Name: Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes-aracılı dönüştürme, patates ve GUS Staining tarafından Suberin gen organizatörü etkinliği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Öğrenin patates bitkilerini Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes ile dönüştürme yöntemlerini. GUS boyama ile köklerde gen promotör aktivitesini değerlendirerek gen fonksiyonlarını hızlıca analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser "gayri resmi" de Innovación y Ciencia (AGL2009-13745, PB FPI hibe), "gayri resmi" de Economía y Competitividad ve finansman (AGL2012-36725, AGL2015-67495-C2-1-R) FEDER ve Girona Üniversitesi (doktora hibe SF ve grant tarafından desteklenmiştir SING11/1). Yazarlar Dr. Inge Broer (arazi kullanımı, üniversite Rostock, Rostock, Almanya Enstitüsü) ve Dr. Salomé Prat (Centro Nacional de Biotecnología, Madrid, İspanya) A. rhizogenes ve A. tumefaciens zorlanma sağlamak için minnettarız, sırasıyla ve Dr Marçal Soler ve Dr Anna Plasencia A. rhizogenes dönüştürme deneyler başlatılıyor alınan destek ve yardım için (Toulouse III Paul Sabatier Üniversitesi — CNRS, bitki Araştırma Laboratuvarı (LRSV), Castanet Tolosan, Fransa). Yazarlar Sara Gómez (Departament de Biologia, UdG, Girona) laboratuvar iş dışarı taşıyan ve bitkiler ve Ferran Fontdecaba ve Carla Sánchez yardımcı bazı deneyler ile onlar yapıyor iken Bakımı onun değerli yardım için teşekkür ederiz onların son derece proje.

A. rhizogenes dönüştürme Protokolü uyarlanmış ve boynuz vd.7 ' den değiştiren ve test genotip S. tuberosum ssp. tuberosum (cv. özellikle). A. tumefaciens dönüştürme Protokolü uyarlanmış ve düşük Banerjee ve ark.22 değiştiren ve test genotip S. tuberosum ssp edildi. tuberosum (cv. özellikle) ve S. tuberosum ssp. andigena. Her iki yordamlar ana adımları şekil 1 ve Şekil 2'de, anılan sıraya göre özetlenir.
Not: Vitro transferler gerçekleştirme yordamı tüm adımları, hızlı bir şekilde yapmak ve mümkün olduğunda, tabak ya da kapalı, tencere böylece solan ve kontaminasyonu önlemek için havaya bitki maruz minimize korumak. Aksi belirtilmedikçe, tüm bitki incubations dolapları 24 ° C ışık/12 h 20 ° C karanlık ve 67 µmol m-1 s-112 h koşullar altında yapılmıştır. Aksi belirtilmedikçe, tüm bakteri manipülasyon ve vitro bitki transferler laminar akış kukuIeta aseptik şartlarda gerçekleştirin. Agrobacterium ve vitro bitki kültürler için tüm medya tarifleri Tablo S1içinde sağlanır.
Uyarı: Genetiği değiştirilmiş bakteri ve yürüttüğü atık konteyner bitkiler Kasası.
1. Agrobacterium kültürler dönüşümü için kullanılan
Not: (Lütfen Dr. Inge Broer tarafından sağlanan) C58C1:Pri15837 A. rhizogenes dönüştürme için kullanılan zorlanma ve bunun için A. tumefaciens (lütfen Dr Salomé Prat tarafından sağlanan) GV2260 oldu. A. rhizogenes ile ikili vektör PK7GWIWG2_II-T-bir dönüşüm işareti taşıyan kıllı kök izlemek için DNA içeren RedRoot (VIB-bölümü bitki sistemleri Biyoloji Universiteit Gent; http://gateway.psb.ugent.be) dönüştü oluşumu. A. rhizogenes ve A. tumefacienstarafından oluşturulan dönüştürülmüş kökleri karşılaştırmak için her ikisi de β-glucoronidase (GUS) muhabir gen sürüş FHT organizatörü taşıyan bir T-DNA içeren ikili vektör pKGWFS7 ile dönüştürülmüş ve sefaloridin direnç gen olarak seçilebilir işaret15.
<ol><li>Agrobacterium kolonisi almak ve bu gecede (O/N) antibiyotik (Tablo S1) ile desteklenmiş YEB orta 5 ml 200 devir / dakikada sallayarak ile 50 mL santrifüj tüpü 28 ° C'de büyümek.</li>
	<li>A. tumefaciens dönüştürme için OD600 olmalıdır optik yoğunluk ölçmek = 0,6-1.0.<ol>
<li>Optik yoğunluk daha yüksek ise, OD600 düşürücü bir alt kültür olun kültür OD600 ulaşıncaya kadar taze medya ve bekleme ile 0,3 = = 0,6-1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Agrobacterium kültür 3000 x g bir tezgah üstü santrifüj oda sıcaklığında 10 dakika içinde de 1 mL santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Pipetting tarafından süpernatant kaldırın ve 1 mL taze YEB orta Antibiyotikler olmadan hücrelerde resuspend. Antibiyotik tümüyle kaldırılmasını sağlamak için bu adımı yineleyin.<ol>
<li>A. tumefaciens dönüşüm için son resuspension OD600 son optik yoğunluğu elde etmek için uygun YEB birim ekleme 0.8 =.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreler buz bulaşması için bitkiler hazırlanırken tutmak.</li>
</ol>2. bitki materyali için dönüştürme
<ol><li>Bir ya da iki düğüm kök kesimler de apikal veya steril vitro patates bitkilerden (donör bitkiler); yardımcı tomurcukları içeren yapmak Onları 3-4 hafta boyunca (şekil 1A ve şekil 2A) katı 2MS orta tencere içinde büyümek.</li>
</ol>3. bitki A. rhizogenes (şekil 1) kullanarak dönüştürme
Not: Bu prosedür dönüştürülmüş kıllı kökleri almak sağlanır. Transgene ifade değerlendirmek için bir negatif kontrol gereklidir. Negatif kontrol hazırlamak için dönüştürülmemiş ya da dönüştürme marker gen içerir boş vektör ile dönüştürülmüş bir A. rhizogenes zorlanma kullanarak yordamı izleyin.
<ol><li>Taze medya tabak kullanın; Alternatif olarak, tabakları, kapak tarafı ile 4 ° C'de medya kurutma önlemek için şeffaf filmle sıkıca kapalı tutulabilir. Kare medya tabak hazırlamak için onları ~ 15 °, MS, 40 mL ile doldurun eğim ve kuvvetlendirmek bildirin. Bu bitki ile orta hava parçası temasını en aza indirmek olacaktır.</li>
	<li>Çok dikkatli bir şekilde bir donör bitki bir 120 x 120 mm kare tabak 2 MS ortamından aktarmak.</li>
	<li>Cerrahi bir iğne A. rhizogenes kültürünün bir kök düğümler arası 3 μL için enjekte ve farklı internodes mümkün olduğunda bitki başına iki kez tekrarlayın. Not: her enjeksiyon bir bağımsız dönüşüm olayı (şekil 1B) olarak düşünün.</li>
	<li>Hemen tüm bitki katı MS Orta 0,1 mM acetosyringone ile takviye ile kare bir tabağa aktarın. Plaka başına 2 bitkiler karşılamak. Not: 1 M acetosyringone hisse senedi çözüm DMSO içinde hazırlanan ve -20 ° C'de depolanan</li>
	<li>Cerrahi bant kullanarak plaka mühür ve dikey 4 gündür bir büyüme kabine içinde düzenleyin.</li>
	<li>Bitki için yeni bir kare plaka A. rhizogenesöldürmeye sefotaksim sodyum ile [500 µg/mL] desteklenen MS orta aktarabilirsiniz.</li>
	<li>10-12 gün sonra kıllı kökleri (şekil 1 c,1 D) görünmesini başlayacak. Daha sonra yerli bitki köklerinin tüketim ve bitki için yeni bir kare tabak sefotaksim sodyum [500 µg/mL] ile desteklenen MS orta aktarabilirsiniz. Not: Dönüştürülmüş kıllı kökleri tarafından kırmızı Floresans ne zaman bir DsRed dönüşümün işaretçisi (şekil 3D) kullanarak kontrol edilebilir.</li>
	<li>Kompozit tesisi (şekil 1E) elde etmek için 3-4 hafta sefotaksim sodyum [500 μg/mL] ile desteklenen MS ortamda büyümeye transgenik kıllı kökleri izin (orta her hafta değiştirin).</li>
	<li>Amacına bağlı olarak takip transgenik kıllı kökleri ve negatif kontrolleri yaymak.<ol>
<li>Bir hydroponic (Tablo S2) veya toprak orta büyük gelişme için izin vermek için tüm bileşik bitki aktarın.</li>
		<li>Kırmızı floresan dönüştürme işaretleyici (DsRed protein) ifade kökleri kesilmiş bir neşter kullanarak tek tek dönüştürülmüş kıllı kökleri yaymak için ne zaman onlar 4-8 cm uzunluğunda (şekil 1E) ve onları bir petri Gamborg B5 katı orta ile içine transfer % 2 sukroz ve sefotaksim sodyum ile [500 μg/mL] desteklenmiştir. Plastik laboratuar film ile plakalarının ve onları 20 ° C'de karanlıkta büyümek Not: Kökleri steril koşullarda ( Tablo malzemelerigörmek) floresan algılamak için donatılmış bir stereomicroscope altında manipüle edilebilir.</li>
		<li>Biyokütle üretimi (yani, gen ifade analizi) için 5 cm uzun kıllı kök kesmek ve ile Gamborg B5 sıvı orta % 2 sukroz ve sefotaksim sodyum ile [500 µg/mL] takıma 20 mL 150 ml Erlenmeyer şişeye aktarabilirsiniz. Bu karanlıkta 20 ° C ile 60 d/d, 6 hafta boyunca büyümeye.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59119/59119fig1v3.jpg"> Resim 1: patates transgenik kıllı kökleri A. rhizogeneskullanarak elde etmek için zaman çizelgesi '. Dönüşüm süreci ve kıllı kökleri büyümek için sonraki adımları her aşamada ulaşmak için toplu hafta gösterilir. Farklı aşamalarında temsil edici görüntüleri tasvir: 3-hafta-yaşlı vitro kullanarak işlemi başlatma tertibatları (A), o zaman enfeksiyon bitkilerin A. rhizogenes (B), proliferatif oluşumu enjekte edilerek doku (C, ok) gelişmekte olan kıllı kökleri (D) ile ve kırmızı floresan dönüşümün işaretçisi DsRed (E) ifade gelişmiş kıllı kökleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59119/59119fig1v3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
4. bitki A. tumefaciens (Şekil 2) kullanarak dönüştürme
Not: Bu prosedür dönüştürülmüş bitkilerin almak sağlanır. Transgene'nın etkisini değerlendirmek için bir negatif kontrol gereklidir. Bir seçenek ile boş vektör dönüştürülmüş bir A. tumefaciens kullanarak yordamı takip etmektir. Alternatif olarak, vahşi türü bitkiler kullanılabilir.
<ol><li>Keser ve bir yaprak (şekil 2A) 3-4-hafta-yaşlı bitkilerden bir kabında yerleştirir. Bir neşter kullanarak petiole dışlamak ve enine keser (yaprak boyutuna bağlı olarak 1-3) (şekil 2B) kesme kaçınarak kenarları yaprak Merkezi'nden yapmak.</li>
	<li>Hemen taze 2MS üzerinde 10 mL sıvı bir petri abaxial tarafı ile medyada yukarı yüzen yaprak yerleştirmek ve plaka kapatın. İlâ 15 accomodating adım cv. özellikle yaprakları yineleyin ve 25 (yaprak boyutu) bağlı olarakndigena ssp. için bırakır.</li>
	<li>Hemen A. tumefaciens kültürünün 80 µL OD600 eklemek sıvı ortamda 0.8 = ve bakteriyel çözüm dağıtmak 1 dk için el ile plaka lunaparkçı.</li>
	<li>Dikkatle film mühürleme ile mühür, alüminyum folyo ile kapatın ve 24 ° C'de ortaya dönüştürme izin için bir odasında 2 gün kuluçkaya.</li>
	<li>CIM orta (şekil 2B) kadar abaxial yan tutmak yapraklarını aktarın ve onları bir hafta içinde bir büyüme kabine için kuluçkaya.<ol>
<li>Böylece yapraklar daha iyi medyada kalabileceği CIM orta cımbız ile kazı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>SIM orta (şekil 2C) kadar abaxial yan tutmak yapraklarını aktarın ve onları bir büyüme orta her 7-10 günde, sürgünler 2 cm boyunda olana yenileniyor kabine kuluçkaya.<ol>
<li>Böylece yapraklar tamamen medya tarafından çevrili olmak SIM orta cımbız ile kazı. Ortaya sürgünler kapağı ulaştığınızda, uzun boylu Petri yemekler ile çalışmak (100 x 20 mm, yükseklik x çapı). Not: 6-7 hafta (şekil 2E) sonra SIM orta (şekil 2B) ve sürgünler 2-3 hafta sonra Kallus oluşturacak. Çekimleri ne zaman onlar bağımsız yarasından oluşmuş Kallus ortaya bağımsız dönüşüm olayları olarak kabul edilecektir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kesme üç vuruyor ortaya çıktı (aynı dönüşüm olayı olarak kabul edilir) her Kallus (şekil 2E), onlara kültür şişeler MG orta ile sefotaksim sodyum [250 mg/L] ile izin vermek için takıma transfer destekliyorum, etiket alt bir sayı ile ve bir büyüme kabin 3-4 hafta için ya da sürgün dinç (şekil 2F) kadar kuluçkaya. Not: sürgün, kesme kaldırdığınızda de Kallus aksi takdirde kök oluşturacak değil.<ol>
<li>Olarak bağımsız satırları gerektiği kadar yineleyin. En fazla 5 farklı dönüştürme olayları farklı etkinlikler bitkilerden değil karışık tam güven içinde çalışmak için 8 cm çapında bir kültür şişesi yerleştirilebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Her olay en güçlü bitki seçin, 3-4 internodes ile çekim apikal segment keser ve yeni bir kültür şişeye sefotaksim sodyum [250 mg/L] ile desteklenmiş 2MS orta ile yerleştirir. Not: 3-6 hafta içinde bitki verimli bir şekilde büyüyecek, güçlü bir çekim ve kökleri gelişmekte.<ol>
<li>Seçilen bitki tam olarak geliştirmiştir kadar seçili olmayan sürgünler odasına getir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>En az bir düğümler arası veya apikal bud ile bitki kök kesimleri kesme ve sefotaksim [250 mg/L] ile desteklenen yeni 2MS orta aktarabilirsiniz. Onları kabine büyüme kuluçkaya.<ol>
<li>Her 3-4 hafta dönüştürülmüş vitro hatları kurmak için çoğaltma. Not: Sefotaksim sodyum 2MS orta için en az üç sonraki transferler emin olmak için A. tumefaciensöldürmek için gereklidir; A. tumefaciens büyüme gözlem yapılırsa, daha sonra bitkiler tekrar sefotaksim sodyum ile desteklenmiş 2MS medyaya aktarmak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bitki fenotip karakterize etmek için bitkiler toprak tam onların karakterizasyonu için ya da suda kültür kök muayene için aktarmak.<ol>
<li>Toprakta yaymak ve kurulan satırları korumak için üretilen yumrular tutun.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59119/59119fig2.jpg"> Resim 2: patates elde etmek için zaman çizelgesi dönüştürülmüş A. tumefacienskullanarak bitkiler. Dönüşüm süreci ve bitkiler büyümek için sonraki adımları her aşamada ulaşmak için toplu hafta gösterilir. Farklı aşamalarında temsil edici görüntüleri tasvir: işlemi kullanarak başlatma (A) 3 - hafta eski vitro bitkilerin yaprakları, yaralı ve virüslü transferini CIM medya (B), ne zaman transfer yaprakları yaprakları SIM medya (C), yaralı alanların etrafında Kallus görselleştirme SIM medya (D), SIM medya (E) 9-11 hafta sonra ateş oluşumu ve (F) MG medyaya transfer ediliyor sonra sürgünler 2-3 hafta sonra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59119/59119fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
5. hydroponic kültür
<ol><li>Hoagland'ın çözüm yarım strength için hazırlamak (0.5 x) (Tablo S2) 10 L kova.</li>
	<li>Homojenliği ve uygun oksijen koşulları korumak için bir akvaryum pompası sokmak.</li>
	<li>Karanlık koşullarda kökleri büyümeye alüminyum folyo ile kova duvarlarını kapsayacak.</li>
	<li>Kök zarar kaçınarak, vitro bitkiler için hydroponic kültür aktarın. Not: kökleri mikroorganizma yayılması kuluçka sırasında dikkatli bir şekilde suya batırılır kökleri sallayarak önlemek için kalan herhangi bir vitro ortamda kaldırın.</li>
	<li>Şeffaf film yeterli iklimlendirme ve büyüyen odasında kuluçkaya sağlamak bir sera gibi bitkilerle kapsar.</li>
	<li>3 gün sonra filmde delikler yapmak ve tamamen bir hafta sonra çıkarın.</li>
	<li>Taze medya ile 10 günde değiştirin.</li>
</ol>6. GUS histochemical muhabir gen tahlil
Not: bizim durumumuzda GUS analiz 2-3 hafta suda veya içinde vitrokökleri ile gerçekleştirildi.
<ol><li>Kökleri % 90'ı soğuk aseton (v/v) ile düzeltmek ve 20 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya.</li>
	<li>Distile su ile iki yıkama gerçekleştirin.</li>
	<li>Taze GUS çözüm (Tablo 1) Boyama ekleyin ve vakum uygulayın (-70 Pa) 20 dk için.</li>
	<li>İçinde karanlık bir mavi renk görünene kadar veya 4 h için ışığa duyarlı GUS korumak için 37 ° C'de kuluçkaya. Not: Ferri ve ferrocyanide GUS çözümde varlığı reaksiyon ürünleri Difüzyon en aza indirmek ve daha kesin yerelleştirme sağlar. Dikkat: bir duman başlığı kullan ve toksik siyanür türevleri GUS çözüm (potasyum ferricyanide ve potasyum ferrocyanide) ele alırken koruyucu giysi giyin. GUS substrat ve elden çıkarma malzeme güvenli bir şekilde atılmalıdır.</li>
	<li>Çözüm boyama GUS kaldırmak ve uygun kaplarda atın.</li>
	<li>Etanol % 70 (v/v) ile iki yıkama gerçekleştirin.</li>
	<li>Parlak alan mikroskop altında gözlemlemek. Not: boyama GUS için birkaç hafta stabil; Ancak, ilk haftasında GUS sinyal açıktır ve komşu hücrelerin içine daha az dağılır. Daha uzun depolama, tüp mühür ve 4 ° C'de depolayın</li>
</ol><img alt="Table 1" src="/files/ftp_upload/59119/59119tbl1.jpg" style="opacity: 0.9; font-size: 14px;"> Tablo 1: GUS boyama çözüm tarifi.

<ol><li>Gelvin, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traversing+the+Cell%3A+Agrobacterium+T-DNA%27s+journey+to+the+host+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Traversing the Cell: Agrobacterium T-DNA's journey to the host genome.</a> Frontiers in Plant Science. 3, 1-11 (2012).</li>
<li>Lacroix, B., Citovsky, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+bacterial+and+host+plant+factors+in+Agrobacterium-mediated+genetic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The roles of bacterial and host plant factors in Agrobacterium-mediated genetic transformation.</a> The International Journal of Developmental Biology. 57 (6-8), 467-481 (2013).</li>
<li>Lee, L. Y., Gelvin, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-DNA+binary+vectors+and+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">T-DNA binary vectors and systems.</a> Plant Physiology. 146 (2), 325-332 (2008).</li>
<li>Ishida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+transformation+of+maize+%28Zea+mays+L.%29+mediated+by+Agrobacteriumtumefaciens%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">High efficiency transformation of maize (Zea mays L.) mediated by Agrobacteriumtumefaciens.</a> Nature Biotechnology. 14 (6), 745-750 (1996).</li>
<li>White, F. F., Taylor, B. H., Huffman, G. A., Gordon, M. P., Nester, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+genetic+analysis+of+the+transferred+DNA+regions+of+the+root-inducing+plasmid+of+Agrobacterium+rhizogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Molecular and genetic analysis of the transferred DNA regions of the root-inducing plasmid of Agrobacterium rhizogenes.</a> Journal of Bacteriology. 164 (1), 33-44 (1985).</li>
<li>Dinh, P. T. Y., Brown, C. R., Elling, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+Interference+of+effector+gene+Mc16D10L+confers+resistance+against+Meloidogyne+chitwoodi+in+Arabidopsis+and+Potato%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">RNA Interference of effector gene Mc16D10L confers resistance against Meloidogyne chitwoodi in Arabidopsis and Potato.</a> Phytopathology. 104 (10), 1098-1106 (2014).</li>
<li>Horn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+potato+plants+with+transgenic+roots+on+non-transgenic+shoots%3A+a+model+system+for+studying+gene+silencing+in+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Composite potato plants with transgenic roots on non-transgenic shoots: a model system for studying gene silencing in roots.</a> Plant Cell Reports. 33 (12), 1977-1992 (2014).</li>
<li>Plasencia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eucalyptus+hairy+roots%2C+a+fast%2C+efficient+and+versatile+tool+to+explore+function+and+expression+of+genes+involved+in+wood+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Eucalyptus hairy roots, a fast, efficient and versatile tool to explore function and expression of genes involved in wood formation.</a> Plant Biotechnology Journal. 14 (6), 1381-1393 (2015).</li>
<li>Ron, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hairy+root+transformation+using+Agrobacteriumrhizogenes+as+a+tool+for+exploring+cell+type-specific+gene+expression+and+function+using+tomato+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hairy root transformation using Agrobacteriumrhizogenes as a tool for exploring cell type-specific gene expression and function using tomato as a model.</a> Plant Physiology. 166 (2), 455-469 (2014).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+application+of+a+universal+and+simplified+multiplex+RT-PCR+assay+to+detect+five+potato+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Development and application of a universal and simplified multiplex RT-PCR assay to detect five potato viruses.</a> Journal of General Plant Pathology. 83 (1), 33-45 (2017).</li>
<li>Almasia, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+production+of+the+potato+antimicrobial+peptide+Snakin-1+in+baculovirus-infected+insect+cells+and+development+of+specific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Successful production of the potato antimicrobial peptide Snakin-1 in baculovirus-infected insect cells and development of specific antibodies.</a> BMC Biotechnology. 17 (1), 1-11 (2017).</li>
<li>Serra, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+StKCS6+in+potato+periderm+leads+to+reduced+chain+lengths+of+suberin+and+wax+compounds+and+increased+peridermal+transpiration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">Silencing of StKCS6 in potato periderm leads to reduced chain lengths of suberin and wax compounds and increased peridermal transpiration.</a> Journal of Experimental Botany. 60 (2), 697-707 (2009).</li>
<li>Serra, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYP86A33-Targeted+gene+silencing+in+potato+tuber+alters+suberin+composition%2C+distorts+suberin+lamellae%2C+and+impairs+the+periderm%27s+water+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">CYP86A33-Targeted gene silencing in potato tuber alters suberin composition, distorts suberin lamellae, and impairs the periderm's water barrier function.</a> Plant Physiology. 149 (2), 1050-1060 (2008).</li>
<li>Serra, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+feruloyl+transferase+involved+in+the+biosynthesis+of+suberin+and+suberin-associated+wax+is+required+for+maturation+and+sealing+properties+of+potato+periderm%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%22%5BJournal%5D)">A feruloyl transferase involved in the biosynthesis of suberin and suberin-associated wax is required for maturation and sealing properties of potato periderm.</a> The Plant Journal. 62 (2), 277-290 (2010).</li>
<li>Boher, P., Serra, O., Soler, M., Molinas, M., Figueras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potato+suberin+feruloyl+transferase+FHT+which+accumulates+in+the+phellogen+is+induced+by+wounding+and+regulated+by+abscisic+and+salicylic+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">The potato suberin feruloyl transferase FHT which accumulates in the phellogen is induced by wounding and regulated by abscisic and salicylic acids.</a> Journal of Experimental Botany. 64 (11), 3225-3236 (2013).</li>
<li>Serra, O., Chatterjee, S., Figueras, M., Molinas, M., Stark, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deconstructing+a+plant+macromolecular+assembly%3A+chemical+architecture%2C+molecular+flexibility%2C+and+mechanical+performance+of+natural+and+engineered+potato+suberins%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Deconstructing a plant macromolecular assembly: chemical architecture, molecular flexibility, and mechanical performance of natural and engineered potato suberins.</a> Biomacromolecules. 15 (3), 799-811 (2014).</li>
<li>Vulavala, V. K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+genes+related+to+skin+development+in+potato%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Identification of genes related to skin development in potato.</a> Plant Molecular Biology. 94 (4-5), 481-494 (2017).</li>
<li>Landgraf, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ABC+transporter+ABCG1+is+required+for+suberin+formation+in+potato+tuber+periderm%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The ABC transporter ABCG1 is required for suberin formation in potato tuber periderm.</a> The Plant Cell. 26 (8), 3403-3415 (2014).</li>
<li>Verdaguer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+the+potato+StNAC103+gene+enhances+the+accumulation+of+suberin+polyester+and+associated+wax+in+tuber+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">Silencing of the potato StNAC103 gene enhances the accumulation of suberin polyester and associated wax in tuber skin.</a> Journal of Experimental Botany. 67 (18), 5415-5427 (2016).</li>
<li>Molina, I., Li-Beisson, Y., Beisson, F., Ohlrogge, J. B., Pollard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+Arabidopsis+feruloyl-coenzyme+A+transferase+required+for+suberin+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Identification of an Arabidopsis feruloyl-coenzyme A transferase required for suberin synthesis.</a> Plant Physiology. 151 (3), 1317-1328 (2009).</li>
<li>Gou, J. Y., Yu, X. -H., Liu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hydroxycinnamoyltransferase+responsible+for+synthesizing+suberin+aromatics+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A hydroxycinnamoyltransferase responsible for synthesizing suberin aromatics in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18855-18860 (2009).</li>
<li>Banerjee, A. K., Prat, S., Hannapel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+transgenic+potato+%28S.+tuberosum+L.+ssp.+andigena%29+plants+via+Agrobacterium+tumefaciens-mediated+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Efficient production of transgenic potato (S. tuberosum L. ssp. andigena) plants via Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation.</a> Plant Science. 170 (4), 732-738 (2006).</li>
<li>Sunil Kumar, G. B., Ganapathi, T. R., Srinivas, L., Revathi, C. J., Bapat, V. a <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+hepatitis+B+surface+antigen+in+potato+hairy+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Expression of hepatitis B surface antigen in potato hairy roots.</a> Plant Science. 170 (5), 918-925 (2006).</li>
<li>Schmidt, J. F., Moore, M. D., Pelcher, L. E., Covello, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+Agrobacteriumrhizogenes-mediated+transformation+of+Saponariavaccaria+L.+%28Caryophyllaceae%29+using+fluorescence+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">High efficiency Agrobacteriumrhizogenes-mediated transformation of Saponariavaccaria L. (Caryophyllaceae) using fluorescence selection.</a> Plant Cell Reports. 26 (9), 1547-1554 (2007).</li>
<li>Petti, C., Wendt, T., Meade, C., Mullins, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+genotype+dependency+within+Agrobacteriumtumefaciens+in+relation+to+the+integration+of+vector+backbone+sequence+in+transgenic+Phytophthorainfestans-tolerant+potato%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bioscience+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Evidence of genotype dependency within Agrobacteriumtumefaciens in relation to the integration of vector backbone sequence in transgenic Phytophthorainfestans-tolerant potato.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 107 (3), 301-306 (2009).</li>
<li>Gaudin, V., Vrain, T., Jouanin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+genes+modifying+hormonal+balances+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Bacterial genes modifying hormonal balances in plants.</a> Plant Physiology and Biochemistry. 32 (1), 11-29 (1994).</li>
<li>Nemoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+aux+and+rol+genes+of+the+Ri+plasmid+in+plant+cell+division+in+vitro.+Plant+Signaling+%26amp%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior%22%5BJournal%5D)">Function of the aux and rol genes of the Ri plasmid in plant cell division in vitro. Plant Signaling &amp.</a> Behavior. 4 (12), 1145-1147 (2009).</li>
<li>Visser, R. G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+inheritance+of+inserted+markers+in+binary+vector+carrying+Agrobacteriumrhizogenes-transformed+potato+%28Solanumtuberosum+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Expression and inheritance of inserted markers in binary vector carrying Agrobacteriumrhizogenes-transformed potato (Solanumtuberosum L.).</a> Theoretical and Applied Genetics. 78 (5), 705-714 (1989).</li>
<li>Guillon, S., Trémouillaux-Guiller, J., Pati, P. K., Rideau, M., Gantet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hairy+root+research%3A+recent+scenario+and+exciting+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Hairy root research: recent scenario and exciting prospects.</a> Current Opinion in Plant Biology. 9 (3), 341-346 (2006).</li>
<li>Georgiev, M. I., Agostini, E., Ludwig-Müller, J., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+transformed+roots%3A+from+plant+disease+to+biotechnological+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Genetically transformed roots: from plant disease to biotechnological resource.</a> Trends in Biotechnology. 30 (10), 528-537 (2012).</li>
<li>Ooms, G., Lenton, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-DNA+genes+to+study+plant+development%3A+precocious+tuberisation+and+enhanced+cytokinins+in+A.+tumefaciens+transformed+potato%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">T-DNA genes to study plant development: precocious tuberisation and enhanced cytokinins in A. tumefaciens transformed potato.</a> Plant Molecular Biology. 5 (4), 205-212 (1985).</li>
<li>de Vries-Uijtewaal, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+introduced+genetic+markers+in+transformed+root+clones+and+regenerated+plants+of+monohaploid+and+diploid+potato+genotypes%5BTitle%5D)+AND+%22TAG.+Theoretical+and+applied+genetics%22%5BJournal%5D)">Fate of introduced genetic markers in transformed root clones and regenerated plants of monohaploid and diploid potato genotypes.</a> TAG. Theoretical and applied genetics. 78 (2), 185-193 (1989).</li>
<li>Bird, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Arabidopsis+ABCG11%2FWBC11%2C+an+ATP+binding+cassette+%28ABC%29+transporter+that+is+required+for+cuticular+lipid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%3A+For+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of Arabidopsis ABCG11/WBC11, an ATP binding cassette (ABC) transporter that is required for cuticular lipid secretion.</a> The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology. 52 (3), 485-498 (2007).</li>
<li>Luo, B., Xue, X. Y., Hu, W. L., Wang, L. J., Chen, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ABC+transporter+gene+of+Arabidopsis+thaliana%2C+AtWBC11%2C+is+involved+in+cuticle+development+and+prevention+of+organ+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+and+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">An ABC transporter gene of Arabidopsis thaliana, AtWBC11, is involved in cuticle development and prevention of organ fusion.</a> Plant and Cell Physiology. 48 (12), 1780-1802 (2007).</li>
<li>Panikashvili, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+DESPERADO%2FAtWBC11+transporter+is+required+for+cutin+and+wax+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis DESPERADO/AtWBC11 transporter is required for cutin and wax secretion.</a> Plant Physiology. 145 (4), 1345-1360 (2007).</li>
<li>Panikashvili, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+DSO%2FABCG11+transporter+affects+cutin+metabolism+in+reproductive+organs+and+suberin+in+roots%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis DSO/ABCG11 transporter affects cutin metabolism in reproductive organs and suberin in roots.</a> Molecular Plant. 3 (3), 563-575 (2010).</li>
<li>Bjelica, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+%CF%89-hydroxylases+from+Solanum+tuberosum%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Fatty acid ω-hydroxylases from Solanum tuberosum.</a> Plant Cell Reports. 35 (12), 2435-2448 (2016).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abscisic+acid+coordinates+nod+factor+and+cytokinin+signaling+during+the+regulation+of+nodulation+in+Medicago+truncatula%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Abscisic acid coordinates nod factor and cytokinin signaling during the regulation of nodulation in Medicago truncatula.</a> The Plant Cell. 20 (10), 2681-2695 (2008).</li>
<li>Isayenkov, S., Mrosk, C., Stenzel, I., Strack, D., Hause, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+allene+oxide+cyclase+in+hairy+roots+of+Medicagotruncatula+reduces+jasmonate+levels+and+the+degree+of+mycorrhization+with+glomus+intraradices+1%5Bw%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Suppression of allene oxide cyclase in hairy roots of Medicagotruncatula reduces jasmonate levels and the degree of mycorrhization with glomus intraradices 1[w].</a> Plant Physiology. 139 (3), 1401-1410 (2005).</li>
<li>Dalton, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+roles+of+glutathione+S-Transferases+in+soybean+root+Nodules+1%5BC%5D%5BW%5D%5BOA%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Physiological roles of glutathione S-Transferases in soybean root Nodules 1[C][W][OA].</a> Plant Physiology. 150 (1), 521-530 (2009).</li>
<li>Limpens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+Agrobacteriumrhizogenes-transformed+roots+of+Arabidopsis+and+Medicago+truncatula%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botany%22%5BJournal%5D)">RNA interference in Agrobacteriumrhizogenes-transformed roots of Arabidopsis and Medicago truncatula.</a> Journal of Experimental Botany. 55 (399), 983-992 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Patates, istikrarlı tam transgenik bitkiler elde etmek için en yaygın sistem eksojen etki kullanarak organogenesis gerektiren Agrobacterium tumefaciens suşları tarafından dönüştürme kullanır. Sigara-T-DNA vektör sıra25entegre potansiyeline göre Agrobacterium protokolleri sahip olmasına rağmen bu metodoloji hala en kolay ve daha az pahalı patates bitkiler dönüştürmek kullanılabilir. Son yıl içinde A. rhizogenesilgi-aracılı dönüştürme transgenik kökleri A. tumefaciens<...

Ekonomik çıkarları dışında transgenik bitkilerin üretimi araştırma ultimate işlev genlerin göstermek için ve Bitki fizyolojisi ve geliştirme daha iyi anlamak için kendi ilgisi yok. Bitki DNA ekleme Agrobacteriumiçin en yaygın yöntem kullanılan-dönüşüm aracılı. Agrobacterium tumefaciens crown galls birçok bitki türü virüslü dokuda onun tümör-inducing (Ti) plazmid eylem tarafından elde edebilecektir. Plazmid T-DNA bölge bitki genom entegre edilecek ve doku dedifferentiation1,2neden genlerin bir dizi içerir. T-DNA transgene tarafından bu genlerde alışverişini fenotipik etkileri3kaçınarak belirli bitki değişiklikler nesil izin verdi. T-DNA'sı klonlama transgene kolaylaştırmak için T-DNA bölge Ti plazmid genler kalan süre ikili bir plazmid denilen bir bağımsız plazmid olarak eksize (T-DNA aktarımı ve ekleme mekanizmaları izin virülans genler) olmuştur bir yardımcı plazmid yerleştirilir. Bitki biyoteknoloji araştırmaları için dönüştürme A. tumefaciens tarafından birçok avantajı vardır: Bu pahalı cihazları gerekmez, istikrarlı ve geçici bitki dönüştürme hem Gen kopya içine entegre edilir az sayıda üretmek mümkün Kromozom4. Ancak, çoğu bitkiler ama değil Arabidopsis, kararlı transformants nesil bitki rejenerasyonu tek bir veya birkaç hücre eksojen etki, bu işlem yapma zahmetli ve zaman alıcı kullanarak gerektirir. A. rhizogenes da kıllı kökleri veya kök-inducing (RI) plazmid5' te kodlanmış rol (kök loci) gen ifadesi nedeniyle enfeksiyon sitelerdeki adventif kökleri üreten bitki genom değiştirmek yapabiliyor. Her ne kadar daha az A. tumefaciensokudu, A. rhizogenes transgenik kökleri elde etmek için de kullanılır. Bu durumda, A. rhizogenes özgün T-Ri Plazmid ve ikili bir plazmid DNA'sını ikinci bir T-DNA transgene taşıyan içerir. Enfeksiyonu site kaynaklanıyor olsa veya hypocotyls olduğunda, bileşik bir bitki, vahşi türü sürgünler ortaya çıkan yeni kıllı transgenik kökleri ile elde edilebilir. Alternatif olarak, kıllı dönüştürülmüş kökleri özerk vitro ortamda karbon kaynak girişi büyüyebilir. Kök çünkü bitki yeniden oluşturma işlemi gerekli değildir ve bu nedenle daha hızlı ve daha az maliyetli hedef organ olduğunda A. rhizogenes transgenik doku üretmek için A. tumefaciens yerine kullanımı alaka kazanıyor. Önceki çalışmalarda Bu metodoloji kök belirli genler6,7,8,9fenotipik karakterizasyonu için tahsis göstermiştir.
Patates (Solanum tuberosum) gıda ve Tarım Örgütü Birleşmiş Milletler (FAO) göre dünyanın dördüncü en önemli ürün olduğu için yumru vitaminler iyi bir kaynak olduğu için insan tüketimi için beslenme ilgisi vardır ve mineraller. Bu nedenle, patates tarımsal biyoteknoloji spot olarak yerleştirildi ve genetik ve gelişimsel için iyi bir biyolojik model10,11çalışmalar olarak da kabul edilir. Patates dönüşüm önemli genler karakterizasyonu aracılığıyla altta yatan suberized dokularda suberin içinde yer ve biyosentezi12,13,14 balmumu moleküler mekanizmaları anlamak için bulunmuştur ,15,16,17, suberin monomer taşıma18 ve transkripsiyon yönetmelik19. Suberin feruloyl transferaz gene, FHT, bu karakterize biyosentetik genlerin biridir; onun downregülasyon suberin ferulate esterleri güçlü bir düşüş ve Vakslar, patates yumrular14ile ilişkili periderm koruma güçlü bir bozulma artış sağlar. Kullanılazlar, kökleri ve Arabidopsis tohumları, onun sözde orthologue (ASFT/RWP1) nakavt de alkil ferulates suberin20,21üreten rolüne gösterdi. Patates, FHT transkripsiyon muhabir çizgi ve FHT antikor sırasıyla organizatörü etkinlik ve protein exodermis, endodermis, phellogen türevleri ve yaralı doku15yer gösterdi.
Bu çalışmada, bir protokol A. rhizogenes yaban türü çekimleri de sürdürülür transgenik kıllı kökleri üretmek için kullanma, bileşik patates bitkiler oluşturmadan veya özerk içinde vitrobüyümeye eksize ayrıntı. Biz de tam patates transgenik bitkiler elde etmek için A. tumefaciens kullanarak iletişim kuralı sağlar. Bir vaka çalışması olarak A. rhizogenes ve A. tumefaciens ile aynı ikili vektör dönüşüm kökleri GUS muhabir gen ekspresyonu sürüş FHT organizatörü ile almak için kullanılır. Sonuçlar bildirdi ve karşılaştırıldığında.

<table><tbody><tr><td> Aseton </td><td> Panreac </td><td> 1.310.071.21 </td><td></td></tr><tr><td> Asetosyringone </td><td> Acros </td><td> 115540050 </td><td></td></tr><tr><td> Akvaryum pompası </td><td> Prodac </td><td> MP350 </td><td></td></tr><tr><td> Otoklav </td><td> Ragpa Strelimatic </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Bakteriyolojik agar </td><td> Lab Conda </td><td> 1800 </td><td></td></tr><tr><td> BAP </td><td> Duchefa </td><td> B0904 </td><td></td></tr><tr><td> Sığır eti özütü </td><td> Lab Conda </td><td> 1700</s> </td><td></td></tr><tr><td> Bitki yetiştirme dolabı </td><td> Nuaire </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Karbenisilin </td><td> Duchefa </td><td> C0109 </td><td></td></tr><tr><td> Sefotaksim sodyum </td><td> Duchefa </td><td> C0111 </td><td></td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Merck </td><td> 1029310161 </td><td></td></tr><tr><td> Ecotron infors </td><td> HT </td><td> 29378 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Merck </td><td> 1,009,831,011 </td><td></td></tr><tr><td> Falcon tube </td><td> Kontrol teknikleri </td><td> CFT011500 </td><td></td></tr><tr><td> Ferrisiyanat </td><td> Sigma </td><td> 101001081 </td><td></td></tr><tr><td> Ferrosiyanat </td><td> Sigma </td><td> 100979088 </td><td></td></tr><tr><td> Şişe (8,06 cm çap ve 11,3 cm yükseklik) ve in vitro kültür için plastik kapak </td><td> Apiglass </td><td> ref16 </td><td></td></tr><tr><td> GA3 </td><td> Sigma </td><td> G7645 </td><td></td></tr><tr><td> Gamborg B5 media </td><td> Duchefa </td><td> G0210 </td><td></td></tr><tr><td> Gelrite </td><td> Duchefa </td><td> G1101 </td><td></td></tr><tr><td> Glukoza </td><td> Sigma </td><td> G5767 </td><td></td></tr><tr><td> Kanamisin </td><td> Sigma </td><td> K1377 </td><td></td></tr><tr><td> Lökopor bant </td><td> BSN Leukopor </td><td> BDF47467 </td><td></td></tr><tr><td> Lupe </td><td> Wild-Heerbrugg </td><td> M420 </td><td></td></tr><tr><td> Manyetik çalkalayıcı </td><td> Agimatic </td><td> 7000243 </td><td></td></tr><tr><td> MES hidrat </td><td> Sigma </td><td> M2933-25G </td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td> Panreac </td><td> 131404 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop </td><td> Olympus </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Minufugue santrifüj 5415R </td><td> Eppendorf </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Murashige ve Skoog media </td><td> Duchefa </td><td> M0254.0050</s> </td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td> Panreac </td><td> 131679 </td><td></td></tr><tr><td> NAA </td><td> Duchefa </td><td> N0903 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Panreac </td><td> 131659 </td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td> Sigma </td><td> 58282 </td><td></td></tr><tr><td> NightSea Stereo </td><td> SFA Ay Adaptörü </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm < </td><td> p>Anorsa </td><td> PRFL-001 </td><td></td></tr><tr><td> Peptone </td><td> Lab Conda </td><td> 1616 </td><td></td></tr><tr><td> Petri kapları (90 x 14) </td><td> Anorsa </td><td> 200200 </td><td></td></tr><tr><td> pHmetre </td><td> Crison </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Phytotron </td><td> Inkoa </td><td> RFTI-R5485 </td><td></td></tr><tr><td> Bitki Agar </td><td> Duchefa </td><td> P1001 </td><td></td></tr><tr><td> Refrigeratot </td><td> Liebherr Medline </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Rifampicin </td><td> Duchefa </td><td> R0146 </td><td></td></tr><tr><td> Spektinomisin </td><td> Sigma </td><td> 59007 </td><td></td></tr><tr><td> Spektrofotometre </td><td> Shimadzu </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Kare plakalar (120 x 120) </td><td> Deltalab < </td><td> p>200204 </td><td></td></tr><tr><td> Streptomisin </td><td> Sigma </td><td> S6501 </td><td></td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> Panreac </td><td> 131621 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi bıçaklar </td><td> Swann-Morton </td><td> 201 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi iğne</s> </td><td> NIPRO </td><td> 015/0204 </td><td></td></tr><tr><td> Triptone </td><td> Lab Conda </td><td> 1612 </td><td></td></tr><tr><td> Triton </td><td> Serva </td><td> 37240 </td><td></td></tr><tr><td> Unimax 1010 çalkalayıcı </td><td> Heidolph </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> Vakum </td><td> Dinko </td><td> </td><td></td></tr><tr><td> x GlcA (5-Bromo-4-kloro-3-indoksil-beta-D-glukuronik asit, sodyum tuzu susuz) </td><td> Biosynth </td><td> B-7398 </td><td></td></tr><tr><td> Maya özütü </td><td> Lab Conda </td><td> 1702.00</s> </td><td></td></tr><tr><td> Zeatin ribosid </td><td> Sigma </td><td> 1001042850 </td><td></td></tr></tbody></table>

agrobacterium tumefaciens ve agrobacterium rhizogenes-aracılı dönüştürme, patates ve gus staining tarafından suberin gen organizatörü etkinliği

Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

Agrobacterium sp. aktarmak ve kendi T-DNA bitkinin genom entegre olanağı olduğu gibi transgenik bitkiler elde etmek için en çok kullanılan yöntemlerinden biridir. Burada, genetik olarak patates (Solanum tuberosum) bitkiler değiştirmek için iki dönüşüm sistemleri mevcut. A. tumefaciens dönüştürme, yaprakları bulaşmış, dönüştürülmüş hücreler seçilir ve yeni tam dönüştürülmüş bitki 18 hafta içinde etki kullanarak yeniden oluşturulur. A. rhizogenes dönüştürme, sapları bakteri bir iğneyle enjekte edilerek bulaşmış, yeni ortaya dönüştürülmüş kıllı kökleri kırmızı bir floresan işaretçisi kullanarak algılanır ve sigara dönüştürülmüş kökleri kaldırılır. 5-6 hafta içinde elde edilen bitki tam gelişmiş dönüştürülmüş kıllı kökleri ile vahşi türü çekimleri karmaşıktır. Biyokütle artırmak için dönüştürülmüş kıllı kökleri eksize kendi kendine yayılır ve. Biz kökleri suberin biyosentetik gen düzenleyici tarafından tahrik GUS muhabir gen ifade elde etmek için her iki aracılı Agrobacterium -dönüştürme yöntemleri uygulanır. GUS boyama yordam sağlanır ve hücre yerelleştirme organizatörü indüksiyon sağlar. Her iki yöntem de GUS GUS faaliyet suberized endodermis ve exodermis ve buna ek olarak, dönüştürülmüş A. rhizogenes kökleri boyama da yan kökler ortaya çıkması algılandı dönüştürülmüş patates kökleri gösterdi. Bu sonuçlar A. rhizogenes kökleri ifade edilir genler çalışmaya hızlı alternatif bir araç olabilir öneririz.

Agrobacterium rhizogenes -patates dönüştürme aracılı
Bu makale, A. rhizogenes ile dönüştürülmüş kök elde etmek için adım adım yordam sunulur. Şekil 1 tamamen (üzerinden tam olarak gelişmiş kıllı kökleri edinmeye A. rhizogenes enjeksiyon) yaklaşık 5-6 hafta sürer yordamı, genel bir bakış sunar. O zaman, bitki bileşik (vahşi türü ateş, trans...

Burada, iki protokol dönüştürmek patates bitkiler için mevcut. Süre kendi kendine yayılan olabilir bir vahşi türü çekimi transgenik kıllı kökleri Agrobacterium rhizogenes üretmek Agrobacterium tumefaciens dönüşümün tam transjenik bitki için yol açar. Biz o zaman organizatörü etkinlik dönüştürülmüş kökleri boyama GUS tarafından tespit.

Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes-aracılı dönüştürme, patates ve GUS Staining tarafından Suberin gen organizatörü etkinliği

Agrobacterium sp. is one of the most widely used methods to obtain transgenic plants as it has the ability to transfer and integrate its own T-DNA into ...

Agrobacterium aracılı dönüşüm genetiği değiştirilmiş patates bitkileri üretmek için kolay bir yöntemdir. Belirli gen fonksiyonlarını ve organ fizyolojisine katkılarını anlamak için. Agrobacterium rhizogenes tarafından dönüşüm hızla gen işleyen kökleri değerlendirmek için sağlam bir araçtır, benzer sonuçlar agrobacterium tumefaciens dönüşüm elde edilebilir gibi.Bu prosedürü gösteren Sandra Fernandez-Pinan, bir post-doc, ve Jennifer Lopez, bizim laboratuvarbir maste5r öğrencisi olacaktır. Maya özü suyu beş mililitre gecede tek bir agrobacterium koloni sülb, ya da YEB orta, 28 santigrat derecede 50 mililitre centrifuge tüp antibiyotik ile desteklenen, dakikada 200 rotasyonlar büyüyerek başlayın. A-tumefaciens dönüşümü için, ertesi sabah optik yoğunluğunu ölçün.600 nanometre veya OD 600 optik yoğunluğu 0,6'ya bir ulaştığında, agrobacterium kültürünün bir mililitresantrifüj ve antibiyotik olmadan taze YEB orta bir mililitre pelet resuspend. İkinci yıkamadan sonra, antibiyotik olmadan taze YEB ortamda pelet resuspend, 0.8 son bir OD 600 elde etmek için uygun konsantrasyon, ve buz üzerinde bakteri hücreleri yerleştirin. A.rhizogenes kullanarak bitki dönüşümü için, bir donör bitkisini 2MS orta kültürden 120'ye 120 milimetre kare plakaya dikkatlice aktarın ve mümkün olduğunca farklı kök internodlarına A.rhyzogenes kültüründen üç mikrolitre enjekte etmek için cerrahi bir iğne kullanın.Sonra hemen katı MS orta içeren yeni bir kare plaka için tüm bitki aktarın, 0.1 milimolar acetosyringone ile takviye. Aynı plaka üzerine ikinci bir bitki yerleştirdikten sonra, aynı şekilde dönüştürülmüş, cerrahi bant ile plaka mühür ve dört gün boyunca bir büyüme kabini içinde dikey plaka yerleştirin. A.rhizogenes öldürmek ve dört gün boyunca bir büyüme kabine içinde dikey olarak mühürlü plaka yerleştirmek için sefotaksim sodyum ile takviye MS orta ile bir kare plaka bitki aktarın.10 ila 12 gün sonra, yeni kıllı kökler ortaya çıkar. Dönüşümleri floresan stereo mikroskop la doğrulanabilir. Şu anda, her bitkinin yerli kökleri çıkarmak ve MS orta ile yeni bir kare plaka için bitkiler transfer, A.rhizogenes öldürmek için sefotaksim sodyum ile takviye.Kompozit bir bitki elde etmek için, transgenik kıllı kökleri MS orta başka bir üç ila dört hafta boyunca büyümeye izin, sefotaksim sodyum ile desteklenmektedir. A.tumefaciens kullanarak bitki dönüşümü için. Kesip bir petri kabına üç ila dört haftalık bir bitkiden bir yaprak yerleştirin ve yaprağın parçalarını kesmeden yaprağın merkezinden kenarlara doğru bir ila üç enine kesik yapmak için neşter kullanın.ve petiole dışlamak için. Hemen taze 2MS sıvı orta 10 mililitre içeren bir petri kabına yaprak yerleştirin, abaxial tarafı kadar, ve plaka kapağı. A.tumefaciens kültürünün 80 mikrolitresini sıvı ortama hızla ekleyin ve bakteriyel çözeltiyi homojen bir şekilde dağıtmak için ortayı bir dakika hafifçe karıştırın.Daha sonra dikkatlice mühür ve 24 derece santigrat odasında iki günlük kuluçka için alüminyum folyo ile plaka kapağı. Dönüşüm döneminin sonunda, yaprakları abaxial-side yukarı, duygusuz-indükleyici orta, büyüme kabinebir haftalık kuluçka için cımbız ile kazınmış transfer. Kuluçka sonunda, yaprakları aktarın, abaxial tarafı yukarı, cızırtılı ateş indükleyici orta üzerine, ve bir büyüme kabine yaprakları kuluçka.Ortaya çıkan oluklar yaklaşık iki santimetre boyunda olduğunda, her duyarsız dan üç yükselen oluk kesti. Köklenmeye izin vermek için sefotaksim sodyum ile desteklenen MG ortamı içeren mg içeren beş farklı oluk dönüşüm olayını bireysel kültür şişelerine yerleştirin ve oluklar güçlü olana kadar büyüme kabininde üç ila dört haftalık bir kuluçka için alt kümeyi uygun olarak etiketle. Kuluçka sonunda, her olayın en güçlü bitki seçin ve her bitkiden üç ila dört internodes ile oluk apikal segmentleri kesti.Cefotaksim sodyum ile desteklenen 2MS orta içeren bir kültür şişesi içine segmentleri yerleştirin ve güçlü oluklar ve kökleri geliştirmek kadar bitkiler büyümek. Bir beta-glukuronidaz veya GUS histokimyasal muhabir gen testi gerçekleştirmek için, buz üzerinde 20 dakika boyunca% 90 soğutulmuş aseton ile iki ila üç haftalık in-vitro bitki kültürü kökleri düzeltmek. Fiksasyon sonunda, distile suda iki kez kökleri yıkayın ve 20 dakika vakum altında taze GUS boyama çözeltisi ile kökleri tedavi.Vakum tedavisinin sonunda, yaklaşık dört saat boyunca karanlıkta 37 derece santigrat kökleri yerleştirin. Mavi bir renk görünür olduğunda, kökleri %70 etanolle iki kez yıkayın ve parlak bir alan mikroskobu altında boyamayı görselleştirin. Dönüştürülmüş tüylü kökler yeşil ışıkla aydınlatıldığında kırmızı bir floresan sergilerken, negatif kontrol dönüştürülmemiş agrobacterium böyle bir floresan göstermez ve transgenik kıllı kökleri tanımlamak için DS kırmızı dönüşüm belirtecinin uygunluğunu gösterir.Burada A.tumefaciens ile elde edilen transgenik bitkilerin köklerinde GUS boyama ve A.rhizogenes ile elde edilen transgenik tüylü kökler gösterilmiştir. Görüldüğü gibi, kökleri A ile dönüştürülmüş, tumefaciens ve in-vitro büyüdü, endodermis mavi boyama göstermek, korteks ve stel arasında bir hücre tabakası. Daha gelişmiş köklerde, mavi etiketleme dış tabakada yamalı, eksodermis karşılık gelen.A.rhizogenes tarafından elde edilen ve hidroponik olarak yetiştirilen dönüştürülmüş tüylü köklerde GUS belirteci özellikle yaralı bölgelerde ve ekodermiste lateral köklerin ortaya çıkmasında endodermis içinde yer alır. Hızlı bir yöntem olmasının yanı sıra, agrobacterium rhizogenes ile elde edilen transgenik kökler de kök indükleyen plazmid dna taşıdı, hangi bazı doğrudan kontrollü süreçleri deregüle olabilir. Agrobacterium rhizogenes ile elde edilen transgenik tüylü kökler çekim sırasında muhafaza edilebilir, ancak alternatif olarak büyük transit üretim için in-vitro yayılan kadar yerinde olabilir.Patates dönüşümü gen fonksiyonu ve organizatör aktivasyon kontrol etmek için iyi bir araç sağlar, ve aynı zamanda yüksek tarımsal ilgi bir tür metodolojik kurallar üretmek için. Genetiği değiştirilmiş organizma, çevresel kirlenmeyi önlemek için kullanımdan sonra güvenli bir şekilde atılmalıdır. Ayrıca, gaz çözeltisi toksik siyanür türevi içerir, bu nedenle koruma yıpratın ve güvenli bir şekilde çözelti atın.

agrobacterium-tumefaciens-agrobacterium-rhizogenes-mediated

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu makale, çiçek-daldırma yöntemi göstermektedir.

Floral-daldırma Dönüşüm Arabidopsis thaliana Inceleyin PTSO2: β-glucuronidase Reporter Gen İfadesi

Agroinfiltrasyon ve PVX agroinfection, bitkilerdeki genlerin geçici ektopik ekspresyonu için rutin fonksiyonel tahlillerdir. Bu yöntemler, efektoromik stratejilerde (hızlı direnç ve avirulence gen keşfi) etkili tahlillerdir ve moleküler bitki patolojisinde modern araştırmalar için çok önemlidir. Tesislerde sağlam yüksek verimli fonksiyonel analiz talebini karşılarlar.

Patates ve Nicotiana benthamiana'da Agroinfiltrasyon ve PVX Agroinfection

Agrobacterium aracılı dönüşümü daldırma çiçek yöntemini kullanarak başarılı bir şekilde Schrenkiella parvulaextremophyte modelinin kararlı transgenik satırları oluşturmak için istihdam edilebilir. Biz bundan farklı büyüme alışkanlıkları ve extremophyte fizyolojik özellikleri dikkate alınarak Arabidopsis thalianaiçin değiştirilmiş bir iletişim kuralı mevcut.

Bitki büyüme ve Floral daldırma dönüşümün Agrobacterium aracılı Extremophyte Schrenkiella parvula

Burada, biz üretimi tarif ve transgenik Arabidopsis thaliana bir dizi uygulama etkinleştirme indüklenebilir, doku özel ifade üç ana sürgen, sürgün apikal meristem, kök apikal meristem ve cambium satırları.

İndüklenebilir, hücre türüne özgü ifade Arabidopsis thaliana aracılığıyla LhGR-aracılı Trans-harekete geçirmek

Bitki morfojenik genler inatçı genotiplerin genetik dönüşümlerini iyileştirmek için kullanılabilir. Burada açıklanan bir Agrobacteriumaracılı genetik dönüşüm (QuickCorn) üç önemli kamu mısır inbred hatları için protokoldür.

Agrobacterium-Rekalsitrant Mısır Inbred Hatları Morfojenik Genler Kullanarak Aracılı Olgunlaşmamış Embriyo Dönüşümü

Biz Agrobacterium rhizogenestarafından kıllı kökleri indükleyen bir yöntem tarif -Tartary karabuğday aracılı dönüşüm (Fagopyrum tataricum). Bu gen fonksiyonları ve Tartary karabuğday ikincil metabolitlerin üretimini araştırmak için kullanılabilir, herhangi bir genetik dönüşüm için kabul edilebilir, ya da iyileştirme den sonra diğer tıbbi bitkiler için kullanılır.

Agrobacterium rhizogenestarafından Kıllı Kökleri Indükleyen -Tartary Karabuğday Aracılı Dönüşüm (Fagopyrum tataricum)

Çeşitli çalışma alanlarında model bir tür olarak çok yönlü uygulaması nedeniyle, dar yapraklı muzda (Plantago lanceolata) genetik dönüşüm araç setine ihtiyaç vardır.  Burada, Agrobacterium tumefaciens aracılı transformasyon kullanılarak,% 20'lik bir dönüşüm verimliliğine sahip stabil transgenik çizgilerle sonuçlanan bir protokol sunulmuştur.

Agrobacterium tumefaciens-Dar Yapraklı Muzun Aracılı Genetik Transformasyonu

Burada, transgenik soya fasulyesi tüylü köklerinin yüksek verimli üretimi için bir protokol sunuyoruz.

Gen fonksiyonunun analizi için soya fasulyesi tüylü kök transformasyonu

Burada, kompozit bitkiler üretmek için Agrobacterium tumefaciens'in aracılık ettiği tek adımlı bir dönüşüm yönteminin ayrıntılı protokolünü sunuyoruz.

Agrobacterium rhizogenes Bazlı Tüylü Kök Dönüşümü ile Kompozit Bitkilerin Üretilmesi İçin Verimli ve Tekrarlanabilir Bir Yöntem

Phytophthora palmivora'nın Agrobakteriya aracılı dönüşümü için basit, etkili ve tekrarlanabilir bir protokol sunuyoruz; bu protokol P. capsici  için de geçerlidir.

Phytophthora palmivora'nın Agrobakteri Aracılı Dönüşümü İçin Basitleştirilmiş Bir Yöntem

Öğrenin patates bitkilerini Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes ile dönüştürme yöntemlerini. GUS boyama ile köklerde gen promotör aktivitesini değerlendirerek gen fonksiyonlarını hızlıca analiz edin.

Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes-aracılı dönüştürme, patates ve GUS Staining tarafından Suberin gen organizatörü etkinliği (Video) | JoVE Journal

Agrobacterium tumefaciens ve Agrobacterium rhizogenes-aracılı dönüştürme, patates ve GUS Staining tarafından Suberin gen organizatörü etkinliği

Daha fazla video keşfet