Name: Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: Öğrenin, Danio rerio'da stres davranışlarını ölçmek için yeni tank testi yöntemini. Bu teknik, nöral devrelerde stres modülasyonunu farmakolojik yaklaşımlarla araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Jüpiter yaşam bilimi girişimi 'nden Florida Atlantic University 'de ERD ve ACK 'e fon tarafından destekleniyordu. Bu çalışma Ayrıca hibe R21NS105071 (ACK ve ERD) ve R15MH118625 (ERD) Ulusal Sağlık Enstitüleri 'nden verilir tarafından desteklenmektedir.

Protokol, kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi Florida Atlantik Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. hazırlık
<ol><li>Davranış etütler gerçekleştirmek için yalıtılmış bir oda belirleyin veya bir odanın bir bölümünü kapatmak için yalıtın. Not: Oda bozulmamış olmalıdır ve balık normal davranışını kesintiye kaçınmak için düşük trafik var.</li>
	<li>Aşağıdaki malzeme ve ekipman davranışsal odaya taşıyın: (i) bir kamera ve objektif, (ii) objektif bağlı olabilir bir kızılötesi filtre, (iii) bir kamera standı, (iv) kamera edinme yazılımı ile bir bilgisayar, (v) bir firma ve istikrarlı tablo tahlil gerçekleştirmek için , (vi) kızılötesi ışıklar (IR ışıkları; 850 nm veya 940 nm), (vii) kayıt tankının uzunluğundan daha uzun olan beyaz akrilik difüzör (VIII) 1,8 L trapez plastik tahlil tankı (' roman tankı ' olarak anılacaktır; burada kullanılan 12 x 18 inç) ve (IX) bir kova balık sistemi suyu. Not: yeni tank için, laboratuvarımız, şekildeki trapez olan ticari olarak kullanılabilen plastik gemiler kullanır. Tankın boyutları yaklaşık olarak 6 x 9 ' da (ayrıntılı boyutlar Şekil 1A'da sağlanır). Kullandığınız difüzör panosu, yeni tanktan (12 ' si x 18 in) biraz daha büyüktür. Yeni tank deneyleri, dikdörtgen veya farklı trapez boyutları20,21olan olanlar gibi farklı şekillerde olan tanklarla gerçekleştirilmiştir. Genellikle, balık davranışı ne olursa olsun kendi boyutları tüm tanklarda benzer: Tüm konteynerler için, balık başlangıçta alt yarısını tercih, henüz zaman içinde daha büyük frekans ile üst yarısında keşfetmeye başlar.</li>
	<li>Kızılötesi filtreyi kamera lensi ile bağlayın. Kızılötesi ışık şeritlerinin dalga boyları genellikle 850 nm 'den 940 nm 'ye kadar değişir. Filtre, kamera üzerinden 720 nm 'den daha az dalga boyu ışığı kısıtlayan uzun geçiş filtresine sahiptir.</li>
	<li>Kamera edinme yazılımı için uygun parametreleri seçin. Çoğu kayıt için, kamera edinimini saniyede 30 kare/saniye hızında ve kayıt süresini 10 dakikaya ayarlayın. Not: Bu parametreler, denemeye bağlı olarak farklılık gösterebilir. Örneğin, bir roman tankında alışkanlık okumak için22,23, daha uzun kayıtlar gerekebilir.</li>
</ol>2. Kurulum
Not: Bu bölümdeki adımlar yeni tank tahlil ayarlama açıklanmaktadır. Şekil 1B'de son ürünün bir diyagramı verilmiştir.
<ol><li>Masanın ortasına yeni tankı yerleştirin.</li>
	<li>Kızılötesi ışıkları tankının arkasına konumlandırın ve beyaz akrilik levha veya difüzör ekranını tank ile LED ışık kaynağı arasına yerleştirin.<ol>
<li>Difüzör yerleştirin böylece LED 'Ler gelen ışık maksimum yayılır ve ışığın yoğunluğu roman tankı aydınlatmak için yeterlidir. Yakın tahta ışık kaynağına, daha parlak ışıklar olacak, henüz daha az diffuz olacaktır. Bunun tersine, difüzör kartını ışık kaynağından uzağa yerleştirmek ışık yoğunluğunu azaltır, ancak ışığı daha iyi yayacak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Balık sistemi suyu ile roman tankının yaklaşık dörtte üçünü doldurun. Not: sistem suyu, musluk suyunun ters osmoz kullanılarak üretilir, böylece iletkenlik 900 ± 100 μS 'ye eşittir, pH nötr (7,2) ve sıcaklık 27 ± 1 °C ' dir.</li>
	<li>Kamerayı kamera standında takın ve kamerayı bilgisayara bağlayın. Video edinme yazılımı açın ve tank ön yüz ve tüm roman tankı görülebilir ve video hiçbir gizlenmiş alanlar vardır sağlamak için kamerayı ayarlayın. Kamera aracılığıyla gözlenen tank boyunca yeterli ve hatta aydınlatma var gibi tank ve kızılötesi ışıkları ayarlayın. Not: deneylere geçmeden önce, bir balık videosunu yakalanan ve izleme gerçekleştirildiği bir deneme çalışması gerçekleştirmek için genellikle yararlı olabilir. Bu, Kur 'un davranış denemesi için yeterli olmasını sağlayacaktır.</li>
</ol>3. yeni tank testi kurulumu
<ol><li>Bir 250 ml kabı balık sistemi su ile önceden dolu hazırlamak ve en az iki tutma tankları.</li>
	<li>Test sabahı, en az 10 test yetişkin zebra balığı her deneysel durum (kontroller ve deneysel yetişkinler) bir tutma tankı içine balık tesisinden kullanılmak üzere transfer, davranış odasına aktarmak ve en az bir için gelmesini izin Saat. Not: bir güç analizi denenmeden önce yapılmalıdır, henüz bizim elimizde, bir n = 10 istatistiksel önemini algılamak için genellikle yeterlidir. Dahası, tutma tankı litre su başına beş kişiden fazlasını içermelidir. Zebra balığı yetişkinler yeni bir tank22dakika içinde habituate gösterilmiştir olarak bir saat bir aklimasyon yeterlidir. Ayrıca, davranışsal ritimler sirkadiyen süreçlerden etkilenir ve böylece farklı günlerde yapılan deneysel çoğaltır aynı saatler içinde yapılmalıdır. Biz genellikle 11:00 saat arasında tüm deneyler gerçekleştirmek ve 6:00 PM.</li>
	<li>Tanklara, hayvanların durumunun veya genotipinin denemeler için kör olduğu şekilde etiketleyin. Not: denemeler, bir mektup veya sayı sistemi kullanarak tankları etiketleme yoluyla deneylere kolayca kör edilebilir (yani, bir tank ' A ', başka bir ' B ', vb. olarak etiketlenmiştir). Deneylere dahil olmayan bir parti, tankları böyle bir sistemle etiketleyebilir ve deneme sonrası kimliklerinizi, post-analiz tamamlandıktan sonra maskeler.</li>
	<li>Bir NET kullanarak, nazikçe adım 3,1 önceden doldurulmuş kabı tek bir yetişkin yerleştirin. Yetişkin balık 10 dakika boyunca kabı içinde gelmesini izin verin. Not: cinsiyete özgü farklılıklar aramak için önemli post-analiz olabilir gibi, yetişkin seks kaydedin.</li>
	<li>Beaker sonra aklimasyon, yeni tank içine balık tanıtmak (Bölüm 1) yavaşça Beaker su ve yetişkin dışarı dökme tarafından kurmak.</li>
	<li>Yeni tank içine yetişkin tanıttıktan sonra, kamera kaydını başlatın ve balık ek sıkıntı önlemek için kurulum uzağa taşıyın.</li>
	<li>Kayıt bittikten sonra, tek bir yeni tank ve bir tutma tankı içine yerden bireysel çıkarın. Not: aynı bireylerde tekrarlanan testleri önlemek için 3,2 adımda birinden farklı bir tutma tankı kullanılmalıdır.</li>
	<li>Tüm hayvanlar test edilinceye kadar her yetişkin için 3,7 3,4 adımları yineleyin. Not: kör edici koşullara veya genotiplere ek olarak, denemeleri rasgele yapın. Rasgele bir sayı jeneratör veya bir denemeler arasında rastgele sağlayan herhangi bir araç kullanın. Denemeler başlamadan önce her deneme belirlenir böylece bu deneme önce yapılmalıdır.</li>
	<li>Tüm testlerin sonunda, balıkları balık tesisine geri dönün.</li>
</ol>4. ilaç ile ön tedavi
Not: aşağıdaki adımların amacı, ilaçların kullanımından önce ve sonra bireyin davranışını karşılaştırmak. Bu karşılaştırma ilk olarak yeni bir tank testi gerçekleştirerek elde edilir adım 3,4 olarak 3,6, ilaç tedavisi ve ardından ikinci bir roman tank testi (Şekil 3a).
<ol><li>Pozitif ve negatif kontroller dahil olmak üzere ilacın stok çözümünü hazırlayın. Not: ilaç daha önce literatürde kullanılırsa, uygun bir çalışma dozu bulun ve bunu kullanın. Örneğin, temsili sonuçlar buspiron için, biz bir 100x stok çözüm yapmak ve kullanım 0,05 mg/ml son konsantrasyon olarak, literatürde açıklandığı gibi13,20. Önerilen doz bilinmiyor ise, birkaç konsantrasyonları inceleyerek bir doz yanıt eğrisi yapılmalıdır. Uyuşturucu seri dilüsyonları ile daha fazla kadehler ayarlayın. İlaç suda çözülebilir değilse, bir solvent olarak dimetil sülventid (DMSO) kullanın.</li>
	<li>250 ml kadehler sistem su ile konsantrasyon çalışma ilaçlar seyreltir. Örneğin, 100x çözelti yapılırsa, sistem suyunda seyreltmeli 1:100. Kontrol olarak sadece sistem suyu ile bir kabı ayarlayın. Not: DMSO, adım 3,1 bir çözücü olarak kullanılırsa, kontrol kabı içinde DMSO eşit bir hacim kullanın.</li>
	<li>Başka bir araştırmacı yardımıyla, ilaç ve kontrol kadehler kimliklerini maskelemek Tester sonrası analiz kadar tedavi koşullarına kör olmasını sağlamak için. Not: bir sayı veya mektup sistemi kullanılabilir.</li>
	<li>3,1, temel davranışsal stres yanıtı elde etmek için 3,6 ile ilgili adımları izleyerek yeni bir tank testi gerçekleştirin.</li>
	<li>Temel kayıt sonra, hemen yeni tank yetişkin balık kaldırmak ve ilaç veya araç ile dozlu kabı yerleştirmek için bir net kullanın, adım 4,2 açıklandığı gibi. Yetişkin 10 dakika boyunca kabı kalmak için izin verin. Not: net, ilaçların çapraz kontaminasyonunu önlemek için beaklardaki suya dokunmadığından emin olun. Kullanılan ilaç bağlı olarak uygun doz ve yönetim süresi emin olun. 10 dakika tedavi süresi tüm ilaçlar için çalışamayabilir.</li>
	<li>Tedavi sonrası, adım 4,5 içinde kabı yetişkin kaldırmak için bir net kullanın ve başka bir kabı sadece taze sistem suyu ile dolu yerleştirin. Bu, ikinci yeni tank testi sırasında dozajı en aza indirmek için yıkım dönemdir. Yetişkin bir ek 10 dakika yıkanmasına kalmak için izin verin. Not: ilaç ile herhangi bir istenmeyen çapraz tedavi önlemek için her ilaç durumu için ayrı ağlar kullanılmalıdır. Deneylerin istekleri durumunda yıkama süresi atlanabilir.</li>
	<li>Önceki adımda kabı Bu yetişkin kaldırarak ikinci bir kez yeni tank dalış testi gerçekleştirin, New Roman tankı yerleştirin ve 3,6 için 3,5 adımları izleyin.</li>
	<li>İkinci yeni tank testinden sonra, kişiyi ayrı bir tutma tankına çıkarın. İkinci roman tankı sistem suyu dökmek ve bir sonraki test için taze sistem suyu ile doldurun. Bu adım, herhangi bir ilacın çapraz kontaminasyonunu önler. Not: ilaçların yarı ömrü bağlı olarak, her 3 saatte bir ilaç içeren taze bezeler yapılmalıdır. Buspirone için, her 3 saatte bir taze çözümler yapın. Buna ek olarak, adım 3,8 notun ardından, testler ve ilaç tedavileri arasında denemeler randomize edilmelidir.</li>
	<li>Tüm denemelerin sonunda, kişileri balık tesisine geri dönün. Not: kullanılan ilacın türüne bağlı olarak, bu tedavilerin bireyler üzerinde etkileri uzun ömürlü olabilir. Bu nedenle, diğer deneylerde bu kişileri kullanmayın.</li>
</ol>5. video analizi
<ol><li>Tüm denemeler sonra, seçim izleme yazılımı içine video dosyalarını yükleyin. Not: genellikle ticari olarak kullanılabilen izleme yazılımı kullanıyoruz, ancak serbestçe kullanılabilen birçok yazılım paketi kullanılabilir. İzleme elde etme adımları kullanılan yazılım paketine göre farklılık gösterebilir.</li>
	<li>Videodan hala bir çerçeve kullanarak, (i) çevresindeki hayali sınırları (i) su ile dolu tüm yeni tank Arenası ve çevresindeki sınırlar (ii) üst üçüncü, (iii) ikinci üçüncü, ve (iv) tankının alt üçte biri olarak tanımlayın. Balık roman tankının her bölümünde harcanan zaman kurmak için bunları kullanın.</li>
	<li>5,2 adımda tanımlanan her arenada kare başına x-y yer değiştirmesi hesaplayın.</li>
	<li>Tankın üst, orta ve alt alanlarını tanımlayın. Her bölge boyutu benzer olmalıdır. Bu bölgelerin belirlenmesi için kısa bir yöntem, y yönünde tank uzunluğunu hesaplamak ve bu 3 ile bölmek etmektir. Not: genel protokol varyasyonları var. Örneğin, bazı laboratuvarlar üçte biri yerine yarısını kullanır14.</li>
	<li>Her arenada, mesafeye ve hızda harcanan süreyi belirleyin. Not: çoğu izleme paketleri Kullanıcı için otomatik olarak hesaplar. Ancak, izleme yazılımı yoksa, bunlar x-y yer değiştirme değerlerinden kolayca hesaplanabilir. Örneğin, uzaklık formül kullanılarak belirlenebilir: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59092/59092eq1.jpg"> ve hız formülü takiben tespit edilebilir: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59092/59092eq2.jpg">
</li>
	<li>Tüm denemeler için parça ve ölçümler almak için 5,4 5,2 adımları yineleyin. Not: Bu genel protokol varyasyonları</li>
</ol>6. normallik için test
<ol><li>İstatistiksel farklılıkları hesaplamak için geçmeden önce istatistikleri gerçekleştirin. Verilerin normal olarak bir Shapiro-Wilk testi kullanılarak dağıtılıp dağıtılacağını kontrol edin.</li>
	<li>Verilerin normalde dağıtıldığı boş varsayım reddedilirse (yani, veriler bir Gauss dağıtımını izlemez), parametrik olmayan testler kullanarak tüm testleri gerçekleştirin. Bunun tersi olarak, veriler normal bir dağılımın takibinde bulunursa, parametrik testler kullanmaya devam edin. Not: istatistik gerçekleştirmek için ticari olarak kullanılabilen yazılımları kullanırız; Ancak, R programlama dili de kullanılabilir. Bir Shapiro-Wilk analizi, R 'nin Shapiro. test işlevi kullanılarak gerçekleştirilebilir.</li>
</ol>

Yazarlar, rakip veya mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Zebrafish, yeni bir tankta sağlam bir stres tepkisi sergiler Burada, Yetişkin zebrafish stres yanıtlarını incelemek için basit bir davranışsal yaklaşım tarif, ve farmakoloji kullanarak stres basit bir ölçü olarak yaklaşımı doğrulamak.
Yeni tank testi, zebra balığı ve diğer balık türlerinde doğuştan gelen stresin incelenmesi için yaygın olarak kullanılan bir testtir12,14,21,<sup ...

Stres tepkiler olası zararlı veya olumsuz uyaranlara kaynaklanan davranış ve fizyolojik durumları değiştirilir. Stres tepkiler Hayvan Krallığı boyunca temin edilir ve bir organizmanın hayatta kalması için önemlidir1. Yıllar süren araştırmalar, stres devletlerinin temelindeki genetik ve nöronal mekanizmalar hakkında bilgilerimizi büyük ölçüde genişletmiştir. Bugün, amigdala ve striatum2gibi beynin alanları ve kortikotropin serbest hormon (CRH) gibi genetik faktörler ve glukokortikoid (gr) ve mineralokortikoid reseptörleri ( Bay) kapsamlı3,4,5,6okudu. Bu kritik bulgulara rağmen, genetik ve nöronal stresin düzenlenmesi hakkında pek bilinmemektedir. Bu nedenle, birçok stres ile ilgili bozukluklar terapötik eksikliği muzdarip.
Genetiği değiştirilebilen model organizmalar, davranışların genetik ve nöronal kontrolünün çalışmasında yararlı bir araç sağlar. Balık modelleri, özellikle, son derece güçlüdür: onlar kısa nesil zaman ile küçük organizmalar, bir laboratuar ortamında kullanımı facile, onların genomları kolayca değiştirilebilir, ve, bir omurgası olarak, onlar sadece genetik paylaşmak, aynı zamanda nöroanatomik memeli meslektaşları ile Homoloji7,8. Stresi ölçmek için standart testler, genetik mutasyonlar içeren zebrafit hatları ile eşleştirilebilir veya hassas nöronal alt setlerin manipülasyonunun mümkün olduğu ve tek genlerin veya tanımlanmış nöronların etkileri hızla ve verimli bir şekilde değerlendirilebilir.
Davranışsal olarak, stres yanıtları, hiper-aktivite veya uzun süreli (' donma ')9, azaltılmış keşif10, hızlı nefes, azaltılmış gıda alımı11dönemleri olarak balık karakterize edilebilir ve bir yer-bir tank alt için tercih12. Örneğin, tanıdık olmayan bir tank içine yerleştirildiğinde, Yetişkin zebra balığı ve diğer küçük balık modelleri tankın alt yarısı için bir başlangıç tercihi gösterir, henüz, zamanla, Balık yakın eşit frekans12ile üst ve alt yarısı keşfetmeye başlar. Tedavi yetişkinlerin anksiyete neden balık hemen üst yarım10keşfetmek için bilinen ilaçlar ile,13. Bunun tersi olarak, endişeyi artıran ilaçlar, balık tankının alt yarısında güçlü bir tercih göstermesine neden olur12,14,15. Böylece, düşük keşif ve tank alt yarısında tercih stres basit ve güvenilir göstergeleri vardır.
Çoğu omurga gibi, balık stres tepkiler Hipotalamik-hipofiz-inter-renal eksen aktivasyonu ile tahrik edilir (HPI; memelilerde Hipotalamik-hipofiz-adrenal [hPa] eksenine benzer)14,16. Hipotalamik nöronlar hormon kortikotropin-serbest hormon ifade (CRH) hipofiz için sinyal, hangi sırayla serbest adrenokortikotropik hormon serbest (ACTH). ACTH o zaman inter-böbrek bezi üretmek ve salgıya kortizol, hangi aşağı hedefleri16, bunlardan biri CRHüreten hipotalamik nöronların negatif geribildirim olan bir dizi vardır sinyalleri3,17, 18,19.
Burada, doğuştan gelen stresin davranışsal önlemlerini değerlendirmek için bir yöntem tarif ediyoruz. Davranış için, biz detay protokolleri yeni tank dalış testi12,14kullanarak. Daha sonra, bir örnek olarak, bilinen bir anksiyolitik ilaç, Buspirone, stres davranışsal önlemleri azaltır göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Kamera</td><td></td><td></td>: <td>Edmund Optics'ten lensli Point Grey Grasshopper3 USB kamera kullanıyoruz.</td></tr><tr><td>Kızılötesi filtre</td><td>Edmund Optics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Video Edinme Programı</td><td></td><td></td><td>Çekim kare hızı ayarlanabildiği için Virtualdub veya FlyCapture gibi programları kullanın.</td></tr><tr><td>Kızılötesi LED ışıklar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tahlil tankı</td><td>Aquaneering</td><td>Parça numarası ZT180</td><td>Boyut: M3 1.8 litre</td></tr><tr><td>Stand ve kelepçe veya kamera</td><td></td><td></td><td></td>için standart tripod</tr><tr><td>250mL beher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzleme yazılımı</td><td></td><td></td><td>Noldus Bilgi Teknolojisi'nden Ethovision XT 13 kullanıyoruz</td></tr><tr><td>Buspirone klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7148</td><td></td></tr><tr><td>Randomize deneme üreteci</td><td></td><td></td><td>Microsoft Excel'de RANDBETWEEN fonksiyonunu kullanıyoruz</td></tr></tbody></table>

zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Stresli uyaranlara uygun şekilde yanıt vermek, bir organizmanın hayatta kalması için önemlidir. Kapsamlı araştırma stres ile ilgili hastalıklar ve psikiyatrik bozukluklar geniş bir spektrumunda yapılmış, henüz daha iyi terapötik geliştirmek için stres genetik ve nöronal düzenleme içine daha fazla çalışmalar hala gereklidir. Zebra balığı stres nöral temelleri araştırmak için güçlü bir genetik model sağlar, orada mutant ve transgenik hatları büyük bir koleksiyon var gibi. Ayrıca, farmakoloji kolayca zebrafish için uygulanabilir, çoğu ilaç doğrudan suya eklenebilir gibi. Biz zebrafish doğuştan stres tepkiler çalışması için bir yöntem olarak ' yeni tank testi ' kullanımı burada tarif ve nasıl potansiyel anksiyolitik ilaçlar tahlil kullanılarak doğrulanabilir gösterir. Yöntem kolayca genetik mutasyonlar içeren zebra balığı hatları ile birleşebilir, ya da hassas nöral devreleri manipüle etmek için transgenik yaklaşımlar kullanılır. Tahlil de diğer balık modellerinde kullanılabilir. Birlikte, açıklanan protokol diğer laboratuvarlara bu basit tahlil kabulü kolaylaştırmak gerekir.

Zebra balığı 'te stres incelenmesi Vahşi tip zebrafish zaman içinde stres davranışını incelemek için, biz yeni tank testinde AB gerinim24 yetişkin balık test. AB yetişkinleri, yukarıda açıklandığı gibi protokole tabi tutulmuştur. Kısaca, Balık davranış odasında bir tankta 1-h iklimlendirme dönemi verildi. Bir birey 10 dakika boyunca bir kabı yerleştirilir ve daha sonra yavaşça taze sistem suyu ile dolu bir tanıdık olmayan tank (yeni tank) yerleştirilir....

Bu yazıda yetişkin zebrafish stres davranışsal ölçmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, stresli bir durumda, zebra balığı bir tankın alt yarısını tercih ettiği doğuştan gelen eğilimin avantajlarından yararlanır. Biz de Farmakoloji ile tahlil bağlantı için yöntemleri tarif.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Yeni tank tsay Zebrafish güçlü genetik araçları ile birleştirecek beynin stres modüle nasıl ve nasıl sinir devreleri disregulated olabilir incelemek için bir yöntem sunuyor. Genetik ve nöronal sinyal yolları zebra balığı ve memeliler arasında son derece korunmuştur ve bu teknik stres tepkisinin altında yatan mekanizmaları daha iyi anlamamıza yardımcı olabilir. Yöntem Zebrafish özgü değildir ve Meksika kör mağara balığı ile kullanılan ve bu nedenle potansiyel olarak diğer balık türlerine genişletilebilir.Deneme çalışması, başarılı bir izleme elde etmek için hayvanın arka plana karşı uygun aydınlatma ve karşıtlığını belirlemek için yararlı olabilir. Tsay nadiren kullanılır, ancak ilgili bir süreç olabilir. Adımları görselleştirmek, diğer araştırmacıların yordamı başarıyla yürütmelerine yardımcı olur.Laboratuvarda doktora sonrası doktora yapan Jacqueline Chin ve lisans öğrencisi Lydia Albert bu prosedürü sergileyecekler. 250 mililitrelik bir kabı ve en az iki tutarak tankı balık sistemi suyuyla doldurarak başlayın. Testsabahı, en az bir saat boyunca alışmak üzere davranış odasına tüm balık transfer etmeden önce bireysel tutma tankları içine her deneysel durum için en az 10 yetişkin Zebrafish aktarın.Tankları, hayvanların durumu veya genotipinin deneyciye göre kör olduğunu etiketlayın ve tek bir yetişkini önceden doldurulmuş kabın içine nazikçe yerleştirmek için bir ağ kullanın. Yetişkin balık yavaşça deneysel roman tankı içine beher gelen su ve balık dökme den önce 10 dakika boyunca kabın içinde alışmak için izin verin. Balık tanka girer girer gelmez, kamera kaydına başlayın ve balıklara ek bir sıkıntı oluşmasını önlemek için kurulumdan uzaklaşın.Kayıt bittiğinde, bireyi yeni tanktan çıkarın ve balığı yeni bir tanka yerleştirin. Ilgi belirli ilaçların etkilerini değerlendirmek için, sistem su 250 mililitre beaers bir çalışma konsantrasyonu için ilaç seyreltmek. Sadece kontrol olarak sistem suyu olan bir kabı kullanmak.Test edenin post-analize kadar tedavi koşullarına kör olduğundan emin olmak için ilacın ve kontrol behemlerinin kimliklerini maskeleyin ve temel davranışsal stres yanıtı elde etmek için gösterildiği gibi yeni bir tank testi yapın. Temel kaydın sonunda, balığı sadece tatlı sistem suyu içeren bir yıkama kabına aktarmadan önce balığı 10 dakika lığına test beherlerinden birine aktarmak için bir ağ kullanın. Özellikle çeşitli ilaç tedavileri söz konusu olduğunda, kontrol balıklarının kazara dozlanmasını önlemek için her bir tedavi kabı için belirlenen ayrı ağlar kullanmak önemlidir.10 dakika sonra, ikinci bir roman tank testi için yeni bir roman tankı içine balık yerleştirin. Testin sonunda yetişkin Zebrafish'i yeni bir tutma tankına aktarın ve deneysel ilacın çapraz kontaminasyonunu önlemek için bir sonraki adım için ikinci yeni tanktaki sistem suyunu taze sistem suyuyla değiştirin. Tüm denemelerin sonunda, balık tesisine bireyleri geri dönün.Burada 10 dakikalık yeni tank testinin ilk ve son dakikasında tek bir Zebrabalığının lokomotor aktivitesi gösterilmiştir. Tanka ilk girdiğinde, balıklar genellikle zamanın çoğunu yeni tankın dibinde geçirirler. Ancak zamanla, yetişkin balıktankın üst harcanan zaman miktarında kademeli bir artış göstermektedir.Gerçekten de, ilk dakika boyunca tankın üst kısmında harcanan toplam süre, yeni tank testinin son dakikasına göre çok daha kısadır. Buna karşılık, ilk ve son dakika arasında kat edilen toplam mesafe önemli bir fark ortaya koymaktadır. Bu temsili deneyde, yetişkin Zebrafish lokomotor yollarının analizi, tek başına araca maruz kalan yetişkin grupları için tedavi öncesi ve sonrası Zebrabalığı yüzme aktivitesi arasında çok az fark ortaya koymuştur.Buna karşılık, anksiyolitik bir ilaca maruz kalan yetişkinler, ilaca maruz kalmadan önce aynı balığın lokomotor yollarına kıyasla tankın üst kısmında büyük miktarda zaman harcamış. Bu farklılıklar genel olarak daha az hareket ten kaynaklanmadı, çünkü herhangi bir grup için seyahat mesafesi önemli bir fark ölçülmedi. Davranışsal ritimler sirkadiyen süreçlerden etkilendiği için, her deney için günün aynı saatinde farklı günlerde gerçekleştirilen deneysel kopyaları gerçekleştirdiğinden emin olun.Açık alan testi veya diğer fizyolojik stres ölçümleri gibi ek davranışsal tahliller, yeni tank dalış testinden elde edilen sonuçları daha da doğrulamak için yapılabilir. Bu yöntem stres, korku ve anksiyete ile ilgili soruları ele almak için yüksek bir iş tamtarı kullanılabilir.

behavioral-approaches-to-studying-innate-stress-in-zebrafish

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Video, etanole maruz kaldıktan sonra zebra balıklarında anksiyete ile ilgili davranışı incelemek için aydınlık-koyu tercih testini açıklamaktadır.

Aydınlık-Koyu Tercih Testi: Zebra Balıklarında Kaygı ile İlgili Davranışları İncelemek İçin Bir Yöntem

Makale, zebra balıklarında stresi değerlendirmek için davranışsal bir yöntemi açıklamaktadır. Strese yanıt olarak, zebra balığı stres giderilene kadar bir tankın dibinde yüzmeye meyillidir. Örnek protokol, testi gerçekleştirmek için adım adım yöntemi açıklar.

Yeni Tank Dalış Deneyi: Zebra Balıklarında Doğuştan Gelen Stres Tepkilerini İncelemek İçin Bir Yöntem

Laboratuvarımız 7 günlük eski Zebra balığı larvaları birkaç farklı davranışların tespiti için yararlı bir yeni yüksek verimli otomatik görüntüleme sistemi geliştirdi. Sistem, larva çevresel toksik ya da eczacılık maruz kalmış sonra davranış ince değişiklikleri tespit etmek için kullanılabilir.

Zebra balığı Larva otomatik Yüksek verim Davranış Analizleri

Balıkları ilaçlara maruz bırakırken değişkenliği azaltmak için yeni bir yöntem açıklanmıştır.  Çeşitli etanol maruziyeti modellerine maruz kalan balıkların, açık / koyu skotaktakik bir testte geri çekilme sırasında anksiyete seviyelerinin değiştiği bulundu.

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi ( Danio rerio) Ve Çekilme Niceleme

Bu el yazması, zebra balıklarında cesaret, saldırganlık ve sürü sürmenin kurulumunu, uygulanmasını ve analizini ve davranışsal bir sendromun varlığının test edilmesini açıklar. Davranışsal niceleme için standartlaştırılmış bir yaklaşım, çalışmalar arasında daha kolay karşılaştırma yapılmasına izin verecektir. Her tahlil ayrı ayrı çalıştırılabildiği için bu protokolde değişiklikler yapmak mümkündür.

Zebra balığı Davranış Sendromlardaki için cesaret, Saldırganlık ve shoaling Tahliller

Zebra balığı'nın kişilikleri onların yanıt-e doğru su akıntıları ve zayıf manyetik alan etkisi nasıl değerlendirmek için tasarlanmış bir davranış protokol açıklar. Aynı kişilikleri balıklarla yönler davranışlarını göre ayrılır. Sonra rheotactic yönlendirme davranışlarını bir yüzme tünelde bir düşük Debi ile ve farklı manyetik koşullar altında görülmektedir.

Zebra balığı manyetik alanlara hassasiyeti kişiliği olan etkisinin değerlendirilmesi

Bu makalede zebrabalığı larvaları modeli kullanılarak çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesinin değerlendirilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sunulmuştur, buna maruz kalma süreci ve nörodavranışsal göstergeler için testler de dahildir.

Çevresel Kirleticilerin Zebrabalığı Larvaları Üzerindeki Nörodavranışsal Etkilerinin İncelenmi

Mevcut protokolün amacı, yetişkin zebra balığı için bir sosyal tercih testi oluşturmak ve kullanmak için gerekli adımları ana hatlarıyla belirtmek ve etanolün neden olduğu sosyal kusurları karakterize etmek için kullanılabileceğini göstermektir.

Olumsuz Bir Embriyonik Ortamın Yetişkin Sosyal Davranışı Üzerindeki Etkisini Karakterize Etmek için Zebra Balıklarında Fetal Alkol Spektrum Bozukluklarının Modellenmesi

Burada, kimyasalların (örneğin, metamfetamin ve glifosat) yetişkin zebra balığı üzerindeki potansiyel nörotoksik etkilerini tek bir tank kullanarak etkili bir şekilde belirlemek için yeni tank, Shoaling ve sosyal tercih testleri dahil olmak üzere kapsamlı bir davranışsal test bataryası sunuyoruz. Bu yöntem nörotoksisite ve çevresel araştırmalarla ilgilidir.

Tek Bir Tankta Davranış Testleri Bataryası Kullanılarak Yetişkin Danio rerio'da Nörotoksisite Değerlendirmesi

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Öğrenin, Danio rerio'da stres davranışlarını ölçmek için yeni tank testi yöntemini. Bu teknik, nöral devrelerde stres modülasyonunu farmakolojik yaklaşımlarla araştırmaya olanak tanır.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Daha fazla video keşfet