Name: Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-20T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: Keşfedin, B2 plazma hücrelerinin çok adımlı kültür sistemindeki in vitro farklılaşma modelini. Bu yöntem, koordineli transkripsiyonel değişiklikleri ve fenotipik özellikleri canlı ortamdaki gibi yeniden üretir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Fransız Inca (Institut National du kanser) gelen hibe tarafından desteklenmiştir Enstitüsü (PLBIO15-256), ANR (Tie-atla) ve ITMO kanser (MM ve TT).

Protokol kuralları Helsinki Bildirgesi ve Montpellier Üniversitesi hastane merkezi Sözleşmesi Biyolojik kaynakların doğrultusunda izler.
1 vitro Normal plazma hücre farklılaşması modeli.
Not: PC'ler bir dört adımlı kültür11,12,13-oluşturulur.
<ol><li>
B hücre amplifikasyon ve farklılaşma
	<ol>
<li>Periferik kan hücreleri sağlıklı gönüllülerden bellek B hücre arıtma için kullanın.</li>
		<li>Kan 7.5 mL ile RPMI 1640 orta 24.5 mL seyreltik.</li>
		<li>Oda sıcaklığında yoğunluk gradient (örneğin, Ficoll) 12.5 mL steril 50 mL konik tüp ekleyin. Yavaşça 32 mL sulandırılmış kan ile yoğunluk gradient overlay. İki aşamasını karıştırma en aza indirmek.</li>
		<li>500 x g de 20 dk kapalı tut ile santrifüj kapasitesi. PBMCs seyreltilmiş plazma/yoğunluk gradient arabiriminden toplamak ve hücreleri bir steril 50 mL tüp içinde yer ve 45 ml Hank'in dengeli tuz solüsyonu ile tamamlayın.</li>
		<li>Hücreler için 500 x gde 5 dk santrifüj kapasitesi. Dikkatle süpernatant kaldırın ve Pelet tutun.</li>
		<li>RPMI1640/10% fetal buzağı serum (FCS) ve santrifüj 5 dk 45 mL de 500 x gekleyin. Dikkatle süpernatant kaldırın ve Pelet tutun. PBS/2% FCS 30 mL ekleyin.</li>
		<li>
Anti-CD2 manyetik boncuklar kullanılarak CD2 + hücre kaldırma. Bir hedef hücre için 4 boncuklu ekleyin. 4 ° C'de 30 dk kuluçkaya
		<ol>
<li>Hücre ayrılık uygulama için bir mıknatıs kullanarak ilişkisiz hücrelerden ayrı boncuk bağlı hücreler. İlişkisiz hücreleri toplamak ve 4 ° c (antikor 106 hücreler için 2 µL) 15 dakika boyunca hücre Pelet CD19 APC anti ve anti CD27 PE antikorlar ile kuluçkaya.</li>
			<li>İki kez PBS/10% keçi serum içinde yıkayın.</li>
			<li>FSC ve SSC ağır etkileri bulaşıcı olaylar kaldırın. Gömlek FSC-A vs FSC-H ve SSC-A vs SSC-H enkaz kaldırmak için ve toplam lökosit nüfus seçmek için arsalar arsa. CD19/CD27 ve CD19 bellek B hücreleri seçin+CD27+.</li>
			<li>Bir hücre sıralayıcısı % 95 saflığı ile kullanarak MBCs arındırmak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>IMDM ve % 10 FCS, 50 mg/mL insan transferrin ve 5 mg/mL insan insülin ile desteklenmiş kullanarak tüm kültür adımları gerçekleştirin.</li>
		<li>
Plaka saf MBCs altı-şey kültür levha (1.5 x 105 MBCs/mL 5 mL/iyi), 4 gün, IL-2 için (20 U/mL), IL-10 (50 ng/mL) ve IL-15 (10 ng/mL).
		<ol>
<li>Phosphorothioate CpG ODN 2006, rekombinant insan çözünür CD40L histidin öğesini eklemek (sCD40L; 50 ng/mL) ve anti-polyhistidine mAb (5 mg/mL) için MBCs harekete geçirmek (Şekil 1). SCD40L veya ODN harekete geçirmek aynı sitokin kokteyl ile yalnızca alt amplifikasyon12' ye verir. Burada en fazla sayısını Kurşunlu harekete geçirmek sinyalleri açıklanan birleşimi harekete geçirmek B hücreleri ve PrePBs11,12 (Şekil 1).</li>
			<li>Gen ifade profil oluşturma için CD38 arındırmak-/CD20- gün 4, bir hücre sıralayıcısı (Şekil 2) kullanarak PrePBs.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Plasmablastic hücre üretimi
	<ol>
<li>Gün 4, hücreleri saymak.</li>
		<li>12-şey kültür plakaları, 2.5 x 2 mL/iyi 105/mL plaka hücrelerde.</li>
		<li>KSY oligonucleotides ve sCD40L kaldırılmasını ve yeni sitokin IL-2 de dahil olmak üzere kokteyl ile yeni bir kültür orta ilavesi farklılaşma teşvik (20 U/mL), IL-6 (50 ng/mL), IL-10 (50 ng/mL) ve IL-15 (10 ng/mL) (Şekil 1). Kültür hücreleri 37 ° C'de (4 gün 7 gün) 3 gün için</li>
		<li>Gen ifade profil oluşturma için CD38 arındırmak+/CD20- , gün 7, bir hücre sıralayıcısı (Şekil 2) kullanarak PBs.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Erken plazma hücre üretimi
	<ol>
<li>Gün 7, hücreleri saymak.</li>
		<li>12-şey kültür plakaları 5 x 105/mL 2 ml, hücrelerde plaka/iyi.</li>
		<li>Erken adet taze kültür orta Il-6 ile kullanarak karton kapak ayırt etmek (50 ng/mL), IL-15 (10 ng/mL) ve IFN-α (500 U/mL) 37 ° C'de 3 gündür Gen ifade profil oluşturma için CD20 arındırmak-/CD38+/CD138+ gün 10, bir hücre sıralayıcısı (Şekil 2) kullanarak erken adet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Uzun ömürlü plazma hücre üretimi
	<ol>
<li>Erken adet uzun süreli adet kültür koşulları değiştirerek ayırt etmek.</li>
		<li>12-şey kültür plakaları 5 x 105/mL 2 ml, hücrelerde kültür/iyi veya 24-şey kültür plakaları 1 mL/de 37 ° C'de Il-6 ve stromal hücre kullanarak orta ve Nisan şartına (200 ng/mL).</li>
		<li>Stromal hücre şartına orta kültür orta ile 5 gün boyunca stromal hücre kültürü çalışmalarının tarafından elde etmek. Stromal hücre kültürü süpernatant (0.2 µm) filtre uygulama ve Don.</li>
		<li>Stromal hücre şartına medya % 50'si her hafta yenileme ile PC kültürleri ekleyin. Oluşturulan uzun ömürlü PC'ler için13ay muhafaza olabilir. Uzun vadede hayatta PC'lerin Il-6 ve Nisan ile bildirilen13elde edilebilir.</li>
		<li>Ölçü IG salgı akış sitometresi üzerinden PC'ler sıralanmış.</li>
		<li>106 hücre/mL 24 h ve hasat kültür süpernatant kültür adet. IgG ve IgA insan enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA) kitleri11,12,13kullanarak ölçer. Medyan IgG salgı 10 pg/cep/gün gün 10-17 pg/cep/gün gün 6013arasında değişiyordu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. moleküler PC farklılaşma B'ye Atlası
Not: Biyoinformatik araçlarını ayıklayın ve PC farklılaşma (GenomicScape)15' e ilgili Affymetrix GEP verilerden en önemli bilgileri görselleştirmek için uygun ve açık erişim yaptık. GEP arıtılmış MBCs, PrePBs, PBs ve EPCs gibi ArrayExpress veritabanından (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/) kamuya: E-MTAB-1771, E-MEXP-2360 ve E-MEXP-3034 ve BMPC E-MEXP-236014,15. Genomicscape serbestçe kullanılabilir bir webtool olduğunu.
<ol><li>
PC veri kümesine b seçimi
	<ol>
<li>B PC veri kümesi Veri Gözat menüsündeki insan B hücreler plazma hücreleriadı verilen GenomicScape açık erişim aracında bioinformatic (http://www.genomicscape.com) seçin. Görselleştirme gen ifade profil benzersiz gen veya gen listesi Analiz araçları ana sayfa kullanılabilir İfade-Coexpression rapor Aracı'nı kullanarak kullanılabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Denetimli Analizi ve asıl bileşen analizi (PCA)
	<ol>
<li>Seçin analiz araçları | webSAM SAM aracı yüklemek için.</li>
		<li>İnsan B hücreleri plazma hücrelerine veri kümesi seçin ve örnekleri karşılaştırmak için grupları seçin.</li>
		<li>İlgi filtreleme seçenekleri uygulamak kullanılabilir farklı filtreleri kullanın.</li>
		<li>Gen ifade profilleri SAM aracı ile karşılaştırmak için kat Değiştir, permütasyon, yanlış bulma oranı ve karşılaştırma türünü de dahil olmak üzere filtreleme seçenekleri değiştirin. GenomicScape analiz hesaplar ve genler differentially Seçili gruplar arasında ifade sağlar.</li>
		<li>Asıl bileşen analizi Temel bileşen analizi Analiz araçları menüsünden seçerek çalıştırın.</li>
		<li>İnsan B hücreleri plazma hücrelerine veri kümesi seçin ve ilgi grupları seçin.</li>
		<li>Genler ilgi veya select genler göre varyans listesini yapıştırın. Genlerin liste Yapıştır, genler/ncRNA'lar, listesi analiz için buraya tıklayınız... Genomicscape seçmek için görüntülenir ve indirilen PCA hesaplar.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Shapiro-Shelef, M., Calame, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+plasma-cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulation of plasma-cell development.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).</li>
<li>Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+generation+of+antibody-secreting+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">The generation of antibody-secreting plasma cells.</a> Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-171 (2015).</li>
<li>Shaffer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blimp-1+orchestrates+plasma+cell+differentiation+by+extinguishing+the+mature+B+cell+gene+expression+program%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Blimp-1 orchestrates plasma cell differentiation by extinguishing the mature B cell gene expression program.</a> Immunity. 17 (1), 51-62 (2002).</li>
<li>Minnich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifunctional+role+of+the+transcription+factor+Blimp-1+in+coordinating+plasma+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Multifunctional role of the transcription factor Blimp-1 in coordinating plasma cell differentiation.</a> Nature Immunology. 17 (3), 331-343 (2016).</li>
<li>Klein, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factor+IRF4+controls+plasma+cell+differentiation+and+class-switch+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Transcription factor IRF4 controls plasma cell differentiation and class-switch recombination.</a> Nature Immunology. 7 (7), 773-782 (2006).</li>
<li>Gass, J. N., Gunn, K. E., Sriburi, R., Brewer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stressed-out+B+cells%3F+Plasma-cell+differentiation+and+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Stressed-out B cells? Plasma-cell differentiation and the unfolded protein response.</a> Trends in Immunology. 25 (1), 17-24 (2004).</li>
<li>Goldfinger, M., Shmuel, M., Benhamron, S., Tirosh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+synthesis+in+plasma+cells+is+regulated+by+crosstalk+between+endoplasmic+reticulum+stress+and+mTOR+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Protein synthesis in plasma cells is regulated by crosstalk between endoplasmic reticulum stress and mTOR signaling.</a> European Journal of Immunology. 41 (2), 491-502 (2011).</li>
<li>Yoshida, H., Matsui, T., Yamamoto, A., Okada, T., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XBP1+mRNA+is+induced+by+ATF6+and+spliced+by+IRE1+in+response+to+ER+stress+to+produce+a+highly+active+transcription+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor.</a> Cell. 107 (7), 881-891 (2001).</li>
<li>Shaffer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XBP1%2C+downstream+of+Blimp-1%2C+expands+the+secretory+apparatus+and+other+organelles%2C+and+increases+protein+synthesis+in+plasma+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">XBP1, downstream of Blimp-1, expands the secretory apparatus and other organelles, and increases protein synthesis in plasma cell differentiation.</a> Immunity. 21 (1), 81-93 (2004).</li>
<li>Reimold, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+cell+differentiation+requires+the+transcription+factor+XBP-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plasma cell differentiation requires the transcription factor XBP-1.</a> Nature. 412 (6844), 300-307 (2001).</li>
<li>Jourdan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+transitional+preplasmablast+population+in+the+process+of+human+B+cell+to+plasma+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Characterization of a transitional preplasmablast population in the process of human B cell to plasma cell differentiation.</a> Journal of Immunology. 187 (8), 3931-3941 (2011).</li>
<li>Jourdan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+differentiation+of+memory+B+cells+into+plasmablasts+and+plasma+cells+including+detailed+phenotypic+and+molecular+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of differentiation of memory B cells into plasmablasts and plasma cells including detailed phenotypic and molecular characterization.</a> Blood. 114 (25), 5173-5181 (2009).</li>
<li>Jourdan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+supports+the+generation+of+human+long-lived+plasma+cells+in+combination+with+either+APRIL+or+stromal+cell-soluble+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">IL-6 supports the generation of human long-lived plasma cells in combination with either APRIL or stromal cell-soluble factors.</a> Leukemia. , (2014).</li>
<li>Kassambara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+miRNA+expression+analysis+identifies+novel+key+regulators+of+plasma+cell+differentiation+and+malignant+plasma+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Global miRNA expression analysis identifies novel key regulators of plasma cell differentiation and malignant plasma cell.</a> Nucleic Acids Research. 45 (10), 5639-5652 (2017).</li>
<li>Kassambara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GenomicScape%3A+an+easy-to-use+web+tool+for+gene+expression+data+analysis.+Application+to+investigate+the+molecular+events+in+the+differentiation+of+B+cells+into+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">GenomicScape: an easy-to-use web tool for gene expression data analysis. Application to investigate the molecular events in the differentiation of B cells into plasma cells.</a> PLOS Computational Biology. 11 (1), 1004077(2015).</li>
<li>Miremadi, A., Oestergaard, M. Z., Pharoah, P. D., Caldas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+genetics+of+epigenetic+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Cancer genetics of epigenetic genes.</a> Human Molecular Genetics. 16, Spec No 1 28-49 (2007).</li>
<li>Pei, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histone+methyltransferase+MMSET+regulates+class+switch+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The histone methyltransferase MMSET regulates class switch recombination.</a> Journal of Immunology. 190 (2), 756-763 (2013).</li>
<li>Le Gallou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-2+requirement+for+human+plasma+cell+generation%3A+coupling+differentiation+and+proliferation+by+enhancing+MAPK-ERK+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-2 requirement for human plasma cell generation: coupling differentiation and proliferation by enhancing MAPK-ERK signaling.</a> Journal of Immunology. 189 (1), 161-173 (2012).</li>
<li>Cocco, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+generation+of+long-lived+human+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro generation of long-lived human plasma cells.</a> Journal of Immunology. 189 (12), 5773-5785 (2012).</li>
<li>Leung-Hagesteijn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xbp1s-negative+tumor+B+cells+and+pre-plasmablasts+mediate+therapeutic+proteasome+inhibitor+resistance+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Xbp1s-negative tumor B cells and pre-plasmablasts mediate therapeutic proteasome inhibitor resistance in multiple myeloma.</a> Cancer Cell. 24 (3), 289-304 (2013).</li>
<li>Orlowski, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+proteasome+inhibitors+cannot+ERADicate+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Why proteasome inhibitors cannot ERADicate multiple myeloma.</a> Cancer Cell. 24 (3), 275-277 (2013).</li>
<li>Ding, B. B., Bi, E., Chen, H., Yu, J. J., Ye, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-21+and+CD40L+synergistically+promote+plasma+cell+differentiation+through+upregulation+of+Blimp-1+in+human+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-21 and CD40L synergistically promote plasma cell differentiation through upregulation of Blimp-1 in human B cells.</a> Journal of Immunology. 190 (4), 1827-1836 (2013).</li>
<li>Tsai, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+promotes+immunoglobulin+production+during+plasma+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 promotes immunoglobulin production during plasma cell differentiation.</a> Journal of Immunology. 181 (7), 4570-4579 (2008).</li>
<li>Tsai, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+and+galectin-8+have+redundant+roles+in+promoting+plasma+cell+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 and galectin-8 have redundant roles in promoting plasma cell formation.</a> Journal of Immunology. 187 (4), 1643-1652 (2011).</li>
<li>Anginot, A., Espeli, M., Chasson, L., Mancini, S. J., Schiff, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin+1+modulates+plasma+cell+homeostasis+and+regulates+the+humoral+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Galectin 1 modulates plasma cell homeostasis and regulates the humoral immune response.</a> Journal of Immunology. 190 (11), 5526-5533 (2013).</li>
<li>Belnoue, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+and+adhesion+patterns+determine+the+cellular+composition+of+the+bone+marrow+plasma+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Homing and adhesion patterns determine the cellular composition of the bone marrow plasma cell niche.</a> Journal of Immunology. 188 (3), 1283-1291 (2012).</li>
<li>Belnoue, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APRIL+is+critical+for+plasmablast+survival+in+the+bone+marrow+and+poorly+expressed+by+early-life+bone+marrow+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">APRIL is critical for plasmablast survival in the bone marrow and poorly expressed by early-life bone marrow stromal cells.</a> Blood. 111 (5), 2755-2764 (2008).</li>
<li>Huard, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APRIL+secreted+by+neutrophils+binds+to+heparan+sulfate+proteoglycans+to+create+plasma+cell+niches+in+human+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">APRIL secreted by neutrophils binds to heparan sulfate proteoglycans to create plasma cell niches in human mucosa.</a> Journal of Clinical Investigation. 118 (8), 2887-2895 (2008).</li>
<li>Ame-Thomas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+isolated+from+bone+marrow+and+lymphoid+organs+support+tumor+B-cell+growth%3A+role+of+stromal+cells+in+follicular+lymphoma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells isolated from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis.</a> Blood. 109 (2), 693-702 (2007).</li>
<li>Ramachandrareddy, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BCL6+promoter+interacts+with+far+upstream+sequences+with+greatly+enhanced+activating+histone+modifications+in+germinal+center+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">BCL6 promoter interacts with far upstream sequences with greatly enhanced activating histone modifications in germinal center B cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (26), 11930-11935 (2010).</li>
<li>Li, G., Zan, H., Xu, Z., Casali, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetics+of+the+antibody+response%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Epigenetics of the antibody response.</a> Trends in Immunology. 34 (9), 460-470 (2013).</li>
<li>Miles, R. R., Crockett, D. K., Lim, M. S., Elenitoba-Johnson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+BCL6-interacting+proteins+by+tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Analysis of BCL6-interacting proteins by tandem mass spectrometry.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 4 (12), 1898-1909 (2005).</li>
<li>McManus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Pax5+regulates+its+target+genes+by+recruiting+chromatin-modifying+proteins+in+committed+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Pax5 regulates its target genes by recruiting chromatin-modifying proteins in committed B cells.</a> The EMBO Journal. 30 (12), 2388-2404 (2011).</li>
<li>Ahmadnejad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+expression+of+DNMT1+is+associated+with+increased+expansion+and+proliferation+of+hematopoietic+stem+cells+co-cultured+with+human+MSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Research%22%5BJournal%5D)">Elevated expression of DNMT1 is associated with increased expansion and proliferation of hematopoietic stem cells co-cultured with human MSCs.</a> Blood Research. 52 (1), 25-30 (2017).</li>
<li>Beguelin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EZH2+is+required+for+germinal+center+formation+and+somatic+EZH2+mutations+promote+lymphoid+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">EZH2 is required for germinal center formation and somatic EZH2 mutations promote lymphoid transformation.</a> Cancer Cell. 23 (5), 677-692 (2013).</li>
<li>Herviou, L., Cavalli, G., Cartron, G., Klein, B., Moreaux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EZH2+in+normal+hematopoiesis+and+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">EZH2 in normal hematopoiesis and hematological malignancies.</a> Oncotarget. 7 (3), 2284-2296 (2016).</li>
<li>Beguelin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EZH2+enables+germinal+centre+formation+through+epigenetic+silencing+of+CDKN1A+and+an+Rb-E2F1+feedback+loop%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">EZH2 enables germinal centre formation through epigenetic silencing of CDKN1A and an Rb-E2F1 feedback loop.</a> Nature Communications. 8 (1), 877(2017).</li>
<li>Herviou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRC2+targeting+is+a+therapeutic+strategy+for+EZ+score+defined+high-risk+multiple+myeloma+patients+and+overcome+resistance+to+IMiDs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Epigenetics%22%5BJournal%5D)">PRC2 targeting is a therapeutic strategy for EZ score defined high-risk multiple myeloma patients and overcome resistance to IMiDs.</a> Clinical Epigenetics. 10 (1), 121(2018).</li>
<li>Asangani, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+EZH2-MMSET+histone+methyltransferase+regulatory+axis+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of the EZH2-MMSET histone methyltransferase regulatory axis in cancer.</a> Molecular Cell. 49 (1), 80-93 (2013).</li>
<li>Pei, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMSET+regulates+histone+H4K20+methylation+and+53BP1+accumulation+at+DNA+damage+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MMSET regulates histone H4K20 methylation and 53BP1 accumulation at DNA damage sites.</a> Nature. 470 (7332), 124-128 (2011).</li>
<li>Cui, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EHMT2+inhibitor+BIX-01294+induces+apoptosis+through+PMAIP1-USP9X-MCL1+axis+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+International%22%5BJournal%5D)">EHMT2 inhibitor BIX-01294 induces apoptosis through PMAIP1-USP9X-MCL1 axis in human bladder cancer cells.</a> Cancer Cell International. 15 (1), 4(2015).</li>
<li>Santo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+activity%2C+pharmacodynamic%2C+and+pharmacokinetic+properties+of+a+selective+HDAC6+inhibitor%2C+ACY-1215%2C+in+combination+with+bortezomib+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Preclinical activity, pharmacodynamic, and pharmacokinetic properties of a selective HDAC6 inhibitor, ACY-1215, in combination with bortezomib in multiple myeloma.</a> Blood. 119 (11), 2579-2589 (2012).</li>
<li>Amengual, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+Targeting+of+Protein+Degradation+Pathways+with+the+Selective+HDAC6+Inhibitor+ACY-1215+and+Bortezomib+Is+Synergistic+in+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Dual Targeting of Protein Degradation Pathways with the Selective HDAC6 Inhibitor ACY-1215 and Bortezomib Is Synergistic in Lymphoma.</a> Clinical Cancer Research. 21 (20), 4663-4675 (2015).</li>
<li>Schoenhals, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forced+KLF4+expression+increases+the+generation+of+mature+plasma+cells+and+uncovers+a+network+linked+with+plasma+cell+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Forced KLF4 expression increases the generation of mature plasma cells and uncovers a network linked with plasma cell stage.</a> Cell Cycle. 15 (14), 1919-1928 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa yoktur

İnsanda, PC hücreler nadir farklılaşma kademeli tam biyolojik karakterizasyonu engel anatomik yerlerde yer alıyor. Bir tüp bebek B nerede harekete geçirmek molekülleri ve sitokinler çeşitli birleşimleri ardından gerçekleşen sıralı hücre farklılaşması çoğaltmak için uygulanan multi-step kültür sistemleri kullanarak PC farklılaşma modeli için geliştirdiğimiz farklı organlar/dokularda vivo11,12,13.
Diğer...

Plazma hücreleri (adet) B hücrelerine farklılaşma humoral bağışıklık için zorunludur ve şirket ana bilgisayar enfeksiyonları1karşı korumak. B PC farklılaşma için transkripsiyon kapasite ve metabolizma antikor salgılanması için karşılamak için önemli değişiklikler ile ilişkilidir. B PC farklılaşma için kontrol transkripsiyon faktörleri kapsamlı bir şekilde inceledik ve B ve PC özel transkripsiyon dahil olmak üzere ortaya özel ağlar faktörler (TFs)2. B hücreleri, PAX5, BCL6 ve BACH2 TFs B hücre kimliği2,3koruyucularıyız. IRF4, BLIMP1 ve XBP1 PC TF kodlama PRDM1 indüksiyon B hücresi genleri söndürmek ve bir eşgüdümlü antikor salgılayan hücre transkripsiyon programı3,4,5teşvik. Koordine bu transkripsiyon değişiklikleri IG genlerin transkripsiyon aktivasyonu ile birlikte salgılanan formun immünglobulin ağır zincir2,3, membran-ilişkili form bir geçiş ile ilişkili 4. PC farklılaşma B'ye indüksiyon genlerin endoplazmik retikulum içinde yer ile bağlantılı ve Golgi aygıtı sentezi accomodating tarafından PC içinde önemli bir rol oynamak için bilinen gelişeceğini protein yanıt (UPR) harekete geçirmek ile eşlik eden işlevleri immünoglobulinler6,7salgılanan. TF XBP1 bu hücresel adaptasyon8,9,10' önemli bir rol oynar.
B hücreleri ve PC'ler humoral bağışıklık anahtar oyuncu var. Biyolojik anlama denetleyen üretim ve normal plazma hücrelerinin yaşaması gereken verimli immün yanıt-e doğru sağlamak ve otoimmünite veya bağışıklık yetersizliği önlemek için tedavi edici müdahalelere kritik işler. PC tam biyolojik karakterizasyonu, özellikle de insan engel anatomik konumlarda yer alan erken farklılaşma aşamaları ile nadir hücreler. Çok adımlı kültür sistemleri kullanarak, PC farklılaşma modeli için bir tüp bebek B bildirdin. Bu model sıralı hücre farklılaşma ve olgunlaşma vivo11,12,13. farklı organlarda meydana gelen üretir İlk adım, bellek B hücreleri dört gün boyunca CD40 ligand, oligodeoxynucleotides ve sitokin kombinasyonuna göre ilk aktif hale gelir ve preplasmablasts (PrePBs) ayırt etmek. İkinci adımda, preplasmablasts plasmablasts (PBs) ayırt etmek için CD40L ve oligodeoxynucleotides dürtme kaldırma ve sitokin kombinasyon değişen indüklenir. Üçüncü adımda, plasmablasts erken adet sitokin birlikte11,12değiştirerek ayırt etmek için indüklenir. Dördüncü adım tam olgun PC'ler bu erken adet kemik iliği stromal hücreler şartına orta ile kültür tarafından almak için kullanılmaya başlanan veya büyüme faktörleri13seçili. Bu olgun PC'ler birkaç ay Tüp Bebek hayatta kalmak ve immünglobulin (Şekil 1) yüksek miktarda salgılar. İlginçtir, tüp bebek modelimiz koordine transkripsiyon değişiklikler ve algılanan içinde vivo11,12,13,14-ebilmek var olmak PC aşamaları için farklı B fenotip tablodur ,15. Adet nadir hücrelerdir ve tüp bebek farklılaşma modelimiz insan B PC farklılaşma için çalışmaya izin verir.

<table><tbody><tr><td>anti-CD2 manyetik boncuklar</td><td>Invitrogen</td><td>11159D</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD138-APC</td><td>Beckman-Coulter ve nbsp;</td><td>B49219</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD19-APC</td><td>BD</td><td>555415</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD20-PB</td><td>Beckman-Coulter&nbsp;</td><td>B49208</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD27-PE</td><td>BD</td><td>555441</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD38-PE</td><td>Beckman-Coulter&nbsp;</td><td>A07779</td><td></td></tr><tr><td>Anti-histidin</td><td>R& D Sistemleri</td><td>MAB050</td><td></td></tr><tr><td>CpG ODN (PT) Sigma</td><td></td><td></td> <td>T*C*G*T*C*G*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*C*G*T*T*T</td></tr><tr><td>insan Transferin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3309</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&alfa;</td><td>Merck</td><td>Intron A IMDM</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>31980-022</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinan İnsan CD40L-hi</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>2706-CL</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan NİSAN</td><td>AR-GECİKME D Sistemleri</td><td>5860-AP-010</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan IL-10</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>217-IL-Rekombinant</td><td></td></tr> <tr><td>İnsan IL-15</td><td>Peprotech</td><td>200-15-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan IL-2 Protein R</td><td>& D Sistemleri</td><td>202-IL-Rekombinant</td><td></td></tr> <tr><td>İnsan IL-6</td><td>Peprotech</td><td>200-06</td><td></td></tr></tbody></table>

uzun ömürlü plazma hücreleri insan normal bellek b hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

Plazma hücreleri (adet) antikorlar büyük miktarda salgılar ve aktive edilmiş B hücrelerinden geliştirmek. PC'ler kemik iliği veya mukoza bulunan nadir hücrelerdir ve humoral bağışıklık sağlamak. Düşük frekans ve konumu nedeniyle, PC'ler çalışmanın zor olduğunu insan. Biz PC için bir B rapor tüp bebek farklılaşma modeli içinde vivo meydana gelen sıralı hücre farklılaşması çoğaltmak izin sitokinler ve harekete geçirmek molekülleri seçili kombinasyonları kullanarak. Tüp bebek bu modelde, B hücreleri (MBCs) öncesi plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs) erken adet ayırt bellek ve son olarak, uzun ömürlü içine PC'ler, sağlıklı bireyler. kendi muadilleri için bir fenotip ile kapatın Ayrıca bir açık erişim Biyoinformatik GEP verilerin PC farklılaşma ile ilgili en önemli bilgiler analiz araçları inşa. Bu kaynakların insan B PC farklılaşma ve çalışmada çalışma için kullanılabilir, biz epigenetik faktörler gen ifade düzenlemesi sırasında PC farklılaşma için insan B araştırdık.

Tüp Bebek normal PC farklılaşma genel yordamı Şekil 1' de temsil edilir. Burada sunulan iletişim kuralını kullanarak, yeterli miktar ile ex vivo insan örnekleri elde edilemedi hücre oluşturabilir. Transkripsiyon faktörleri PC farklılaşma ilgili karmaşık ağın rolünü araştırıldı rağmen anahtar PC farklılaşma transkripsiyon ağlar düzenleyen mekanizmalar kötü bilinen kalır. Hücresel başkalaşım çoğunlukla epigenetik ve transkripsiyon değişiklikleri tarafından tahr...

Çok adımlı kültür sistemleri kullanarak, biz in vitro bir B hücre plazma hücre farklılaşması modeli için rapor.

Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...

Plazma hücreleri, anatomik yerlerde, özellikle de insanda tam biyolojik karakterizasyonu bozan 30 farklılaşma evresi olan nadir hücrelerdir. In vitro B2 plazma hücre farklılaşma modelimiz, in vivo in differentorganlarda oluşan sıralı hücre farklılaşmasını ve olgunlaşmasını yeniden üretir. Bu in vitro model, in vivo saptanabilen farklı B2 plazma hücre aşamalarının eşgüdümlü transkripsiyonel değişikliklerini ve fenotipini özetler.Ayrıca plazma hücresi farklılaşması ile ilgili keşif verilerinden en önemli bilgileri analiz etmek için açık erişimli biyoinformatik araçlar inşa ettik. Prosedürü gösteren Hugues de Boussac, laboratuvarımdan bir doktora sonrası. Başlamak için, bellek B hücre arınması için sağlıklı gönüllülerden periferik kan hücreleri elde.RPMI 1640 orta 24,5 mililitre ile kan seyreltin 7.5 mililitre. Daha sonra, steril 50 mililitrelik konik tüpe 12,5 mililitre oda sıcaklığında yoğunluk degradesi ekleyin. Yoğunluk degradesini seyreltilmiş kanın 32 mililitrelik kısmıyla hafifçe üst üst etektin, iki fazın karışmasını en aza indirgediğinden emin olun.20 dakika boyunca 500 kat yer çekiminde fren kapalı. Seyreltilmiş plazma ve yoğunluk gradyan arabiriminden periferik kan mononükleer hücreleri toplayın. Hücreleri steril 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve hank'in Dengeli Tuz Çözümü ile tüpü 45 mililitreye kadar doldurun.5 dakika boyunca 500 kat daha fazla yer çekiminde santrifüj. Dikkatle supernatant çıkarın ve pelet tutun. Sonra, RPMI 45 mililitre ekleyin 1640 orta, ile birlikte 10%FCS.5 dakika boyunca 500 kat daha fazla yer çekiminde santrifüj. Dikkatle supernatant çıkarın ve pelet tutun. PBS 30 mililitre ekleyin, 2% FCS ile desteklenmektedir.Bir hedef hücre için dört boncuk ekleyerek CD2 pozitif hücreleri kaldırmak için anti-CD manyetik boncuklar kullanın. 30 dakika boyunca 4 santigrat derecede kuluçkaya yat. Hücre ayırma uygulaması için bir mıknatıs kullanarak, boncuk bağlı hücreleri bağlanmamış hücrelerden ayırın.Bağlanmamış hücreleri toplayın ve dört santigrat derecede on beş dakika boyunca anti-CD19 APC ve anti-CD27 PE antikorları ile kuluçkaya yatırın. %10 keçi serumu içeren PBS'de hücreleri iki kez yıkayın. Daha sonra, bellek B hücrelerini %95 saflıkta arındırmak için hücre ayırıcısını kullanın.Bundan sonra, bellek B hücre aktivasyonu için çözünür CD40 ligand ve anti-polihistidin monoklonal antikor ekleyin. Purified memory B hücrelerini interlökin-2, interlökin-10 ve interlökin-15 ile dört gün boyunca altı kuyulu kültür plakalarında plakalayın. Gen ekspresyonu profilleme için, cd38-negatif CD20-negatif preplasmablasts dördüncü gün arındırmak için bir hücre ayırıcı kullanın.Dördüncü gün, hücreleri sayın ve her kuyuya iki mililitre hücre süspansiyonu ekleyerek mililitre başına 250,000 hücre yoğunluğunda 12 kuyulu kültür plakalarına yerleştirin. Farklılaşmayı teşvik etmek için, CpG oligonükleotidleri ve çözünür CD40 ligand'ı çıkarın ve interlökin-2, interlökin-6, interlökin-10 ve interlökin-15 dahil olmak üzere yeni bir sitokin kokteyli içeren yeni kültür ortamı ekleyin. 37 santigrat derecede üç gün boyunca hücreleri kültür.Gen ekspresyonu profilleme için, yedinci gün CD38-pozitif, CD20-negatif plazmablastları arındırmak için bir hücre ayırıcıkullanın. Yedinci günde hücreleri say. Her kuyuya iki mililitre hücre süspansiyonu ekleyerek hücreleri 500,000 hücrelik bir hücre yoğunluğuna yerleştirin.Plazmablastları interlökin-6, interlökin-15 ve interferon-alfa içeren taze kültür ortamını kullanarak 37 santigrat derecede üç gün boyunca erken plazma hücrelerine ayırın. Gen ekspresyonu profilleme için, 10. İlk olarak, kültür stromal hücreleri kültür ortamı ile beş gün boyunca.Stromal hücre koşullu orta elde etmek ve kullanıma hazır olana kadar dondurmak için stromal hücre kültürünü süpernatant filtrelemek için 0.2-mikrolitre filtre kullanın. Sonra, kültür 12-iyi kültür plakaları erken plazma hücreleri, interlökin-6 ve NISAN ile daha önce elde edilen stromal hücre orta kullanarak 500, 000 hücre başına bir hücre yoğunluğu, her kuyuya hücre süspansiyon iki mililitre ekleyerek. 37 santigrat derecede kuluçka, stromal hücre klimalı orta her hafta yenileniyor.Daha sonra, akış sitometri sıralanmış plazma hücrelerinden immünglobulin salgısını ölçün. Kültür plazma hücreleri 24 saat boyunca mililitre başına bir milyon hücre yoğunluğunda ve kültür supernatant hasat. Bir ELISA kiti kullanarak, immünglobulin G ölçmek, ve immünglobulin A.First, GenomicScape açık erişim biyoinformatik web aracı başlatın.Gözatma veri menüsünde, plazma hücrelerine insan B hücreleri adlı veri kümesini seçin. Analiz Araçlarında İfade/Ko-İfade Raporu aracı kullanılarak benzersiz bir genin veya gen listesinin gen ekspresyonu profilinin görselleştirilmesi mevcuttur. Ardından, SAM aracını yüklemek için Çözümleme Araçları webSAM'ı seçin.Plazma hücreleri veri seti için insan B hücrelerini seçin ve karşılaştırmak için örnek grubunu seçin. İlgi çekici filtreleme seçeneklerini uygulamak için kullanılabilen farklı filtreleri kullanın. Gen ekspresyonu profillerini SAM aracıyla karşılaştırmak için, kat değişimi, permütasyon sayısı, yanlış bulma hızı ve karşılaştırma türü gibi filtreleme seçeneklerini değiştirin.Yazılım analizi hesaplamak ve farklı seçilen gruplar arasında ifade genleri sağlayacaktır. Bu çalışmada normal plazma hücre farklılaşmasında epigenetik faktörlerin ekspresyon değişiklikleri araştırılmıştır. Çok sınıflı SAM analizini kullanarak, 71 genin bellek B hücreleri, preplasmablastlar, plazmablastlar, erken plazma hücreleri ve kemik iliği plazma hücreleri arasında anlamlı olarak farklı olarak ifade ettiği görülür ve %5'in altında yanlış bir keşif hızına sahip olan bellek B hücre evresi histone asetiltransferazların %39.13'ü, histoneli metillerin %30.43'ü dahil olmak üzere 23 epigenetik oyuncu geninaşırı ile karakterizedir. Histone demethylazların %21.74'ü, metil bağlayıcı proteinlerin %4.35'i ve histon deasetilazlarının %4.35'i.14 epigenetik oyuncu geni preplasmablast evresinde histone metitransferazların %50'si, DNA metiltransferazlarının %14.28'i, histon deasetilazlarının %21.43'ü, histon demetilazlarının %7.14'ü ve histone asetiltransferazların %17.14'ü olmak üzere anlamlı olarak aşırı ifade edilir. Bu prosedürütaki b2 plazma hücre farklılaşması sırasında kromatin yapısı ve mimarisindeki değişiklikleri tanımlamak ve anlamak için çeşitli analizler yapılabilir. Bu in vitro diferansiyasyon modeli, b2 plazma hücre farklılaşması sırasında hem bu modellemede yer alan yolları hem de aşağı transkripsiyonel etkilerini ortaya çıkarmak için bu moleküler analizi tamamlamak için yeterli hücre oluşturmayı sağlayacaktır.Bu araştırmadan elde edilen bu bilgi, daha iyi prognoz ve geliştirilmiş tedavi stratejilerinin kritik derecede gerekli olduğu multipl miyelom, kesin bir tedavi olmaksızın bir kanser gibi plazma hücre bozuklukları için tanı salsal ve tedavi stratejileri hakkında bilgi verebilir ve öğretebilir. B2 plazma hücre farklılaşması sırasında kromatini etkileyen epigenetik remodeling yapısal ve mimari değişikliklerin karakterizasyonu ve anlaşılması özellikle ilgi çekici olacaktır. Bu gen sıralaması kullanılarak yapılabilir, ERRBS, ATAC sıralama, IC, ve RNA sıralama.Bellek B hücre arınması için kullanılan sağlıklı donör kanına bağlı olarak aktive B hücreleri, preplasmablastlar, plazmablastlar ve plazma hücrelerinin yüzdesinde Orta derecede bir heterojenlik görülebilir.

in-vitro-differentiation-model-human-normal-memory-b-cells-to-long

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Epstein-Barr virüsü ile transforme B hücre hatları üretmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Ayrıca, üç gün sonra enfeksiyon gibi erken olarak dönüşüm geçirmesi mukadder B hücreleri belirleyebilir bir roman tahlil göstermektedir.

Epstein-Barr Virus Büyüme dönüştürülmüş lenfoblastoid hücre dizilerinde kurulması

İnsan monoklonal antikorlarının sentezi, oto-antikor aracılı immün yanıtların patofizyolojik mekanizmalarını çözmeyi amaçlayan çalışmaların ilk basamağıdır. B hücresi izolasyonu, antikor klonlaması ve in vitro sentez dahil olmak üzere kanla sınıflandırılmış B hücrelerinden rekombinant insan immünoglobulin G (IgG) monoklonal antikorları üretmek için bir protokol geliştirdik.

Ölümsüzleştirilmiştir Sıralama B hücrelerinden Rekombinant İnsan IgG Monoklonal Antikorlarının Üretimi

İnsan periferik kanı, humoral immün yanıtın değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılır. Burada, insan B hücrelerini periferik kandan izole etme, insan B hücrelerini kültürde antikor (Ab) salgılayan B hücrelerine (ASC'ler) ayırma ve bir ELISpot testi ile toplam IgM ve IgG-ASC'leri numaralandırma yöntemleri açıklanmaktadır.

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi&#39;nin olarak

Bu protokol, in vitro olarak naif CD4 + T hücrelerinden üretilebilir üretimi ve insan kaynaklı düzenleyici T hücrelerinin (iTregs) fenotipleme tarif eder. FoxP3 indüksiyonu için farklı protokoller ilgili protokolleri ile elde edilen spesifik iTreg fenotipleri çalışması için izin verir.

Bir TGF-β-içeren Protokolü kullanılarak naif CD4 + T hücrelerinden insan CD4 + FoxP3 + Bağlı regülatör T hücreleri (iTregs) in vitro ayrımında

B-LCLs'in kurulması için basit bir kırmızı kan hücre parçalama yöntemi kan küçük bir miktar gerektiren ve dondurarak saklama için başlangıcından itibaren zaman tasarrufu, yüksek ölümsüzleşme verimliliği ile geliştirilmiştir.

B lenfoblastoid hücre dizilerinde Kurulması için Basit Kırmızı Kan Hücresi Lizis Yöntemi

Biz insan kanında dolaşan nadir B hücreleri başlayarak insan antikorlar faiz, bir antijen için belirli üretim için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu doğal antikorlar nesil verimli ve hızlı ve elde edilen antikor arasında son derece ilgili antijenleri ayırt edebilirsiniz.

Kanda dolaşan nadir antijen spesifik B hücreleri Discriminative insan monoklonal antikorların üretimi

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

BSelex yöntemi tanımlamak ve insan periferik kan mononükleer hücrelerden bireysel antijen özgü antikorlar kurtarmak için tek hücreli PCR ve klonlama ile akış sitometri birleştirir.

Zenginleştirilmiş İnsan Hafızası B Hücre Popülasyonlarından İstenilen Özgülliklerle Antikorların Seçimi ve Geri Kazanımı İçin Tek Hücreli Tarama Yöntemi

Burada periton, dalak ve kemik iliği dokularındaki murin immün B hücre bölmesinin akış sitometrisine göre heterojenliğinin basit bir analizinde açıklanmaktadır. Protokol diğer fare dokularına uyarlanabilir ve genişletilebilir.

Murine B Hücre Gelişiminin Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Bu protokol, naif CD4+ T hücrelerinin in vitro olarak patojenik Th17 hücrelerine farklılaşmasını tanımlar. Spesifik olarak, çok parametreli akış sitometrisi tabanlı bir yaklaşımla birleştirildiğinde, bu farklılaşma yöntemi kullanılarak saf CD4+ T hücrelerinden %90 saflıkta patojenik Th4 hücreleri elde edilebilir.

Farede Naif CD4+ T Hücrelerinin Patojenik Th17 Hücrelerine İn Vitro Farklılaşması

CD8 T hücresinin farklılaşmasını ve işlevini in vitro incelemek için, CD8 T hücreleri fareden izole edilip önceden oluşturulmuş enfekte fare vajinal epitelyal organoidleriyle uzun süreli birlikte kültürlenebilir. Burada, bu süreci tanımlıyoruz ve ortak kültür sırasında yerleşik hafıza T hücresi belirteçlerinin edinilişini değerlendiriyoruz.

In Vitro Epitelyal organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek CD8 T hücresi farklılaşması

Keşfedin, B2 plazma hücrelerinin çok adımlı kültür sistemindeki in vitro farklılaşma modelini. Bu yöntem, koordineli transkripsiyonel değişiklikleri ve fenotipik özellikleri canlı ortamdaki gibi yeniden üretir.

Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

Daha fazla video keşfet