Name: Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Keşfedin fare modelinde Staphylococcus aureus enfeksiyonuna karşı doğuştan gelen bağışıklık yanıtını gerçek zamanlı izleme yöntemiyle. Bu teknik, immünoloji ve enfeksiyon hastalıkları araştırmalarında tedavi stratejileri geliştirmeye katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ulusal kurumları, sağlık hibe R01 AI129302 (SIS için) ve Farmakoloji eğitim programı tarafından desteklenen: UC Davis başucunda banka üzerinden (NIH T32 GM099608 L.S.A için). Moleküler ve genomik görüntüleme (CMGI) Kaliforniya Üniversitesi Davis üstün teknolojik destek sağlamıştır.

Tüm fare çalışmalar incelendi ve kurumsal hayvan bakım ve UC Davis kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve hayvan refahı Yasası ve Sağlık Araştırma uzantısı Yasası kurallarına göre yapıldı. Steril eldiven hayvanlarla çalışırken kullandığınızdan emin olun.
1. kaynak ve konut fare
<ol><li>LysM-eGFP fareler C57BL/6J genetik arka plan üzerinde türetmek12daha önce açıklandığı gibi. LysM-EGFP × MyD88- / - fareler MyD88- / - fareler üzerinde bir C57BL/6J arka plan ile geçiş LysM-EGFP fareler tarafından türetme yapıp yapmayacağınızı.</li>
	<li>Bir vivaryum House fareler. Bu çalışmalar için hayvanlar Kaliforniya Üniversitesi Davis cerrahi ve tek ev aşağıdaki ameliyatla önce grupta yer. 10-16 hafta yaşları arasında fare kullanın.</li>
</ol>2. bakteriyel hazırlık ve miktar
<ol><li>Kollarındaki kaldırmak S. aureus zorlanma buz erimek için-80 ° C depolama dan ilgi. Çizgi %5 sığır kan agar tabakta. 37 ° c gece (16 h) oksijen bir kuluçka çizgili plaka kuluçkaya. Not: Bu protokol için ALC2906 SH1000 zorlanma kullanıldı. Bu zorlanma Servisi plazmid pSK236 ile Photohabdus luminescens18 luxABCDE muhabir kaset için erimiş penisilin-bağlayıcı protein 2 organizatörü içerir.</li>
	<li>Tryptic soya suyu (TSB) 0,03 g mL saf su ve basınçlı kap TSB sterilize etmek için başına TSB tozu karıştırarak hazırlayın. Soğuyunca, steril tekniği kullanarak gerekli antibiyotik ekleyin. Bu protokol için 10 µg/mL kloramfenikol18 tekerlekli sandalye Basketbolu bioluminescence luxABCDE kaset içerir pSK236 Servisi plazmid ifade için seçmek için ekleyin.</li>
	<li>3-4 ayrı kolonileri S. aureus plaka TSB 10 µg/mL kloramfenikol ile bir gecede kültür başlatmak için seçin. 37 ° c gece (16 h) incubating bir shaker bakteri kuluçkaya.</li>
	<li>Yeni bir bakteri kültürü gecede kültüründen bir örnek 1:50 TSB 10 µg/mL kloramfenikol ile sulandrarak başlatın. Kültür incubating bir shaker 200 devir/dakika ve 37 ° c</li>
	<li>S. aureus, bölme sonra iki saat izlemek optik yoğunluk 600 nm (OD600) bir Spektrofotometre üzerinde. Orta-logaritmik faz büyüme bulmak için zaman vs OD600 gözlemlemek. ALC2906 SH1000 zorlanma için 0,5 OD600 orta-logaritmik olduğunu ve 1 x 108 CFU/mL (şekil 1) bir konsantrasyon için karşılık gelir.</li>
	<li>OD600 0,5 olarak bakteri buz gibi DPBS ile 1:1 yıkayın. Bakteri 3000 x g ve 4 ° c de 10 dakika santrifüj kapasitesi Dikkatle süpernatant dikkatle boşaltmak ve ek soğutulmuş DPBS ve girdap iyice ekleyin. Bir kez daha için 3000 x g ve 4 ° c, 10 dk santrifüj</li>
	<li>Dikkatle süpernatant dikkatle boşaltmak. Bakteriyel Pelet istenen bir konsantrasyon resuspend. Bu çalışmalar, ALC2906 SH1000 3 mL toplar ve PBS, yaklaşık 2 x 108 CFU/mL bakteri konsantrasyonu için bağıntı 1.5 ml resuspend. Buz üstünde bakteri kadar kullanmak tutmak.</li>
	<li>Bakteri konsantrasyonu doğrulamak için bakteriyel Örnek 1:10,000 ve PBS 1:100,000 100 µL oranında seyreltin. Plaka 20 µL aliquots agar plaka üzerinde. Kuluçkaya brüt bir sınava 16 h. sayısı CFUs için oksijen bir kuluçka 37 ° C'de ve bakteri konsantrasyonu ertesi gün hesaplayın.</li>
</ol>3. excisional deri Wounding ve S. aureus ile aşı
<ol><li>0.03 mg/mL buprenorfin hidroklorür (~0.2 mg/kg) 100 µL her fare ile mayi enjeksiyon için yönetmek.</li>
	<li>Yirmi dakika sonrası enjeksiyon, bir odası ile 2-3 LPM oksijen ile % 2-4 isoflurane farelerde yer 2-4. Fareler tam anestezi sonra tek tek bir burun konisi için 2-3 LPM oksijen ile % 2-4 isoflurane bağlı fare aktarın. Fareler tamamen sıkıca başparmak ve işaret parmağı arasında her arka pençe pinching tarafından anestezi doğrulayın. Hayvan için çimdik yanıt vermezse sonraki adıma geçin.</li>
	<li>Arkadaki fare 2 inç Bölüm 1 santim elektrik makasları ile tıraş ve kürk kupürleri temiz silin veya gazlı bez kullanarak alanı boşaltın. Aşırı iltihap neden olabilir çünkü depilatory losyon kullanmaktan kaçının.</li>
	<li>Temiz fare arkası ilk % 10 povidone-iyot batırılmış gazlı bez ve sonra % 70 etanol ile gazlı bez ıslanmış. Cerrahi alan merkezden dışa doğru hareket bir spiral düzende alanı temizleyin. Ameliyat öncesi kurumasını cerrahi alan yaklaşık 1 dakika bekleyin.</li>
	<li>
Traş iki parmak arasında gevşek fare geri tutun ve steril 6 mm punch biyopsi hazırlanan cerrahi alan ortasındaki sıkıca bastırın. Cildi gergin çekmeyin.
	<ol>
<li>Anahattın en az bir bölümünde deri yoluyla tamamen keser cilt üzerinde dairesel bir anahat oluşturmak için punch biyopsi twist. Temel fasya veya doku kesmemeye dikkat et.</li>
		<li>Steril makas ve forseps epidermis ve punch biyopsi tarafından baskılı dairesel desen DermIS ile kesmek için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. S. Aureus aşı
<ol><li>28 G insülin şırınga ile istenen kollarındaki bakteriyel inoculant doldurun. Bu çalışmada, 1 x 108 CFU/mL bir konsantrasyon yönetmek (50 µL). Birimin fazla 100 µL yönetmek değil.</li>
	<li>
İnoculant fasya ve doku yara arkadaki fare ortasına arasında 50 µL enjekte. İnoculant en az kaçağı veya dağılım yarayla ortasındaki bir kabarcık oluşturur emin olun.
	<ol>
<li>Dermis kenara çek, şırınga doku neredeyse paralel tutun ve direnç ani bir düşüş, fasya piercing gösterir hissedilir kadar yavaş yavaş şırınga dokusu içine itin. Dikkatle şırınga yaranın ortasına kurşun ve inoculant yavaş yavaş dağıtmak. Şırıngayı yavaşça hayvandan kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Steril PBS aynı hacmi yukarıda açıklandığı gibi hastalık bulaşmamış tek hayvan yaralar enjekte.</li>
	<li>Hayvan onun kafes dönmek. A ısı lamba altında veya üstünde bir Isıtma yastığı kafes yerleştirin ve hayvan kurtarma anestezi kadar izlemek.</li>
</ol>5. vivo BLI ve FLI
<ol><li>Araç yazılım aracılığıyla tüm hayvan Imager başlatın. 2-3 LPM oksijen ile % 2-4 isoflurane alma odası farelerde anestezi. Anestezi nosecones Görüntüleyici içinde teslim.</li>
	<li>
Yaralı ve virüslü fare Imager yerleştirin. Öyle ki yara gibi dümdüz fareyi getirin. Aşağıdaki sıra set-up fareler görüntü için kullanın.
	<ol>
<li>Işıma ve fotoğraf görüntüleme modu olarak seçin. 1dk küçük binning ve F/stop 1 (ışıma) ve durdurmak F/8 (fotoğraf) maruz kalma zamanı. Emisyon filtre açıktır. Görüntü kaydetmek için Al düğmesini tıklatın.</li>
		<li>Floresan ve fotoğraf görüntüleme modu olarak seçin. Pozlama süresi 1 s (floresan) küçük binning ve F/stop 1 ve durdurmak F/8 (fotoğraf) 465/30 bir uyarma dalga boyu ile de nm ve emisyon dalga boyu 520/20 nm yüksek lamba yoğunluğu ile. Görüntü kaydetmek için Al düğmesini tıklatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvan onun kafes ve İzleyicisi anestezi kurtarma kadar geri dönmek.</li>
	<li>Görüntü fareler yukarıda açıklandığı gibi her gün.</li>
</ol>6. görüntü analizi
<ol><li>Sayısal için görüntüleri aç.</li>
	<li>Faiz (ROI) büyük bir dairesel bölgeye cilt görüntüdeki her fare için çevreleyen dahil olmak üzere tüm yara alan üzerine getirin. Nötrofil içinde vivo FLI EGFP sinyalleri ve içinde vivo BLI S. aureus sinyalleri birkaç gün sonra yara kenar genişletmek ve bu çalışmalarda (şekil 2A ve 2B) dahil edildi. Ölçü ROI ve her fare için ortalama akı için kayıt değerlerini tıklatın. Karşı her sinyal (p/s) Zaman ortalama akı arsa.</li>
	<li>
Nötrofiller veya S. aureus yarada kesin rakamlar isterseniz, aşağıdaki deneyler yapmak.
	<ol>
<li>Nötrofil içinde vivo FLI EGFP sinyalleri sayılara ilişkilendirmek için yukarıda açıklandığı gibi C57BL/6J fareler yara ve LysM-EGFP veya LysM-EGFPxMyD88- / - bağış nötrofil (5 x 105 1 x 107) kemik iliği elde edilen bir dizi transfer doğrudan farklı yaralar üstüne. Görüntü yukarıdaki ve correlate açıklandığı gibi içinde vivo FLI EGFP nötrofil bilinen miktara sinyalleri.</li>
		<li>S. aureus CFU içinde vivo BLI sinyalleri ilişkilendirmek için yara ve yukarıda açıklandığı gibi fareler bulaştırmak. 1. gün sonrası enfeksiyon kayıt içinde vivo BLI sinyalleri fareler ve hemen üzerinde ötenazi ve leşleri chill. Yara tüketim, doku homojenize ve agar gecede kuluçka için üzerinde bakteriyel dilutions plakası. Ertesi gün, koloniler CFU yara belirlemek için say.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yara kenar ve yara (cm2) alanının ölçü üzerinde dairesel bir yatırım Getirisi yara iyileşme uyum ölçmek ve zaman (şekil 2C) vs temel kesirli değişikliğinden çizmek için.</li>
</ol>7. istatistik
Not: Tüm verileri sunulmaktadır olarak ortalama ±SEM. p < 0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul
<ol><li>Holm-Sidak yöntemini kullanarak tek bir günde iki grup arasındaki farkları belirlemek, Alfa ile 0,05 = ve her zaman noktası tek tek, tutarlı bir SD varsayarak olmadan analiz</li>
	<li>Tukey çoklu karşılaştırmalar posttest ile tek yönlü ANOVA tarafından aynı gün birden çok grubu arasındaki farkları karşılaştırın. Hayatta kalma deneysel gruplar arasında Mantel-Cox yöntemi ile analiz edildi.</li>
</ol>

<ol><li>Moran, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-Resistant+S.+aureus+Infections+among+Patients+in+the+Emergency+Department%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department.</a> New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).</li>
<li>Suaya, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+cost+of+hospitalizations+associated+with+Staphylococcus+aureus+skin+and+soft+tissue+infections+in+the+United+States+from+2001+through+2009%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009.</a> BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296(2014).</li>
<li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antibiotic+resistance+crisis%3A+part+1%3A+causes+and+threats%5BTitle%5D)+AND+%22P+%26+T+%3A+a+Peer-Reviewed+Journal+for+Formulary+Management%22%5BJournal%5D)">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> P & T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).</li>
<li>Blaser, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+use+and+its+consequences+for+the+normal+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome.</a> Science. 352 (6285), 544-545 (2016).</li>
<li>Hilliard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-Alpha-Toxin+Monoclonal+Antibody+and+Antibiotic+Combination+Therapy+Improves+Disease+Outcome+and+Accelerates+Healing+in+a+Staphylococcus+aureus+Dermonecrosis+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).</li>
<li>Proctor, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+for+Staphylococcus+aureus+vaccines%3A+clinical+and+basic+science+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges.</a> European Cells & Materials. 30, 315-326 (2015).</li>
<li>Mölne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Neutrophil+Leukocytes+in+Cutaneous+Infection+Caused+by+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus.</a> Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).</li>
<li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).</li>
<li>Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils%2C+from+Marrow+to+Microbes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Neutrophils, from Marrow to Microbes.</a> Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).</li>
<li>Miller, L. S., Cho, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+against+Staphylococcus+aureus+cutaneous+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).</li>
<li>Hasenberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catchup%3A+a+mouse+model+for+imaging-based+tracking+and+modulation+of+neutrophil+granulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes.</a> Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).</li>
<li>Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+of+enhanced+green+fluorescent+protein+into+the+lysozyme+gene+creates+mice+with+green+fluorescent+granulocytes+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages.</a> Blood. 96 (2), 719-726 (2000).</li>
<li>Falahee, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Toxin+Regulates+Local+Granulocyte+Expansion+from+Hematopoietic+Stem+and+Progenitor+Cells+in+Staphylococcus+aureus-Infected+Wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">α-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds.</a> Journal of immunology. 199 (5), Baltimore, Md. 1772-1782 (2017).</li>
<li>Kim, M. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Neutrophil+Infiltration+during+Cutaneous+Wound+Healing+and+Infection+Using+Fluorescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging.</a> Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).</li>
<li>Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+two-photon+microscopy+of+host-pathogen+interactions+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+skin+abscess+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation.</a> Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).</li>
<li>Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+recruited+through+high+endothelial+venules+of+the+lymph+nodes+via+PNAd+intercept+disseminating+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).</li>
<li>Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+TLR2-Deficient+and+MyD88-Deficient+Mice+Are+Highly+Susceptible+to+Staphylococcus+aureus+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection.</a> The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).</li>
<li>Miller, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MyD88+Mediates+Neutrophil+Recruitment+Initiated+by+IL-1R+but+Not+TLR2+Activation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus.</a> Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).</li>
<li>Macedo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+is+impaired+in+MyD88-deficient+mice%3A+a+role+for+MyD88+in+the+regulation+of+wound+healing+by+adenosine+A2A+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors.</a> The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).</li>
<li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+IL-1%CE%B2+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047(2012).</li>
<li>Granick, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+recognition+by+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+via+TLR2%2FMyD88%2FPGE2+stimulates+granulopoiesis+in+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds.</a> Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).</li>
<li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+survival+and+c-kit%2B-progenitor+proliferation+in+Staphylococcus+aureus-infected+skin+wounds+promote+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution.</a> Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).</li>
<li>Foster, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+evasion+by+staphylococci%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immune evasion by staphylococci.</a> Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).</li>
<li>Gordon, R. J., Lowy, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+Methicillin-Resistant+Staphylococcus+aureus+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection.</a> Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).</li>
<li>Cho, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-derived+IL-1%CE%B2+Is+Sufficient+for+Abscess+Formation+in+Immunity+against+Staphylococcus+aureus+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice.</a> PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).</li>
<li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+post-arthroplasty+Staphylococcus+aureus+joint+infection+to+evaluate+in+vivo+the+efficacy+of+antimicrobial+implant+coatings%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings.</a> PLoS ONE. 5 (9), e12580(2010).</li>
<li>Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stably+Luminescent+Staphylococcus+aureus+Clinical+Strains+for+Use+in+Bioluminescent+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging.</a> PLoS ONE. 8 (3), e59232(2013).</li>
<li>Dillen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonally+expanded+%CE%B3%CE%B4+T+cells+protect+against+Staphylococcus+aureus+skin+reinfection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Clonally expanded γδ T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).</li>
</ol>

Lloyd S. Miller MedImmune, Pfizer, Regeneron ve Chan Soon-Shiong Nanthealth Vakfı ve raporlanan çalışma ile ilgili olmayan danışmanlık ücretleri Noveome Biotherapeutics ve Chan Soon-Shiong Nanthealth Vakfı Hibe destek aldı Bu yazıda. Diğer yazarlar ifşa gerek yok.

Kollarındaki S. aureus kullanmak S. aureus enfeksiyon modelleri floresan nötrofil muhabir fare gelişmiş teknikler ile birlikte enfeksiyon tüm hayvan içinde vivo optik görüntüleme bilgimizi doğuştan gelen gelişmiş enfeksiyon bağışıklık yanıtı. Önceki çalışmalar LysM-EGFP fareyi kullanarak yukarı bir S. aureus enfekte yara enfeksiyonu ilk 24 saat içinde için 1 x 107 nötrofil işe14ve nötrofil yara işe onların yarı ömrü 1,5 gün 5 gün uzatmak olduğunu göstermiştir ...

Staphylococcus aureus Deri ve yumuşak doku enfeksiyonları (SSTIs), Amerika Birleşik Devletleri1çoğunluğu (S. aureus) hesapları. Görülme sıklığı metisiline dirençli S. aureus (MRSA) enfeksiyonlar giderek insan sebat mekanizmaları ve yeni tedavi stratejileri keşfi motive son yirmi yılda2, artmıştır. Standart tedavi MRSA enfeksiyonları için sistemik antibiyotik tedavisi, ama MRSA süresi3 giderek antibiyotiklere dirençli hale gelmiştir ve bu ilaçlar özellikle olumsuz sağlık etkileri, neden ana bilgisayarın faydalı microbiome düşürebilir Çocuk4. Preklinik çalışmalar MRSA enfeksiyonları5tedavi etmek için alternatif stratejiler inceledik ama bu yaklaşımlar kliniğe çeviren konak immün yanıt-e doğru6önlemek virülans faktörleri ortaya çıkması nedeniyle zorlu kanıtlamıştır. Ana bilgisayar-patojen dynamics bu sürücüyü S. aureus SSTIs incelemek için biz noninvaziv birleştirmek ve nötrofil sayısının boyuna dökümanları yara yatağına bakteriyel bereket Kinetik ölçüleri ile işe ve alanına yara.
Nötrofil en bol dolaşımdaki akyuvar insanlar ve ilk yardım ekipleri bir bakteriyel enfeksiyon7vardır. Nötrofil S. aureus enfeksiyonlar Reaktif oksijen türleri, proteaz, antimikrobiyal peptidler ve fonksiyonel yanıt üretimi dahil olmak üzere bakterisidal mekanizmaları nedeniyle karşı etkili ana müdahale için gerekli bir bileşeni vardır fagositoz ve nötrofil hücre dışı tuzak üretim8,9dahil olmak üzere. İnsan gibi kronik granulomatous hastalığı ve Chediak-Higashi sendromu, nötrofil işlevindeki genetik kusurların hastalarda S. aureus enfeksiyon bir artış duyarlılık gösterin. Buna ek olarak, hastaların genetik (örneğin Konjenital Nötropeni) ve Edinsel (Nötropeni kemoterapi hastalarda görülen) gibi kusurları nötrofil rakamlarla da S. aureus enfeksiyon10' a son derece açıktır. S. aureus enfeksiyonlar takas nötrofil önemi göz önüne alındığında, bağışıklık kapasitelerinin artırılması veya sayıları S. aureus lezyon içinde ayarlama enfeksiyon çözümünde etkili bir strateji ispat edebilir.
Son on yıl içinde Floresans nötrofil muhabirlerle transgenik fareler onların ticareti11,12incelemek için geliştirilmiştir. Nötrofil muhabir fareler bütün hayvan görüntüleme teknikleri ile birleştirerek kronolojik zamanmekansal analiz nötrofil doku ve organlarında izin verir. S. aureuskollarındaki suşları ile birleştirildiğinde, S. aureus bereket karşılık olarak nötrofil birikimi izlemek mümkündür ve sebat bakteriyel virülans bağlamında doğrudan ve dolaylı olarak faktörler etkilenen doku13,14,15,16nötrofil numaraları huzursuz.
Fareler S. aureus virülans ve bağışıklık kaçırma mekanizmaları için insanlardan daha az duyarlı değildir. Bu nedenle, farelerde vahşi-tip etkinliğini araştırmak için ideal bir hayvan modeli olmayabilir bir kronik S. aureus tedavisi için tedavi verilen enfeksiyon. MyD88-eksik fareler (yani, MyD88- / - fareler), fonksiyonel interleukin-1 reseptör (IL-1R) ve sinyal, Toll benzeri reseptör (TLR) göre S. aureus enfeksiyon Haritayı büyük duyarlılık yoksun bir immün fare zorlanma farelerde vahşi-tip17 ve18cilt S. aureus enfeksiyon bir siteye nötrofil kaçakçılığı bir bozulma. Floresan nötrofil muhabir MyD88- / - farelerde sahip bir fare yük gelişimi için geçerli nötrofil karşılaştırıldığında S. aureus enfeksiyon tedavisinde terapiler etkinliğinin araştırılması için alternatif bir model sağlamıştır muhabir fareler.
Bu iletişim kuralı ' S. aureus enfeksiyon farelerde immün LysM-EGFP × MyD88- / - karakterize ve zaman ders yapmak ve enfeksiyon LysM-EGFP fareler ile karşılaştırın. LysM-EGFP × MyD88- / - fareler does değil karar vermek bir kronik enfeksiyon geliştirmek ve % 75 enfeksiyon 8 gün sonra yenik düşer. İlk nötrofil işe alım önemli bir üründe 72 h enfeksiyon inflamatuvar aşamasının üzerinden oluşur ve % 50 daha az sayıda nötrofil enfeksiyon ikinci aşaması sırasında işe. - / - Fareler bu belirli yapar MyD88 zorlanma S. aureus enfeksiyon için geçerli göre hedefleme yeni tedavi teknikleri etkinliğini değerlendirmek için titiz preklinik modeli LysM-EGFP × artan duyarlılık modelleri vahşi tipi fareler, özellikle enfeksiyon karşı doğuştan gelen bağışıklık yanıtı artırmak amaçlayan teknikleri kullanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>14 mL Polipropilen Yuvarlak Tabanlı Boru</td><td>Falcon</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>6 mm Tek Kullanımlık Biyopsi Punch</td><td>Integra Miltex</td><td>33-36</td><td></td></tr><tr><td>Biyolüminesan S. aureus</td><td>Lloyd Miller, Johns Hopkins&nbsp;</td><td>ALC 2906 SH1000</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Kanı Agar, %5, Hardy Diagnostics</td><td>VWR</td><td>10118-938</td><td></td></tr><tr><td>Buprenoprhine hidroklorür enjekte edilebilir</td><td>Western Medical Supply</td><td>7292</td><td>0.3 mg/mL</td></tr><tr><td>C57BL/6J Fareler</td><td>Jackson Labratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Kloramfenikol (kristal toz)</td> <td>Fisher BioReagents</td><td>BP904-100</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (1x)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin Şırıngaları</td><td>Becton, Dickson and Company</td><td>329461</td><td>0.35 mm (28 G) x 12.7 mm (1/2 '')</td></tr><tr><td>IVIS Spectrum In Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Living Image Software &ndash; IVIS Spektrum Serisi</td><td>, Perkin Elmer</td><td>128113</td><td></td></tr><tr><td>LysM-eGFP Fareler</td>, <td>Thomas Graff, Albert Einstein, New York Koleji&nbsp;</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Mikrohacim Spektrofotometresi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND-2000</td><td></td></tr><tr><td>MyD88 KO Fareler</td><td>Jackson Labratory</td><td>009088</td><td></td></tr><tr><td>Dokumasız süngerler</td><td>AMD- Ritmed Inc</td><td>A2101-CH</td><td>5 cm x 5 cm</td></tr><tr><td>Povidone İyot %10 Çözelti</td><td>Aplicare</td><td>697731</td><td></td></tr><tr><td>Prism 7.0</td><td>GraphPad Yazılım</td><td>Lisansı&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Suyu</td><td>Becton, Dickson ve Şirket</td><td>211825</td><td></td></tr></tbody></table>

bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı staphylococcus aureus enfeksiyon

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Staphylococcus aureus (S. aureus) enfeksiyonları, metisiline dirençli lekeler, dahil olmak üzere sağlık sistemi üzerinde büyük bir yük vardır. Her yıl tırmanma S. aureus enfeksiyonu insidans hızları ile onun patojen ek araştırma için bir talep vardır. Ana bilgisayar-patojen yanıt bizim anlayışı ilerletmek ve etkili tedavi gelişmesine yol bulaşıcı hastalık hayvan modelleri. Nötrofil S. aureus enfeksiyonları abse enfeksiyonla duvar ve bakteriyel Gümrükleme kolaylaştırmak için oluşturarak denetler doğuştan gelen bağışıklık yanıtı bir birincil rol oynamaktadır; bir S. aureus deri enfeksiyonu genelde sızmak nötrofil sayısı hastalık sonucu ile karşılıklı olarak ilişkilendirir. (Öncelikle nötrofil tarafından ifade edilir) lizozim M (LysM) organizatörü bölge takılı gelişmiş yeşil flüoresan protein (EGFP) sahip, LysM-EGFP fareler ile birlikte kullanıldığında içinde vivo bütün hayvan Floresans görüntüleme (FLI) sağlayan bir nötrofil göç Noninvazif ve boyuna miktarının yaralı deri içine anlamına gelir. Kollarındaki S. aureus ile birleştirildiğinde zorlanma ve sıralı içinde vivo bütün hayvan kollarındaki görüntüleme (BLI), boyuna nötrofil işe alım dinamikleri ve içinde vivo bakteri yükü yerinde izlemek mümkün olduğunu enfeksiyon çözünürlük veya ölüm enfeksiyon başlangıcı üzerinden imzalat farelerde. Fareler etkili kolonizasyon ve enfeksiyon insanlarda kolaylaştırmak virülans faktörleri S. aureus tarafından üretilen bir dizi daha dayanıklıdır. İmmünyetmezligi fareler sağlar kalıcı S. aureus incelemek için daha duyarlı hayvan modeli enfeksiyonlar ve tedavi yeteneği doğuştan gelen bağışıklık yanıtı artırmak için. Burada, S. aureus Cilt yara enfeksiyonu araştırmak için vahşi-LysM-EGFP farelerde tip birlikte yanıt-e doğru MyD88-eksik fareler (LysM-EGFP × MyD88- / - fareler) için yetiştirilen LysM-EGFP farelerde karakterize. Spektral eş zamanlı algılama çalışma nötrofil işe alım dinamiği içinde vivo FLI, içinde vivo BLI, kullanarak bakteri yükü kullanarak etkin ve boyuna ve Noninvazif zamanla iyileşmesi.

LysM-EGFP × MyD88- / - fareler LysM EGFP fareler S. aureus enfeksiyona daha duyarlı
Bu çalışmada, ALC290618, kullanılan S. aureus suşu canlı ve aktif metabolize bakterilerden kollarındaki sinyalleri üretir lux yapısı içeren bir plazmid ile inşa. Fareler aşısını, içinde vivo bioluminescence (BLI) teknikleri Imaging boyuna virüslü bir yara içinde bakteri yükü ölçm...

Bir yaklaşım Kutanöz yaralama için doğuştan gelen bağışıklık yanıtının gerçek zamanlı algılama ve Staphylococcus aureus enfeksiyon farelerin için tanımlanır. Karşılaştırma LysM-EGFP tarafından (floresan nötrofil sahip) fareler LysM EGFP ile immünyetmezligi fare zorlanma olacak, biz anlayışımız enfeksiyon ve enfeksiyon mücadele için yaklaşımlar gelişimi önceden.

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...

Bakteri yükünü ve nötrofil inkişacını aynı anda izleyen teknikler, Staph aureus kalıcılığının mekanizmaları ve tedavi stratejilerinin etkinliği hakkında bilgi sağlayabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, enfeksiyon süresi boyunca canlı bir konakta birden fazla parametrenin uzunlamasına ölçülebiliyor olmasıdır. Yaranın fare dorsuma nereye yerleştirilecek, derinin nasıl çıkarılabildiğini ve yaranın Staph aureus ile nasıl aşılamak için olduğunu göstermek çok önemlidir.Biyolüminesans Staph aureus'un buz üzerindeki negatif 80 santigrat santigrat deposundan gelen gerilimi eriterek başlayın. Kültürü %5'lik büyükbaş kan agar tabağına almadan önce. 37 santigrat derecede bir gecede kuluçka için.Ertesi sabah, Staph aureus plakasından üç ila dört ayrı koloniyi tripptik soya suyuna veya TSB'ye aktarın. 37 santigrat derece bir gecede sallayarak kuluçka için kloramfenikol mililitre başına 10 mikrogram ile desteklenmektedir. Ertesi sabah, 120 mikrolitre kültür örneğini altı mililitre TSB'de seyreltin.Kloramfenikol mililitre başına 10 mikrogram ile, 37 santigrat derece iki saatlik kuluçka için, ve dakikada 200 rotasyon. 600 nanometredeki optik yoğunluk 0,5'e ulaştığında, üç mililitre bakteriyel süspansiyonu 10 mililitre buz gibi DPBS'ye aktarın. Supernatant dikkatle dekanting sonra, pelet ek soğutulmuş DPBS ekleyin ve iyice yeniden askıya bakteri girdap.İkinci bir santrifüjden sonra, bakteriyel peleti 1,5 mililitre pBS'lik buz üzerinde yeniden askıya alın. Bakteri konsantrasyonu doğrulamak için, seri 4 1 x 10 bir faktör ile bakteri süspansiyon 100 mikrolitre seyreltmek ve 1 x 10 5, taze PBS. Ve her bir agar plakası üzerinde her seyreltme plaka 20 mikrolitre.37 santigrat derece bir gecede kuluçka sonra, önceki gün bakteri konsantrasyonu hesaplamak için brüt muayene ile koloni oluşturan birimlerin sayısını saymak. Alıcı hayvanların eksizyonel deri yarası için, farenin arka tarafında bir çift inç bölüm tıraş önce, parmak çimdik yanıt eksikliği onaylamak. Herhangi bir sokak kıllarını çıkarmak için hafifçe silin.Ve ardışık% 10 povidon iyot ile maruz kalan cilt dezenfekte, ve 70% etanol gazlı bez uygulamaları batırılmış. Cerrahi alanın merkezinden dışarı doğru hareket eden spiral bir desen. Cildin yaklaşık bir dakika kurumasını sağladıktan sonra, hazırlanan cerrahi alanın ortasında steril altı milimetrelik bir yumruğuna sıkıca basın.Twist yumruk biyopsi cilt üzerinde dairesel bir anahat oluşturmak için, bu tamamen cilt dokusu ile keser, ve anahat en az bir bölümü. Altta yatan fasya veya doku kesmek için değil özen. Sonra steril makas kullanın, ve forceps, epidermis ve dermis ile kesmek için, yumruk biyopsi sizler tarafından baskılı dairesel desen aşağıdaki.Staph aureus aşısı için, hazırlanan biyolüminesans bakteriyel inokülant 50 mikrolitre ile 28 gauge insülin şırınga doldurun. Ve yaralı hayvanın dermisini kenara çekmek için parmağınızı kullan. Şırıngayı dokuya neredeyse paralel tutarak, direncinde ani bir azalma hissedene kadar şırıngayı yavaşça dokuya takın.Fasyapiercing gösteren. Yaranın ortasına yerleştirilen iğne ile, yavaşça inokülan tüm hacmi teslim. Inokülenin yaranın merkezinde en az sızıntı veya dağılımla bir kabarcık oluşturduğundan onaylayın.Ve şırıngayı hayvandan yavaşça çıkarın. Sonra tam iyileşme kadar ısı ve izleme ile kafese hayvan dönün. Yaralama ve enfeksiyon dan sonra, ve deney sırasında günlük, bir biyolüminesans ve floresan görüntüleyici içinde anestezili fare yerleştirin, yara mümkün olduğunca düz.Görüntüleyici yazılımında, görüntüleme modları olarak parlaklık ve fotoğraf seçin. Pozlama süresi küçük binning bir dakika, Parlaklık için F /Stop 1, fotoğraf için F /Stop 8 ve emisyon filtresi için açık önceden ayarlanmış olmalıdır. Ardından görüntüyü kaydetmek için acquire'e tıklayın.In vivo floresan görüntüleme için, görüntüleme modları olarak floresan ve fotoğraf seçin. Pozlama süresi küçük binning bir saniye için önceden ayarlanmış olmalıdır, F / Stop 1 floresan için, F / Stop 8 fotoğraf için, ve Uyarma ve Emisyon dalga boyları 465 üzerinde 30 nanometre, ve 520 üzerinde 20 nanometre, yüksek lamba yoğunluğu ile, sırasıyla. Ardından resmi kaydetmek için edinme'yi tıklatın.Her iki görüntü kümesini de elde ettikten sonra, hayvanı tam iyileşmeye kadar izleyerek kafesine geri döndürün. Görüntü analizi için, uygun bir görüntü analizi yazılım programında sayısallaştırılacak görüntüyü açın ve varsayılan dairesel ilgi alanını çevredeki cilt de dahil olmak üzere tüm yara alanının üzerine yerleştirin. İlgi bölgesini ölçü'ye tıklayın ve her sinyalin ortalama akının zamana göre çizilmesine izin vermek için yaranın ortalama akısı değerlerini kaydedin.Yara iyileşmesini ölçmek için, yara kenarına dairesel bir ilgi bölgesi sığdırın ve yaranın alanını santimetre kare şeklinde ölçün, taban çizgisinden zamana göre kısmi değişimin çizilmesine izin verin. Bu temsili deneyde, koşullu EGFP ekspresyonu miyeloid farklılaşma primer yanıtı 88, Veya MyD88 nakavt fareler, Staph aureus aşısı için daha büyük bir duyarlılık gösterdi, olmayan koşullu EGFP ifade hayvanlar yaptı. Enfeksiyonun ilk sekiz gününde %80 ölümcüllük gözlenir.Her iki fare türü de enfeksiyondan hemen sonra vücut ağırlıklarının yaklaşık %5'ini kaybetti. Ancak, koşullu EGFP fareler ifade gün iki orijinal ağırlıkları kurtarıldı. MyD88 fareler değil iken.Staph aureus enfeksiyonu varlığında yara kapanması iki suş arasında farklı değildi. Ancak, steril yaralı MyD88 nakavt fareler, yara iyileşmesi önemli bir kusur vardı, koşullu EGFP hayvanları ifade göre. Tüm hayvan görüntüleme daha yüksek bir bakteriyel yük ortaya, MyD88 nakavt hayvanların yaralarında artan biyolüminesans sinyal kanıtlandı, koşullu EGFP hayvanları ifade göre.MyD88 nakavt hayvanların enfekte olmayan yaralar için ilk nötrofil ticaretinde% 40 azalma, ayrıca koşullu EGFP hayvanları ifade göre gözlendi. Staph aureus'un 7. Bakterileri dağıtmadan önce, şırıngada hava kabarcıkları olmadığından ve iğnenin yerinin yaranın ortasına doğru şekilde yerleştirildiğinden emin olun.Hayvan dokuları, ilgi ve yara bakteriyel yayma proteinlerin ekspresyonunu ölçmek için son noktada hasat edilebilir. Staph aureus insanlar için bulaşıcıdır. Bu nedenle, kişisel koruyucu ekipman bakteri işleme giyilmelidir, ve dikkatli egzersiz yapılmalıdır, patojen içeren bir şırınga kullanırken.Bu teknik enfeksiyona karşı konaklar doğuştan bağışıklık yanıtı geliştirmek Staph aureus enfeksiyonları için biyolojik tedavilerin kullanımını keşfetmek yardımcı oldu.

a-mouse-model-to-assess-innate-immune-response-to-staphylococcus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Murin deri ve yumuşak doku enfeksiyonu modeli metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve ev sahibi immünolojik yanıtlar virülans fonksiyonu değerlendirmek için kullanılmaktadır. Burada, biz, deri ve yumuşak doku enfeksiyonu için bir deri altı enfeksiyon modeli sundu.

Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA)

Source: Zhang, C., et al., Development and Assessment of Intracellular Infection Models for Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2025)The video demonstrates the isolation of kidneys containing Staphylococcus aureus-infected macrophages, followed by tissue homogenization to release intracellular bacteria. It quantifies bacterial persistence within macrophages in control and antibiotic-treated groups by counting colony-forming units.

Assessing Intracellular Bacterial Persistence and Antibiotic Resistance in a Mouse Model

Bu video, GFP eksprese eden nötrofillere sahip bağışıklığı baskılanmış, transgenik bir farede bir enfeksiyon bölgesindeki nötrofil alım dinamiklerini incelemek için in vivo görüntülemeyi göstermektedir. Bir enfeksiyona neden olmak için ışıldayan bakterilerin enjekte edilmesini içerir. Bu, izlenmesi görüntüleme ile yapılan enfeksiyon bölgesine nötrofil alımına yol açar.

Bir Murin Modelinde Enfeksiyon Bölgesinde Nötrofil Alım Dinamiklerinin ve Bakteri Yükünün İzlenmesi

Bu videoda, cilt yarası enfeksiyonunun bir fare modeli oluşturmak için bir teknik gösterilmektedir. Nötrofillerde bir floresan proteini eksprese etmek için tasarlanmış fareleri, patojenik bir bakteri olan genetik olarak değiştirilmiş bir biyolüminesan Staphylococcus aureus ile enfekte ettikten sonra. Enfeksiyon bölgesindeki bakteri yükü ve nötrofil alım dinamikleri, tüm hayvan görüntülemesi kullanılarak incelenebilir.

Bakteriyel Bir Patojene Karşı Bağışıklık Tepkisini İncelemek için Bir Murin Deri Yarası Enfeksiyonu Modeli

Bu video, beyne göç eden otoreaktif T hücrelerini aktive etmek için miyelin türevi peptitleri bir adjuvan ile enjekte ederek deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) indükleme yöntemini göstermektedir. Boğmaca toksini, kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için uygulanır ve bu T hücrelerinin ve diğer bağışıklık hücrelerinin beyne girmesine izin verir. Bu bağışıklık hücreleri demiyelinizasyona neden olarak sinir iletiminin bozulmasına ve EAE gelişimine yol açar.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Oluşumu

Hayvan modelleri kronik inflamasyon gelişimine katkıda konak ve patojen spesifik mekanizmaları tanımlarken paha biçilmez araçlardır olduğu kanıtlanmıştır. Burada, lokal ve sistemik inflamasyon bölgelerinde ilerlemesini değerlendirmek için insan patojeni Porphyromonas gingivalis ve detay metodolojileri ile ağızdan enfeksiyondan bir fare modeli tarif eder.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Bu protokol, yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının fiziksel özelliklerini, immün yanıtını ve in vivo koruyucu etkisini hazırlar ve değerlendirir.

Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi

Staphylococcus aureus (S. aureus) tüm vücuda yayılma yeteneğine sahiptir, bu da kalıcı ve tekrarlayan enfeksiyonlara neden olur. Bu süreçleri daha iyi anlamak için, bu çalışma S. aureus için bir hücre içi enfeksiyon modeli oluşturmaktadır. Bu model, hücre içi enfeksiyonların arkasındaki mekanizmaları araştırmak için çok önemli bir temel sağlayacaktır.

Staphylococcus aureus için Hücre İçi Enfeksiyon Modellerinin Geliştirilmesi ve Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, implant ile ilişkili enfeksiyonları araştırmak için subkutan dorsal implantasyon kullanan, patofizyolojik mekanizmaların kapsamlı bir şekilde araştırılmasını sağlayan ve hedefe yönelik terapötik stratejilerle tanı kriterlerinin geliştirilmesini destekleyen bir fare modelini tanımlamaktadır.

Farelerde İmplantla İlişkili Enfeksiyonların Hayvan Modeli

Metisiline dirençli nedeniyle deneysel rat endokardit...

Metisiline Dirençli Deneysel Endokardit Modeli<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) Sıçan

Keşfedin fare modelinde Staphylococcus aureus enfeksiyonuna karşı doğuştan gelen bağışıklık yanıtını gerçek zamanlı izleme yöntemiyle. Bu teknik, immünoloji ve enfeksiyon hastalıkları araştırmalarında tedavi stratejileri geliştirmeye katkı sağlar.

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Daha fazla video keşfet