İçi Omental adacık nakli kullanarak h Omental matris adacık doldurma (posta)

Burada, bir protokol adacık nakli örnek tarafından resimli hidrojel tabanlı hücre tedavisinin içinde vivo doğrulama için mevcut. (hOMING) implantasyon doldurma h Omental matris adacık hücre hidrojel karışımı kan damarları engraftment uygun metabolik ortamında en üst düzeye çıkarmak için yakın omental katmanlar arasında implantasyonu sağlar.

Bu yöntem hücre terapisi alanında anahtar sorunun cevaplanmasına yardımcı olabilir, örneğin, adacık transplantasyonu hOMING cerrahi tekniği ile optimize edilebilir mi? Bu tekniğin başlıca avantajları basit, hızlı ve sabit olması ve biyomalzeme doğrulamasının da çok hızlı olmasıdır. Yanlış yerleştirilmiş bir iğne adacık sızıntısına neden olabileceğinden, iğne yerleşiminin görsel gösterimi omentumun içine uygun greft enjeksiyonunun sağlanması açısından önemlidir.

Diyabet indüklemek için, her altı haftalık içine streptozotosin intraperitoneally kilogram başına 75 miligram enjekte, 150-190 gram Lewis alıcı sıçan, ve enjeksiyondan sonra ilk dört gün için günlük kan şekeri ölçümü ile diyabet durumunu kontrol edin. Sıçanlar litre başına iki gram üzerinde bir glisemi sergileyen, subkutan diyabet komplikasyonları ve kilo kaybını önlemek için günde uzun etkili insülin altı birim enjekte. Kuyruk damar kan şekeri seviyesinin iki ölçü silitre başına dört ila beş gramdan fazla olduğunda, 200 picomolar'ın altında bir C-peptid seviyesi ile deneysel kohorta fareler ilerler.

Pelet implantasyonu için, anestezi diyabetik alıcı hayvan ayak sıkışma yanıt eksikliği onaylamak ve povison iyot ile boyun temizleyin. İmplantasyon alanını tıraş edin ve ek povison iyot ile maruz kalan cildi temizleyin. Üç dakika sonra, bir 1-5 povidone iyot çözeltisi bir 1/2 insülin pelet sterilize ve maruz boyun deri delmek için 16 gauge trocar kullanın.

Daha sonra, pelet eklemek ve tek bir nokta ile açılış dikiş kılavuzu ve stylet kullanın. Daha povidon iyot ile dikiş temizleyin ve sıçan hipoglisemi önlemek için izleme ve gıda ile bir kafes içinde kurtarmak için izin. Peletlerin verimliliğini ölçmek için, insülin pelet implantasyonundan bir ay sonra 200 pikomün altında tutulan deneysel kohorttaki sıçanlar da dahil olmak üzere, implantasyondan sonraki bir ay boyunca glisemi düşüşünün ölçülmesi.

Intra-omental matris adacık dolum için, adacık eşdeğerleri sağlıklı donör sıçanlardan izole adacık sayısını sayın ve bireysel 1,5 mililitrelik tüplerde alıcının kilogram başına 7, 660 adacık eşdeğeri hazırlamak. Her aliquot'u fetal sığır serumu olmadan 500 mikrolitre CMRL ortamıile yıkayın ve tüpleri buzüzerine koymadan önce tüp başına 150 mikrolitre taze hazırlanmış aljinat hidrojel taşıyıcıda adacık peletlerini yeniden askıya alın. Sonra, ölü hacim olmadan boş aljinat 150 mikrolitre ile bir atravmatik 21-gauge iğne ile donatılmış bir mililitreşli şırıngalar, aljinat artı adacıklar 150 mikrolitre takip.

Şırıngaları buza yerleştirin ve ilk alıcı hayvanın boynunu az önce gösterildiği gibi hazırlayın. Eski yara üzerinde bir kesi yapmak ve pelet kaldırmak için forceps kullanmak için bir neşter kullanın. Bir veya iki tek dikiş noktaları ile dikiş kapatın ve supine pozisyonda sıçan yerleştirin.

Periton alanını sterilize edin ve tıraş edin. Göğüs kafesinin hemen altında bir 1/2 santimetre laparotomi oluşturmak için neşter kullanın. Kesi nin etrafına ıslak sterilize gazlı bez yerleştirin ve midenin yanında bulunan omental yağ yastığını belirleyin.

Yağ yastığını periton boşluğundan yavaşça çıkarmak için forseps kullanın ve gazlı bezin üzerine yayın. Önceden ısıtılmış iki mililitre ile omental doku nemlendirin, 37 derece-Santigrat steril salin, ve, bir elinde küçük kavisli forseps ile doku tutarak, diğer bir adacık yüklü şırınga iğne ile omental katmanları arasında omental kenarına nüfuz. İğneyi takırken, enjeksiyona başlamadan önce ince bir omental doku tabakası ile çevrili olduğundan emin olun.

İğneyi tamamen takın ve enjekte edilen adacıkların dokuya yayılmasını sağlamak için iğneyi geri çekerken adacık preparatını yavaş yavaş enjekte etmeye başlayın. Enjeksiyon sırasında, iğneyi dokuların kenarına geri çek, iğne neredeyse bitince enjeksiyonu durdurun. Ardından, bir sonraki konumda yeni bir enjeksiyon başlamadan önce beş saniye bekleyin.

Ve gösterildiği gibi başka bir 3-4 aliquots enjekte. Tüm hidrojel dağıtıldığında, enjekte edilen adacıkların kaybını önlemek için iğneyi dikkatlice çekin ve adacıkların enjeksiyon sonunda şırıngada kümelenmediğini kontrol edin. Tüm adacıklar teslim edildiğinde, dikkatle karın boşluğuna omental doku dönmeden önce omentum ve laparotomi duvar nemlendirin.

Sıçan rehydrate karın boşluğuna önceden ısıtılmış steril salin iki mililitre enjekte. Sonra sürekli bir iplik sütür ile kas duvarını kapatın ve tek dikiş noktası ile kutanöz tabaka dikiş. Metabolik takip bir ila iki ay sonra, gösterildiği gibi her alıcının cerrahi kesi açın ve dikkatle kesilerin yanında ortaya çıkan tuzlu batırılmış parçaları üzerine omenta yaymak için forseps kullanın.

Pankreas kuyruğuna bağlı bölgeden başlayarak, omental dokuyu çıkarmak için makas kullanın ve her hayvanı kapatmadan önce iki mililitre önceden ısıtılmış salin enjekte edin. Parafin gömmeden önce% 4 paraformaldehit alınan omenta düzeltin. Daha sonra, bir mikrotom üzerinde dokuların dört mikrometre kalınlığında bölümleri elde ve nakilmorfolojik değerlendirme için hematoksin ve eozin leke uygulayın.

HOMING yöntemi ile nakledilen Dekstran boncuklar sıklıkla kan damarlarına yakın olarak gözlendi ve yağ dokusunun içine iyi yerleştirildi. Bu temsili isojenik çalışmada, glisemi ilk olarak gösterildiği gibi bir 1/2 insülin pelet implantasyonu ile kontrol edildi ve daha sonra alıcı hayvanlarda yaklaşık iki gram glisemi ve 500 pikomdan fazla bir C-peptidisi ile gösterildiği gibi implante adacıklar tarafından implante edildi. Buna ek olarak, eksektimi omenta histolojik analizi yüksek revaskülarize adacıklar ortaya, büyük olasılıkla kan damarlarına yakınlığı sonucu.

Bu teknik, geliştirildikten sonra hücre terapisi alanında araştırmacıların klinik öncesi modellerde biyomühendislik hücre mikroçevresini keşfetmelerinin önünü açmıştır.