"> Şekil 4 : Ch-FE huzurunda zaman ders çalışma (24 saat) Colletotrichum fioriniae . Bu tahlil içinde bir SDW denetim (A-D) ve kızılcık 'Stevens' ch-FE (E-F) görsel olarak 0, 6, 12 ve 24 saat sonrası aşılama (birden çok FE karşılaştırma yerine değişken zaman puan örneği) denetlendi. Appressorium oluşumu (ok uçları) 6 h ch-Fe'de başladı ve sonraki zaman Puan giderek arttı. Bu sonuçları eludes patojen Biyoloji önemli bir faktör çiçeklenme döneminde: çiçek formu enfeksiyon yapıları için gereken süreyi azaltmak. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig5.jpg"> Şekil 5 : Bir bioassay rw-FE kullanarak toplanan verilerin grafik ekran. Yağmur suyu çalıştırmak kızılcık çiçekler (CB "Çiçek" rw-FE) kapalı ve herhangi bir kızılcık bitki dokulardan ("Ground" rw-FE) tek bir ıslatma olay artı bir çift aktif, su bazlı kızılcık çiçek özü (CB etkin dokundu bakir yağmur suyu -FE) (pozitif kontrol) ve SDW (negatif kontrol) bir su bazlı coverslip bioassay tabi ve C. fioriniae büyüme için değerlendirilir. CB "Çiçek" rw-FE standart CB etkinolarak ikincil conidiation ve appressorium oluşumu aynı düzeyde vardı-koleksiyon aygıtları çiçek uyarıcılar sırasında çıkış yakalayan etkili olduğunu belirten FE 24 saat sonrası aşılama, adlı bir ıslatma-olay. Toplam conidia (yatırılır) İlköğretim, conidia ve yeni kurulan ikincil conidia oluşur. Harfler (LSD); p &lt; 0,05 Fischer'ın en azından önemli bir değişikliğe göre önemli farklılıklar test gösterir büyük harfli, toplam conidia; küçük harf, appressoria. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58880/58880fig6.jpg"> Şekil 6 : Kızılcık fenoloji dayalı ch-FE bioassay, görsel denetim. Hastalık yönetimi mantarlar kez çürüyen meyve için bloom kez mantar ilacı uygulamaları içerir. Burada, kızılcık kloroform tabanlı özler (ch-FE) kızılcık ('Stevens') birden fazla büyüme aşamalarında etkisi yüzey Vakslar C. fioriniae , 24 saat sonrası aşılama için görsel olarak değerlendirildi. Yumurtalık toplanan Haziran (A), Temmuz ve Ağustos aylarında toplanan olgunlaşmamış meyve (B, C), hasat meyve toplanan Ekim (D)ve bir SDW denetimi (E) appressorial oluşumu (ok uçları) kontrol. Yumurtalık ch-FE appressorial oluşumu, bu bitki fenoloji (bloom) için yaşam döngüsü C. fioriniaeönemli olduğunu belirten en büyük büyüklüğü vardı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 1" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig1.jpg"> Tamamlayıcı şekil 1: Blueberry önümüzdeki. Yaban mersini çiçekler ('Bluecrop' olarak gösterilen) çekimi için tam çiçeklenme (Nisan-Mayıs ayında New Jersey, ABD) sırasında toplanmıştır. Corollas/yumurtalık bitişik çiçek üzerinden örtüşme ve tamamlayıcı Şekil 2 ile (kızılcık dik) karşılaştırıldığında önümüzdeki genel mimarisi unutmayın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 2" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig2.jpg"> Tamamlayıcı Şekil 2: kızılcık dik. Kızılcık çiçekler ('Stevens' olarak gösterilen) çekimi için tam çiçeklenme (Haziran-Temmuz ayında New Jersey, ABD) sırasında toplanmıştır. Not bir tek kızılcık önümüzdeki (dik) ve çengel çeşitli çiçek Etaplar, su damlacığı corolla şeklinde istinat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 3" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig3.jpg"> Tamamlayıcı şekil 3: Blueberry yağmur suyu dağıtım (çiçek). Yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, doğrudan çiçeklenme bir küme altında yerleştirilen tamamlandı. Dikey olarak cihazın yönlendirmek için kullanılan plastik kaplı tel unutmayın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 4" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig4.jpg"> Tamamlayıcı şekil 4: Blueberry yağmur suyu dağıtım (kök). Tamamlanan yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, yarım taç Bush arasındaki bir önümüzdeki kök aşağı yerleştirilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 5" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig5.jpg"> Tamamlayıcı Şekil 5: Blueberry yağmur suyu dağıtım (taç). Yaban mersini çiçek yağmur suyu toplama aygıt, bush (taç) tabanında yer tamamlandı. Not plastik kaplı teller-ebilmek var olmak çıkarmak değil gerekirse. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 6" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig6.jpg"> Tamamlayıcı şekil 6: Blueberry yağmur suyu dağıtım (toprak). Bakire yağmur suyu toplama aygıt, yaban mersini çalılar için bitişik yerleştirilen tamamlandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig6large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 7" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig7.jpg"> Tamamlayıcı Şekil 7: kızılcık yağmur suyu dağıtım (yakın çekim). Kızılcık çiçek yağmur suyu toplama cihazı, iki tarafta düzgünce çapraz kablo bağları altında sıkışmış ile tamamlandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig7large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Figure 8" src="/files/ftp_upload/58880/58880supfig8.jpg"> Tamamlayıcı şekil 8: kızılcık yağmur suyu dağıtım. Çoklu bir bataklıkta dağıtılan kızılcık çiçek yağmur suyu aygıtları tamamlandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/58880supfig8large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Supplemental Movie 1" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie1.jpg"> Tamamlayıcı film 1: etkin, su bazlı çiçek özleri (etkin -FE). Aşağıdaki adımları 2.3-2.5.1 tamamlayıcı video desteği. Yaban mersini 'Bluecrop' çiçek kullanılmıştır. Bu videoyu izlemek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/active-FEextraction.mp4" target="_blank">lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Supplemental Movie 2" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie2.jpg"> Tamamlayıcı Movie 2: pasif, su bazlı çiçek özleri (geçmek-FE). 3.3-3.4 tamamlayıcı video desteği aşağıdaki adımları. Yaban mersini 'Bluecrop' çiçek kullanılmıştır. Bu videoyu izlemek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/pass-FEextraction.mp4" target="_blank">lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Supplemental Movie 3" src="/files/ftp_upload/58880/58880supmovie3.jpg"> Tamamlayıcı film 3: dağıtım kızılcık çiçek yağmur suyu toplama cihazların. 6.4. adımda takip tamamlayıcı video desteği. Bu videoyu izlemek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58880/rw-FEdeployment.mp4" target="_blank">lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>

Burada, BİYOANALİZLER bir mantar patojen, Colletotrichum fioriniae, yaban mersini yoksa yabanmersini çiçek özleri cam coverslips Tarih huzurunda gelişimini izlemek için tasarlanmıştır açıklanmıştır. Su - kloroform-, dayanarak ve alan yağmur suyu - çiçek çıkarma teknikleri bu bilgileri uygulanabilir nasıl fikir yanı sıra ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Colletotrichum fioriniae Su ve kloroform tabanlı yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kalkınma

To accurately monitor the phenology of the bloom period and the temporal dynamics of floral chemical cues on fungal fruit rotting pathogens, floral ...

Bu protokol, Colletotrichum fiorniae ve dönem çiçek enfekte diğer bitki patojenleri florokimyasal ipuçları zamansal dinamikleri değerlendirmek için ucuz ve uyarlanabilir bir sistem sağlar. Yeni zemin yağmur suyu toplama cihazları, kullanıcının doğal uyarıcıları ve patojen gelişimini etkileyen koşulları neredeyse gerçek zamanlı siteye özgü bir şekilde izlemesini sağlar. Bu yordamı, metin protokolünde açıklandığı gibi doğal olarak enfekte olmuş bir ana bilgisayardan Colletotrichum fiorniae kültürüyle başlatın.Koloniler sporulate başladığında, başka bir V 8 Suyu agar üzerine bir yüksek yoğunluklu sporlama kültürü üretmek için hücre kültürü çanak içeren çizgi conidia. Büyüme yedi gün sonra, hafifçe conidial kitle döngü dokunarak yüksek yoğunluklu kültürden konidia küçük bir miktar toplamak için standart bir steril döngü kullanın. Steril deiyonize su 10 mililitre içeren 15 mililitrelik santrifüj tüp içine karıştırın.Bu numuneyi 10 saniye boyunca girdaplayın. Standart bir pipet kullanarak, numuneyi daha fazla karıştırmak için defalarca yukarı ve aşağı daldırın. Daha sonra girdaplı numunenin bir damlasını hemositometrenin üzerine yerleştirin ve spor konsantrasyonlarını tahmin edin.Beş mililitrelik son hacmi ile steril distile su mililitre başına 0,1 milyon conidia konsantrasyonu ayarlayın. Bu spor süspansiyon olarak adlandırılır ve sadece hemen önce her iki bioassay kullanmak için yapılır. Kloroform bazlı çiçek ekstraksiyonu gerçekleştirmek için tüm bileşenleri iki kez %95 etanol ile temizleyin.Daha sonra her ekstraksiyon için kontaminasyonu önlemek için bileşenleri kloroform ile iki kez temizleyin. PTFE kaplı kapakları kloroform la temizlemeyin, çünkü bu kapaklar onlara zarar verir. Temizlendikten sonra, baş aşağı kuruması için bileşenleri bir kenara koyun.Çiçek ve daha sonra kloroform ekleyerek bir beher dokuz parça kloroform bir parçası işlenmiş çiçekler birleştirin. Yavaşça 30 saniye boyunca girdap ve ikinci kabın içine paslanmaz çelik bir ekran ile süzün. İkinci kabın kloroform bazlı ekstresini cam kültür tüpüne dökün ve PTFE kapağını yapıştırın.Buharlaşmayı önlemek için kapağı parafilmle sarın. Deneysel kullanıma kadar dört santigrat derecede ışık bozulmasını azaltmak için karanlıkta ortaya çıkan kloroform bazlı çiçek ekstresi saklayın. Çoğaltmasağlamak için çıkarmaları birden çok örnekle tekrarlayın.Seçili her konum için bir toplama aygıtı oluşturmak için, bir püskürtme kabının altında delik açmak için matkap presine bağlı bir adım biti kullanın. Sonra sprey fincan ağzına deliğin üstünden düz bir çizgi kesti. Şimdi sprey kabın ağzında plastik kaplı tel iplik için yeterince büyük dört eşit uzaklıklı delik matkap.Plastik kaplı tellerin bir ucunu serbest bırakarak takın. 50 mililitrelik bir santrifüj kapağı içine boya spreyveya fincan adaptörü iplik için yeterince büyük bir delik delin. Sızdırmayı önlemek için adaptör ipliklerini parafilm ile kapatın.Bunu hem santrifüj kapağına hem de püskürtücü kabın dişli kısmına takın. Sonra çiftleştirilmiş 50 milimetrelik santimetrelik santimetrelik tüp ekleyin. Örnekleme konumu başına dört toplama aygıtı oluşturun.Püskürtücü bardakları saplara sığacak şekilde esneterek cihazları seçili konumlara dağıtın. Püskürtücü kabının kesilmiş tarafını, diğer saplara bağlı plastik kaplamalı telleri kullanarak yukarı doğru yönlendirin. Bu çiçekler üzerinden geçen su yakalanır sağlar.Kızılcık çiçeklerinden yağmur suyu toplamak için, ilk ısı bir metal sonda kullanarak hunin ağız etrafında sekiz eşit uzaklıkta delik delinme. Deliklerden dördüne büküm bağları yerleştirin. Diğer uçları o deliğin zıt konumuna takarak düzgün bir geçiş deseni oluştur.Huniyi parafilm ile buhara sarın ve bir kenara koyun. Huniyi 50 mililitrelik bir santrifüj kapağına bir adım ucuyla sokacak kadar büyük bir delik aç. Hazırlanan huniyi santrifüj kapağına takın.Yağış veya havai sulama sonra, kaldırmak ve santrifüj tüp alt tüp kısmı değiştirin. Yağmur suyu toplama tüpleri, bakteri ve diğer mantarlar gibi akıntıda harekete geçen doğal kirleticilerden bozulmaya yatkın oldukları için ıslatma olaylarından sonra hızlı bir şekilde değiştirilmelidir. Kültür yemekleri içinde kağıt diskler iki kat yerleştirin ve steril distile su iki mililitre ile ıslatın.Daha sonra, iki mililitremikrosantrifüj tüpler steril distile su ve su bazlı çiçek ekstresi eşit hacimlerde karıştırın. Daha sonra hazırlanan iki mililitrelik mikrosantrifüj tüplere spor süspansiyonunun eşit hacimlisini ekleyin. Ortaya çıkan hazırlık sulu bir tedavi karışımı olarak adlandırılır.Kontrol için, çiçek özü kısmını atlayın ve conidial konsantrasyonları tutarlı tutmak için steril distile su ile değiştirin. Şimdi hücre kültürü çanak içinde ıslatılmış kağıt havlu üstüne önceden temizlenmiş cam kapakları yerleştirin. Bir coverslip merkezine sulu tedavi karışımı bir 40 mikrolitre damlacık yerleştirin.Kontrol de dahil olmak üzere istenilen tedaviler için bunu tekrarlayın. Sonra hücre kültürü çanak kapatın. Tüm tedaviler ve çoğaltmalar dağıtıldıktan sonra, tüm çoğaltılmış hücre kültürü yemeklerini kapalı plastik bir kap içine yerleştirin ve karanlıkta 25 santigrat derecede kuluçkaya yatırın.Önceden belirlenmiş zaman noktalarında, büyümeyi durduran ve dağı yarı koruyan damlacıklara 10 mikrolitre fiksatif ekleyin. Bir fiksatif eklendikten sonra, mikroskobik incelemeyi kolaylaştırmak için kapakların her birini cam mikroskop kaydırağı üzerine yerleştirerek dikkatlice ters çevirin. Tüm kapaklar cam mikroskop slaytlar üzerinde olduğunda, yerleşmek ve kısmen 20 dakika boyunca akış kaputunda kuru maya bırakın.Primer konidia, çimlenmiş konidia ve yeni oluşan ikincil konidia ve appressoria dahil olmak üzere kapak ta mevcut tüm conidia mevcut saymak. 3.808 milimetrelik bir alanı 400 kez büyütme veya 200 kez toplam çalışma. Bir laminar akış kaputunda, iki mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne iki eşit hacimli steril distile su ve bir hacim spor süspansiyon ekleyin.Kloroform bazlı çiçek özü bioassays için kenara bu sulu tedavi karışımı ayarlayın. Bir duman başlık içinde, hazırlanan plastik hücre kültür çanak içinde bir cam coverslip üzerine bir Van T Cell yerleştirin. Hücrenin ortasına istenilen kloroform bazlı çiçek ekstresinin 33 mikrolitresini dağıtın ve kurumasını bekleyin.Hücrenin duvarlarına dokunmayın. Kontrol tedavisi için, bakire kloroform ekleyin. Kloroform bazlı çiçek özü kuruduktan sonra, van T Hücresi'nin merkezine standart bir pipet ile hazırlanan sulu arıtma karışımının 99 mikrolitresini dağıtın.Sonra tüm hücre kültürü yemekleri kapatın ve kuluçka. Önceden belirlenmiş zaman noktalarında, Van T Hücresine 15 mikrolitre fiksatif ekleyin ve yeterli mantar lekesi sağlamak için en az beş dakika bekleyin. Bu süre sonunda Van T Hücresini dikkatlice çıkarın.Coverslip ters çevirme ve veri toplama adımlarını eskisi gibi gerçekleştirin. 24 saat sonra aşılama da C.fiornia mikroskobik değerlendirilmesi üzerine, steril distile su varlığında konidia karşılaştırma su bazlı çiçek ekstresi ikincil konidiyasyon ve appressoryum oluşumunda dramatik bir artış ortaya koymaktadır. Ancak, kloroform biyoassay steril distile su kontrolü kloroform bazlı özler karşılaştırırken ikincil konidiasyon olarak belirgin değildi.Bunun yerine, C.fiorniae büyüme appressorial oluşumudoğru kaymıştır. Bu testte, steril distile su kontrolü ve kızılcık kloroform bazlı çiçek ekstraksiyonları görsel olarak sıfır, altı, 12 ve 24 saat sonra aşılama denetlenmiştir. Appressoryum oluşumu kloroform bazlı çiçek ekstresi altı saat başladı ve sürekli sonraki zaman noktaları boyunca arttı.Bu sonuç, çiçeklerenfeksiyon yapıları oluşturmak için gerekli süreyi azaltmak bulgu destekler. Meyve çürüyen mantarlar için hastalık yönetimi genellikle çiçek zaman fungisit uygulamaları içerir. Burada, kızılcık birden fazla büyüme aşamalarında kızılcık kloroform bazlı özler görsel c.fiorniae üzerinde etkili yüzey mumlar için değerlendirildi 24 saat sonrası aşılama.Haziran ayında toplanan yumurtalıklar, Temmuz ayında toplanan olgunlaşmamış meyveler ve Ağustos ayında ekim ayında toplanan meyveler ve steril distile su kontrolü appressorial oluşumu için denetlendi. Yumurtalık kloroform bazlı ekstreler, C.fiorniae yaşam döngüsünde çiçeklenmenin önemini gösteren appressorial formasyonun en büyük büyüklüğüne sahipti. Patojen bu protokolün en önemli bileşenidir.Mantarlar denemeler arasında tutarlılık korumak için rutin taze medya taşınmalıdır. Kloroform ile herhangi bir çalışma güvenlik nedenleriyle bir duman başlık içinde yapılmalıdır. Bu malzeme ve cam hazırlanması, ekstraksiyon prosedürleri ve kloroform bazlı biyoassay iletkeniçerir.Zaman noktaları, patojenler, çiçek yağmur suyu koleksiyonları veya konak ekstraksiyon kombinasyonları çeşitli konak-patojen etkileşimleri değerlendirmek için kullanılabilir. Yağmur suyu toplama cihazları ve ilgili bioassays başkalarının çok sayıda yol sistemlerinde yağmur olayları sırasında seferber ev sahibi uyarıcılar ile çalışmak sağlayacaktır.

colletotrichum-fioriniae-development-water-chloroform-based-blueberry

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bitki uçucu toplamak için bir itme-çekme yöntemi açıklanmıştır. Bu yöntem, otçul beslenme, eksojen metil jasmonate ve mekanik hasar kaynaklanan uçucu bir karşılaştırma için sağlar. Bu teknik aynı zamanda yaban mersini bitkileri içinde hasarlı dalları otobur uçucu için maruz hasarsız şube uçucu yanıtını araştırmak için kullanılır.

Otobur bağlı Blueberry uçucu ve Intra-bitki Sinyalleşme

Yöntem bitki özleri, ince katman kromatografisi (TLC) ile ayırma antibakteriyel metabolitlerin tespit etmek için iletişim bioautography açıklanmaktadır. Yöntem sığır işkembe için yerel aşırı amonyak üreten bakteri (HAB) inhibe kırmızı yonca fenolik bileşiklerin taranması uygulanır.

İnce tabaka kromatografi (TLC) Ayırımı ve bitki özleri Biyodenemeler Antimikrobiyal Bileşikler tanımak

Burada, yakın kızılötesi spektroskopi ile tek tek yaban mersinindeki toplam şeker, toplam organik asit ve toplam antosiyanin içeriğinin tahribatsız tahmini için modeller oluşturmak ve doğrulamak için bir protokol sunuyoruz.

HPLC Ölçümleri dayanarak Yakın kızılötesi Spektroskopisi Yaban mersini içinde Hammadde İçeriği tahribatsız Tahmininde Modellerinin İnşaatı

Bu çalışma, dondurularak kurutulmuş çilek tozundan polifenol bakımından zengin ekstraktları hazırlamak için adım adım bir yöntemi ayrıntılarıyla anlatmaktadır. Buna ek olarak, Vasküler Düz Kas Hücreleri (VSMC) kullanarak peptit hormonu anjiyotensin II'nin (Ang II) varlığında hücre kültüründe bu polifenol bakımından zengin özütlerin nasıl kullanılacağına dair kapsamlı bir açıklama sağlar.

Dondurularak Kurutulmuş Berry Tozundan Polifenollerin Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Tedavisinde Ekstraksiyonu ve Saflaştırılması<em&gt; In vitro</em

Olgun frenk üzümü meyvelerinde hızlı, güvenilir ve yarı otomatik uçucu tanımlama ve niceleme için burada bir headspace katı faz mikroextraction-gaz kromatografi platformu açıklanmıştır. Bu teknik, meyve aroması hakkındaki bilgileri artırmak ve üreme amacıyla gelişmiş lezzete sahip kültivarları seçmek için kullanılabilir.

Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometresi ile Birleştirilmiş Headspace Katı Faz Mikroextraction Kullanarak Frenk Üzümü Meyvesinde Uçucu Bileşiklerin Profillemesi

Burada, floresan proteinlerinin stabilitesini korurken bitki dokularını şeffaf hale getirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, temizlenmiş bitki dokularının fiziksel kesitleme olmadan derin görüntülenmesini kolaylaştırır.

Floresan Görüntüleme için Bitki Dokularının Optik Temizlenmesi

Bu makale, bitki ilişkili endofitik mantarların izolasyonu, izolatların uzun süreli korunması, morfolojik karakterizasyon ve sonraki moleküler tanımlama ve metagenomik analizler için toplam DNA ekstraksiyonu için ayrıntılı ve yeterli protokoller sağlamayı amaçlamaktadır.

Mikoheterotrofik Bitkilerde Endofitik Mantarları Tanımlamak için İzolasyon, Karakterizasyon ve Toplam DNA Ekstraksiyonu

Bu protokol, fenolik bileşiklerin ve doğal antioksidanların ekstrakte edilmesi için poliol bazlı mikrodalga destekli bir ekstraksiyon yönteminin kullanımını detaylandırır ve kullanıma hazır ekstraktların geliştirilmesine yönelik pratik ve çevresel olarak sürdürülebilir bir yaklaşımı temsil eder.

Poliol bazlı teknoloji kullanılarak kozmetik uygulamalar için fenolik bileşiklerin ve antioksidanların mikrodalga destekli ekstraksiyonu

Agar içeren cam kaplarda modifiye edilmiş bir müstakil yaprak yöntemi kullanılarak biber tripslerinin toplu olarak yetiştirilmesi için müstakil yapraklı bir biyotahlil protokolü oluşturulmuştur, bu da yüksek sağkalım ve senkronize gelişme sağlar. Bu sistem, entomopatojenik mantar virülansının 2. instar larvalarına karşı verimli bir şekilde taranmasını sağlar ve laboratuvar, sera ve tarla değerlendirmeleri için güvenilir bir trips kaynağı sağlar.

Entomopatojenik Mantarların Virülans Taraması için Biber Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) Yetiştirme Sisteminin Kurulması

Bu protokol, aynı örnekte bitki iyon sızıntısı, peroksidaz aktivitesi ve kallos üretimini değerlendirmek için yüksek verimli bir yaklaşımı tanımlar.

Mikrobiyal İkincil Metabolitlere Yaprak Yanıtlarının Yüksek Verimlilikli Bir Formatla Değerlendirilmesi

Keşfedin, yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kullanarak bitki patojeni Colletotrichum fioriniae'nin gelişimini nasıl izleyeceğinizi. Bu yöntem, su ve kloroform bazlı ekstraksiyon teknikleriyle fungal büyüme dinamiklerini değerlendirmenizi sağlar.

Colletotrichum fioriniae Su ve kloroform tabanlı yaban mersini ve kızılcık çiçek özleri kalkınma

Daha fazla video keşfet