Name: Tripeptit stabilize Nanoemulsion oleik asit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: Keşfedin, KYF tripeptidi ile stabilize edilmiş oleik asit-platin(II) konjugatı nanoemülsiyon sentezleme yöntemini. Bu biyobozunur sistem, platin içeren anti-kanser ilaçların kapsüllenmesi için ilaç uygulamalarında yüksek potansiyel sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ulusal Kanser Enstitüsü mali desteği minnetle anıyoruz SC2CA206194 verin. Hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirilir.

1. oleik Acids–Platinum(II) eşlenik sentezi
<ol><li>Sisplatin aktivasyonu<ol>
<li>60 ° C'de 50 mg (0,167 mmol) sisplatin 4 ml su (örneğin, nanopure) askıya</li>
		<li>Dropwise 55.2 mg (0.325 mmol) AgNO3 sisplatin 0.5 mL su ekleyin ve en az 2 h için tepki 60 ° C'de ilave edin. AgCl beyaz çökelti tepki ilerlemesini gösteren oluşturacak.</li>
		<li>Testi ile % 10 harekete geçirmek reaksiyon tamamlandıktan belirlemek için HCl ücretsiz Ag+ iyon çözümde varlığı için. Testin negatif olması gerekir (hiçbir ek AgCl çökelti oluşturması gerektiğini).</li>
		<li>3,220 x g 10 min için tepki karisimin santrifüj kapasitesi ve AgCl beyaz çökelti kaldırın.</li>
		<li>Süpernatant toplamak ve 0.2 mm şırınga filtre ile filtre. Süpernatant Platin varlığı için eriyik yolu ile Pasteur pipet 2-3 damla SnCl2 kristal uygulayarak test edin. Kalay platinum ile koordinat karmaşık rengini koyu sarı/turuncu ise pozitif bir testtir.</li>
		<li>Süpernatant ile aktif Pt(II) ikinci adım için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aktif Pt(II) ile oleik asitin reaksiyonu<ol>
<li>Oleik asitin esterleri (0.333 mmol) 94.2 mg 3 mL su 60 ° C'de askıya</li>
		<li>13,3 mg (0.333 mmol) NaOH ile 1 mL su ve harekete geçirmek Pt(II) adım 1.1 çözüm ile karıştırın</li>
		<li>Reaksiyon 2s için 60 ° C'de ve oda sıcaklığında sonraki gecede karıştırın. Yağlı bir sarı/kahverengi küçülmesinihızlandırmalı ham ürünüdür.</li>
		<li>3,220 x g 10 min için tepki karisimin santrifüj kapasitesi ve süpernatant kaldırın. Rotary Evaporatör kullanarak 25 ° C'de ham ürün kuru. Asetonitril ile birden fazla yıkama tarafından ürün arındırmak. Son saf oleik acids–Pt(II) eşlenik soluk sarı renktedir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. KYF-Pt-NE sentezi ve FITC etiketli Nanoemulsion FITC-KYF-Pt-NE
<ol><li>KYF tripeptit ve fluorescently etiketli tripeptit FITC-KYF sentezi<ol>
<li>Çift katı hal peptid kimya kullanarak KYF sentez. Her amino asit bağlamak için aşağıdaki standart koşullar kaplin kullanın: Wang reçine (2,19 mmol), korumalı Fmoc amino asit (4,38 mmol), 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate (TBTU) (4,38 mmol) ve diisopropylethylamine (DIPEA) (8,76 mmol). Dimethylformamide (DMF) TBTU ile amino asitlerin dağıtılması ve DIPEA.</li>
		<li>DMF 25 ml 1 kullanılmadan önce s için Fmoc-L-Phe 4-alkoxybenzyl alkol reçine (0.382 meq/g) 5,7 gram soak.</li>
		<li>L-fenilalanin amino asit Amin grubu 15 mL 5 min için % 20 Piperodin/DMF çözeltisi ile deprotect, solvent atmak ve yıkama 20 dk döngüsü ile yineleyin.</li>
		<li>Aşağıdaki maddeleri ile 1 dk. için reçine yıkama: DMF, izopropil alkol (IPA), DMF, IPA, DMF, IPA, DMF, DMF. Çözücü her yıkama sonra atın.</li>
		<li>Ücretsiz NH2 grup reçine üzerinde varlığını belirlemek için Kaiser testi (adımlar bakınız) ve pozitif (reçine tohum mor), Fmoc-L-tirozin amino asit ekler ve kaplin gerçekleştirmek bir gecede.<ol>
<li>Kaiser test çözümleri ayrı şişelerde hazırlayın.</li>
			<li>100 ml etanol ninhydrin 5 g geçiyoruz.</li>
			<li>Fenol 20 ml etanol 80 g geçiyoruz.</li>
			<li>2 mL potasyum siyanür ile 0,001 M sulu çözüm mix pyridine 98 mL.</li>
			<li>2-3 damla her Kaiser çözümleri örnek ve ısı 5 min için kaynar suda ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Üzerine başarılı kaplin ikinci amino asitin Kaiser testi gerçekleştirmek ve negatif deprotection Protokolü (Adım 2.1.3-2.1.5) ile devam ederseniz. Fmoc-fenilalanin amino asit ile işlemi tekrarlayın.<ol>
<li>Her yıkama atmak sonra çözücü üzerine kaplin tüm amino asitlerin reçine DMF, IPA, DMF, metanol, diklorometan ve Dietil eter, 5 mL ile 1 dakika yıkayın. Daha fazla işlem için reçine kaydedin.</li>
			<li>Reçine yarısı peptid FITC ile değiştirmek için sonraki adımlar (2.1.7-2.1.9) için kullanın. Değiştirilmemiş KYF tripeptit elde etmek için 2.1.10 başlatma yordamı izleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>KYF KYF-N3 6-azidohexanoic asit ile N-terminal amino asit değiştirin. Bu amaçla, 1 g (0.382 mmol) KYF Wang reçine ve 120.1 mg (0.764 mmol) 6-azidohexanoic asit 245.2 mg (0.764 mmol) ile TBTU ve DMF 30 ml 197.1 mg (1.528 mmol) DIPEA karıştırın. Reaksiyon gecede oda sıcaklığında karıştırın.</li>
		<li>KYF-FITC propargyl floresein üzerinden bir tıklama tepki ile KYF-N3 sentezi ile alın. Bu amaçla, 253 mg (0,097 mmol) KYF N3 / Wang reçine 3.78 mg (0,019 mmol) CuI katı, 71.9 mg (0,193 mmol) propargyl floresein ve 2,24 mg (0.017 mmol) DIPEA ile karıştırın. Reaksiyon kahverengi yeşil renk değiştirir.</li>
		<li>24 saat sonra reçine için 1 dk 5 mL metanol ve üç kere su, DMF ve su üç kez, beş kere DMF ve IPA ile dönüşümlü olarak ve diklorometan ve Dietil eter ile üç kez yıkayın. Çözücü her yıkama sonra atın.</li>
		<li>Reçine trifluoroacetic asit (TFA) bir çözüm ile gelen KYF-FITC veya KYF peptid ayırmak / triisopropylsilane (/ h2O 95/2.5/2.5 oranında 3 saatten fazla ipuçları).</li>
		<li>Bir soğuk Dietil eter, üç kez soğuk eter ile yıkama ve daha sonra kuru vakum altında ham peptid çökelti.</li>
	</ol>
</li>
	<li>FITC KYF stabilize nanoemulsion Pt(II) (FITC-KYF-Pt-NE) ve KYF-Pt-NE ile sentezi<ol>
<li>10 mg (0.0126 mmol) oleik acids–Pt(II) eşlenik isopropanol 1,5 ml ve 5 mL şırınga yerinde geçiyoruz.</li>
		<li>Oleik acids–Pt(II) eşlenik şırınga bir enjektör pompası yerleştirin ve akışını 0.1 mL/dk için ayarlayın.</li>
		<li>FITC-KYF-Pt-NE sentezlemek için 1 mg (0.00105 mmol) FITC-KYF ve 1 mg (0.00219 mmol) KYF çözmek (FITC molar oranı 1:2-KYF:KYF) 20 ml su ve çözüm ile 37 ° c sıcaklık ayarlama Kapsayıcı FITC fluorophore photobleaching önlemek için alüminyum folyo ile duvarlar kapsayacak. KYF-Pt-NE sentezlemek için KYF tripeptit 20 ml su, 2 mg (0.0044 mmol) dağıtılması ve çözüm ile 37 ° c sıcaklık ayarlama</li>
		<li>Oleik acids–Pt(II) eşlenik dropwise FITC-KYF/KYF veya KYF tripeptit çözüme ekleyin. Başlık altında bu adımı gerçekleştirin.</li>
		<li>Çözüm gecede oda sıcaklığında izin veren ve organik çözücüler buharlaşır için heyecan FITC-KYF-Pt-ND veya KYF-Pt-ne, kendinden montajlı</li>
		<li>FITC-KYF-Pt-ND veya KYF-Pt-NE bir santrifüj yoğunlaştırıcı konsantre (10k MWCO) ve üç kez 4 mL nanopure su ile yıkayın.</li>
		<li>KYF-Pt-NE ve FITC-KYF-Pt-NE sulu çözümler 4 ° C'de depolayın</li>
		<li>Atomik Absorpsiyon spektroskopisi (AAS), üretici Kılavuzu48takip kullanarak Platin içerik için analiz.<ol>
<li>Platin standartları % 10 HCl çözümünde kalibrasyon eğrisi için hazırlamak (AAS için etkili menzili olan 100 ila 1.200 app (milyar başına parçaları) arasında).</li>
			<li>KYF-Pt-NE eriyik--dan adım 2.2 100 µL aqua regia (3:1 konsantre hidroklorik asit, nitrik asit karışımı), 50 µL dağıtılması ve oda sıcaklığında gece bırakın. 850 µL son numune hacmi 1 ml ulaşmak için su ekleyin. AAS kullanarak örneğini analiz. Son asit konsantrasyonu %10 tüm analiz örnekleri içinde olmalıdır.</li>
			<li>App içinde Pt konsantrasyon okuma kaydetmek ve son Platin içeriği örnek (Numune dilüsyonu ve nanoemulsion ilk hacmi için hesabı) hesaplamak.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. confocal görüntüleme FITC-KYF-Pt-NE hücresel Alım
<ol><li>6 yumurtalık kanseri hücre satır (A2780, CP70, SKOV3, OV90, TOV21G ve ES2), 4,7 x odası başına 104 hücre yoğunluğu 4 iyi-odası confocal yemeklerinin içine tohum ve gecede 37 ° C'de önceden kültür</li>
	<li>24 saat sonra fosfat tampon serum (PBS) üç kez hücrelerle yıkama ve FITC-KYF-Pt-NE hücre kültürü ortamında kuluçkaya (bkz. Adım 6.1 hücre için belirli ayrıntıları satır) 37 ° C'de 15 dakika</li>
	<li>Sonra kuluçka, medyayı çıkarın ve hücreleri üç kez PBS ile yıkayın.</li>
	<li>-20 ° C'de 5 min için soğuk metanol ile hücreleri tamir ve üç kez PBS 1 mL ile yıkayın.</li>
	<li>1 mL 0.1 hücrelerle permeabilize % Triton-X 10 dakika oda sıcaklığında ve yıkama için üç kez ile 1 mL PBS.</li>
	<li>Alexa Fluor 647 (1 mL) ile 1:50 Birleşik LAMP1 antikor ile 90 dk için hücreleri kuluçkaya PBS, seyreltme, oda sıcaklığında. Daha sonra 3 kez PBS içeren hücreleri yıkayın.</li>
	<li>DAPI hisse senedi çözüm (1 mg/mL) 1 mg/mL PBS sulandırmak. Daha sonra her odasına seyreltilmiş çözeltinin 1 mL ekleyin ve 15 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya. Hücreleri 3 kez PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Mount coverslips kullanarak montaj orta bir slayttaki.</li>
	<li>405 uyarma dalga boyu canlı hücre confocal mikroskop kullanarak hücreleri görüntü nm, 488 nm ve 633 nm. Algılama parametreleri takip ayarla: % 0.2 ve en fazla % 1 Pinole 1 havadar birim, lazer güç kazanmak ana 650-750, dijital ofset 0.</li>
	<li>Disk görüntüsü oluşturma yazılımı, görüntü aç. Altında görüntülenen resim, grafik ve görüntü ölçek çubuğu eklemek için, Ekle ölçek çubuğu, seçin.</li>
</ol>4. ilaç yayın Araştırmaları
<ol><li>PBS uyuşturucu yayın çalışmaları yürütmek. Üç PBS arabellekleri 7.4, 6,8 ve 5.0 için pH değerlerini sırasıyla ayarlamak.</li>
	<li>KYF-Pt-NE 5 μL uygun pH PBS arabelleği 180 μL içinde seyreltik, 3,5 kDa MWCO mini diyaliz kupasına aktarmak ve PBS 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>Her üç mini diyaliz tüpler 2, 4, 6, 24, 48 ve 140 h arabellek kaldırmak ve AAS tarafından platin konsantrasyonları ölçün. Tüm örnekleri adım 2.2.8 göre hazırlayın ama 500 µL örneğe son seviyesini ayarlamak.</li>
</ol>5. hücre kültür yöntemleri
<ol><li>Kültür hücre hatları A2780, CP70, SKOV-3, OV-90, TOV - 21 G, ES-2 hücre kültür (A2780, CP70, SKOV-3, ES-2) % 10 veya % 15 (TOV - 21 G, OV-90) fetal sığır serum (FBS), ile desteklenmiş orta (DMEM)'l-Glutamine ve penisilin/streptomisin ile. Büyümek tüm hücreleri % 5 CO2, su doymuş atmosfer 37 ° C'de</li>
	<li>Tohum 3 x 105 hücrelerde her 96-şey plaka ve öncesi kültür gecede tüp bebek kuluçka deneyler için. Su KYF-Pt-NE, sisplatin ve carboplatin çözümlerinde hazırlayın. Carboplatin ve sisplatin her hücre satırı için konsantrasyon eşleştirmek için KYF-Pt-NE Pt(II) konsantrasyonu ayarlayın. 37 ° C'de 72 saat için kuluçkaya</li>
	<li>Kuluçka sonra Renkölçer tahlil (ÇMT hücre çoğalması tahlil) kullanarak hücresel canlılığı değerlendirin. Kısaca, orta kaldırın ve MTT her ortamda iyi ve 37 ° C'de 2 h için kuluçkaya % 10 110 μL ekleyin O zaman her şey için 100 μL deterjan ekleyin ve 37 ° C'de 5 h için kuluçkaya</li>
	<li>570 Absorbans kontrol plaka okuyucu kullanarak nm. Z-test ve P-testi ile istatistiksel analiz kullanarak sonuçları analiz.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek çatışması var mı.

Nanoemulsion sentez kritik adımlar içerir yüzeylerde molar oranını ayarlama, oleik acids–Pt(II) eklenmesi sırasında sıcaklık ve akış hızı denetimi sürdürmek için yeterli süre kendinden montajlı sağlayan ve ürün kullanarak arındırıcı bir santrifüj yoğunlaştırıcı sütun. Bu parametreler KYF-Pt-NE morfolojisi ve boyutu etkiler; Böylece, uygun molar oranını korumak ve sentetik koşullar doğru ayarlamak özellikle önemlidir.
Nanoemulsion sentezi (Adım 3) sırasında yüzeylerde oranını kendinden montajlı...

Son yıllarda, ilaç dağıtım ve bioimaging1,2,3,4Biyomedikal gibi uygulamalar için nano tanecikleri mühendislik büyüyen bir ilgi olmuştur. Nanoparçacık tabanlı sistemler Çokişlevlilik kez bir formülasyon içinde birden çok bileşeni ekleme gerektirir. Lipidler veya polimerler kez temel yapı taşlarını fizikokimyasal özellikleri yanı sıra Biyouyumluluk ve sonuçta nanostructure1, işlevini etkileyebilir biodegradability açısından farklılık 5,6. Proteinler ve peptidler, gibi biyolojik olarak türetilen malzeme uzun onların sıra esneklik7,8nedeniyle çok fonksiyonlu nanoyapıların umut verici bileşenleri olarak kabul edilmiştir. Peptidler Helisel oluşturan yüksek sıralı supramolecular mimarileri kendi kendine araya şerit9,10, fibröz iskele11,12ve adl daha, böylece bina önünü bir alt-up kullanarak biomolecule tabanlı melez nanoyapıların13yaklaşım.
Peptidler için ilaç ve biyoteknoloji, özellikle antikanser terapi14 ve antibiyotik geliştirme16,17, metabolik gelince kalp-damar hastalıkları15 de uygulamaları incelemiş bulunuyoruz bozuklukları18ve enfeksiyonlar19. Üzerinde yüzlerce klinik çalışmalar20geçiren küçük-peptid tedavi vardır. Peptidler değiştirmek için ve düşük maliyetle hızlı sentezlemek için kolaydır. Buna ek olarak, hangi büyük ölçüde onların biyolojik ve ilaç uygulamaları21,22kolaylaştırır biyolojik olarak parçalanabilir, bunlar. Duyarlı, peptid tabanlı nano tanecikleri ve hidrojel depoları kontrollü yayın23,24,25,26 mühendislik peptidler yapısal bileşenleri olarak kullanımını içerir , 27, peptid tabanlı biyosensörler28,29,30,31veya bio-elektronik aygıtlar32,33,34. Önemlisi, fenilalanin içeren iki ya da üç amino asit kalıntıları eklenmesi ile bile kısa peptidler kılavuzu bulundu kendinden montajlı35,36,37 işler ve stabilize emülsiyonlar38 oluşturmak .
Onların yüksek etkinlik sayesinde Platin bazlı ilaçlara birçok kanser tedavi rejimleri hem tek başına hem de diğer ajanlar39,40ile birlikte kullanılır. Platin bileşikler, monoadducts ve intrastrand veya interstrand çapraz bağlantılar oluşturarak DNA hasar ikna etmek. Pt-DNA lezyonlar hücresel makine tarafından tanınır ve eğer tamir değil, hücresel apoptosis için yol. Hangi Pt(II) kanser hücre ölümüne katkıda en önemli, DNA transkripsiyon41,42inhibisyonu mekanizmadır. Ancak, Platin tedavisinin yararları ciddi yan etkileri tetikler Pt(II) Sistemik toksisite tarafından azalır. Bu Pt(II)43kez DNA ulaşan Platinum alt terapötik konsantrasyonlarda sonuçları, alt klinik dozaj için yol açar. Sonuç olarak, izleyen DNA tamiri kanseri hücre yaşam ve Pt(II) direnç elde katkıda bulunmaktadır. Antikanser terapi ve tedavi başarısızlığı44,45ana nedeni Platin kemoterapi direnci önemli bir sorundur.
Sistemik dolaşıma koruyucu bir etki sağlamak ve Pt II kaynaklı yan etkileri azaltmak için Pt(II) Ajan kapsüller istikrarlı bir nanosystem geliştirdik. Sistem bir nanoemulsion (KYF-Pt-NE)46oluşturmak için KYF tripeptit ile stabilize bir oleik acids-Pt(II) çekirdek temel alır. KYF-Pt-NE, tripeptit hem de oleik asit, amino asitler yapı taşları ile gıda ve İlaç Dairesi (FDA) genel olarak tanınan olarak güvenli (GRAS) durumunda. KYF-Pt-NE bir nanoprecipitation yöntemi47kullanılarak hazırlanır. Kısacası, oleik acids-Pt(II) eşlenik organik bir çözücü içinde çözünmüş ve sonra dropwise 37 ° C'de sulu bir KYF çözüm (şekil 1) eklendi Çözümü birkaç saat KYF-Pt-ne kendinden montajlı izin karıştırılır Nanoemulsion 10 kDa santrifüj yoğunlaştırıcıları içinde konsantre ve üç kere su ile yıkanır. Bir fluorophore ile KYF kimyasal modifikasyonu floresan FITC-KYF-Pt-NE sentezi Biyomedikal görüntüleme için uygun sağlar.

<table><tbody><tr><td>2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronyum tetrafloroborat (TBTU)</td><td>ANASPEC INC.:</td><td>AS-20376</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>4 kuyulu odacıklı konfokal çanak</td><td>Lab-Tek II, Thermo Fisher Scientific</td><td>154526</td><td></td></tr><tr><td>6-bromoheksanoik asit</td><td>Chem-Impex INT ' görüntüleme için L A.Ş.</td><td>24477</td><td>Mount</td></tr><tr><td>Sinai Hastanesi'nden profesör John Martignetti tarafından cömertçe yapılan</td> peptid<td>A2780</td> için tıklama modifikasyonu <td>Yumurtalık kanseri hücre hattı</td>Barnstead Nanopure Thermo Fisher D11901 su filtreleme sistemi BUCHI rotavapor R-3 Buchi Z568090 Solvent giderme ve numune kurutma için Santrifüj 5810 R eppendorf <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>5811F</td><td>Platin kompleksi ayrımı için</td></tr><tr><td>Cis-diklorodiaminplatin (II) %99</td> <td>Acros Organics</td><td>19376-0050</td><td>in vitro testler</td></tr><tr><td>CP70</td><td>Mount Sinai Hastanesi'nden profesör John Martignetti tarafından cömertçe onaylandı</td><td>Yumurtalık kanseri hücre hattı</td>Dijital su banyosu VWR 97025-134 Hücre kültürü için ortamı ısıtmak için Dinamik Işık Saçılımı (DLS)<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nanopartikül boyutu ölçümleri için</td> <td>Brookhaven Instrument Corporation</td><td></td></tr><tr><td>ES-2</td><td>ATCC</td><td>CRL-1978</td><td>yumurtalık kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys (Boc) -OH %99,79</td> <td>Chem-Impex INT' L A.Ş.</td><td>00493</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe 4-alkoksibenzil alkol reçinesi (0.382 meq / g),</td> <td>Chem-Impex INT' L A.Ş.</td><td>01914</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>Fmoc-LTyr(tBu)-OH %98</td> <td>Alfa Aesar</td><td>H59730</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>HERACELL 150i CO2 kuluçka makinesi</td><td>Thermo Scientific Fisher</td><td></td><td>kuluçka makinesi</td></tr><tr><td>Yüksek basınçlı şırınga pompası</td><td>Yeni Çağ</td><td>1010-US</td><td>Nanopartikül sentezinde platin kompleksi ilavesi için</td></tr><tr><td>Ocak gözü/karıştırıcı</td><td>VWR</td><td>12365-382</td><td>Numune karıştırma ve ısıtma için</td></tr><tr><td>LAMP-1 Antikoru (Alexa Fluor 647 ile kojuge edilmiş)</td> <td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc-18821 AF647</td><td>Görüntüleme için</td></tr><tr><td>N, N-diizopropiletilamin (DIPEA)</td> <td>Meşe Ağacı Kimyasal</td><td>005027</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>Ninhydrin% 99</td> <td>Alfa Aesar</td><td>A10409</td><td>Kaiser testi</td></tr><tr><td>Oleik asit</td><td>Chem-Impex INT ' L A.Ş.</td><td>01421</td><td>Platin kompleksi sentezi için</td></tr><tr><td>OV90</td><td>ATCC</td><td>CRL-11732</td><td>Yumurtalık kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>Hücre yıkama için</td></tr><tr><td>Permount montaj ortamı</td><td>Fisher Chemical</td><td>SP15-100</td><td>Görüntüleme için</td></tr><tr><td>Fenol</td><td>Fisher Chemical</td><td>A92500</td><td>Kaiser testi</td></tr><tr><td>Fosfotungstik asit</td><td>Fisher Chemical</td><td>TEM</td><td></td></tr> <tr><td>Piperidine %99</td> <td>BTC</td><td>219260-2.5L</td><td>SPPS</td></tr> Platinum AAS standart ruhu için A248-25 negatif leke <tr><td></td><td>Alfa Aesar</td><td>88086</td><td>1000ug/ml kalibrasyon eğrisi için</td></tr><tr><td>Propargil bromür %97</td> <td>Alfa Aesar</td><td>L10595</td><td>Floreseinin alkin modifikasyonu için</td></tr><tr><td>Bilimsel biyolojik kabin</td><td>Thermo Scientific Fisher</td><td>1385</td><td>Bio-hood hücre kültürü için</td></tr><tr><td>Kendi Kendini Temizleyen Vakum Sistemi</td><td>Welch</td><td>2028</td><td>Rotavapor için vakum pompası</td></tr><tr><td>Gümüş nitrat</td><td>Acros Organics</td><td>19768-0250</td><td>Sisplatin aktivasyonu</td></tr><tr><td>SKOV3</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td>Yumurtalık kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>S313-1</td><td>Platin kompleksi sentezi için</td></tr><tr><td>Kalay (II) klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>208256</td><td>Platin varlığı için Test</td></tr><tr><td>TOV21G</td><td>ATCC</td><td>CRL-11730</td><td>Yumurtalık kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit %99 (TFA)</td><td>Alfa Aesar</td><td>L06374</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>Triizopropilsilan (TIPS)</td><td>Chem-Impex INT' L A.Ş.</td><td>01966</td><td>SPPS</td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Uranin tozu görüntüleme için% 40</td> <td>Fisher Scientific</td><td>S25328A</td><td>Floresein Vivaspin 20'nin alkin modifikasyonu için</td></tr><tr><td>(10000 MWCO)</td> <td>Nanopartikül yıkama ve yoğuşma için</td> <td>Sartorious</td><td>VS2001</td></tr><tr><td>VWR Ters Mikroskop VWR</td><td></td><td>89404-462</td><td>Hücre kültürü izleme için</td></tr></tbody></table>

tripeptit stabilize nanoemulsion oleik asit

A Tripeptide-Stabilized Nanoemulsion of Oleic Acid

Biz bir oleik acids-Pt(II) çekirdek ve lizin-tirozin-fenilalanin (KYF) kaplama (KYF-Pt-NE) oluşan bir nanoemulsion üretmek için bir yöntem açıklanmaktadır. KYF-Pt-NE Pt(II) 10 Wt % saklar, 107 ± 27 nm ve negatif bir yüzey yük çapındadır. KYF-Pt-NE su ve serum stabil ve biyolojik olarak aktif. Bir fluorophore KYF için konjugasyon biyolojik görüntüleme için uygun bir floresan nanoemulsion sentezini sağlar. Nanoemulsion sentezi sulu bir ortam ve kısa bir KYF peptid ve oleik acids-platinum(II) eşlenik, kendinden montajlı KYF-Pt-NE formları yoluyla gerçekleştirilir. Kendinden montajlı işlem bağlıdır çözüm sıcaklığını yüzeylerde molar oranı ve akış hızı substrat ilavesi. Çok önemli adımlar sentezi sırasında en iyi karıştırma oranı korumak, kendinden montajlı için yeterli zaman izin ve nanoemulsion yavaş yavaş santrifüj yoğunlaştırıcı içinde ön zenginleştirme içerir.

KYF-Pt-NE bu iletişim kuralını kullanan hazırlanan temsilcisi TEM görüntüsü şekil 2Agösterilir. KYF-Pt-NEs de dağınık, Morfoloji, küresel ve üniforma içinde büyüklük. KYF-Pt-doğrudan doğruya--dan 200 ölçümleri yapılır, en az üç TEM görüntülerle ölçülen NEs, göbek çapı 107 ± 27 nm olduğunu. KYF-Pt-NE, dinamik ışık spektroskopisi (DL), kullanılarak analiz hidrodinamik çapını 240 bulundu nm ile 0.156 bir polydispersity dizin. KYF-Pt-NE su Zeta potansiyel-60.1 or...

Bu iletişim kuralı ile lizin-tirozin-fenilalanin (KYF) tripeptit stabilize bir oleik acids-platinum(II) eşlenik nanoemulsion sentezlemek için verimli bir yöntem açıklanır. Nanoemulsion formlar KYF ve eşlenik olmasını, kendinden montajlı yolu ile hafif sentetik koşullar altında.

Tripeptit stabilize Nanoemulsion oleik asit

We describe a method to produce a nanoemulsion composed of an oleic acids-Pt(II) core and a lysine-tyrosine-phenylalanine (KYF) coating (KYF-Pt-NE). The ...

Kısa peptid dizileri geniş göz önüne alındığında, bu yöntem diğer birçok nanopartikül tasarımları genişletilebilir. Peptit modifikasyonu sistemi tanı amaçlı uygun hale getirebilir. Biyobozunur, düşük toksisite stabilizatör ajan ile ilaçlara anti-kanser platin kapsülleme son derece ilaç uygulamaları için ilgilidir.Yumurtalık kanseri ile ön in-vivo çalışmalar umut verici ve daha fazla araştırılacaktır. Başlamak için, 60 santigrat derecede ultra saf su dört mililitre 50 miligram sisplatin askıya. Sisplatin çözeltisine gümüş nitrat çözeltisini damla-akıllıca ekleyin ve karanlıkta 60 santigrat derecede iki saat boyunca 300 ila 400 RPM karışımı karıştırın.Bundan sonra, çözeltide serbest gümüş iyonları olmadığını doğrulamak için ağırlık hidroklorik asit %10 kullanın. Hidroklorik asit ilave edilerek ek gümüş klorür oluşursa, karışımı 3, 220 kat yerçekiminde 10 dakika santrifüj edin. Supernatant decant ve 0,2 mikrometre şırınga filtresi ile filtre.Daha sonra, 10 iki klorür kristalleri 2-3 damla uygulayarak platin için filtrat test edin. Süspansiyon koyu kahverengi veya turuncuya dönerse platin bulunur. Daha sonra, 60 santigrat derecede üç mililitre suda oleik asit 94,2 miligram süspansiyon içine su bir mililitre sodyum hidroksit 13.3 miligram ekleyin.60 santigrat derece iki saat boyunca karışımı karıştırın. Daha sonra, ısı kapatın ve bir yağlı, sarı-kahverengi çökelti olarak ham ürün elde etmek için 16 ila 24 saat oda sıcaklığında karıştırmaya devam edin. Reaksiyon karışımını 3, 220 kat yerçekiminde 10 dakika santrifüj edin ve süpernatantı çıkarın.Ürünleri 25 derecede döner buharlaştırıcıda kurutun. Ham ürünü, ürünü santrifüj le girdap ve geri kazanarak beş mililitre asetonitite askıya alın. Saf, oleik asit platin II soluk sarı bir katı olarak eşlenik elde etmek için en az iki üç kez daha bu yıkama işlemi tekrarlayın.İlk olarak, bir saat boyunca 25 mililitre dimetilformamid içinde 5.7 gram Fmoc korumalı L-fenilalanin fonksiyonel Wang rekarin ıslatın. Daha sonra, amin korumak için 80 RPM sallayarak beş dakika dmf% 20 piperidine 15 mililitre rezorin ıslatın. Resin drenaj ve de-koruma 20 dakika boyunca tekrarlayın.Reçiyiyi DMF ve izopropil alkol le yıkayın. Korumadan arındırma onaylandıktan sonra, Fmoc korumalı L-tirozin TBTU ve DIPEA'yı ekleyin ve karışımı kaplin için 16 ila 24 saat boyunca çalka Reçiyiyi DMF ve izopropil alkolle yıkayın.Kaiser testini gerçekleştirin ve daha önce açıklandığı gibi korumayı arındırmaya ve yıkamaya devam edin. Çift ve de-protect Fmoc aynı şekilde lizin korumalı. Reçieni DMF, IPA, metanol, diklorotan ve diethyl eter ile yıkayın.FITC modifikasyonu için bir gram KYF rulmanlı rezorna ayırın. Kalan reçiyiyi %95 trifloroasetik asitle ıslatın. Rezorneden tripeptid imal etmek için üç saat boyunca %2.5 triisopropilsilane ve %2.5 su.20 santigrat dereceye soğutulmuş diethyl eter ile ham peptid çökeltin. 30-40 mililitrelik soğuk dietil eter porsiyonlarında santrifüj ile çökelti üç kez yıkayın ve vakum altında kurulayın. Daha sonra KYF reşarinin kalan gramını 30 mililitre DMF'de 120,1 miligram 6-asetatanoik asit ile TBTU ve DIPEA ile karıştırın.Azit modifiye tripeptid elde etmek için oda sıcaklığında 16 ila 24 saat boyunca karışımı çalkalayın. Daha sonra, 3.78 katı bakır miligram ile bu reçine 253 miligram birleştirin (I)iyodür 71.9 propargyl florisean miligram ve DIPEA 2.24 miligram. 24 saat sallayarak karışımı tepki sağlar.Daha sonra FITC modifiye edilmiş KYF rulman reçisini iyice yıkayın. Cleave FITC rezorneden KYF modifiye ve değiştirilmemiş tripeptid aynı şekilde arındırMak. Nanoemoulsion hazırlamaya başlamak için, 10 miligram oleik asit platin II ipa 1.5 mililitre eşlenik eritin.Bu çözeltiyi 5 mililitrelik şırınganın içine çekin, 20 kalibrelik bir iğne takın ve şırıngayı reaksiyon alanının üzerine bir şırınga pompasına monte edin. Şırınga pompasını dakikada 0,1 mililitreye ayarlayın. FITC modifiye KYF ile bir nanoemülsiyon için, 20 mililitre suda bir miligram FITC modifiye KYF ve bir miligram değiştirilmemiş KYF çözün.Modifiye edilmemiş KYF ile bir nanoemülsiyon için, bunun yerine 20 mililitre suda iki miligram KYF çözünür. FITC ile modifiye edilmiş veya değiştirilmemiş KYF çözeltisini 37 santigrat dereceye ısıtın. KYF çözeltisinin yaklaşık 400 RPM'de kıpırdadığından ve şırınganın çözeltiyle uyumlu olduğundan emin olun.Sonra, oleik asit platin iki konjuge damla akıllıca eklemeye başlamak için şırınga pompası başlatın. Eşlekap eklendikten sonra karıştırma hızını 150 RPM'ye düşürün ve çözeltinin oda sıcaklığına soğumasını bekleyin. 16-24 saat karıştırmaya devam edin.Sonra, 10,000 Daltons santrifüj filtre ünitesinde nanoemultion konsantre. Nanoemülsiyonunu bir santrifüj filtre ünitesinde üç kez dört mililitrelik ultrasaf su ile yıkayın. Ve sonra sulu bir çözelti olarak saklayın.Nihai ürün KYF nano tanecikleri için opalescent ve FITC modifiye nano tanecikleri için floresan olduğunu. Modifiye edilmemiş KYF ile hazırlanan nanoemülsiyondamlacıklar küresel, iyi dağılmış ve nispeten düzgün boyutlardaydı. İletim elektron mikroskobu görüntülerine dayanarak, çekirdeklerin çapı yaklaşık 107 nanometre idi.FITC modifiye nanoemülsiyon, burada yeşil görünür, çeşitli yumurtalık kanseri hücre hatları hücreleri girebilir. Her iki formülasyonun hidrodinamik çapı suda dört ay boyunca artarken, genel boyutlar korunmuştur. Buna ek olarak, %20 fetal büyükbaş serumda bir gün kuluçkadan sonra emülsiyon da opsonizasyon gözlenmedi.Emülsiyondan platin salınımı pH 7.4'te en yavaş ıstabuydu ve platinin sadece %20.8'i dört saat sonra serbest bırakıldı. pH azaldıkça platin salınımı hızlandı. Platin içeren KYF kaplı nanoemülsiyon, bu yumurtalık kanseri hücre hatlarının canlılığını klinik olarak ilgili analog olan karboplatinden çok daha büyük bir dereceye kadar azalttı.Nanoemülsiyon da altı hücre hatları beş sisplatin daha canlılık karşılaştırılabilir veya daha büyük bir azalma gösterdi. KYF kaplı nanoemülsiyon sürekli oleik asit platin II tek başına eşlenik daha canlılık karşılaştırılabilir veya daha büyük bir azalma indüklenen. Bu tripeptid baz nanopartikül iskele içinde hidrofobik terapötik kapsülleme için basit, verimli bir yöntemdir.Kısa peptidler biyobozunur ve tıp ve biyoteknoloji için önemli olan düşük toksisite vardır. Organik çözücülere maruz kalmamak için duman kaputu altında bu işlemi gerçekleştirin. Platin oleik asit ve KYF platin nanoemülsiyonlar anti-kanser özelliklere sahiptir ve bu nedenle özel bir özenle ele alınmalıdır.Bu yöntem düşük filabilatör aktivitesi ve ekipman açısından basittir, ancak sentez stratejisinin doğru uygulanmasına dayanır ve altta yatan kimyasal kavramlar. Yöntemimiz diğer küçük ilaç molekülleri sunmak için uzatılabilir. Nanopartikül çekirdek oleik asit oluşur ve bu nedenle hidrofobik ajanların kapsülleme için uygundur.

a-tripeptide-stabilized-nanoemulsion-of-oleic-acid

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Faz kaydırmalı nanoemulsions (PSNE) lokalize ısıtma geliştirmenize ve tümörlerde termal ablasyon geliştirmek için yüksek yoğunluklu odaklanmış ultrason kullanarak buharlaşmış olabilir. Bu yazıda, dar bir boyut dağılımı ile kararlı PSNE hazırlanması tarif edilmektedir. Ayrıca, ultrason aracılı ablasyonu konusunda buharlaşmış PSNE etkisini doku taklidi hayaletleri gösterilmiştir.

Akustik Damlacık buharlaşması ve Bubble-gelişmiş Ultrason aracılı Ablasyon için dar Boyut Dağılımları ile Faz-shift Nanoemulsions sentezi

Emülgatör olarak E-TPGS vitamini kullanılarak poli(laktik-ko-glikolik asit) oluşan nanopartiküllerin ve mikropartiküllerin üretimini ve karakterizasyonunu açıklıyoruz. Emülgatör konsantrasyonu gibi formülasyon parametrelerini değiştirerek, ortalama çapları 220 nm ila 1.98 μm arasında değişen nanopartiküller üretmek mümkündür.

Vitamin E-TPGS ile Tek veya Çift Emülsiyon ile Oluşturulan PLGA Nanopartikülleri

Çekirdeklerinde kendi kendine birleşmiş nanoyapılar içeren lipid parçacıklarının kinetik stabilizasyonu için karbon nanotüplerin akıllı bir uygulamasını rapor ediyoruz. Lipid parçacıklarının hazırlanması, ilaç dağıtımı gibi biyomedikal uygulamalarda kullanımlarına izin veren oldukça düşük konsantrasyonlarda karbon nanotüpler gerektirir.

Karbon Nanotüpler tarafından Stabilize İçeriden Kendinden monte Lipid Parçacıklar uyduruk hazırlanması

Metoksi-polietilen glikol (MPEG-b -PPheGE) üzerine fenil glisidil eter (PheGE) anyonik polimerizasyon yaşayan önemli adımlar anlatılmıştır. Elde edilen blok kopolimer miseller (BCMS) fizyolojik olarak uygun koşulları elde edildi altında 4 gün boyunca doksorubisin% 14 (% ağırlık) ve ilacın sürekli bırakılmasını sağlar ile yüklendi.

π-π İstifleme etkileşimlerle Stabilize blok kopolimer miselleri hazırlanması için bir amfifilik kopolimerin anyonik polimerizasyonu

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Lipozomlar tek Zincirli amphiphiles içeren, özellikle yağ asitleri, sergi farklı özellikleri nedeniyle tek zincir amphiphiles benzersiz kimyasal özelliklerini içeren bu diacylphospholipids göre. Burada hazırlık, arıtma ve kısmen oluşan lipozomlar kullanımı ya da bu amphiphiles bütün teknikleri açıklar.

Hazırlık, arıtma ve yağ asidi içeren lipozomlar kullanımı

Bu çalışmada nanopartikül karakterizasyonu takip nanoliposome hazırlık için ince lipid film yöntemi kullanılarak klasik hidrasyon açıklanır. A 47 kDa-hidrofilik ve küresel protein, tarin, başarıyla istikrarı artırmak için bir strateji olarak kapsüllenir, hızlı açıklık önlemek, ve kontrollü salınımı teşvik. Bu yöntem hidrofobik moleküllerkapsülasyonuna adapte edilebilir.

Biyoaktif Hidrofilik Globüler Proteinlerin Tuzakları Için Nanoliposomes Hazırlanması ve Karakterizasyonu

İlaç taşıyıcı uygulamalar için kullanılan yağlar, hastaların lipid profilini bozabilir, bu da kardiyovasküler hastalıklarda istenmeyen bir durumdur. Omega-3 yağ asitleri açısından zengin yağlar, geleneksel yağlara sağlıklı bir alternatiftir ve kendi kendine emülsifiye edilmiş ilaç dağıtım sistemleri için muazzam bir potansiyele sahiptir.

Lipofilik İlaçların Çözünürlüğünü Arttırmak için Sağlıklı Yağların Kendi Kendine Nanoemülsifikasyonu

Verimli adjuvanları rasyonel olarak tasarlamak için, poli-laktik-ko-glikolik asit nanopartikül-stabilize Pickering emülsiyonu (PNPE) geliştirdik. PNPE, güçlü hücresel temas için benzersiz yumuşaklığa ve hidrofobik bir arayüze sahipti ve yüksek içerikli antijen yüklemesi sundu, dağıtım sisteminin antijen sunan hücrelere hücresel afinitesini artırdı ve antijenlerin verimli bir şekilde içselleştirilmesini sağladı.

Antijen İçselleştirmesini Artırmak için Parçacık Stabilize Emülsiyonun Hücresel Afinitesi

Mevcut protokol, biyouyumlu lipozomlar üretmek için mikroakışkan bir teknik olan oktanol yardımlı lipozom montajını (OLA) tanımlamaktadır. OLA, verimli kapsülleme ile monodispersed, mikron boyutunda lipozomlar üretir ve anında çip üzerinde deneylere izin verir. Bu protokolün sentetik biyoloji ve sentetik hücre araştırmaları için özellikle uygun olması beklenmektedir.

Biyomühendislik için On-Chip Oktanol Destekli Lipozom Montajı

Bu protokolde, antijene özgü sistemik ve mukozal yanıtları desteklemek için adjuvan olarak kullanılmak üzere katyonik nanoemülsiyon kapsüllü retinoik asit (RA) geliştirdik. FDA onaylı RA'yı nanoemülsiyona ekleyerek, nanoemülsiyonun intramüsküler enjeksiyonundan sonra vajina ve ince bağırsakta antijene özgü sIgA teşvik edildi.

OVA'ya özgü sistemik ve mukozal yanıtları teşvik etmek için bir adjuvan olarak katyonik nanoemülsiyon kapsüllenmiş retinoik asit

Keşfedin, KYF tripeptidi ile stabilize edilmiş oleik asit-platin(II) konjugatı nanoemülsiyon sentezleme yöntemini. Bu biyobozunur sistem, platin içeren anti-kanser ilaçların kapsüllenmesi için ilaç uygulamalarında yüksek potansiyel sunar.

Tripeptit stabilize Nanoemulsion oleik asit

Daha fazla video keşfet