Name: Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 23 s
Description: Öğrenin bıldırcın ve tavuk embriyonik dokularını mikrocerrahi ve enzimatik sindirimle izole etme yöntemini. Bu teknik, gen ifadesi çalışmaları ve kimerik organ oluşumu araştırmaları için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Isabel Alcobia için el yazması, eleştirel okuma için minnettarız yapmak video anlatımı için Mário Henriques ve Vitor Proa Instituto de Histologia e Biologia Histoloji hizmetinden Desenvolvimento, Faculdade de Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa, teknik destek için. Unidade de audiovisuais (görsel-işitsel birimi), Faculdade de Paulo Caeiro ve Hugo Silva için özellikle borçlu olduğumuzu Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa olağanüstü bağlılıklarını bu video üretimi için. Lütfen Interaves ve video sistemi ile donatılmış bir stereoscope sağlamak için Leica Microsystems anıyoruz - Sociedade Agro-Pecuária, S.A bıldırcın ile katkıda bulunmak için yumurta döllenmiş. Bu eser Faculdade de tarafından desteklenen Medicina de Lisboa, Universidade de Lisboa (FMUL).

Bu deneylerin hayvan bakımı ve Centro Académico de Medicina de etik kuralları izleyin Lisboa.
1. bıldırcın ve tavuk yumurta kuluçka döllenmiş
<ol><li>Yer yumurta Japon bıldırcın (Coturnix coturnix japonica) 38 ° C oksijen kuluçka makinesine 3 gün boyunca döllenmiş. Yukarı dönük olacak şekilde hava odasında yumurta (yumurta künt son) kuluçkaya. Not: Kuluçka makinesi alt kısmında bir su kabı yerleştirerek oksijen ortamı elde edilir.</li>
	<li>Döllenmiş yumurta tavuk (Gallus gallus) 38 ° C oksijen kuluçka 2,5 gün kuluçkaya. Yatay bir konumda yumurtaları kuluçkaya ve embriyo konum belirlemek için bir parça kömür kullanarak üst tarafı işaretleyin. Not: Bu deneme kurarken 40 bıldırcın yumurtası ve 60 tavuk yumurtası ile başlayın.</li>
</ol>2. bıldırcın endoderm timik rudiment potansiyel etki alanını içeren yalıtım
Not: yatay laminar akış kukuIeta ve steril aletler ve malzemeler yumurta işleme yordamları için steril koşullarda kullanın.
<ol><li>Timik rudiment meşru topraklarının içeren embriyonik bölge kaldırmak içinrd 3 ve 4th içeren faringeal kemer bölgesi (3/4PAR), açıklanan7,8olarak kemerler.<ol>
<li>Bir büyük borosilikat cam kase (100 x 50 mm; 100 cm3) 60 mL soğuk fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile doldurun.</li>
		<li>Eğri makas yardımıyla dokunun ve 3 gün boyunca inkübe yumurta dairesel delik bir bıldırcın kabuk. Yumurta karşı tarafta delik künt aç ve soğuk PBS ile kase yumurta sarısı (embriyo ile) aktarmak.</li>
		<li>Embriyo vitelline membran harici olarak eğri makas kullanarak ekstra embriyonik damarları keserek sarısı kaldırın.</li>
		<li>İnce forseps yardımıyla, transfer embriyo için küçük bir kase (60 x 30 mm; 15 cm3) 10 mL soğuk PBS ile dolu.</li>
		<li>Bir kepçe ile 100 mm Petri kabına siyah bir tabanı ile embriyo taşımak ( Tablo malzemelerigörmek) 10 mL soğuk PBS içeren ve stereomicroscope yerleştirin.</li>
		<li>3/4PAR, yukarıda açıklanan8olarak incelemek.</li>
		<li>3/4PAR ve bir cam tabak dörtte üçü aktarmak 2 mL steril Pasteur pipet kullanarak soğuk PBS ile dolu Aspire edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pankreatin ile enzimatik sindirim tarafından timik rudiment (3/4PP endoderm) meşru topraklarının içeren endoderm yalıtmak.<ol>
<li>Spatula ve ince forseps yardımıyla, soğuk Pankreatin (8 mg/mL; 1:3 seyreltme olarak 25 mg/mL soğuk PBS ile) transferi bir cam tabak dörtte üçü 3/4PAR dolu.</li>
		<li>Buz enzimatik sindirim için 1 h için kuluçkaya. Not: Geliştirme (Tablo 1) aşaması enzimatik sindirim bağlıdır.</li>
		<li>3/4PAR dan endoderm yalıtmak için stereomicroscope (40 x-60 x büyütme) altında cam tabak yerleştirin. Not: tüm yüzeyler ve çözümleri soğuk bu yordam sırasında tutmak. Eğer belgili tanımlık doku incelemek için uzun süren yeni bir soğuk Pankreatin çözüm değiştirmek (> 15 dk). Bir ışık kaynağı olarak LED ışıklar sınırlı ısı yükü dikkate alınarak stereomicroscope veya optik lifler dahil kullanın.</li>
		<li>Çevre dokular üzerinden endoderm yalıtmak için PIN sahipleri iki paslanmaz çelik microscalpels kullanın. Not: 0,1 mm ve 0.2 mm ve nikel iğne sahipleri arasında çapı 1 mm 0 mm çene açılış büyüklüğündeki microscalpels kullanın.<ol>
<li>Önce nöral tüp ve faringeal endoderm dorsal yüzeye bağlı mesoderm kaldırın.</li>
			<li>Sırt tarafı yukarı ile dikkatli bir şekilde ayırmak ve faringeal kemerler arasında Mezenşim kaldırmak ve faringeal torbalar içinde karşı karşıya. 3/4PAR her iki tarafta bu yordamı gerçekleştirin.</li>
			<li>Kalbini tüp ve anterior torbalar çevreleyen Mezenşim kaldırın.</li>
			<li>Ventral tarafı yukarı ile 2nd ve 3rd faringeal kemerler ektoderm kesme ve torbalar için bağlı Mezenşim dikkatli bir şekilde çıkarın. 3/4PAR diğer tarafında bu yordamı yineleyin. Bu aşamada tiroid rudiment görünür olmalıdır.</li>
			<li>Faringeal endoderm iki microscalpels ile bağlı kalan mezenkimal hücreler kaldırın.</li>
			<li>2nd ve 3rd s,rd 3 ve 4th torbalar tiroid rudiment ve 2nd endoderm ön kısmından içeren faringeal endoderm dissociating arasında enine bir kesim yapmak faringeal kese.</li>
			<li>Spatula ve ince forseps yardımıyla transfer izole 3/4PP endoderm bir cam tabak dörtte üçü için % 100 soğuk fetal Sığır serum ile (FBS) dolu.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Buz üzerinde izole dokular ile cam çanak tüp bebek tahlil hazırlanması sırasında tutmak. Alternatif olarak, izole doku üç boyutlu korunabilir ve in situ olarak gen-ifade için analiz edilebilir.</li>
</ol>3. yalıtım tavuk somatopleura mesoderm
Not: yumurta gerçekleştirmek işleme yordamları steril koşullarda yatay laminar akış kukuIeta ve sterilize edilmiş aletler ve malzemeler kullanarak.
<ol><li>Somites 19-24 (ss19-24) düzeyinde somatopleura mesoderm içeren embriyonik bölge kaldırın.<ol>
<li>Tavuk yumurta inkübatör kuluçka 2.5 gün sonra kaldırın.</li>
		<li>Eğri makas ile kabukta küçük bir delik açın. Bir iğne takın ve albümin 2 mL içinde yumurta albümin birim alt ve (işaretli kabuk altında bulunan) embriyo zarar görmesini önlemek için bir 10 mL şırınga ile Aspire edin. Emişli albümin atmak.</li>
		<li>Bir daire kesme delik (ilâ 2 / 3 üst yüzey alanı) eğri makas kullanarak kabuk işaretli bölgesinde.</li>
		<li>Vitelline membran ince forseps ile embriyo tutarken extraembryonic gemiler dışarıdan kesti.</li>
		<li>Bir stereomicroscope altında embriyo soğuk PBS 10 mL içeren bir siyah Bankası ile bir 100 mm Petri kabına yerleştirin. Not: bir stereomicroscope bu aşamadan itibaren mikrocerrahi yordamlar ilerici büyütme için kullanın.</li>
		<li>Embriyo plaka altına tutmak için dört ince böcek pimleri kullanın. Pimleri bir kare şekli oluşturan extraembryonic bölgede yerleştirin.</li>
		<li>19 ve somites 24-kemiği embriyo eksen ve wecker göz makas kullanarak tüm embriyo bölge geçiş arasında iki kesim gerçekleştirin.</li>
		<li>Embriyo bölümünde, ss19-24, kesme marjinal embriyonik kenarlarından serbest bırakın.</li>
		<li>Aspiratı ss19-24 doku ve bir cam tabak dörtte üçü aktarmak 2 mL steril Pasteur pipet kullanarak soğuk PBS ile dolu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Somatopleura bölge (ss19-24) yanal mesoderm Pankreatin (8 mg/mL; 1:3 seyreltme olarak 25 mg/mL soğuk PBS ile) ile enzimatik sindirim tarafından izole et.<ol>
<li>Spatula ve ince forseps, transfer yardımıyla dörtte üçü soğuk Pankreatin çözüm ile dolu bir cam ss19-24 dokuların çanağı.</li>
		<li>Buz enzimatik sindirim için 30 dk için kuluçkaya.</li>
		<li>Stereomicroscope altında bir sahibi iki microscalpels kullanarak çevre dokular üzerinden mesoderm yalıtmak. Not: tüm yüzeyler ve çözümleri soğuk bu yordam sırasında tutmak. Eğer belgili tanımlık doku incelemek için uzun süren yeni bir soğuk Pankreatin çözüm değiştirmek (> 10 dak.). Bir ışık kaynağı olarak LED ışıklar sınırlı ısı yükü dikkate alınarak stereomicroscope veya optik lifler dahil kullanın.</li>
		<li>Mesoderm yalıtım sırasında önce ektoderm ventrally bulunduğu splancnopleura dokular dikkatli dekolmanı tarafından takip yüzeyde kaldırın.</li>
		<li>Somatopleura sağ yanal mesoderm nöral tüp paralel hareket halinde keserek serbest bırakın.</li>
		<li>Embriyo sol tarafındaki mesoderm ayrılması yineleyin. Not: Bu işlem sırasında microscalpel hareketleri yavaş olun. Maruz kalan ekstra hücresel matris proteinler doku ve sıvı hareketleri önleme aletleri için sopa.</li>
		<li>Spatula ve ince forseps yardımıyla bir cam tabak dörtte üçü izole mesoderm aktarmak ile soğuk FBS dolu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Buz üzerinde izole dokular ile cam çanak tüp bebek tahlil hazırlanması sırasında tutmak.</li>
</ol>4. İn vitro organotypic tahlil: bıldırcın 3/4PP endoderm ve tavuk somatopleura mesoderm heterospecific Derneği
<ol><li>%10 FBS ve % 1 kalem/Strep3,5RPMI-1640 orta ile kültür ortamı hazırlamak.</li>
	<li>Bir metal ızgara 35 mm ile 5 mL kültür ortamının Petri kabına yerleştirin. Not: üst kılavuz ile orta yüzey seviye için sıvı fazlalığı kaldırın.</li>
	<li>İnce forseps yardımıyla bir membran filtre kültür orta daldırma ve sonra hava ile temas halinde bir yüzeye sahip ızgaranın üstüne yerleştirin. Not: Membran alanı (13 mm çap ile) dörtte biri doku Derneği için yeterlidir.</li>
	<li>Stereomicroscope altında membran filtre üst izole doku ilişkilendirin. İlk nazik bir nakli kaşık (veya spatula) yardımı ile kaydırarak cam tabak 3/4PP endoderm (adım 2) aktarmak ve ince forseps. İzole mesoderm (adım 3) için bu yordamı yineleyin. Not: bir microscalpel yardımı ile ilişkisini en üst düzeye çıkarmak belgili tanımlık doku karıştırın.</li>
	<li>Dikkatle 48 h. kültürlü dokulara chorioallantoic membran (CAM) aşılı için ilişkili dokulara oksijen kuluçka %5 CO2 37 ° C'de yer. Not: CAM ektopik organ oluşumu daha önce ayrıntılı8yaşındaydım.</li>
</ol>

<ol><li>Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nogent+Institute--50+years+of+embryology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Nogent Institute--50 years of embryology.</a> The International Journal of Developmental Biology. 49 (2-3), 85-103 (2005).</li>
<li>Le Douarin, N. M., Teillet, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+migration+of+neural+crest+cells+to+the+wall+of+the+digestive+tract+in+avian+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">The migration of neural crest cells to the wall of the digestive tract in avian embryo.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 30 (1), 31-48 (1973).</li>
<li>Le Douarin, N. M., Jotereau, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracing+of+cells+of+the+avian+thymus+through+embryonic+life+in+interspecific+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tracing of cells of the avian thymus through embryonic life in interspecific chimeras.</a> Journal of Experimental Medicine. 142 (1), 17-40 (1975).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Developmental Dynamics. 195 (4), 231-272 (1992).</li>
<li>Neves, H., Dupin, E., Parreira, L., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Bmp4+signalling+in+the+epithelial-mesenchymal+interactions+that+take+place+in+early+thymus+and+parathyroid+development+in+avian+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Modulation of Bmp4 signalling in the epithelial-mesenchymal interactions that take place in early thymus and parathyroid development in avian embryos.</a> Developmental Biology. 361 (2), 208-219 (2012).</li>
<li>Takahashi, Y., Bontoux, M., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelio--mesenchymal+interactions+are+critical+for+Quox+7+expression+and+membrane+bone+differentiation+in+the+neural+crest+derived+mandibular+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+Journal%22%5BJournal%5D)">Epithelio--mesenchymal interactions are critical for Quox 7 expression and membrane bone differentiation in the neural crest derived mandibular mesenchyme.</a> Embo Journal. 10 (9), 2387-2393 (1991).</li>
<li>Figueiredo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+and+Hedgehog+in+the+thymus%2Fparathyroid+common+primordium%3A+Crosstalk+in+organ+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Notch and Hedgehog in the thymus/parathyroid common primordium: Crosstalk in organ formation.</a> Developmental Biology. 418 (2), 268-282 (2016).</li>
<li>Figueiredo, M., Neves, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-step+Approach+to+Explore+Early-and+Late-stages+of+Organ+Formation+in+the+Avian+Model%3A+The+Thymus+and+Parathyroid+Glands+Organogenesis+Paradigm+Video+Link%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualuzed+Experiments%22%5BJournal%5D)">Two-step Approach to Explore Early-and Late-stages of Organ Formation in the Avian Model: The Thymus and Parathyroid Glands Organogenesis Paradigm Video Link.</a> Journal of Visualuzed Experiments. , (2018).</li>
<li>Nehls, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+genetically+separable+steps+in+the+differentiation+of+thymic+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Two genetically separable steps in the differentiation of thymic epithelium.</a> Science (New York, N.Y.). 272 (5263), 886-889 (1996).</li>
<li>Morahan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nu+gene+acts+cell-autonomously+and+is+required+for+differentiation+of+thymic+epithelial+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The nu gene acts cell-autonomously and is required for differentiation of thymic epithelial progenitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (12), 5742-5746 (1996).</li>
<li>Jerome, L. A., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DiGeorge+syndrome+phenotype+in+mice+mutant+for+the+T-box+gene%2C+Tbx1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">DiGeorge syndrome phenotype in mice mutant for the T-box gene, Tbx1.</a> Nature Genetics. 27 (3), 286-291 (2001).</li>
<li>Nie, X., Brown, C. B., Wang, Q., Jiao, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+Bmp4+from+the+Tbx1+expression+domain+causes+abnormal+pharyngeal+arch+artery+and+cardiac+outflow+tract+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Inactivation of Bmp4 from the Tbx1 expression domain causes abnormal pharyngeal arch artery and cardiac outflow tract remodeling.</a> Cells Tissues Organs. 193 (6), 393-403 (2011).</li>
<li>Zou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+of+the+third+pharyngeal+pouch+into+thymus%2Fparathyroid+by+Six+and+Eya1%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Patterning of the third pharyngeal pouch into thymus/parathyroid by Six and Eya1.</a> Developmental Biology. 293 (2), 499-513 (2006).</li>
<li>Davey, M. G., Tickle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chicken+as+a+model+for+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cytogenetic+and+Genome+Research%22%5BJournal%5D)">The chicken as a model for embryonic development.</a> Cytogenetic and Genome Research. 117 (1-4), 231-239 (2007).</li>
<li>Nowak-sliwinska, P., Segura, T., Iruela-arispe, M. L., Angeles, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology%2C+medicine+and+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li>
<li>Uematsu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+in+ovo+chorioallantoic+membrane+engraftment+to+culture+testes+from+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Use of in ovo chorioallantoic membrane engraftment to culture testes from neonatal mice.</a> Comparative Medicine. 64 (4), 264-269 (2014).</li>
<li>Martyn, I., Kanno, T. Y., Ruzo, A., Siggia, E. D., Brivanlou, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+a+human+organizer+by+combined+Wnt+and+Nodal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-organization of a human organizer by combined Wnt and Nodal signaling.</a> Nature. 558 (7708), 132-135 (2018).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada verilen embriyonik doku yalıtım yordam bıldırcın-tavuk chimeric bebekleri farklı biyolojik bağlamlarda3,5,6üretmek için önceki teknik geliştirildi.
Bu yaklaşım genetik manipülasyon veya belirsiz, genetiği değiştirilmiş hayvan modelleri kullanımını sınırlama çoğu kez doku özgü işaretleri kullanımı gerektirmeden saf embriyonik doku yalıtmak uygundur. Mezenkimal epitel etkileşimleri geliştirme sır...

1970'lerin başında, bir zarif bıldırcın-tavuk chimera sistem Le Douarin, geliştirme1,2sırasında hücre göç ve hücresel etkileşimlerin rolünü anlamak için yeni yollar açma tarafından geliştirilmiştir. Hücre değişimi iki tür arasındaki önemli ölçüde embriyogenez, daha sonra gergin oluşumu ve hematopoetik dahil olmak üzere çok sayıda gelişimsel süreçleri çalışmaya kullanıldığında doğruladı rahatsız değil öncül modeli geliştirildi sistemleri1. İkinci örnek olarak alırsak, hematopoetik ataları timik epitel rudiment kolonize döngüsel dalgaları ilk gözlenen bıldırcın-tavuk chimera sistem3kullanarak. Bunun için timus, üçüncü ve dördüncü faringeal torbalar (3/4PP), endoderm aday bölge 15-30 - somite aşamada [embriyonik gün (E) 1.5-E2.5] bıldırcın (q) embriyo mekanik ve enzimatik izole edildi. Bu aşamalar tavuk Hamburger ve Hamilton4 (HH) - aşamaları 12-17 karşılık gelir. Yalıtım yordamlar tripsin enzimatik endoderm ekli Mezenşim dan ayırmak için kullanımı ile başladı. İzole endoderm ana tavuk (c) embriyo E3-E3.5 (SS-aşamaları 20-21), somatopleura bölgeye aşılı. Bu Contegra Mezenşim timik epitel gelişimine de katkıda organ oluşumu3' e "keyfi" olarak kabul edildi. Daha sonra art arda gelen dalgalar tavuk ev sahibi kan yoluyla progenitör hücrelerin ana bilgisayar embriyo3timus oluşumunda katkıda bulunmak ve bıldırcın donör timik epitel muadili sızmış.
Son zamanlarda, bu yaklaşım değiştirilmiş bir sürümü de erken-evrelerinde timus oluşumu5mezenkimal epitel etkileşimleri eğitimi için önemli olduğu kanıtlanmış oldu. Bu bağlamda, ektopik timus chimeric embriyo3 oluşumu dahil dokular, donör ve ana bilgisayar embriyolar, her ikisi de izole ve ex vivo ilişkili. Bıldırcın 3/4PP endoderm (E2.5-E3) ve tavuk somatopleura mesoderm (E2.5-E3) izole etmek için kullanılan gelişmiş bir protokol. Kısaca, embriyonik doku mikrocerrahi ve tüp bebek Pankreatin sindirim tabi izole edildi. Ayrıca, enzimatik sindirim, sıcaklığı ve süresi, kuluçka koşulları doku ve gelişimsel sahne (Tablo 1) göre optimize.
Ardından, izole dokular bir organotypic vitro sistemde 48 h, daha önce bildirilen5,6ilişkili. Tüp bebek derneğin dokuların içinde vivo manipülasyon bazı sınırlamalar üstesinden embriyo, yerel hücresel etkileşimlerde taklit eder. Bu sistem geliştirme faringeal cihazları gibi karmaşık morphogenic olaylarda hücresel etkileşimlerin çalışmaya özellikle yararlıdır.
Timus doku her dokusunda katkısını yanı sıra yetenek bir timus oluşturmak için heterospecific derneğin keşfedilmeyi kullanarak daha fazla CAM metodolojisi, daha önce ayrıntılı5,7,8olabilir. Kısaca, kültürlü dokulara cE8 embriyo CAM aşılı ve 10 gün boyunca ovo içinde geliştirmek için izin. O zaman, timus oluşumu hasat explants morfolojik analizi ile değerlendirilmiştir. Olduğu gibi klasik bıldırcın-tavuk çalışmalar3, bıldırcın timik epitel hematopoetik progenitör hücreler (HPCs) daha sonra organ gelişimi9' a,10 katkıda bulunmak için gösterildi tavuk embriyo elde tarafından kolonize . HPCs ile son derece bozukluklarına CAM5,7,8chimeric ektopik timus embriyo göç. Bıldırcın türetilmiş timik epitel doku özel moleküler işaretleyiciler ihtiyacını üstesinden species-specific antikorlar (yani, QCPN - MAb bıldırcın Perinükleer), kullanarak immünhistokimya belirlenebilir.
Bu deneysel Yöntem, önceki yayın8' de bildirilen iki aşamalı yaklaşım olarak sinyalleme yollarının modülasyonu düzenli yönetim sırasında tüp bebek ve ovo geliştirme farmakolojik ajanlar tarafından sağlar. Ayrıca, explants herhangi bir zaman-noktada deneme8tabii hasat edilebilir.
Son olarak, burada ayrıntılı yalıtım Protokolü doğal özellikleri korunması ve 3D-mimari embriyonik dokuların, aksi takdirde yerinde gen ekspresyonu desenleri embriyonik'in ayrıntılı için özellikle yararlı tarafından erişilemeyen sağlar geleneksel yöntemleri. Buna ek olarak, transcriptome analiz yaklaşımları, RNA-seq veya microarrays, dahil olmak üzere de izole dokularda bir doku özgü yüksek üretilen iş "omics" analiz sağlarken genetik işaretler gerek kalmadan uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Tavuk döllenmiş yumurtaları (Gallus gallus)</td><td>Pintobar, Portekiz</td><td></td><td>Tavuk çiftliği&nbsp;</td></tr><tr><td>Bıldırcın döllenmiş yumurtaları (Coturnix coturnix)</td><td>Interaves, Portekiz</td><td></td><td>Kuş çiftliği&nbsp;</td></tr><tr><td>15 mL PP santrifüj tüpleri</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>50 mL PP santrifüj tüpleri</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>60 x 20 mm pyrex tabaklar</td><td>Duran grubu</td><td>21 755 41</td><td></td></tr><tr><td>100 x 20 mm pyrex tabaklar</td><td>Duran grubu</td><td>21 755 48</td><td></td></tr><tr><td>Metal ızgara</td><td>Goodfellows</td><td></td><td>ince gözenekli ve paslanmaz çelik ızgara</td></tr><tr><td>Membran filtre</td><td>Kırlangıç</td><td>DTTP01300</td><td>0,6 mm İzogor membran filtre</td></tr><tr><td>Petri kabı, 35 x 10 mm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5112&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>60 x 30 mm pyrex kaseler (Küçük boy)</td><td></td><td></td> <td>süpermarketten&nbsp;</td></tr><tr><td>100 x 50 mm pyrex kaseler (Büyük boy)</td><td></td><td></td> <td>süpermarketten&nbsp;</td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Samco Scientific, Thermo Fisher Scientific</td><td>2041S</td><td>2 mL plastik pipet</td></tr><tr><td>Cam pastör pipeti</td><td>Normax</td><td>5426015</td><td></td></tr><tr><td>Süpermarketten şeffaf plastik bant</td><td></td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Sitokeratin (pan; asidik ve bazik, tip I ve II sitokeratinler), klon Lu-5</td><td>BMA Biyomedikaller</td><td>T-1302</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>İnvitrojen, Thermo Fisher Scientific Standart</td><td></td><td>FBS</td></tr><tr><td>Pankreatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-3292</td><td>Üreticinin talimatlarına göre 25 mg / mL'lik bir çözelti hazırlayın; aliquote'dan önce santrifüjleyin ve filtreleyin ve -20 ° C'de saklayın. Alikotlar donmuş olarak saklanabilir. birkaç yıl.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>İnvitrojen, Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>GIBCO, Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>QCPN antikoru</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası</td><td>QCPN</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta, GlutaMAX Takviyesi&nbsp;</td><td>GIBCO, Thermo Fisher Scientific</td><td>61870010</td><td></td></tr><tr><td>Bluesil RTV141A/B Silikon Elastomer 1.1Kg Kit</td><td>ELKEM/Silmid</td><td>RH141001KG</td><td>Petri kabı için arka tabanı hazırlamak için</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-30&nbsp;</td><td>İnce forseps</td></tr><tr><td>Ekstra ince Bonn makası, kavisli</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14085-08</td><td>Kavisli makas</td></tr><tr><td>Böcek iğneleri&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>26001-30</td><td>0.3 mm Paslanmaz çelik pim</td></tr><tr><td>Mikro spatula&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10087-12</td><td>Nakil kaşığı</td></tr><tr><td>Minutien Pimleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-20</td><td>0.2 mm Paslanmaz çelik mikro neşter</td></tr><tr><td>Minutien Pimleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-10</td><td>0.1 mm Paslanmaz çelik mikro neşter</td></tr><tr><td>Moria Nikel Kaplama Pim Tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26016-12</td><td>Nikel kaplama pim tutucu</td></tr><tr><td>Moria Delikli Kaşık</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10370-17</td><td>Skimmer</td></tr><tr><td>Wecker Göz Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>MC170 HD</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>NanoZoomer&nbsp; S360 Dijital&nbsp; slayt tarayıcı&nbsp;</td><td>Hamamatsu Fotonik</td><td>C13220-01</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskop</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>Leica M80</td><td></td></tr></tbody></table> İkinci El

yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk chimeric organ oluşumu

Isolation of Embryonic Tissues and Formation of Quail-Chicken Chimeric Organs Using The Thymus Example

Embriyonik Doku yalıtmak için kapasite sırayla gelişim biyolojisi örtüsünü açmak temel süreçleri tartışmasız katkılar sağlamıştır bıldırcın-tavuk chimera sistemi kurulması için önemli bir adım oldu.
Burada olduğunu bıldırcın ve Mikrocerrahi ve biyolojik özelliklerini koruyarak süre enzimatik sindirim tarafından tavuk embriyonik dokulardan yalıtmak için en iyi duruma getirilmiş bir yöntemi açıklanmıştır. Yalıtım sonra her iki tür dokulardan bir tüp bebek organotypic tahlil 48 h. bıldırcın için ilişkili ve tavuk dokuları farklı nükleer özellikleri ve moleküler işaretleyiciler hücresel çapraz konuşma arasında çalışma izin tarafından ayrımcılığa dokuların heterospecific Derneği. Bu yaklaşım, bu nedenle, karmaşık doku etkileşimleri gelişim süreçlerinde olanlar faringeal morfogenez ve foregut oluşumu sırasında meydana gelen gibi son derece dinamik uzamsal değişiklikler ile çalışmak için yararlı bir araçtır endoderm elde edilen organlar. Bu deneysel yaklaşım ilk mezenkimal epitel etkileşimleri erken-evrelerinde timus oluşumu incelemek için geliştirilmiştir. Bu, potansiyel timik rudiment endoderm kaynaklı ve Mezenşim mesoderm kaynaklı, sırasıyla bıldırcın ve tavuk embriyo izole edildi.
Organları oluşturmak için kapasite ilişkili dokuların daha fazla tavuk embriyo chorioallantoic membran (CAM) aşılama tarafından test edilecek. CAM besin sağlar ve explanted dokulara gaz alışverişi sağlar. Ovo geliştirme 10 gün sonra chimeric organ hasat explants geleneksel morfolojik yöntemlerle analiz edilebilir. Bu yordam ayrıca organogenesis (ovo gelişiminde) son dönemlerinde için ilk gelişimi (tüp bebek geliştirme) üzerinden organ oluşumu sırasında doku özgü katkıları eğitim verir.
Son olarak, geliştirilmiş yalıtım yöntemini sağlar ayrıca üç boyutlu (3D) doku özel gen ekspresyonu desenleri yüksek çözünürlüklü topografik analizi için de kullanılabilir embriyonik dokular, korunmuş.

İletişim kuralı birkaç hücresel ve gelişim biyolojisi teknik yaklaşım içinde kullanılmak üzere kuş embriyonik doku yalıtmak için bir yöntemi ayrıntıları. Bu yöntem daha önce timus oluşumu5erken evrelerinde mezenkimal epitel etkileşimleri çalışmaya istihdam edildi. Burada, yeni sonuçları Şekil 1 ve Şekil 2benzer yaklaşımları kullanarak, gösterilir.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1...

Bu makalede embriyonik dokulardan saf formu ex vivo chimeric organları için bir araya getirilebilen bıldırcın ve tavuk embriyolar izole etmek için bir yöntem sağlar.

Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu

The capacity to isolate embryonic tissues was an essential step for establishing the quail-chicken chimera system, which in turn has provided undisputed ...

Bu işlemin genel amacı bıldırcın ve tavuk embriyolarından embriyonik dokuları izole etmek için optimize edilmiş deneysel bir yaklaşım sunmaktır. Bu teknikle gen ekspresyonu çalışmalarında ve fonksiyonel tahlillerde kullanılabilecek saf embriyonik dokular elde ediyoruz. Bıldırcın ve tavuk embriyolarından elde edilen dokular mikrocerrahi ile izole edilir ve biyolojik özelliklerini korurken in vitro enzimatik sindirime tabi tutulur.İzolasyondan sonra, üç boyutlu korunmuş dokular yüksek çözünürlüklü topografik gen ekspresyon kalıpları analizi için kullanılabilir. Bu yaklaşım, geleneksel yöntemlerle erişilemeyen embriyonik bölgelerde situ gen ekspresyonunu detaylandırmak için özellikle yararlıdır. Buna ek olarak, transkripsiyon analizi yaklaşımları genetik belirteçler gerektirmeden izole dokularda da uygulanabilir, dokuya özgü yüksek iş artışı omik analizi sağlarken.Alternatif olarak, her iki türün izole dokular bir in vitro organotipik tsay ilişkili olabilir 48 saat. Bıldırcın ve tavuk hücreleri farklı nükleer özellikler ve moleküler belirteçler tarafından ayrımcılığa uğrayabildiği için bu yaklaşım doku etkileşimlerinin incelenmesine olanak sağlar. Kültür dokularının organ oluşturma kapasitesi ovo testiile daha da test edilebilir.Bu nedenle bu yöntem, son derece dinamik aralıklı modifikasyonlar ile gelişimsüreçlerinde karmaşık doku etkileşimlerini incelemek için yararlı bir araçtır ve aynı zamanda organların oluşumuna belirli embriyonik bölgelerin potansiyelini ortaya çıkarmak için yardımcı olabilir. Örnek olarak, burada izole embriyonik dokulardan bıldırcın-tavuk şimerik timus oluşumu açıklanmıştır. Birincisi, üçüncü ve dördüncü faringeal keselerin endodermi, prospektif timik ilkellik gelişme üç gün ile bıldırcın embriyolarının faringeal bölgeden izole edilir.Sonra, Bu doku gelişimini destekleyen yeteneğine sahip bir mezenchyme ile ilişkilidir, somatopleura mezoderm. Son olarak, dokuların heterospesifik ilişkisi bir şeymerik timus oluşturmak için in vitro ve ovo kültürlü. Yatay laminar akış başlığı ve steril ize edilmiş alet ve malzemeleri kullanarak steril koşullarda tüm yumurta manipülasyon işlemlerini gerçekleştirin.Döllenmiş bıldırcın yumurtaları hava odası yukarı bakacak şekilde kuluçkaya yatırıldı. Başlamak için, bıldırcın yumurtalarını kuvözden çıkarın. Soğuk PBS ile dolu büyük bir borosilikat cam kase hazırlayın.Kavisli makas ile, dokunun ve kuluçka üç gün ile bir bıldırcın yumurtası kabuğunda dairesel bir delik kesti. Yumurtanın karşı tarafındaki deliği künt yapın ve sarısını soğuk PBS ile kaseye aktarın. Ekstraembriyonik damarlara dışarıdan vitellin membran keserek sarısı embriyo çıkarın.İnce püskler yardımıyla, soğuk PBS ile dolu küçük bir kase embriyo transfer, sonra bir kaymaz ile siyah taban ile bir Petri kabına embriyo taşıyın. Önceki Jove SPA ligasyonunda açıklandığı gibi üçüncü ve dördüncü faringeal keseleri içeren faringeal bölgeyi çıkarın. Daha sonra, enzimatik sindirim için, buz üzerinde, bir saat boyunca soğuk pankreatin ve kuluçka ile dolu bir bardağa üçüncü ve dördüncü faringeal kemer bölge aktarın.Enzimatik sindirimin kuluçka süresinin gelişim aşamasına bağlı olduğunu unutmayın. Stereo mikroskop altında cam çanak yerleştirin ve bir tutucu iki mikro-neşter kullanarak, üçüncü ve dördüncü faringeal kemer bölgeden endoderm izole. İlk dış yüzeyde endoderm ve ektoderm gösteren, dorsal tarafı ile faringeal bölge yerleştirin.Nöral tüpün ektoderm, endoderm, mezenkim, kalp tüpü ve ventral kısmını gözlemleyin. Faringeal endoderm in dorsal yüzeyine bağlı nöral tüp ve mezoderm çıkarın. Farinks endoderm gözlemlemek, dördüncü ve üçüncü faringeal torbalar, ve kalp tüpü.Dorsal tarafı yukarı ile, dikkatle ayırmak ve faringeal kemerler arasında mezenchyme kaldırmak ve faringeal torbalar ortaya çıkarmak. Bu yordamı faringeal bölgenin diğer tarafında gerçekleştirin. Endodermin en posterior kısmına iliştirilen mezenchyme çıkarın ve dördüncü faringeal kese gözlemlemek.Arka tarafı yukarı, hem sol hem de sağ dördüncü faringeal torbalar gözlemleyin. Endodermin en arka kısmına ve ikinci kese bağlı mezenchyme kaldırarak devam edin. Kalp tüpünü ve iç keseleri çevreleyen mezenchyme çıkarın.Ventral tarafı yukarı ile, farinks endoderm gözlemlemek, ve ikinci faringeal kemer sağ tarafında. Bu aşamada tiroid rudiment endoderm görünür olmalıdır. İkinci ve üçüncü faringeal kemerlerin ektoderm'ini ayırın ve kemerlerin mezenchyme'sini dikkatlice çıkarın.Sağ tarafta ikinci faringeal kemer mezenchyme kaldırılması gözlemleyin. Dördüncü ve üçüncü poşetlerin ve tiroid ilkelerinin bulunduğu yere dikkat edin. Faringeal torbalara bağlı mezenkimal hücrelere kalıntıları çıkarın.Sağ tarafın üçüncü ve dördüncü keselerini ve sol taraftan dördüncü keseyi gözlemleyin. Sol tarafın mezenchyme müfrezesini tekrarlayın. Şimdi sol tarafın üçüncü kesesini gözlemleyin.Sol tarafta ikinci kemer mezenchyme müfreze gözlemleyin. Bu işlem sırasında tüm yüzeylerin ve çözeltilerin soğuk tutulması gerektiğini unutmayın. Dokuların kesilmesi uzun zaman alan durumda yeni bir soğuk pankreatin çözeltisi ve çanak değiştirin.Son olarak, ikinci ve üçüncü faringeal torbalar arasında bir transversal kesim ikinci torbalar ve tiroid rudiment kaldırmak için olun. Bu noktada, izole endoderm üçüncü ve dördüncü faringeal torbalar ve farinks arka ucu oluşur. Kalıntıları iki mikro-neşter yardımıyla müstakil mezenchyme çıkarın.İzole endodermi soğuk fetal sığır serumu ile dolu bir cam çanağa aktarın ve in vitro tahsin in hazırlanması sırasında buz üzerinde tutun. Yumurtalar yatay pozisyonda, üst tarafı ise kömür kullanmak için işaretlenmiştir. Başlamak için, kuvözden yumurtaları çıkarın.Kavisli bir makasile, kabukta küçük bir delik açın, bir iğne yerleştirin ve 10 mililitrelik şırınga ile iki mililitre albümin aspire edin. Kabuğun işaretli bölgesinde dairesel bir delik açın ve ince forceps ile embriyo tutarken ekstra embriyonik damarlara dışvian membran kesti. Bir stereo mikroskop altında, soğuk PBS içeren siyah baz ile bir Petri kabına embriyo yerleştirin.Embriyoyu tabağın dibine tutmak için dört böcek iğnesi kullanın. Pimleri kare şeklinde ki ekstraembriyonik bölgeye yerleştirin. 19 ve 24 kromozomlar arasında embriyo eksenine transversvesi arasında iki kesik yapın ve embriyoyu geçerek.Marjinal embriyonik kenarları keserek bu bölümü bırakın. Lateral plaka, nöral tüp ve somites gözlemleyin. Aspire ve soğuk pankreatin dolu bir cam çanak dokuları aktarın.Enzimatik sindirim için buz üzerinde 30 dakika kuluçka. Stereo mikroskop altında, tutucularda iki mikro-neşter kullanarak çevredeki dokulardan mezoderm izole. Somatopleura mezoderm, splanchnopleura, nöral tüp ve ektoderm gözlemleyin.İlk olarak, yüzeydeki ektodermi çıkarın. Ektodermden ayrıştırılan somatopleura mezoderm'i gözlemleyin. Daha sonra, dikkatle somatopleura gelen ventrally bulunan splanchnopleura ayırmak.Somatopleura sağ lateral mezoderm gözlemleyin. Nöral tüpe paralel bir hareketle keserek serbest bırakın. Bu işlem sırasında tüm yüzeylerin ve çözeltilerin soğuk tutulması gerektiğini unutmayın.Dokuların kesilmesi uzun zaman alan durumda yeni bir soğuk pankreatin çözeltisi ve çanak değiştirin. Somatopleura sol lateral mezoderm gözlemlemek, somites, nöral tüp, ve ektoderm. Bu tarafın mezoderm salınımını tekrarlayın.Mikro-neşter ile yavaş hareketler yapın. Maruz kalan ekstrasellüler matriks proteinleri doku ve aletler arasında oturup sıvı hareketlerini önlerler. Dikkatle nöral tüp paralel bir hareketle somatopleura kesti.İzole mezodermi soğuk fetal büyükbaş serumu ile dolu bir cam çanağa aktarın ve in vitro tahsin in hazırlanması sırasında buz üzerinde tutun. Bir Petri kabına ince bir meshed metal rendeyerleştirin ve kültür ortamı ile doldurun. Orta yüzeyi ızgaranın üst kısmıyla eşitlemek için aşırı sıvıları çıkarın.İnce pratisyen ler yardımıyla, bir membran filtresini kültür ortamına batırın ve onunla temas eden bir yüzeye sahip olmak için dikkatlice ızgaranın üstüne yerleştirin. Stereo mikroskop altında, spatula ve ince çerofma yardımı ile hafif çeşni ile membran filtreye izole endoderm aktarın. İzole mezoderm için bu yordamı tekrarlayın.Bir mikro-neşter yardımıyla, bu dernek maksimize etmek için dokuları karıştırın. İlişkili dokuları 37 derecede nemlendirilmiş bir kuvözde 48 saat boyunca %5 CO2 ile dikkatlice yerleştirin. Kuluçka döneminden sonra kültür dokularını koriolan tipi membranüzerine aşılayın ve daha önce açıklandığı gibi organ oluşumunu tamamlamak için 10 gün daha oval olarak gelişmesini bekleyin.Burada kuş embriyonik dokuların izolasyon uyrkunluğu farklı deneysel yaklaşımlarda kullanılmak üzere izin retiküler yöntemdir. Örnek olarak, faringeal keselerin oluşumunda rol aldığı bilinen genlerin ekspresyonu da embriyonik üçüncü günde tavuk embriyolarından ikinci, üçüncü ve dördüncü faringeal keseleri içeren izole edilmiş bir endoderm değerlendirildi. Sonic Kirpi ifadesi merkezi yutak endoderm tespit edildi ve torbalar dışında, BMP7 ikinci ve üçüncü faringeal torbalar endoderm ifade edildi ve merkezi yutak ve dördüncü yutak kese dışında.İzole dokular da 48 saat boyunca özellikle in vitro ilişkili olabilir, koriolan tipi membran üzerine greft, ve daha fazla geliştirmek için izin 10 gün. Eksplorasyonlar konvansiyonel histoloji ve immünohistokimya ile analiz edilebilir. Tavuk somatopleura mezoderm ile üçüncü ve dördüncü faringeal torbalar bıldırcın endoderm ilişkisinin bazı temsili sonuçları aşağıdaki-Greftler qcpn ve tavuk lenfoid hücreleri için pozitif timik epitel hücreleri elde edilen bıldırcın türetilmiş tam biçimli bir şemerik timus gösterdi.Ayrıca, sitokatin pozitif timik epitel normal morfolojik özellikler gösterdi, tipik bir retiküler mimari gösteren. Bu videoyu izledikten sonra, nasıl bıldırcın ve tavuk embriyonik dokular gen ekspresyonu çalışmalarında kullanılabilir izole etmek için iyi bir anlayışa sahip olmalı ve şemerik organlar oluşturarak da organ genetiğinin karmaşıklığını çözmeye yardımcı olabilir.

isolation-embryonic-tissues-formation-quail-chicken-chimeric-organs

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu yazıda, tavuk embriyo merkezi sinir sisteminin çeşitli bölgelerinde insan kök hücrelerinin nakli için bir yöntem mevcut. Bu...

Tavuk embriyo haline İnsan Kök Hücre Xenotransplantation

Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Bıldırcın-chick kimerik embriyo kuş nöral krest hücrelerinin göç ve nihai kaderi analiz etmek için bir yaklaşım tarif edilmiştir. Bu yöntem, aksi ayarlanmamış bir civciv embriyo içinde ayırt etmek zor göç ve farklılaşma sırasında nöral krest hücrelerinden izlemek için basit ve kolay bir tekniktir.

Çapraz türler Nakli Sinir Crest Göç ve Farklılaşma Analiz

Bu makalede, kraniofasiyal gelişimine nöral ve / veya diğer dokuların türe özgü katkılar test etmek için tasarlanmıştır kimerik embriyolar oluşturmak için bir yöntemi tarif etmektedir.

Bıldırcın-ördek Chimeras kullanma Kraniyofasiyal Kalkınma için Türlere özgü Katılımlar değerlendirilmesi

Bu makalede klasik bıldırcın-tavuk chimera sistemin roman vitro ve ovo içinde deneysel prosedürler birleştirerek organ oluşumu, çalışma Güncellenme Zamanı bir yaklaşım sağlar.

İlk - ve geç-aşamalarında Organ oluşumu kuş modelindeki keşfetmek için iki adımlı yaklaşım: timus ve paratiroid bezleri Organogenesis paradigma

Burada, embriyonik tavuk organları büyümeye Protokolü kültür bir organotypic mevcut tüp bebek. Bu yöntemi kullanarak, embriyonik tavuk doku gelişimi, kültür ortamı üzerinde kontrol yüksek derecede korunarak okudu.

Embriyonik tavuk doku gelişimi çalışmaya Organotypic kültür yöntemi

Bu makalede, kraniyofasiyal gelişim sırasında bazal ön beynin sinyal ve paternleme özelliklerini test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği anlatılmaktadır.

Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak

Bu protokol, piliç embriyolarında preadipositlerin yağ dokusundan izole edilmesi için basit bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, yüksek verim, primer kültür ve preadipositlerin adipojenik farklılaşması ile izolasyonu sağlar. Yağ Kırmızı O boyama ve lipid / DNA boyası, farklılaşma ortamı ile indüklenen izole hücrelerin adipojenik yeteneğini ölçtü.

Preadipositlerin Broiler Civciv Embriyolarından İzolasyonu

Burada, doku etkileşimlerini, 4D görüntüleme timelapse filmini (3D artı zaman), moleküler fonksiyonun küresel veya yerel bozulmasını ve sistem biyolojisi karakterizasyonunu incelemek için kullanılabilecek üç tip kuş embriyonik deri eksplant kültürü için protokolleri açıklıyoruz.

Doku Desenini ve Organogenezi İncelemek için Kuş Derisi Eksplantlarının Kullanılması

Mikroarray teknolojisi, transkriptlerin genom çapında kantitatif ölçümüne ve gen ekspresyon profiline izin verir. Bu nedenle, bu protokol, düşük miktarda toplam RNA kullanmanın fizibilitesini göstermek için 7. gün sığır embriyolarını kullanan iki renkli özel yapım bir sığır dizisinde optimize edilmiş bir teknik prosedür sağlar.

Transcriptome Profil In-vivo Üretilen Sığır pre-implantasyon Embriyolar

Öğrenin bıldırcın ve tavuk embriyonik dokularını mikrocerrahi ve enzimatik sindirimle izole etme yöntemini. Bu teknik, gen ifadesi çalışmaları ve kimerik organ oluşumu araştırmaları için kullanılabilir.

Yalıtım embriyonik doku ve timus örnek kullanarak bıldırcın-tavuk Chimeric organ oluşumu

Daha fazla video keşfet