Name: Islak eğirme esaslı kalıplama işlemi doku rejenerasyonu için jelatin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-07T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Öğrenin, doku mühendisliği için ıslak eğirme tekniğiyle jelatin bazlı biyomalzemeler nasıl üretilir. Bu basit ve ekonomik yöntem, sinir sistemi tedavisi ve kan damarı replasmanı gibi rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada Milli Savunma Bakanlığı tarafından (MAB-105-070; desteklenmiştir MAB-106-077; MAB-107-032; Mab-107-065), Bakanlığı bilim ve Teknoloji (çoğu 107-2320-B016-016), Tri-hizmet Hastanesi'ne, ulusal savunma Tıp Merkezi, Tayvan (TSGH-C106-046; TSGH-C106-115; TSGH-C107-041) ve Cheng-Hsin General Hospital ve ulusal savunma Tıp Merkezi işbirliği (CH-NDMC-107-8).

Yağlı doku ortopedik ameliyatlar kurumsal inceleme kurulu, Tri-hizmet genel hastane tarafından sertifikalı olarak elde edilmiştir, Taipei, Tayvan, R.O.C. yordamlar hayvan konular içeren ulusal, hayvan bakımı Komitesi tarafından onaylanmış olan Savunma Tıp Merkezi, Tayvan (R.O.C).
1. işlem iplik ıslak
<ol><li>
Çözüm hazırlık
	<ol>
<li>5 g jelatin tozu %5 (w/v) çözüm konsantrasyonu elde etmek için çift distile su 100 ml geçiyoruz.</li>
		<li>Karışımı yavaş yavaş 60-70 ° C'de herhangi bir kabarcıklar olmadan tamamen homojen bir dağılım elde etmek için gecede ilave edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İplik ıslak
	<ol>
<li>Fiber oluşumu Not: Yönteminin şematik Resim 1içindeAgösterilir. İplik kurulum Peristaltik pompa makine ile donatılmış yüksek hassasiyetli hız sağlar ( Tablo malzemelerigörmek) ve akışını düzgün teslimini kontrol eder.<ol>
<li>26 G x 1/2 inç (0,45 mm x 12 mm) şırınga çözüm enjektör açık vinil tüp içine takın.</li>
			<li>100 mL % 99.5 aseton çözeltisi koagülasyon banyo kullanılmak üzere bir kabı cam hazırlayın.</li>
			<li>Peristaltik pompa makine 21 rpm'de (3.25 mL/dk) yap, birkaç saniye içinde aseton çözüm kadar inişli çıkışlı önce stand jelatin çözüm.</li>
			<li>Jelatin lifleri aseton çözümden çıkar ve onları %2.5 (w/v) polycaprolactone/diklorometan (PCL/DCM) çözüm 1:20 (w/w) içine bırakın.</li>
			<li>PCL/DCM çözüm kuru lifler, oda sıcaklığında başlık altında bir gecede jelatin izin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Tüp oluşumu Not: Yönteminin şematik Resim 1'Bgösterilir.<ol>
<li>24 G x 3/4 inç (0.7 mm x 19 mm) periferik Venöz kateter tüp kalıp olarak kullanın.</li>
			<li>Kateter jelatin çözüm içine yük ve 3 için yerde kal s.</li>
			<li>Kateter aseton çözüm içine yük ve 1 dakika tutun.</li>
			<li>Kateter yeniden jelatin çözüm yükleyin ve 3 için yerde kal s.</li>
			<li>Bu alternatif yordam 20 x tekrarlayın.</li>
			<li>Kateter aseton çözümden çıkar ve 5 min için oda sıcaklığında kuru kalıp tüp izin.</li>
			<li>Yavaşça kateter jelatin tüpünden bir hemostat kullanarak çıkar ve dikkatle jelatin tüp bir bardak PCL/DCM çözüm daldırma (w/v) % 2.5 ile Pasteur pipet aktarmak.</li>
			<li>Pasteur pipet içeren jelatin tüp ve PCL/DCM çözüm kuru, oda sıcaklığında başlık altında bir gecede izin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Morfoloji jelatin tüp
<ol><li>Kurutulmuş jelatin tüp parçası üzerinde karbon saplama takma.</li>
	<li>Örnek iyon sputter coater makine koymak ( Tablo malzemelerigörmek) ve örnek altın 60 kat s; sonra morfolojisi elektron mikroskobu tarama yoluyla gözlemlemek ( Tablo malzemelerigörmek).</li>
</ol>3. Kültür insan yağ kök hücrelerin
<ol><li>(Klinik cerrahi ile sözlü Yağ dokusundan elde edilen) yağlı doku 10 mL 0.1 M fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS), % 1 penisilin/streptomisin ve % 0.1 glikoz transferi çözeltisi içeren bir Petri kabına yerleştirin.</li>
	<li>Belgili tanımlık doku küçük parçalara (1 mm2' den az) bir neşter bıçakla kesti.</li>
	<li>15 mL plastik tüp ve 5 min için 500 x g , santrifüj içine belgili tanımlık doku transfer.</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak ve oksijen bir atmosferde 37 ° C'de % 0,1 collagenase ile Dulbecco'nın değiştirilmiş kartal orta (DMEM, 4 mM L-glutamin, 1 mM sodyum pyruvate ve 15 mg/L fenol red oluşan) 10 mL içeren bir plastik tüp tortu kuluçkaya % 95 hava ve % 5 CO2, 1 gün için içeren.</li>
	<li>500 x g 5 min için de plastik tüp santrifüj kapasitesi, dikkatle süpernatant atın (tortu dokunmatik değil) ve sonra tortu yavaşça 10 mL % 10 fetal sığır serum (FBS) içeren DMEM ekleyerek askıya alma ve 37 ° C'de 1 gün için stand izin , bir oksijen atmosferde içeren % 95 hava ve % 5 CO2.</li>
	<li>500 x g 5 min için de plastik tüp santrifüj kapasitesi ve süpernatant dikkatli atmak; sonra kök hücre orta (keratinosit serum-Alerjik orta (K-SFM), %5 FBS, N-asetil-L-sistein, askorbik asit-2-fosfat, streptomisin ve Amfoterisin oluşan) tortu askıya alma, bu transfer için 1 mL 4 mL içeren bir T25 kültür şişesi ekleyin kök hücre orta ve oksijen bir atmosferde % 95 hava ve % 5 CO2içeren 37 ° C'de 3 gündür stand izin verin.</li>
	<li>Süpernatant atmak, 1 mL % 0.25 tripsin-ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) ekleyin ve kültür balonun altındaki hücreleri ayırmak için % 95 hava ve % 5 CO2 3,5 dakika, içeren bir oksijen atmosferde 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>1 mL FBS ekleyin, karışım askıya alma ve bir microcentrifuge tüp aktarın.</li>
	<li>Süspansiyon vasıl 500 x g 3,5 dk santrifüj kapasitesi, tortu kök hücre orta 1 mL ile askıya alma ve kök hücre orta 5 mL içeren kültür şişeye nakletmek; daha sonra bir oksijen atmosferde % 95 hava ve % 5 CO2içeren 37 ° C'de tutmak.</li>
	<li>Alt kültür 3 günde kök hücre orta değiştirerek korumak.</li>
</ol>4. hücre jelatin Tube tarımı
<ol><li>Jelatin tüp 2s için UV ışığıyla sterilize; o zaman, %75 (v/v) etanol bırakın ve yıkayın kalan etanol kaldırmak için kök hücre orta ile 2 x.</li>
	<li>
İnsan yağ kök hücreleri (hASCs) kültür balonun toplamak.
	<ol>
<li>Orta kültür balonun kaldırın.</li>
		<li>1 mL % 0.25 tripsin-EDTA ekleyin ve oksijen bir atmosferde % 95 hava ve % 5 hASCs kültür balonun altından ayırmak için 3,5 dakika, CO2 içeren 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
		<li>1 mL FBS ekleyin, karışım askıya alma ve bir microcentrifuge tüp aktarın.</li>
		<li>Microcentrifuge tüp vasıl 500 x g 3,5 dk santrifüj kapasitesi; o zaman, dikkatlice süpernatant atın ve tortu kök hücre orta 1 mL ile askıya alma.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Jelatin tüp kök hücre orta 3 mL içeren bir 6-şey tabağına yerleştirin ve 4 x 104 hASCs tüp / tohum; Onları içeren % 95 hava ve % 5 CO2oksijen bir atmosferde 37 ° C'de 2 hafta kuluçkaya.</li>
	<li>Kök hücre orta 3 günde yeterli beslenme için hücre büyümesini sağlamak için değiştirin.</li>
</ol>5. Immunocytochemistry
<ol><li>Kök hücre orta kaldırmak ve PBS ile iyi yıkayın.</li>
	<li>Buzul, oda sıcaklığında 30 dakika % 0,1 asetik asitle hücreleri ile tüp düzeltmek.</li>
	<li>De 2 x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Bir yüzey aktif (NP-40, % 0.05) Ekle ve oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
	<li>PBS ile de 3 x yıkayın.</li>
	<li>% 2 normal keçi serum ekleyin ve 30 dk için oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
	<li>Çözüm dikkatle boşaltmak, birincil antikor (nöral progenitör hücre işaretçisi) testin eklemek ve gecede 4 ° C'de kuluçkaya</li>
	<li>PBS ile de 3 x yıkayın.</li>
	<li>İkincil antikor eşek mouse-floresein isothiocyanate (FITC) ekleyin ve 2 h için örnek anlatmamanı.</li>
	<li>PBS ile de 3 x yıkayın.</li>
	<li>Çekirdeklerin leke ve oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya Höchst 33342 1 mL ekleyin.</li>
	<li>İyi yıkamak yavaşça ve floresan mikroskop altında gözlemlemek.</li>
</ol>6 vivo Biyouyumluluk testi.
Not: 201-225 g arasında bir ağırlık ile rats başarıyla bu iletişim kuralını kullanan test edilmiştir.
<ol><li>
Anestezi
	<ol>
<li>Neden ve anestezi korumak; tercihen, bir fare (8 haftalık Sprague Dawley rat, kadın) ile tiletamine ve zolazepam bir kas içi enjeksiyon anestezi (25 mg / kg + 25 mg / kg, sırasıyla) ve xylazine (5 mg/kg). Anesthetization onaylamak için sıçan parmak basarak bir ağrı stimülasyon testi gerçekleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sterilizasyon cerrahi sitesi
	<ol>
<li>Tıraş ve (boyun arkası) üzerinde fare trapezius alan cilt temizlemek ve cilt (100 mg/mL) aseptik durumunu hazırlamak için povidone-iyot losyon ile silin.</li>
		<li>Bakteri transfer ve cerrahi sitesi sonraki kirlenme azaltmak için steril cerrahi perdeler fareyle kapsar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Jelatin tüp implantasyonu
	<ol>
<li>Yavaşça fare trapezius alan Cerrahi makas ile deriyi kesme.</li>
		<li>Bir yara 2 cm oluşturun ve fasya ve kas arasında doğrudan katmandaki jelatin tüpü yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Postimplantation cerrahi
	<ol>
<li>Naylon dikiş yarayla kapatın ve povidone-iyot çözüm (100 mg/mL) ile silin.</li>
		<li>Fareyi ketoprofen (2.5 mg/kg) ve sülfadiyazin (15 mg/kg) bir kas içi enjeksiyon yoluyla teşvik.</li>
		<li>7 gün için aseptik şartlarda sıçan tutmak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ötenazi
	<ol>
<li>Sıçan ötenazi için Travma kuralları uyarınca CO2 Havasızlıktan Boğulma yoluyla euthanized. Kalp atışı sağlamak için göğüs dokunarak takip ayak ve kuyruk tutam tarafından fare ölümü onaylayın.</li>
		<li>Fareyi yavaşça bir neşter bıçakla kesmek, implante dokuyu ve gözlem için fotoğraf çekmek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Bagnall, A. M., Jones, L., Duffy, S., Riemsima, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+fixation+surgery+for+acute+traumatic+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+of+Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">Spinal fixation surgery for acute traumatic spinal cord injury.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 1, 004725(2008).</li>
<li>Fehlings, M. G., Perrin, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+timing+of+early+decompression+for+cervical+spinal+cord+injury%3A+update+with+a+review+of+recent+clinical+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">The role and timing of early decompression for cervical spinal cord injury: update with a review of recent clinical evidence.</a> Injury. 36, Suppl 2 13-26 (2005).</li>
<li>Yang, L., Jones, N. R., Stoodley, M. A., Blumbergs, P. C., Brown, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitotoxic+model+of+post-traumatic+syringomyelia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Excitotoxic model of post-traumatic syringomyelia in the rat.</a> Spine. 26, 1842-1849 (2001).</li>
<li>Rolls, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+faces+of+chondroitin+sulfate+proteoglycan+in+spinal+cord+repair%3A+a+role+in+microglia%2Fmacrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two faces of chondroitin sulfate proteoglycan in spinal cord repair: a role in microglia/macrophage activation.</a> PLoS Medicine. 5, 1262-1277 (2008).</li>
<li>Properzi, F., Asher, R. A., Fawcett, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroitin+sulphate+proteoglycans+in+the+central+nervous+system%3A+changes+and+synthesis+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Society+Transactions%22%5BJournal%5D)">Chondroitin sulphate proteoglycans in the central nervous system: changes and synthesis after injury.</a> Biochemical Society Transactions. 31, 335-336 (2003).</li>
<li>Fawcett, J. W., Asher, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+scar+and+central+nervous+system+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">The glial scar and central nervous system repair.</a> Brain Research Bulletin. 49, 377-391 (1999).</li>
<li>Yang, Z., Mo, L., Duan, H., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chitosan%2Fcollagen+substrates+on+the+behavior+of+rat+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science+China+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Effects of chitosan/collagen substrates on the behavior of rat neural stem cells.</a> Science China Life Sciences. 53, 215-222 (2010).</li>
<li>Chawla, K. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChawla%2C+KK+%22Fibrous+Materials%22">Fibrous Materials</a>. , Cambridge University Press. London, UK. (1998).</li>
<li>Pickering, K. L., Aruan Efendy, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+recent+developments+in+natural+fibre+composites+and+their+mechanical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Composites+Part+A-Applied+Science+and+Manufacturing%22%5BJournal%5D)">A review of recent developments in natural fibre composites and their mechanical performance.</a> Composites Part A-Applied Science and Manufacturing. 83, 98-112 (2016).</li>
<li>Lundgren, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+fibers+made+from+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Protein+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Synthetic fibers made from proteins.</a> Advances in Protein Chemistry. 5, 305-351 (1954).</li>
<li>Radishevskii, M. B., Serkov, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+mechanism+in+wet+spinning+of+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Fibre+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Coagulation mechanism in wet spinning of fibres.</a> Fibre Chemistry. 37, 266-271 (2005).</li>
<li>Yannas, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+and+gelatin+in+the+solid+state%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Macromolecular+Science+Part+C+Polymer+Reviews%22%5BJournal%5D)">Collagen and gelatin in the solid state.</a> Journal of Macromolecular Science Part C Polymer Reviews. 7, 49-106 (1972).</li>
<li>Baer, E., Cassidy, J. J., Hiltner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+structure+of+collagen+composite+Systems%3A+lessons+from+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Pure+and+Applied+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Hierarchical structure of collagen composite Systems: lessons from biology.</a> Pure and Applied Chemistry. 6, 961-973 (2009).</li>
<li>Harrington, W. F., Von Hippel, P. H. The structure of collagen and gelatin. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrington%2C+WF+%22Advances+in+Protein+Chemistry%22">Advances in Protein Chemistry</a>. 16, 1-138 (1961).</li>
<li>Veis, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVeis%2C+A+%22The+Macromolecular+Chemistry+of+Gelatin%22">The Macromolecular Chemistry of Gelatin</a>. , Academic Press. New York, NY. (1994).</li>
<li>Freyman, T. M., Yannas, I. V., Gibson, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+materials+as+porous+scaffolds+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Materials+Science%22%5BJournal%5D)">Cellular materials as porous scaffolds for tissue engineering.</a> Progress in Materials Science. 46, 273-282 (2001).</li>
<li>Michalczyk, K., Ziman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nestin+structure+and+predicted+function+in+cellular+cytoskeletal+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Histology+and+Histopathology%22%5BJournal%5D)">Nestin structure and predicted function in cellular cytoskeletal organization.</a> Histology and Histopathology. 20, 665-671 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Biz jelatin tabanlı Biyomalzeme gelişimi basit bir ıslak doku rejenerasyonu için doğal polimerler çalışmada uygulanan teknik iplik kullanarak sundu. Bu eser olasılığını jelatin imalat jelatin kendisi özelliklerini optimize etmek amacı ile diğer kaynaklardan ek olmadan büyük protein kaynağı olarak gösterdi. Jelatin tabanlı Biyomalzeme gelişimi tamamen oda sıcaklığında (22-26 ° C) gerçekleştirilmiştir. Bir nazik çözüm iletişim kuralına, önemli bir adım olarak bir kesin çözüm konsantrasyonu Bakımı ve çözüm çok sorunsuz herh...

Doku rejenerasyonu en son gelişme tıbbi tedaviler yeni tedavi stratejileri geliştirilmesi için bir meydan okuma gösteren doku Mühendisliği uygulama içerir. Örneğin, sınırlı potansiyeli sinir sistemi yeniden oluşturma işlemi, aşağıdaki yaralanma veya hastalık, dünya çapında bir önemli sağlık sorunu teşkil etmektedir. Sinir sistemi ile ilgili patofizyolojik süreçlerin karmaşıklığı, nedeniyle geleneksel otogrefti kullanımı veya sabitleme cerrahi uygulamaları fonksiyonel sonuçlar avantajlar gösterilmiştir, ancak için güçlü hiçbir kanıt Omurilik fiksasyon ameliyat1,2etkileri. Hasarlı bölgeyi, doku kaybetti ve sonunda yoğun gliyal yara4,5şekillendirme hypertrophically indüklenen astrocytes3ile eski yerine koymak. Bu matris sinir kurtarılması6,7 işlev ve ki, bloklar böylece, büyük ölçüde engel olduğunu rejenerasyon bir engel olarak davranır. Bu nedenle, uygun doldurma boşluğu malzeme doku kaybı önlemek ve hasarlı bölgeyi bütünlüğünü muhafaza yanı sıra sinir hücreleri doğrudan değiştirme sağlayan bağ dokusu skar ilişkili oluşumunu azaltmak için bekleniyor ve devresi Axon rejenerasyon teşvik etmek.
Polimer Biyomalzeme iskele için doku yenileme terapisi, hücre veya axon davranış ve doku ilerleme doğal hücre dışı Matriks (ECM) desteği ile düzenlenmesi dayalı olarak tercih edilmiştir. Fiber biçimi genellikle onun tek boyutlu yapısı8sayesinde çeşitli malzemeler için bir yapı taşı olarak kabul edilir. Lifler genellikle eritebilir ekstrüzyon veya ıslak eğirme yöntemi tarafından elde edilebilir; Ancak, büyük boy ve maliyet ekipman ve bu yöntemler gerçekleştirmek için zorluk zor vardır. Buna ek olarak, polimer lifleri için ilgili çalışmaları çoğunluğu sentetik veya kompozit malzemeler üzerinde odaklanmıştır. Biomaterial kaynağı olarak doğal polimerler daha iyi Biyouyumluluk özellikleri insan vücudu için sunuyoruz. Yine de, doğal polimer lifleri hizalama elde etmek için sentetik polimer kaynakları9/ nispeten daha zordur. Bu nedenle, doğal bir polimer protein zengin bir kaynak olarak biomaterial lifleri dönüşüm önemli bir stratejidir — sadece biomaterial lifleri olabilir doğrudan hammadde, böylece monomerleri, gereksiz bir dönüşümü kaçınarak dan izole ama protein lifleri de iyi görünüm ve olumlu özelliklerini10var.
Bu bağlamda, biz doğal polimer lifleri için doku Mühendisliği laboratuvar ölçekte uygulanacak ıslak eğirme, temel kavramı ile üretim için bir ucuz işleme yöntemi açıklanmaktadır. Islak iplik ekstrüzyon ve uygun polimer nonsolvent içine bir polimer çözüm koagülasyon tarafından gerçekleştirilir. Uygun, yapışkan çözümünü koagülasyon orta katkılı polimer molekülleri erimeye neden olur. Faz geçiş yoluyla filamentler sonra onların çözünürlük kaybetmek ve bir katı polimer faz11şeklinde çöktürülmüş. Bu konsepte atıfta, biz o zaman jelatin geliştirme tüp şekle doku rejenerasyonu uygulama için uygun olarak kabul edilir bir kalıplama işlemi tarafından genişletilmiş. Buna ek olarak, özünde, biz de herhangi bir şekil jelatin liflerinden malzemenin gelişebilir (örneğin, jelatin conduit yerleştirilmiştir birkaç jelatin lifleri), diğeri için istenen uygulamalar.
Jelatin, bir biyolojik doğal polimer denatüre ve hidrolize kolajen herhangi bir semicrystalline, amorf veya üçlü sarmal devlet kollajen12de dahil olmak üzere oluşturulur. Bu kolajen olduğunu tüm bağ dokusu, sinir büyüme indükler ana ECM protein yapısına benzeyen omurgalı ve omurgasız13,14, temel yapısal protein bilindiği ve, aynı anda, omurilik yaralanmaları sırasında salgılanan glikozaminoglikan büyük miktarda yerini alır. Bu nedenle, bir kaynak olarak jelatin kullanımı tıbbi herhangi bir araç için mükemmel bir seçim olurdu. Ucuz bir kaynak olmasının yanı sıra, jelatin de biyolojik olarak parçalanabilen ve cytocompatible ve klinik olarak kanıtlanmış bir geçici dolgu15kusur olmak. , Tüp forma geliştirilen tüp bebek ve içinde vivo testleri burada açıklanan göstermek jelatin bir mükemmel Biyouyumluluk ve gelecekteki doku mühendisliği uygulamaları için uygunluk var. Kültürlü insan yağ kök hücreleri ile jelatin tüpleri pozitif testin bir sinir hücre marker olarak boyama kullanarak hücre farklılaşması nöral progenitör hücre içine geliştirmek. Ayrıca, jelatin boşluk, bu çalışmada, kurulan yöntemi tarafından üretilen gibi dolgu olarak yönetilebilir ve güvenli olması ve büyük yarar şu anda geliştirme doku için Bağdaşık doğal polimerler gelişmekte olan doku mühendisleri için bekleniyor rejenerasyon stratejileri.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Çözelti hazırlama: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Jelatin tip B (domuz)</td> <td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 10733</td><td>500 g flakon</td></tr><tr><td><güçlü>Islak eğirme işlemi: < / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik pompa</td><td>Gilson</td><td>Model M312</td><td>Minipuls*3</td></tr><tr><td>Plastik boru konektörü</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>14011</td><td>1 kutu</td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>Sterican</td><td>5A06258541</td><td>26Gx1 / 2 "(0.45 x 12mm)</td></tr> <tr><td>Aseton</td><td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 00010</td><td>2.5 L flakon</td></tr><tr><td>Polikaprolakton CAPA 6500</td><td>Perstorp</td><td>24980-41-4-Diklorometan</td><td></td></tr> <tr><td>ve nbsp;</td><td>Scharlau</td><td>CL03421000</td><td>1 L flakon</td></tr><tr><td>Cam Pastör pipeti</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A-Hemostat</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Shinetec aletleri</td><td>ST-B021-Periferik</td><td></td></tr> <tr><td>venöz kateter (Introcan Certo)</td><td>B. Braun</td><td>1B03258241</td><td>24Gx3/4" (0.7 x 19mm)</td></tr><tr><td><güçlü>Jelatin tüpünün morfolojisi: </güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İyon püskürtme kaplama makinesi&nbsp;</td><td>Hitachi</td><td>e1010-Taramalı</td><td></td></tr> <tr><td>elektron mikroskobu</td><td>Hitachi</td><td>S-3000N</td><td>-</td></tr><tr><td><güçlü>Jelatin tüp üzerinde hücrelerin yetiştirilmesi: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>488625</td><td>100 mL flakon</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gibco</td><td>923119</td><td>500 mL flakon</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle ortamı&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>31600-034</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Keratinosit-SFM ortamı</td><td>Gibco</td><td>10744-019</td><td>500 mL flakon</td></tr><tr><td>T25 kültür şişesi</td><td>TPP</td><td>90025</td><td>VENT tipi</td></tr><tr><td>6 oyuklu plaka</td><td>Falcon</td><td>1209938</td><td>-</td></tr><tr><td><güçlü > İmmünositokimya: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Gibco</td><td>654471</td><td>500 mL şişe</td></tr><tr><td>Asetik asit buzul</td><td>Ferak</td><td>Art. -Nr. 00697</td><td>500 mL flakon</td></tr><tr><td>NP-40 yüzey aktif madde (Tergitol çözeltisi)</td><td>Sigma</td><td>056K0151</td><td>500 mL flakon</td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>S-1000-20</td><td>20 mL flakon, konsantre</td></tr><tr><td>Nestin (birincil antikor)</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>SC-23927-Eşek</td><td></td></tr> <tr><td>anti-fare-floresein izotiyosiyanat ( ikincil antikor)</td> <td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>SC-2099-Hoechst</td><td></td></tr> <tr><td>33342</td><td>Anaspec</td><td>AS-83218</td><td>5 mL flakon</td></tr> <tr><td>< güçlü > in vivo biyouyumluluk testi: < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tiletamin + zolazepam ve nbsp;</td><td>Virbac</td><td>BC91</td><td>5 mL flakon</td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Bayer kore</td><td>KR03227</td><td>10 mL flakon</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Astar</td><td>1406232</td><td>2 mL flakon</td></tr><tr><td>Povidon-iyot çözeltisi</td><td>Everstar</td><td>HA161202</td><td>4 L varil</td></tr><tr><td>Sefazolin</td><td>Çin Kimyasal & İlaç</td><td>18P909</td><td>1 g flakon</td></tr><tr><td>Neşter bıçağı</td><td>Shinetec aletleri</td><td>ST-B021-Cerrahi</td><td></td></tr> <tr><td>makas</td><td>Shinetec aletleri</td><td>ST-B021</td><td>-</td></tr></tbody></table>

islak eğirme esaslı kalıplama işlemi doku rejenerasyonu için jelatin

Wet-spinning-based Molding Process of Gelatin for Tissue Regeneration

Bu makalede monofilament iplik veya uygun diğer biçimleri jelatin, doğal bir polimer imal etmek ucuz bir yöntem sunuyor. Islak yöntemi iplik, jelatin lifler uygun koagülasyon ortamda düzgün ekstrüzyon tarafından üretilmektedir. İşlevsel yüzey bu jelatin lifleri ve doku özelliklerini taklit yeteneğini artırmak için jelatin tüp forma bu kavramı bakarak kalıplanmış. Tüp Bebek ve içinde vivo testleri tarafından muayene, jelatin tüpler doku Mühendisliği uygulama için büyük bir potansiyel göstermek. Görevi uygun dolgu boşluğu malzemesi, jelatin Borular hasarlı bölgeyi dokusunda (örneğin, sinirli ya da Kardiyovasküler sistemde) yerine gibi doğrudan yerine kök hücreler ve nöro çevrim sağlayarak yeniden oluşturma işlemi tanıtmak için kullanılabilir. Bu protokol üzerinde doğal bir polimer esaslı bir biomaterial oluşturmak için ayrıntılı bir yönerge sağlar ve uygulanması büyük yarar doku rejenerasyonu stratejileri gerçekleştirmek için yardım Bağdaşık doğal polimerler geliştirilmesi bekleniyor.

Bu çalışmada, biz lifleri (Şekil 2A) içine jelatin ve tüpler (Şekil 2B, C) kullanıcı dostu ıslak eğirme kavramı aracılığıyla geliştirdi. Bu jelatin-esaslı malzemeler şekillerini bağlı olarak tıbbi herhangi bir aracı olarak yararlı olabilir. İşlevsel yüzey ve çerçeve gibi malzemelerin doku rejenerasyonu için daha uygun olduğunu göz önünde bulundurursak, tüp bebek ve içinde vivo testleri gerçekleşt...

Geliştirilen ve jelatin tabanlı Biyomalzeme doku Mühendisliği uygulama için kullanılacak inşası için ıslak eğirme kavramı dayalı bir iletişim kuralı tanımlayın.

Islak eğirme esaslı kalıplama işlemi doku rejenerasyonu için jelatin

This article presents an inexpensive method to fabricate gelatin, as a natural polymer, into monofilament fibers or other appropriate forms. Through the ...

Bu protokol, tek bir lif şeridinden herhangi bir tercih edilen tıbbi uygulama için kullanılabilecek çeşitli şeritler e bir malzeme geliştirmek için ıslak iplik temel bir kavram geliştirir. Bu teknik basit, ucuz ve ilgi malzemeleri için protein kaynağı içine doğal polimerlerin özelleştirme için sentetik polimerler eklenmesi gerektirmez. Bu teknik, merkezi veya periferik sinir sistemi tedavisi, kan damarı replasmanı veya doğrudan idrar yolu rekonstrüksiyonu gibi soğuk tedavi öldürmek için biyomalzeme gelişimine genişletilebilir.Bu yöntem doku nöralizasyon veya rejeneratif tıp için bir strateji olarak da dahil olmak üzere tıbbi uygulama için tasarlanmıştır. Bu teknik yeni başlayanlar tarafından kolayca uygulanabilir. Birkaç kalıp tekrarı sonra, çözümün kalitesi her zaman en iyi oluşumu korumak için kontrol edilmelidir unutmayın.Islak dönen tüpü oluşturmak için, ilk üç saniye için taze hazırlanmış jelatin çözeltisi içine üç saniye için üç çeyrek inç periferik venöz kateter tarafından 24 göstergesi batırın, bir dakika için taze hazırlanmış aseton çözeltisi daldırma izledi. Bu adımları 20 kez tekrarlayın. Son aseton daldırma sonra, oda sıcaklığında beş dakika boyunca kalıplı tüp kuru izin, ve dikkatle oda sıcaklığında bir gecede başlık altı kuluçka için% 2.5 polikaprolakton diklorometan çözeltisi ile cam pastörette içine kateter jelatin tüp aktarmak için bir hemostat kullanın.Ertesi sabah, jelatini ultraviyole ışık altında iki saat sterilize edin ve tüpü %75 etanol ile daldırın. Sonra artık etanol kaldırmak için kök hücre orta ile tüp iki kez yıkayın. Hücre kültürü ile jelatin tüp yetiştirmek için, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit 3,5 dakika kuluçka için% 0.25 Trypsin-EDTA bir mililitre ile bir kültür şişesi insan yağ kök hücrelerinin supinate sonu değiştirin.Hücreler ayrıldığında, bir mililitre fetal sığır serumu ile reaksiyonu durdurun ve hücre süspansiyonuna mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Santrifüj ile hücreleri toplamak ve kök hücre orta bir mililitre pelet resuspend. Daha sonra jelatin tüpünü, üç mililitre kök hücre lilitre içeren altı kuyulukbir plakanın bir kuyuya yerleştirin.Hücreleri sayarak sonra, tohum dört kez 10 dördüncü insan yağ kök hücreleri hücre kültürü kuluçka iki hafta kuluçka için tüp içine. Bir kadın sekiz haftalık Sprague Dawley sıçanda parmak kıskacına yanıt eksikliği ile sedasyon uygun düzeyde doğruladıktan sonra, trapezius bölgeden saç tıraş ve povison-iyot çözeltisi ile maruz kalan cilt sterilize. Cerrahi sitenin bakteriyel kontaminasyonunu azaltmak için steril cerrahi perdeler ile sıçan kapağı ve sığ yapmak için cerrahi makas kullanın, iki santimetre uzunluğunda deri kesi.Fasya ve kas arasındaki tabaka içine doğrudan jelatin tüp yerleştirin ve yara kapatmak için bir naylon dikiş kullanın. Sonra povison-iyot çözeltisi ile kesi sterilize. Ketoprofen ve sefazolin bir intramüsküler enjeksiyon yoluyla sıçan neden ve yedi gün boyunca aseptik koşullar altında hayvan korumak.Bu kullanıcı dostu ıslak iplik kavramı lifler ve tüpler içine jelatin geliştirmek için kullanılabilir. Elektron mikroskobu tarayarak jelatin tüpünün morfolojik gözlemleri, 200 mikrometreden daha büyük iç çapı ve yaklaşık 20 mikrometre kalınlığında çok düzgün olmayan bir yüzey ortaya koymaktadır. Nöral hücre belirteç ekspresyonu için bir insan yağ kök hücre kültürü jelatin tüp boyama hücrelerin nüfuz ve jelatin tüp etek ve yapışmak ve nöral progenitor hücreleri içine ayırt düşündüren birden fazla tespit çekirdekleri ile birlikte marker için olumlu bir boyama göstermektedir.Jelatin tüpün fasya tabakasına yerleştirilmesi, yerel dokuda kızarıklık, şişlik veya diğer iltihap belirtileri nin görülmemeve tüpün iyi gelişmiş bağ dokusu ile çevrili olması nedeniyle güvenlik ve biyouyumluluk olduğunu doğrular. Bu prosedürü iki nokta bir çalışırken, her çözeltide belirli kaplama süresi içinde kalıbın daldırma sağlanması çok hassas bir tüp formu oluşturmak için önemlidir. Bu prosedürütaki deneylerimiz, doku rejenerasyon stratejisi için biyomalzemelerin sonucunu doğru bir şekilde araştırmak için insan hastalığının hayvan modelini kullanmaktadır.Bu teknik, geliştirildikten sonra, araştırmacıların basit korelasyonlu doğa polimerleri geliştirmelerinin önünü, karar verilen bir tıbbi uygulama için her türlü malzemeye dönüştürmektedir. Normal kullanım koşulu altında, polikaprolakson diklorotan çözeltisi minimal çevresel tehlike sunmak için kabul edilir, ancak uygun bir biyogüvenlik kabine bu kimyasal ile herhangi bir adım gerçekleştirmek için unutmayın.

wet-spinning-based-molding-process-of-gelatin-for-tissue-regeneration

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Elektrospinning iskelelerinin doku mühendisliği uygulamaları için post prodüksiyon işlenebilir. Burada kısırlık (aseptik üretim veya sterilizasyon post prodüksiyon) ulaşmak için ve uygun biyomekanik özellikleri elde etmek için, daha kalın iskeleleri (çoklu katman ısı kullanarak veya buhar tavlama ile) yapmak için, karmaşık iskeleleri (ardışık eğirme) eğirme yöntemleri açıklanmaktadır.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Bir bioprinter bir kurban kalıp dayalı desenli hidrojeller oluşturmak için kullanıldı. Poloksamer kalıp ikinci bir hidrojel ile dolduruldu ve daha sonra üçüncü bir hidrojel ile doldurulmuş boşluklar bırakarak elüt edilmiştir. Bu yöntem Biyopolimerlerin karmaşık mimarileri oluşturmak için hızlı sağım ve poloksamerin iyi baskı kullanır.

Desenli ve Yaratılış 3D Hücre Kültürü için iki bileşenli Hidrojeller için Thermoresponsive Ters Kalıpları Baskı

Biz hücre davranışlarını incelemek için hangi electrospun zarlar içinde mikrocepler imalatı için bir teknik rapor. Özellikle, PLGA (poli (laktid-ko-glikolid)) microfeatures ile donatılmış kornea biyomalzeme cihazların üretimi için microstereolithography ve üretebilmektedir bir kombinasyonunu tarif eder.

Microstereolithography ve ELEKTROÜRETİM kombinasyonu Kornea Yenilenme Nişli ile donatılmış Membranlarını Üretiliyor

Bu çalışmada, kollajen, düz kas hücreleri ve endotel hücrelerinin doğrudan kültürlenmesi yoluyla canlı vasküler dokuların hızlı bir şekilde üretilmesi için bir teknik sunuyoruz. Ek olarak, tasarlanmış vasküler dokuların mekanik karakterizasyonu için yeni bir protokol tanımlanmıştır.

Vasküler Doku Rejenerasyon için Mühendislik 3D cellularized Kollajen jeller

İletişim kuralları hydrazone toplu ölçek, microscale ve Nano, ikincisi jel nano tanecikleri ve nanofibers hazırlanması için polimer reaksiyonlar, cross-linking göre parçalanabilir thermoresponsive hydrogels imalatı için açıklanmıştır.

Parçalanabilir Thermoresponsive Hydrogels birden fazla uzunluğu ölçeklerde yolu ile reaktif ekstrüzyon, havacilik, kendinden montajlı imalatı ve Electrospinning

Bu iletişim kuralı elastik 3D macroporous microcryogels imalatı microfabrication cryogelation teknolojisi ile entegre ederek açıklar. Hücrelerle yükleme üzerine, 3D microtissues, hangi rejeneratif terapi kolaylaştırmak için kolayca enjekte içinde vivo olabilir veya diziler vitro yüksek üretilen iş uyuşturucu tarama için içine monte oluşturulur.

Enjekte edilebilir rejeneratif terapi ve yüksek-den geçerek uyuşturucu tarama için 3D Microtissues

Bir protokol mikrosıvısal iplik ve rejenere ipek fibroin Monofilament Mikroyapı karakterizasyonu için sunulmaktadır.

Mikrosıvısal kuru-iplik ve rejenere ipek Fibroin lifleri karakterizasyonu

Burada sunulan jelatin metakril 3D biyobaskı için bir yöntemdir.

Jelatin Metacryloyl Hidrojel Bazlı Bioinks 3D Biyobaskı Protokolleri

Hidrojel oluşumu sırasında kesme işlemi, kesme kuvvetlerinin giderilmesini takiben kesme inceliğinde ancak hızla yeniden yapılandırılan mikrojel süspansiyonlarının üretilmesiyle sonuçlanır. Bu tür malzemeler, biyobaskı kompleksi, hücre yüklü yapılar için destekleyici bir matris olarak kullanılmıştır. Burada, destekleyici yatağın ve uyumlu biyomürekkeplerin üretiminde kullanılan yöntemler açıklanmaktadır.

Askıda 3D biyobaskı için jelasyon sırasında kesme işlemi ile oluşturulan agaroz sıvı jelleri

Bu makalede, mikroakışkan cihazlar kullanılarak yüksek verimli jelatin metakriloil mikrojel üretimi, mikrojellerin yeniden askıya alınabilir toza (mikro-aerojeller) dönüştürülmesi, granüler hidrojel iskeleleri oluşturmak için mikrojellerin kimyasal montajı ve 3D biyobaskı için korunmuş mikroporoziteye sahip granüler hidrojel biyomürekkeplerinin geliştirilmesi için protokoller açıklanmaktadır.

Jelatin Metakriloil Granül Hidrojel İskeleleri: Yüksek Verimli Mikrojel İmalatı, Liyofilizasyon, Kimyasal Montaj ve 3D Biyobaskı

Bu çalışma, dikkate değer geri dönüşümlü sıkışma-sıkışma giderme geçiş özellikleri sergileyen yeni bir κ-İrlanda yosunu alt mikrojel süspansiyon banyosunu tanıtmaktadır. Bu özellikler, gömülü 3D biyobaskıda biyomimetik doku ve organların inşasına katkıda bulunur. Kalp/özofagus benzeri dokuların yüksek çözünürlüklü ve hücre büyümesi ile başarılı bir şekilde basılması, yüksek kaliteli biyobaskı ve doku mühendisliği uygulamalarını göstermektedir.

κ-Carrageenan Sub-Microjel Ortamı Kullanılarak Doku Benzeri Yapıların Gömülü Biyobaskısı

Öğrenin, doku mühendisliği için ıslak eğirme tekniğiyle jelatin bazlı biyomalzemeler nasıl üretilir. Bu basit ve ekonomik yöntem, sinir sistemi tedavisi ve kan damarı replasmanı gibi rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

Islak eğirme esaslı kalıplama işlemi doku rejenerasyonu için jelatin

Daha fazla video keşfet