Name: Sıçan Adrenokortikal hücreleri ve deneyleri Steroidogenic fonksiyonların birincil kültür (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 33 s
Description: Öğrenin sıçan adrenal hücrelerinin birincil kültür yöntemini steroidogenez ve stres hastalıkları araştırmaları için. Bu protokol enzimatik sindirim ve ACTH stimülasyonu ile fonksiyonel hücreler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Ulusal Bilim Konseyi Tayvan (NSC102-2320-B-037-008-MY3) ve bir ulusal Cheng-Kung Üniversitesi Hastanesi araştırma bursu (NCKUH-10102045) bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Hayvan konular da dahil olmak üzere tüm yordamları kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Kaohsiung Tıp Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. deneysel bir işlem
<ol><li>Yetişkin (8-12 haftalık) kadın/erkek SD fareler CO2 ötenazi tarafından kurban.</li>
	<li>% 70 etanol uygulamak ve cilt içine emilir ve kağıt mendil ile cildinizi silin sağlar.</li>
	<li>Sırtüstü pozisyonda temiz plastik tabakta sıçan koymak.</li>
	<li>Orta çizgi, "dış" kavisli Forseps ile cilt kaldırın ve "Y" şekil (subcostal açıyla kalça seviyesinden) oluşturarak bir künt diseksiyon gerçekleştirmek.<ol>
<li>Makas % 70 etanol ile durulayın ve sonra aynı zamanda bir "Y" şekil oluşturma kas kesti.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mide arkasında sol böbreküstü bezi bul. Not: sağ böbrek üstü derinden karaciğer bulunabilir.<ol>
<li>Bir çift forseps mide veya karaciğer Asansör ve adrenal başka bir eğri Forseps ile ayırmak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Böbreküstü bezleri steril bir tabak içine koyarak sonra iyi Forseps ile adrenal kapsül dikkatli bir şekilde çıkarın.</li>
	<li>Makas hassas çifti ile adrenal biraz küçük parçalar halinde kesip serum-Alerjik Dulbecco bit'ın modifiye kartal orta (DMEM) / F-12 orta.</li>
	<li>
Üç farklı gözenek ölçekli Pasteur pipets hazırlamak ve adrenal taşlarını collagenase II (~0.5–0.8 mg/mL) ile orta içeren bir 50 mL konik tüp içine Aspire edin için ilk Pasteur damlalıklı kullanın.
	<ol>
<li>Yavaşça doku parçaları 10 x hakkında triturate. Pipets kullanabilir ve tüm parçaları daha küçük olana kadar yukarıdaki adımları tekrarlayın. Not: Pasteur pipets farklı gözenek boyutları ateşle Isıtma tarafından oluşturulabilir. İlk damlalıklı özgün boyutu (yaklaşık 1 mm) ikinci bir gözenek boyutu yaklaşık 0.8 mm ve üçüncü Pasteur damlalıklı yaklaşık 0.5 mm. Sindirim sırasında böbrek üstü parçaları daha küçük olacak. Böylece, mekanik yordamın daha tamamlanmış adrenal sindirmek. Su banyosu (37 ° C'de) tüp kuluçkaya ve her 5 dk, salla toplam 4 x.</li>
	</ol>
</li>
	<li>20 dk kuluçka sonra serin ve taze orta (sixfold birimi; Örneğin, doku 5 mL + 25 mL serin DMEM/F-12 orta) içeren % 2.5 fetal sığır serum (FBS) ve % 5 at serum enzim etkisi durdurmak için ekleyin.</li>
	<li>Santrifüjü vasıl 800 x g 10 dk tarafından hücre topakları toplamak.</li>
	<li>Orta hücreleri askıya almak için uygun bir hacmi ekleyin. Not: Her bezi yaklaşık 3 ~ x 10 yapabilirsiniz5 ~ 4 x 105 hücreleri.</li>
	<li>İstenen plakaları veya yemekleri hücrelerde büyüme orta ile plaka (1:1 [v/v] karışımı F-12 orta, DMEM ve Ham'ın takıma 25 mM HEPES ve % 1 penisilin ve streptomisin) % 95 hava ve % 5 CO2oksijen bir ortamda 37 ° c gece (0 gün). Not: Genellikle, biz 24-şey tabak (dört bezleri/plaka) hücrelerde corticosterone tahlil için plaka ve 35 mm yemekleri (yemekler bir bezi/yaklaşık 1-2) için tıklayın: western analiz leke..</li>
	<li>Dikkatli bir şekilde hücreleri 2 yıkama x ile serum ücretsiz sıcak DMEM/F-12 orta (gün 1). Yeni büyüme orta yerine.</li>
	<li>Hücreleri oksijen ortamında % 95 hava ve % 5 CO2 37 ° C'de 3 güne kadar korumak.</li>
</ol>

<ol><li>Frith, C. H. Histology, Adrenal Gland, Mouse. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrith%2C+CH+%22+Endocrine+System.+Monographs+on+Pathology+of+Laboratory+Animals%22"> Endocrine System. Monographs on Pathology of Laboratory Animals</a>. Jones, T. C., Mohr, U., Hunt, R. D., Capen, C. C. , Springer. Berlin, Heidelberg. 8-12 (1983).</li>
<li>Keegan, C. E., Hammer, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+organogenesis+of+the+adrenal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Recent insights into organogenesis of the adrenal cortex.</a> Trends in Endocrinology Metabolism. 13 (5), 200-208 (2002).</li>
<li>Marieb, E., Wilhelm, P. B., Mallatt, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarieb%2C+E+%22Chapter+17%3A+The+Endocrine+System%22">Chapter 17: The Endocrine System</a>. , 558-581 (2017).</li>
<li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+and+immune-mediated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-mediated inflammation.</a> New England Journal Medicine. 332 (20), 1351-1362 (1995).</li>
<li>Bornstein, S. R., Rutkowski, H., Vrezas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+steroidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cytokines and steroidogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. (1-2), 135-141 (2004).</li>
<li>Bielohuby, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+analysis+of+the+mouse+adrenal+gland+from+weaning+to+adulthood%3A+time-+and+gender-dependent+alterations+of+cell+size+and+number+in+the+cortical+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Growth analysis of the mouse adrenal gland from weaning to adulthood: time- and gender-dependent alterations of cell size and number in the cortical compartment.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology Metabolism. 293 (1), E139-E146 (2007).</li>
<li>van Weerden, W. M., Bierings, H. G., van Steenbrugge, G. J., de Jong, F. H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenal+glands+of+mouse+and+rat+do+not+synthesize+androgens%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Adrenal glands of mouse and rat do not synthesize androgens.</a> Life Sciences. 50 (12), 857-861 (1992).</li>
<li>Wang, T., Rainey, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adrenocortical+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Human adrenocortical carcinoma cell lines.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 351 (1), 58-65 (2012).</li>
<li>Payne, A. H., Hales, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+steroidogenic+enzymes+in+the+pathway+from+cholesterol+to+active+steroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Review%22%5BJournal%5D)">Overview of steroidogenic enzymes in the pathway from cholesterol to active steroid hormones.</a> Endocrine Review. 25 (6), 947-970 (2004).</li>
<li>Ruggiero, C., Lalli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+ACTH+Signaling+on+Transcriptional+Regulation+of+Steroidogenic+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Impact of ACTH Signaling on Transcriptional Regulation of Steroidogenic Genes.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 24(2016).</li>
<li>Chen, Y. C., Liang, Y. L., Huang, Y. L., Huang, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Toona+sinensis-stimulated+adrenal+steroidogenesis+in+primary+rat+adrenal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Functional+Foods%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Toona sinensis-stimulated adrenal steroidogenesis in primary rat adrenal cells.</a> Journal of Functional Foods. 14 (2015), 318-323 (2015).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+I.+Culture+conditions+for+optimal+growth+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. I. Culture conditions for optimal growth and function.</a> In Vitro. 17 (7), 599-604 (1981).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+II.+Quantitation+of+steroid+dehydrogenase+stain%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. II. Quantitation of steroid dehydrogenase stain.</a> In Vitro. 17 (7), 605-611 (1981).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+metabolism+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroid metabolism by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 58 (3), 447-462 (1973).</li>
<li>Di Blasio, A. M., Fujii, D. K., Yamamoto, M., Martin, M. C., Jaffe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+cell+proliferation+and+steroidogenesis+in+cultured+human+fetal+adrenal+cells+chronically+exposed+to+adrenocorticotropic+hormone%3A+rationalization+of+in+vitro+and+in+vivo+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Maintenance of cell proliferation and steroidogenesis in cultured human fetal adrenal cells chronically exposed to adrenocorticotropic hormone: rationalization of in vitro and in vivo findings.</a> Biology of Reproduction. 42 (4), 683-691 (1990).</li>
<li>Brasaemle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+The+perilipin+family+of+structural+lipid+droplet+proteins%3A+stabilization+of+lipid+droplets+and+control+of+lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. The perilipin family of structural lipid droplet proteins: stabilization of lipid droplets and control of lipolysis.</a> Journal of Lipid Research. 48 (12), 2547-2559 (2007).</li>
<li>Hoeflich, A., Bielohuby, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+adrenal+gland+growth%3A+signal+integration+by+extracellular+signal+regulated+kinases1%2F2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of adrenal gland growth: signal integration by extracellular signal regulated kinases1/2.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 42 (3), 191-203 (2009).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+responses+to+corticotrophin+and+cyclic+AMP+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Morphological responses to corticotrophin and cyclic AMP by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 56 (3), 529-536 (1973).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Böbreküstü bezleri çevresel adaptasyon3' te önemli bir rol oynar. Hangi tarafından adrenal korteks salgılar hormon düzenleyen ve fizyolojik fonksiyonları ve homeostasis3ayarlayın. İçinde vivo modeli gerçek fizyolojik etkileri vücuttaki yansıtır. Ancak, o hala kararsız etkileri deneylerde neden birçok karmaşık faktörlerden etkilenir. Buna ek olarak, in vitro hücre modeli hayvan modeli için eşsiz kılan avantajları vardır. İlk olarak, çevre koşulu tüp bebek sisteminde kontrol ...

Endokrin sistemi fizyolojik faaliyetleri ve homeostasis1düzenleyen sorumludur. Böbreküstü bezleri böbrekler kafatası kutbunda yer alan mineralocorticoids, glukokortikoid ve androjen2,3salgılar önemli endokrin organ biridir. Böbreküstü bezinin iki ayrı parçadan oluşur: korteks ve medulla. Adrenal korteks üç katmandan oluşur: dış glomerulosa, ara fasciculata ve iç reticularis3. Zona glomerulosa aldosteron, sodyum iyon ve su böbrekler3reabsorbing AIDS bir mineralocorticoid orijinal secreting sitedir. Zona fasciculata öncelikle glukokortikoid normal fizyolojik şartlarda3Bazal bir seviyede üretir. Kortikosteroidler rodents ve kortizol insanlarda kan glikoz3düzenleyerek vücudun stres ile başa çıkma yardımcı olan hareket. Bir dereceye kadar onlar inflamatuar yanıt inhibe ve bağışıklık sistemi4,5düzenler. Diğer memeliler, fare ve sıçanların aksine bir işlevsel zona reticularis 17α-hidroksilaz ifade eksikliği nedeniyle böbrek üstü bezi6,7' var mı. Böylece, adrenal fareler ve sıçanlar adrenal C-19 steroidler (kortizol ve adrenalin androjenler) salgılanmasını yoksun bulunmaktadır.
Birincil kültürlü Adrenokortikal hücreler adrenal Fizyoloji8kontrol mekanizmaları araştıran için yararlı olduğu gösterilmiştir. Steroidogenic diğer dokular gibi adrenal her bölge kendi steroid ücretsiz kolesterol9sentezler. Adrenocorticotropic hormon (ACTH) stimülasyon, üzerine ücretsiz kolesterol arıza lipid damlacıkları serbest bırakmak ve böylece, steroid üretim fasciculata ve reticularis10artırır.
Birçok grup Adrenokortikal Karsinom istikrarlı hücre satırlarından kurmaya çalıştılar. Ancak, birkaç endişeleri Adrenokortikal hücre hatları vitro modelleri8olduğu gibi kullanımı sınırlı olabilir. Hücre hatları steroid yanıt pasajlar, serum lot numarası ve serum kalitesi arasında farklı olabilir. Ayrıca, ticari adrenal hücre hatları (Y1 ve SW13) corticosterone, adrenal steroidogenesis8çalışmaya daha zor hale salgılar değil. Düz-se bile bu pazarlara dokulardan bilinmeyen bazı riskler belirsiz sığır ve at adrenal kullanarak ex vivo modelleri iyi bir seçim olabilir. Onlara göre sıçan böbrek üstü bezleri yönetmek daha kolaydır ve nispeten daha istikrarlı ve patojen ücretsiz kaynağıdır. Birlikte ele alındığında, burada mevcut olan yöntemi sıçan adrenal fasciculata hücre corticosterone sentezinde ilgili mekanizması araştırmak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Dişi/erkek, SD/Wistar sıçanları (8-12 hafta)</td><td>BioLASCO</td><td></td><td>erkek veya dişi sıçanlar deneyler için uygundur. Dişilerin adrenal bezleri erkek sıçanlardan daha büyüktür, ancak dişi sıçanlar deneyleri etkileyebilecek östrus döngülerine sahiptir</td></tr><tr><td>Kollajenaz, tip II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td>adrenal hücrelerin izolasyonu</td></tr><tr><td>Adrenal hücreler için DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12800-017</td><td>toz besiyeri Böbreküstü</td></tr> bezleri için <tr><td>Jambon F12</td><td>ThermoFisher</td><td>21700-075</td><td>toz besiyeri</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>JT.baker</td><td>4018</td><td>tampon (toz)</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>JT.baker</td><td>3506-1</td><td></td></tr><tr><td>At serumu</td><td>Hiklon</td><td>16050014</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>SAFC</td><td>12103C</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin (10.000 U)-streptomisin (10.000 ug/mL)</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td>antibiyotikler</td></tr><tr><td>Kavisli forseps</td><td>BRAUN</td><td>BD343R</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>BRAUN</td><td>BD331R</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>BRAUN</td><td>BC224R</td><td>sıçan derisi ve kası kesti</td></tr><tr><td>Hassas makas</td><td>BRAUN</td><td>BC101R</td><td>kesilmiş adrenal bezler</td></tr><tr><td>Yağ farklılaşması ile ilgili protein</td><td>Abcam</td><td>ab108323</td><td>lipid damlacığı ile ilişkili protein için antikor</td></tr><tr><td>Kortikosteron ELISA kiti</td><td>cayman</td><td>500655</td><td>kortikosteron sentezi için test</td></tr><tr><td>Ters çevrilmiş ışık mikroskobu</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>JT.baker</td><td>X198-07</td><td>immünofloresan boyama için</td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan IgG Alexa 488 Fluor ikincil antikor</td><td>İmmünofloresan boyama</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>için ThermoFisher A-11034</td><td>İmmünofloresan boyama için</td>Anti-ADFP <td>Abcam</td><td>108323</td> İmmünofloresan</tr><tr><td>boyama için</td> <td>ProLong Gold antifade mountant</td><td>ThermoFisher</td><td>P36935</td></tr></tbody></table>

sıçan adrenokortikal hücreleri ve deneyleri steroidogenic fonksiyonların birincil kültür

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

Adrenal korteks salgılar hormon stres ve hastalıklara karşı hayvanlar için hayati önem taşımaktadır. Burada açıklanan yordam birincil kültürlü sıçan adrenal hücrelerin ve ilgili fonksiyonel deneyleri (ayirt corticosterone analiz yanı sıra lipit damlacık yüzey proteini boyama) yöntemidir. İçinde vivo bir model, aksine interexperiments adrenal monolayer kültürlerde varyasyonu daha az ve deneysel durumu kontrol etmek kolaydır. Ayrıca, kaynağın Rats'in da daha sığır olanlar gibi diğer hayvanların daha kararlıdır. Aynı zamanda adrenal çalışmalarda kullanılan birçok insan adrenal hücre satır (ncı-H295, ncı-H295R, SW13, vb) vardır. Ancak, bu satırları steroid üretimi hala serum lot numarası, geçiş numarası, mutant/zarar farklı genler, vb içeren birçok faktör tarafından etkilenir. 17α-hidroksilaz eksik dışında birincil fare Adrenokortikal hücre adrenal Fizyoloji için daha iyi ve daha uygun bir yüntem kültürdür. Özet olarak, birincil fare adrenal kültürleri iyi bir tüp bebek platform mekanizmaları böbreküstü bezi sistemi ilgi reaktif araştırmak araştırmacılar için olabilir.

Burada açıklanan yordamı kullanarak, birincil kültürlü adrenal hücreleri (şekil 1A) faz kontrast mikroskop altında seçkin. Daha fazla veziküller içinde sitoplazma lipid damlacıkları olduğunu doğrulamak için ayirt adipose farklılaşma ile ilgili protein (ADRP) Boyama gün-3 kültürler (şekil 1B) yürütülen. Hücreleri üzerinde cam coverslips yetiştirilmiştir. Hücreler fosfat tamponlu tuz (PBS) ile üç kez yıkanmış ve % 4 paraformaldehyd...

Adrenal korteks tarafından salgılanan hormon stres ve hastalıklara karşı hayvanlar için hayati önem taşımaktadır. Burada, adrenal hücreler kültür birincil fare için bir iletişim kuralı mevcut. Adrenal steroidogenesis ve lipit sentezi ilgi reaktif mekanizmalarının araştırılması için iyi bir tüp bebek platform olabilir.

Sıçan Adrenokortikal hücreleri ve deneyleri Steroidogenic fonksiyonların birincil kültür

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...

Sunulan protokol çok kolaydır ve araştırmacılarbirincil adrenal kültürleri hazırlamak yardımcı olacaktır. Bu adrenal steroidogenez başlatmak için kolay bir prosedür sağlar. Bu teknik strese bağlı hastalıkların, ajan inhibe inflamatuar yanıtların tüm potansiyellerinin taranması nda uygulanabilir.Prosedürü gösteren Wei-Chang Lee, benim laboratuvarımdan bir Master öğrencisi olacak. %70 etanol kullanarak ötenazi SD sıçan sterilize ve deriiçine emilir izin ile başlayın. Mendil kağıdı ile deri sildikten sonra, supine pozisyonda temiz bir plastik plaka üzerinde sıçan yerleştirin.Daha sonra, orta hatta deri kaldırmak için dış kavisli forseps kullanın. Subkostal açı uyluk seviyesinden bir Y şekli oluşturarak cildin künt bir diseksiyon gerçekleştirmek için makas kullanın. % 70 etanol ile makas durulama sonra, kas kesmek, ayrıca bir Y şekli oluşturarak.Karaciğer arkasında sağ mide arkasında sol adrenal bezi bulun. Standart forseps bir çift ve kavisli forseps bir çift ile, mide ve karaciğer asansör ve daha sonra başka bir kavisli forseps ile adrenalizole ve steril bir çanak içine yerleştirin. Dikkatle her bezinden adrenal kapsül taşımak için ince forceps kullanın.Şimdi, doku kapsayacak şekilde

primary-culture-rat-adrenocortical-cells-assays-steroidogenic

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

Bu çalışmada, yetişkin sıçan kalp miyositler izole ve kültürü tipik bir şekilde tanımladı. Kollajenaz ve proteaz tek miyositler sindirimi ve izole etmek için kullanılır. Miyositler Çoğu deney gereksinimlerini karşılamak bu protokolü takip kültürü.

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

İlköğretim hepatositler bir fizyolojik ilgili deneysel sistem biyokimyasal, moleküler ve metabolik fonksiyonlarını değerlendirmek için değerli bir araç sağlar. Biz sürekli to1.0 × 10 kadar yaşayabilir hepatositler üretir yerinde karaciğer perfüzyon, sıçan için güvenilir bir protokol...

Sıçan Karaciğer Hücreleri İzolasyon ve İlköğretim Kültür

Arginin-vazopressin (AVP) böbrek temel hücreleri tarafından su geri emilimini kolaylaştırmak yoluyla vücudun su dengesi ince ayar kontrol eder. Burada, AVP-aracılı su geri emilimini moleküler mekanizmaları hakkında aydınlatılması için uygun toplayıcı kanal hücrelerinin primer sıçan iç medüller yetiştiriciliği için bir protokol mevcut.

Kanal Hücreleri Toplama kültür İlköğretim Rat İç Medüller

Birincil Sertoli hücreleri immüno özelliklerinin iltihap ya da enfeksiyon ve yararlanma sırasında testis immün ayrıcalığı, sinyal transdüksiyonunu çalışmak için gereklidir. Burada yüksek derecede saflaştırılmış birincil Sertoli hücreleri ve sıçan testis peritübüler hücrelerin izolasyonu için bir enzim bazlı protokol açıklar.

Sıçan Testislerindeki Sertoli Hücreleri İzolasyon ve peritübüler Hücreler

Oligodendrositler, merkezi sinir sisteminin miyelinli hücreleridir. Bu protokol, öncülleri olan oligodendrosit progenitör hücrelerinin sıçan kortekslerinden izolasyonu ve kültürü için bir yöntemin yanı sıra, deneysel faktörlere yanıt olarak in vitro oligodendrogenezi değerlendirmek için hızlı ve güvenilir bir kantitatif yöntemi tanımlar.

Sıçan oligodendrosit Progenitör Kültürler hazırlanması ve Oligodendrogenesis Niceleme Çift kızılötesi Floresan Tarama kullanma

Burada adrenal bezlerin fareler üzerinden ayırma, dokuları düzeltmek, onları bölüm ve ayirt boyama gerçekleştirmek için bir yöntem mevcut.

Yalıtım, fiksasyon ve fare böbreküstü bezlerinin ayirt görüntüleme

Bu protokol, NuTRAP fare modelini kullanarak hücre tipine özgü çeviri ribozomal mRNA'ları izole etmeyi amaçlamaktadır.

Hücre Tipine Özgü RNA'ları, Hücre Sıralama Olmadan Dondurulmuş Heterojen Doku Örneklerinden İzole Edin

Burada, sıçan endometriyal epitelyal kök hücrelerini (reESC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol sunuyoruz, bu da sıçan endometriyal organoidleri üretiyor. Bu yöntem, endometriyal hastalıkların in vitro çalışmalarını kolaylaştırarak gen düzenlemesini ve diğer hücresel manipülasyonları mümkün kılar.

Sıçan Endometriyal Epitel Kök Hücrelerinden Sıçan Uterus Organoidlerinin Üretimi ve Karakterizasyonu

Fare adrenal korteks için zona glomerulosa ve zona fasciculata ile zenginleştirilmiş hücrelerin 2D birincil kültürlerini oluşturmak amacıyla sağlam ve tekrarlanabilir bir yaklaşım geliştirildi. Bu sistem, her bölgenin temel moleküler ve fonksiyonel özelliklerini koruyarak sinyal yolları, hormon üretimi ve adrenal kortikal hücre davranışının odaklanmış şekilde incelenmesini mümkün kılar.

Fare Adrenal Korteksinden Bölge Zenginleştirilmiş Birincil Kültürlerin Oluşumu

Öğrenin sıçan adrenal hücrelerinin birincil kültür yöntemini steroidogenez ve stres hastalıkları araştırmaları için. Bu protokol enzimatik sindirim ve ACTH stimülasyonu ile fonksiyonel hücreler sağlar.

Sıçan Adrenokortikal hücreleri ve deneyleri Steroidogenic fonksiyonların birincil kültür

Daha fazla video keşfet