Name: Ağrı ve Kaşıntıya Bağlı Davranışların Eşzamanlı Ölçümü İçin Yanak Enjeksiyon Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 59 s
Description: Öğrenin, farelerde yanak enjeksiyonu ile ağrı ve kaşıntı davranışlarını eşzamanlı ölçme yöntemini. Bu model, nörobilim araştırmalarında kaşıntı ve ağrı mekanizmalarını ayrıntılı analiz etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Steven G. Shimada ve Robert H. LaMotte'a (Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi, Connecticut) yöntemleri (referans 4) bu tekniğin uyarlanmış olmasına müteşekkiriz. Ayrıca fare çizimleri oluşturmak için Bay Kentaro Miyahara teşekkür ederiz. Bu çalışma, Japonya'da Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (Nos. 15H02501 ve 15H05928 to M.T., no. 16K21691 to H.K.) ve Uehara Memorial Foundation (H.K.'ye) bilimsel araştırma için hibe desteği ile desteklenmiştir. Yale Üniversitesi'nden Prof. LaMotte'un yanak enjeksiyonu yöntemini uygulamaya girişini takdir ediyoruz.

Hayvanların bakımı ve kullanımı ile ilgili tüm prosedürler, Ulusal Doğa Bilimleri Enstitüsü'nün (16A074) kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve Fizyolojik Bilimler.
NOT: Orijinal protokol Steven G. Shimada ve Robert H. LaMotte4tarafından bildirilmiştir , ve mevcut rapor çeşitli değişiklikler ile bu yöntemleri açıklar, bir ekran birbirlerini görmesini önlemek için bir ekran eklenmesi de dahil olmak üzere, bir yokluğu ayna, kayıt başına fare sayısı, fare zorlanması, kafes boyutu ve kayıt süresi.
1. Yanak Enjeksiyon Modeli
<ol><li>
Deney hazırlama
	<ol>
<li>Kafes<ol>
<li>Şekil 1'degösterildiği gibi dört kafesi kameranın altına ayarlayın. Farelerin birbirini görmesini önlemek için bir ekran ayarlayın. Her kafese her fare koyun ve farelerin kaçışönlemek için bir akrilik kapak ayarlayın. Kayıtların sıcaklık, nem ve sesin kontrol edildiği bir ortamda yapılması gerektiğini unutmayın. NOT: Kafes yeterince yüksekse davranışlar da kapaksız kaydedilebilir.</li>
		</ol>
</li>
		<li>İğne ve şırınga<ol>
<li>Test maddelerinin enjeksiyonu için 0,5 mL şırıngaya bağlı 29 G veya 30 G iğne kullanın. Test maddesi çözeltisi son derece viskoz ise, daha büyük iğneler gereklidir. Ancak, büyük iğneler ek fiziksel yan etkiler teşkil unutmayın. NOT: Bir polietilen tüp ile bir şırınga bağlı bir iğne kullanılabilir.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Video kamera<ol>
<li>Sıfırdan kalma nöbetlerin ve silme davranışlarının ölçümü için nispeten yüksek çözünürlüğe sahip, yeterince büyük kare hızlarına (30-60 kare/s) sahip bir video kamera kullanın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Video analizi için yazılım<ol>
<li>Video oynatma ve çözümleme için bir video düzenleme yazılımı kullanın. Hassas çözümleme için ileri sarma modu ve kare kare oynatma modu gerektiğini unutmayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig1.jpg"> Şekil 1: Video kamera ve kafes kurulumu. Farelerin kaçmasını önlemek için akrilik kapaklı dört akrilik kafes ve bulaşıcı kaşıntıyı önlemek için bir ekran kullanılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="2"><li>
Enjeksiyon ve kayıt
	<ol>
<li>Deneyden bir gün önce, saç makası ile farenin yanağındaki kürkü tıraş edin (Film 1). Tıraş olmadan önce fareleri dizginlemeyin. NOT: CD-1 veya C57BL/6 fareler çoğunlukla bumodeldekullanılmıştır 4,5. Bu yazıda erkek 6-12 haftalık C57BL/6N fareler kullanılmıştır. Kimyasallara duyarlılık çeşitli fare suşları arasında farklı olabileceğini unutmayın3,6,7.</li>
		<li>Tıraştan bir gün sonra fareyi kayıt koşullarına alışmak için 1 saat boyunca kayıt kafesine taşıyın. Topikal bir uygulama kullanılırsa, bu alışma döneminde uygulayın. NOT: Bu raporda, 10 μL 2% (w / v) difenhidramin hidroklorür tuzu tuzlu 30 dakika önce kayıt uygulandı.</li>
		<li>Kafesin üzerine bir video kamera ayarlayın ve test maddesi enjeksiyonundan önce video kaydını başlatın. Test maddesinin 10 μL'lik çözeltisini uyanık koşullarda tıraşlı yanak içine enjekte edin(Movie 2). Enjeksiyondan sonra fareyi kayıt kafesine geri döndürün. NOT: Bu raporda test maddesi olarak 50 μg/10 μL histamin, 40 μg/10 μL kapsaisin veya araç (%7 ara 80 tuzlu) kullanılmıştır.</li>
		<li>Kafesin kapağını kapatın ve 30 dakika boyunca video kaydına devam edin. NOT: Toplam kayıt süresi deneysel koşullara bağlıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Davranış analizi
	<ol>
<li>Sırasıyla, çizik nöbetleri ve silme davranışları saymak. Fareler yanak doğru bir arka bacak yükseltmek ve bir veya birkaç saniye içinde birkaç kez çizik, sonra bacak aşağı koymak. Bu eylem serisi bir çizik maçı olarak sayılır. Diğer alanların çizilmeleri dikkate alınmamalıdır. Fareler silme için tek bir ön bacak ve tımar için her iki ön bacak kullanın. Bu eylemler ayırt edilmelidir. Yalnızca silme davranışları ağrıyla ilgili davranışlar olarak sayılır. NOT: Her eylem Şekil 2gösterilir , Film 3, Film 4, ve Film 5.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig2.jpg"> Şekil 2: Kayıt sırasında tipik fare etkinliği. Paneller A-C sağ ön bacak(A),sağ arka bacak(B)ile çizilme davranışı ve her iki ön bacak(C)ile damat davranışı silme davranışı temsil eden resimlerdir. Fareler yanak doğru bir arka bacak yükseltmek ve bir veya birkaç saniye içinde birkaç kez çizik, sonra aşağı bacak koymak. Bu eylem serisi bir çizik maçı olarak sayılır. Diğer alanların çizilmeleri dikkate alınmamalıdır. Fareler silme için tek bir ön bacak ve tımar için her iki ön bacak kullanın. Bu eylemler ayırt edilmelidir. Yalnızca silme davranışları ağrıyla ilgili davranışlar olarak sayılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. Boyun Enjeksiyon Modeli
<ol><li>
Enjeksiyon ve kayıt
	<ol>
<li>Deneyden bir gün önce, 2-3 dakika boyunca yaklaşık %5 izofluran soluma yaptıktan sonra farenin boynunun ensesindeki kürkü saç makası ile tıraş edin.</li>
		<li>Tıraştan bir gün sonra fareyi kayıt koşullarına alışmak için 1 saat boyunca kayıt kafesine taşıyın.</li>
		<li>Kafesin üzerine bir video kamera ayarlayın(Şekil 1), ve test maddesi enjeksiyonundan önce video kaydına başlayın. Test maddesinin 10 μL'lik çözeltisini uyanık koşullarda tıraşlı boyuna enjekte edin. Enjeksiyondan sonra fareyi kayıt kafesine geri döndürün. NOT: Bu makalede, test maddesi olarak 50 μg/10 μL histamin, 10 μg/10 μL veya 40 μg/10 μL kapsaisin veya araç (%7 ara 80 tuzlu) kullanılmıştır.</li>
		<li>Kafesin kapağını kapatın ve 30 dakika boyunca video kaydına devam edin. NOT: Toplam kayıt süresi deneysel koşullara bağlıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Davranış analizi
	<ol>
<li>Scratch bout davranışlarını say. Fareler boynuna doğru bir arka bacak yükseltmek ve bir veya birkaç saniye içinde birkaç kez çizik, sonra aşağı bacak koymak. Bu eylem serisi bir çizik maçı olarak sayılır. Diğer alanların çizilmeleri dikkate alınmamalıdır. NOT: Çizilme eylemi yanak enjeksiyon modelinde benzer, çizilme yerini n boyuna kaydırılır dışında.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Ikoma, A., Steinhoff, M., Stander, S., Yosipovitch, G., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiology+of+itch%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neurobiology of itch.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (7), 535-547 (2006).</li>
<li>Kuraishi, Y., Nagasawa, T., Hayashi, K., Satoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratching+behavior+induced+by+pruritogenic+but+not+algesiogenic+agents+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Scratching behavior induced by pruritogenic but not algesiogenic agents in mice.</a> European Journal of Pharmacology. 275 (3), 229-233 (1995).</li>
<li>Kuraishi, Y., Yamaguchi, T., Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-scratch+responses+induced+by+opioids+through+central+mu+opioid+receptors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science%22%5BJournal%5D)">Itch-scratch responses induced by opioids through central mu opioid receptors in mice.</a> Journal of Biomedical Science. 7 (3), 248-252 (2000).</li>
<li>Shimada, S. G., LaMotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+differentiation+between+itch+and+pain+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral differentiation between itch and pain in mouse.</a> Pain. 139 (3), 681-687 (2008).</li>
<li>Kittaka, H., Uchida, K., Fukuta, N., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid-induced+itch+is+mediated+by+signalling+of+LPA5+receptor%2C+phospholipase+D+and+TRPA1%2FTRPV1%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid-induced itch is mediated by signalling of LPA5 receptor, phospholipase D and TRPA1/TRPV1.</a> The Journal of Physiology. 595 (8), 2681-2698 (2017).</li>
<li>Maekawa, T., Nojima, H., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-associated+responses+of+afferent+nerve+innervating+the+murine+skin%3A+different+effects+of+histamine+and+serotonin+in+ICR+and+ddY+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Japanese+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Itch-associated responses of afferent nerve innervating the murine skin: different effects of histamine and serotonin in ICR and ddY mice.</a> The Japanese Journal of Pharmacology. 84 (4), 462-466 (2000).</li>
<li>Inagaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratching+behavior+in+various+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Pharmacology+and+Applied+Skin+Physiology%22%5BJournal%5D)">Scratching behavior in various strains of mice.</a> Skin Pharmacology and Applied Skin Physiology. 14 (2), 87-96 (2001).</li>
<li>Inami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+surfactant-induced+pruritus%3A+involvement+of+histamine+released+from+epidermal+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Topical surfactant-induced pruritus: involvement of histamine released from epidermal keratinocytes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 344 (2), 459-466 (2012).</li>
<li>Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+assessment+of+facial+pain+in+rats%3A+face+grooming+patterns+after+painful+and+non-painful+sensory+disturbances+in+the+territory+of+the+rat%27s+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral assessment of facial pain in rats: face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rat's infraorbital nerve.</a> Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).</li>
<li>Yeo, J. F., Ong, W. Y., Ling, S. F., Farooqui, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebroventricular+injection+of+phospholipases+A2+inhibitors+modulates+allodynia+after+facial+carrageenan+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Intracerebroventricular injection of phospholipases A2 inhibitors modulates allodynia after facial carrageenan injection in mice.</a> Pain. 112 (1-2), 148-155 (2004).</li>
<li>Yeo, J. F., Ling, S. F., Tang, N., Ong, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+effect+of+CNS+peroxynitrite+scavenger+in+a+mouse+model+of+orofacial+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive effect of CNS peroxynitrite scavenger in a mouse model of orofacial pain.</a> Experimental Brain Research. 184 (3), 435-438 (2008).</li>
<li>Hashimoto, T., Ohata, H., Momose, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-scratch+responses+induced+by+lysophosphatidic+acid+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Itch-scratch responses induced by lysophosphatidic acid in mice.</a> Pharmacology. 72 (1), 51-56 (2004).</li>
<li>Kremer, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid+is+a+potential+mediator+of+cholestatic+pruritus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid is a potential mediator of cholestatic pruritus.</a> Gastroenterology. 139 (3), 1008-1018 (2010).</li>
<li>Alemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TGR5+receptor+mediates+bile+acid-induced+itch+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The TGR5 receptor mediates bile acid-induced itch and analgesia.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (4), 1513-1530 (2013).</li>
<li>Nieto-Posadas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid+directly+activates+TRPV1+through+a+C-terminal+binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid directly activates TRPV1 through a C-terminal binding site.</a> Nature Chemical Biology. 8 (1), 78-85 (2011).</li>
<li>Akiyama, T., Carstens, M. I., Carstens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+itch-+and+pain-related+behavioral+responses+and+%C2%B5-opoid+modulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Dermato-Venereologica%22%5BJournal%5D)">Differential itch- and pain-related behavioral responses and µ-opoid modulation in mice.</a> Acta Dermato-Venereologica. 90 (6), 575-581 (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu makalede, bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı ve ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların analizi için yararlı olduğu gösterilmiştir.
Bir önceki rapor algesic maddelerin bir fare boyun enjeksiyonu modeli4çizilme davranışları neden olduğunu gösterdi . Buna karşılık, kapsaisin diğer boyun enjeksiyonu deneylerinde azaltılmış çizik davranışları(Şekil 3). Bu nedenle, kaşıntı davranışı üzerinde ağrı etkisi belirsizliğini koruyor. Bu nedenle aynı anda ağrı ve davranış testleri ile kaşıntı araştırmak için bir yöntem geliştirmek için gereklidir. Bir yanak enjeksiyon modeli kullanılarak, ağrı ve kaşıntı hem de bir maddenin etkisi değerlendirilebilir.
Daha önce hücre içi LPA doğrudan LPA kaynaklı kaşıntı bir mekanizma olarak TRPV1 ve TRPA1 aktive bildirilmiştir5. Buna göre, LPA kaynaklı kaşıntı histamin bağımsız olabilir. Bir önceki çalışmada da bir yanak enjeksiyon modeli histamin bağımsız kaşıntı16değerlendirilmesi için kullanılabilir gösterdi. Bu nedenle, bu model hem histamin bağımlı hem de -bağımsız kaşıntı için kullanılabilir.
Bu deneydeki kritik adımlardan biri enjeksiyondur. Bu akut bir davranış testi olduğundan, bu davranışları etkileyebileceğinden enjeksiyon aşamasında anestezi kullanılamaz. Bu nedenle, fare nin hassas bir enjeksiyon yapabilmesi için güvenli bir şekilde tutulması gerekir. Hayvan üzerinde tutun güvenli olmadığında, özellikle güçlü algojenler enjekte ederken, fareler mücadele edebilir, yanlış bir enjeksiyon hacmi ve derinliği yol, sonuçları yorumlamada zorluk takip. Fareyi kullanırken, farenin hareketini engellemek için başparmak ve işaret parmağı arasındaki ense deki deriyi çekin.
Bir diğer kritik adım da davranış analizidir. Çizilme çok hızlı olduğundan, video dikkatle izlenmesi gerekir. Ayrıca, silme damat ayırt etmek zor olabilir. Bu nedenle, kapsaisin gibi pozitif kontrol kimyasallarının kullanımı ilk deney sırasında tavsiye edilir. Kayıt ve yeniden oynatma koşulları da her iki davranışın sayma etkileyebilir. Davranışları net bir şekilde gözlemlemek zorsa, aynalar kafeslerin etrafında görüntüleme açılarını geliştirmek için kullanılabilir4.
Bu yanak enjeksiyon modeli boyun enjeksiyon modelidaha test edilen kimyasallar için azaltılmış kantitatif doğruluk gösterebilir unutulmamalıdır. Şekil 3 ve Şekil 4'tegösterildiği gibi , aynı miktarda histamin, boyun modelinde yanak modeline göre daha fazla çizilme davranışına neden olmuş ve boyun enjeksiyon modelinde daha küçük bir varyasyon göstermiştir. Test edilmiş bir maddenin yanak enjeksiyon modeli ile düşük ajezik etkiye sahip bir pruritojen olduğu kanıtlandıktan sonra, boyun enjeksiyonu modeli ek kantitatif analiz için tavsiye edilir. Bu sınırlamalar bile, yanak enjeksiyon modeli test maddelerin hassas değerlendirilmesi için yararlıdır, kaşıntı araştırma alanında özellikle.

Kaşıntı aslında cilt yüzeyinden zararlı maddeleri kaldırmak için çizilme davranışları neden olan bir duygu olarak karakterize edildi. Ancak, kaşıntı atopik dermatit, nörojenik lezyonlar ve kolestaz gibi birçok hastalığın neden olduğu hoş olmayan duyumlar için tedavilerin odak noktası olmuştur1. Bu gibi durumlarda, kaşıntı ağrı benzer ciddi bir tatsız hissi. Bu nedenle, kaşıntı önemli bir araştırma hedefini temsil eder. Çizilme davranışı hayvan deneylerinde kaşıntı birincil göstergesidir, ve çizilme davranışları boyun 2 deriiçine pruritogens enjekte ederek farelerde indüklenebilir2,3. Ancak, Bir önceki çalışmada kapsaisin gösterdi, bir algojen, Ayrıca bir boyun enjeksiyonu modelinde çizilme davranışları neden4, zor bu modelde ağrı kaşıntı ayrımcılık yapma.  Buna karşılık, kapsaisin bir boyun enjeksiyon modelinde çizilme davranışları azaltılmış bulunmuştur, çizilme davranışları üzerinde ağrı etkisi karmaşık olduğunu gösteren ve deneysel koşullara bağlıdır.  Bu nedenle, ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların eşzamanlı ölçümlerpruritogens ve algojenlerin kesin analizi sağlayacaktır. Steven G. Shimada ve Robert H. LaMotte yanağa boyun enjeksiyon sitesi değiştirerek ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların eşzamanlı ölçümleri başarılı4. Yanak enjeksiyon modelinde, kapsaisin silme neden, ama davranışları çizilme değil, histamin, bir pruritogen, sadece çizilme davranışları indüklenen. Bu nedenle, Bu model kaşıntı ve ağrı bağımsız değerlendirilmesi sağlar, yanak enjeksiyonu kaşıntı araştırma için yararlı bir model yapma. Bir test maddesinin pruritojen ve/veya algojen olup olmadığını belirlemeye çalışırken, bu model boyun enjeksiyon modelinden daha fazla bilgi sağlar. Bu makalede, yanak enjeksiyonu yapmak ve çizilme veya silme nöbetlerini saymak için pratik bir yöntem açıklanmaktadır ve lisofosfatidik asit (LPA) tarafından indüklenen çizilme davranışlarını değerlendirmek için bu yöntemin yararını göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Kapsaisin</td><td>Sigma</td><td>M2028</td><td></td></tr><tr><td>Difenhidramin hidroklorür</td><td>Wako</td><td>044-19772</td><td></td></tr><tr><td>Histamin</td><td>Sigma</td><td>H7125</td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>Elma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lizofosfatidik asit</td><td>Avanti Polar Lipidler</td><td>325465-93-8</td><td></td></tr><tr><td>Myjector</td><td>Terumo</td><td>ss-05M2913</td><td></td></tr><tr><td>Tween-80</td><td>Sigma</td><td>P4780</td><td></td></tr><tr><td>Video kamera</td><td>Panasonic</td><td>VX985M</td><td></td></tr></tbody></table>

ağrı ve kaşıntıya bağlı davranışların eşzamanlı Ölçümü İçin yanak enjeksiyon modeli

Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors

Itch, 1941'de Rothman tarafından "çizilme arzusunu kışkırtan hoş olmayan bir kutanöz his" olarak tanımlandı. Fare modellerinde, çizik nöbetleri genellikle pruritogens tarafından indüklenen kaşıntı değerlendirmek için sayılır. Ancak, önceki raporlar algezik maddeler de davranışları çizilme için kullanılan en yaygın test olan bir fare boyun enjeksiyon modeli, çizilme davranışları neden göstermiştir. Bu bulgu farelerde kaşıntı çalışmayı zorlaştırır.  Buna karşılık, kapsaisin, ortak bir algojen, bazı boyun enjeksiyonu deneylerinde azaltılmış çizilme davranışları. Bu nedenle ağrının çizilme davranışları üzerindeki etkisi belirsizliğini korumaktadır. Bu nedenle aynı anda davranış testleri kullanarak kaşıntı ve ağrı hissi araştırmak için bir yöntem geliştirmek için gereklidir. Burada, aynı anda ağrı ölçmek için kullanılabilecek bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı- ve kaşıntı ile ilgili davranışları. Bu modelde, pruritogens algesic maddeler silme davranışları neden ise çizilme davranışları neden olur. Bu modeli kullanarak, kaşıntı ile kolestatik hastalarda bulunan bir kaşıntı mediator olan lysophosphatidic asit (LPA), sadece kaşıntı değil, ağrı neden gösterilmiştir. Ancak, fare modellerinde, LPA hem bir pruritojen ve bir algojen olduğu bildirilmiştir. Bir fare yanak enjeksiyon modelinde LPA etkileri içine Soruşturma LPA sadece çizilmeye neden olduğunu gösterdi, ama davranışları silme değil. Bu LPA fareler ve insanlarda benzer bir pruritogen olarak davranır gösterir, ve kaşıntı araştırma için bir yanak enjeksiyon modeli yarar gösterir.

Boyun enjeksiyon modelinde histamin indüklenen güçlü çizilme davranışları(Şekil 3). Araç (%7 ara 80 tuzlu) da çizilme davranışları na neden oldu. Bir önceki rapor deterjan keratinositler8histamin üretimi ile kaşıntı indüklenen gösterdi. Tween 80 benzer mekanizmalar tarafından kaşıntı neden olabilir, kapsaisin azaltılmış araç kaynaklı çizilme davranışları ise, bir önceki raporun aksine4. Fare zorlanma farklılıkları bu farklı sonuçları hesaba katmak mümkündür. Bu bulgular, ağrının çizilme davranışları üzerindeki etkisinin karmaşık olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların eşzamanlı ölçümü pruritogens ve algojenlerin kesin analizini sağlayabilir. Yanak enjeksiyon modelinde, kapsaisin çizilme davranışları neden vermedi ve sadece ağrı ile ilgili olduğu düşünülen silme davranışları, indüklenen9,10,11 ( Şekil4). Kapsaisin enjeksiyonu da tımar davranışları arttı (veriler gösterilmedi). Yanak içine enjeksiyon dan sonra, histamin esas zayıf silme davranışları ile kaşıntı davranışları indüklenen. Bir anti-histamin reaktifuygulaması, difenhidramin, çizik inhibe. Bu sonuç histamin kaynaklı çizilme davranışlarının histamin reseptörleri üzerindeki histamin etkisinden kaynaklandığını göstermektedir. Burada, örnek olarak, yanak enjeksiyon modelinde LPA etkileri gösterilir (Şekil 5). LPA kaşıntılı kolestatik hastalarda bulunan bir kaşıntı arabulucusudur. Ancak, fare modellerinde, LPA hem bir pruritojen ve bir algojenolarak bildirilmiştir 12,13,14,15. Bu nedenle, LPA etkileri bir yanak enjeksiyon modeli nde araştırıldı ve sonuçlar LPA çizilmeye neden olduğunu gösterdi, ama davranışları silme değil. Bu LPA bir pruritojen olduğunu gösterir, ama bir algojen değil, farelerde insanlarda etkileri benzer.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig3.jpg"> Şekil 3: Boyun enjeksiyon modelinde histamin ve kapsaisin etkileri. (A) Araç enjeksiyonu ile indüklenen çizilme davranışları (%7 ara 80 tuzlu, açık kare), histamin (site başına 50 μg/10 ll, dolgulu daireler) veya kapsaisin ( Site başına 10 μg/10 μL, açık üçgen; 40 μg/10 μL alan başına, dolgulu üçgen) boyun içine toplam 30 dakika boyunca her 5 dakikada bir değerlendirildi. (B) A panelinde 30 dk.luk süre içinde çizilme davranışlarının nicel analizi. Düzeltme. Veriler ortalama ± SEM (n = 6-8) olarak gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig4.jpg"> Şekil 4: Yanak enjeksiyon modelinde pruritojen ve algojenin etkileri. Farelerin sağ yanağına araç enjeksiyonu ile indüklenen silme (A) ve çizilme (B) davranışları (%7 ara 80 tuzlu, açık kare), histamin (site başına 50 μg/10 μL, dolu daireler) veya kapsaisin (site başına 40 μg/10 μL, üçgen) toplam 30 dk için her 5 dakikada bir değerlendirilir. Açık daire olarak gösterilen grup histamin enjeksiyonundan önce perkütan olarak 30 dakika (site başına 50 μg/10L) 10 μL %2 (w/v) difenhidramin hidroklorür tuzu (DHHCL) ile tedavi edildi. DHHCl tuzlu olarak çözüldü. A ve B panellerinde 30 dk.lık süre içinde silme (C) ve çizilme (D)davranışlarının nicel analizi; n = Grup başına 8 hayvan. •P &lt; 0.05, 0.05, P &lt; 0.01 anova tarafından Takip Bonferroni düzeltme. Veriler ortalama ± SEM olarak <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig4large.jpg" target="_blank">gösterilir.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig5.jpg"> Şekil 5: LPA, yanak enjeksiyon modelindeki davranışları niçin silmeden, çizilmeye neden olur. Farelerinsağ yanağına araç (tuzlu, açık kareler) veya LPA (site başına 100 nmol/10 μL, dolu daireler) enjeksiyonu ile indüklenen çizilme ve silme (B)davranışları toplam 30 dk. A ve B panellerinde 30 dk.lık süre içinde (C) ve silme (D)davranışları; n = 17 araç için ve n = 20 LPA için. •P &lt; 0.05, Welch'in t testine göre 0.01P &lt; 0.01. Veriler ortalama ± SEM olarak gösterilir. Bu rakam Kittaka ve ark.5'tendeğiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie1.jpg"> Film 1: Fare yanağının nasıl tıraş edilebildiğini gösteren film. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_1.mp4" target="_blank">Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayınız. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie2.jpg"> Film 2: Fare yanağına enjeksiyon uyguluyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_2.mp4" target="_blank">Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayınız. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie3.jpg"> Film 3: Tipik silme davranışını gösteren film. Bu film% 25 hızda gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_3.mp4" target="_blank">Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie4.jpg"> Film 4: Tipik çizilme davranışı film. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_4.mp4" target="_blank">Bu videoyu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>
<img alt="Movie 5" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie5.jpg"> Film 5: Tipik tımar davranışı film. Bu film% 25 hızda gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_5.mp4" target="_blank">Bu videoyu izlemek için lütfen buraya tıklayın. (İndirmek için sağ tıklatın.)</a>

Tipik olarak, fare boyun enjeksiyon modeli pruritogen kaynaklı çizilme davranışlarını değerlendirmek için kullanılır. Ancak, model sadece kaşıntı değil, ağrı hakkında bilgi sağlar. Burada, aynı anda ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışları ölçmek için kullanılabilir farelerde bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı.

Ağrı ve Kaşıntıya Bağlı Davranışların Eşzamanlı Ölçümü İçin Yanak Enjeksiyon Modeli

Itch was defined as &#34;an unpleasant cutaneous sensation that provokes a desire to scratch&#34;&#160;by Rothman in 1941. In mouse models, scratch bouts ...

Verilerimiz algojenlerin çizilme davranışlarını azalttığına işaret ediyor, ancak kapsaisinin çizilme davranışları üzerindeki etkisi belirsizliğini koruyor. Bu nedenle ağrı her miktarda eşzamanlı bir ölçüm önemlidir. Geleneksel yöntem sadece kaşıntı veya ağrı hissi için bilgi sağlamak, ancak yanak enjeksiyon modeli kaşıntı ve ağrı için bilgi sağlamak, ayrı ayrı ve aynı anda.Bu çizilme, silme ve tımar davranışları ayrımcılık için pratik alır gibi yanak enjeksiyonu, ilk başta zor olabilir. Enjeksiyon ve davranış analizi Video gösteri teknikleri mastering için yararlı olabilir. Bir yanak enjeksiyon deneyi için, değerlendirmeden bir gün önce, saç makası ile her farenin yanağında kürk tıraş ve bir tripod üzerine saniye kare hızı 30 ila 60 kare ile bir video kamera monte, sıcaklık, nem, ve ses kontrollü bir ortamda.Belirtilen yönde kameranın altına dört kafes yerleştirin ve farelerin birbirini görmesini önlemek için her kafesin arasına ekranlar yerleştirin. Tıraştan bir gün sonra, hayvanları kayıt koşullarına alıştırmak için her kayıt kafesine bir saat boyunca bir fare yerleştirin. Topikal tedavi kullanılacaksa, şu anda uygulayın.Hayvanlar alışArken, test maddesini fare başına 29 veya 30 kalibrelik bir iğneyle donatılmış 0,5 mililitrelik şırınga yükleyin. Alışma süresinin sonunda, enjeksiyondan önce video kaydını başlatın. Daha sonra test maddesinin 10 mikrolitrelik çözeltisini uyanık hayvanın tıraşlı yanağına enjekte edin.Daha sonra enjekte edilen fareleri kendi kafeslerine geri verin ve video kaydına 30 dakika devam edin. Denemenin sonunda, videoyu uygun bir video düzenleme yazılımı programına yükleyin. Bir fare yanak doğru bir arka bacak yükseltir ve bir veya birkaç saniye içinde birkaç kez çizer bir çizik bout olarak bacak aşağı koymadan önce her zaman saymak.Fareler silme için tek bir ön bacak kullanır, ve tımar için her iki ön bacak, ancak sadece silme davranışları ağrı ile ilgili davranışlar olarak sayılır. Bir boyun enjeksiyonu deneyi için, deneyden bir gün önce, her farenin boynunun ensesindeki kürkü saç makası ile tıraş edin. Tıraştan bir gün sonra, kayıt kafeslerinde fareleri uyanık koşullarda, yoğun olarak incelenmiş boynuna 10 mikrolitre lik test maddesini enjekte etmeden önce bir saat boyunca alıştırın.Enjekte edilen hayvanları kayıt kafeslerine geri verin ve fare davranışlarını 30 dakika kaydedin. Sonra boyun ve herhangi bir yüz silme davranışları sadece gösterildiği gibi çizilme nöbetleri saymak. Boyun enjeksiyon modelinde histamin güçlü çizilme davranışlarına neden olurken, araç hafif çizilmeye neden olur.Yanak enjeksiyon modelinde, kapsaisin çizilme davranışları neden olmaz, ama silme davranışları neden olur, ağrı ile ilgili olduğu düşünülmektedir. Yanak içine enjeksiyon dan sonra, histamin esas zayıf silme davranışları ile kaşıntı davranışları neden olur. Bir anti-histamin reaktif uygulaması çizilme inhibe, histamin kaynaklı çizilme davranışları histamin reseptörleri üzerinde histamin reaksiyonu neden olduğunu düşündürmektedir.Bu deneyde, bir kaşıntı arabulucu uygulama çizilmeye indüklenen, ancak davranışları silme değil, test mediatör bir pruritojen olarak hareket ettiğini gösteren, ama farelerde bir algojen değil, insanlardaki etkileri benzer. Bu yöntem kaşıntı ve ağrı duyumları kolayca ve açıkça bir prosedür ile ayırt edilmesine olanak sağlar. Ayrıntılı bir davranış analizi kaşıntı veya ağrı hissi odaklanarak yapılabilir.Kaşıntı ve ağrı davranışları farklı tepkilere uyum. Ayrıca bu teknikler zor değildir. Yanak enjeksiyonu ve gözlem prosedürü, çeşitli eğitim akranlarımızın ustalaşmasına izin verebilir.Biz Yale Üniversitesi'nde Profesör LaMotte tarafından yanak enjeksiyon modeli giriş için teşekkür ederiz.

cheek-injection-model-for-simultaneous-measurement-pain-itch-related

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Algoritmalar insan deneklerin deneysel iltihaplı deride ısı ve mekanik ağrı eşikleri değerlendirilmesi gösterilmiştir. Iki ağrı test paradigmalar, acı verici, iki büyük periferik sinir lifi popülasyonları bağımsız nosiseptif işleme incelemek, yani miyelinli olmayan C lifleri ve küçük A-delta lifleri miyelinli.

İnsan denekler üzerinde iltihaplı cilt ısı ve mekanik ağrı eşiğini Belirlenmesi

Yemek süresinde bir uzatma, orofasiyal ağrısı olan insanların koruma davranışına benzer kemirgenlerde orofasiyal noseptif davranışı temsil eder. Yemek, eğitim veya hayvan manipülasyonu gerektirmeyen, kortikal katılım gerektiren ve bu tahlilleri alternatif refleks veya operant ölçümlerden ayıran diğer deneysel olarak indüklenen davranışlarla rekabet etmeyen bir davranıştır.

Kemirgenlerde Orofacial Noseptif Yanıtların Ölçüsü Olarak Yemek Süresi

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Recombinase bağımlı rekombinant adeno ilişkili virüs (rAAV) kesici enjeksiyon herhangi bir genetik olarak etiketli hücre tipi spinal kord işlemek için kullanılabilir. Burada biz lomber spinal kord dorsal boynuz nöronlarda transduce anlatan. Bu teknik işlenmiş nöron alt türündeki fonksiyonel sorgulama sağlar.

Omurilik genetik olarak tanımlanmış nöronlar Adeno ilişkili virüs-aracılı Transgene ifade

Biz artrit ağrı uyarılmış bir ölçüsü geliştirdik ve kimyasal olarak indüklenen artrit farklı fare modellerinde spontan acı ölçmek için standart bir yöntem ile birleştiğinde. Bu hassas ve eklem ağrısı farklı türleri için tekrarlanabilir önlemlerdir.

Fare modelleri Monoarticular diz ağrısı kendiliğinden ve uyarılmış önlemler

Burada verilen kronik post-iskemi ağrı (CPIP) bir hayvan modeli kurmak için adımları ayrıntıları bir protokoldür. Bu insan kompleks bölgesel ağrı sendromu tip-I taklit iyi tanınan bir modeldir. Mekanik ve termal hipersensitiviteler daha da değerlendirilir, ayrıca CPIP sıçan modelinde gözlenen kapsaisin kaynaklı nosifensif davranışlar.

Sıçanlarda Kompleks Bölgesel Ağrı Sendromu Tip-I kronik Post-Iskemi Ağrı Modeli

Bu çalışma, sıçanlarda mono-iyodoasetatın eklem içi enjeksiyon yöntemini açıklamakta ve gelecekteki uygulamalar için referans sağlayan ağrıya bağlı davranışları ve histopatolojik değişiklikleri tartışmaktadır.

Sıçanlarda Mono-İyodoasetatın Eklem İçi Enjeksiyonu ile İndüklenen Osteoartrit Ağrı Modeli

Mekanik çatışmadan kaçınma testi, farelerde ağrı duyarlılığının refleksif olmayan bir okuması olarak kullanılır ve çeşitli fare ağrısı modellerinde duygusal-motivasyonel tepkileri daha iyi anlamak için kullanılabilir.

Farelerde Ağrı Davranışını Ölçmek için Mekanik Çatışmadan Kaçınma Testi

Bu protokol, operant tabanlı bir orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı kullanılarak nöropatik orofasiyal ağrının bir sıçan modelinde mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesini açıklar.

Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Burada, analjezik etkiyi değerlendirmek için her iki arka pençe karragenan enjeksiyonu ile modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli sunuyoruz.

Farelerde analjezik etkiyi incelemek için modifiye edilmiş bir inflamatuar ağrı modeli

Öğrenin, farelerde yanak enjeksiyonu ile ağrı ve kaşıntı davranışlarını eşzamanlı ölçme yöntemini. Bu model, nörobilim araştırmalarında kaşıntı ve ağrı mekanizmalarını ayrıntılı analiz etmeyi sağlar.

Ağrı ve Kaşıntıya Bağlı Davranışların Eşzamanlı Ölçümü İçin Yanak Enjeksiyon Modeli

Daha fazla video keşfet