Fareler serbestçe davranıyor uzun vadeli duyusal çatışma

Bu protokolün genel amacı, serbestçe davranan farelerde uzun süreli öğrenme çalışmaları için kalıcı bir duyusal çatışma üretmektir. Duyusal öğrenmenin deneysel maliyetini ve zamanını düşüren bu yaklaşım, in vivo ve in vitro deneylerin birleşimini barındırır. Uyuşturulmuş bir farede parmak ucuna tepki eksikliğini doğruladıktan sonra, başın arkasından deriyi kavramak için bir çift künt çözgü kullanın ve kafatasını ortaya çıkarmak için bir buçuk cm boyuna kesi yapmak için makas kullanın.

Yavaşça bir neşter ile periost çizik ve kemik geçirgenliğini artırmak için kafatasının ortasına yeşil aktivatör bir damla uygulayın. Sonraki karışımı monomer beş damla ve katalizör bir damla ile implantasyon kiti polimer bir kaşık ve fırça lambda ve bregma kafatası işaretleri arasında çimento karışımı cömert bir miktar. Lambda'dan bregma'ya doğru bir kaydırma hareketi kullanarak, başlık direğine hızla çimento yerleştirin ve başlık direğinin kafatasına güvenli bir şekilde yapışmasını sağlamak için gönderinin alt kısmına ek çimento uygulayın.

Çimento kururken, rezorin tozunu rezorin sıvısıyla pürüzsüz bir kıvamda karıştırın ve elde edilen rezorn karışımını kurutulmuş çimentoya ve başlık çevresine uygulayın. Resenin üç dakika kurumasını sağladıktan sonra, kulakların arka tarafındaki deriyi kapatmak için Vicryl 4-0 sütür kullanın ve kesiye %10-20 iyot çözeltisi uygulamak için pamuklu bir bez kullanın. Sonra tam iyileşme kadar izleme ile kırmızı ışık altında hayvan yerleştirin.

Ameliyattan kırk sekiz saat sonra çizgili cihazdaki delikleri başlıktaki deliklerle hizalayın ve cihazı karakola sabitlemek için 1,3 mm'lik bir hex tornavida ve iki adet 1,2 mm vida kullanın. Başlığı nisökme veya tornavida ile hayvana zarar verme riskini önlemek için cihazı ikinci bir operatör yardımıyla başlık üzerine sabitlemenizi öneririz. Sahte durumu düzeltmek için cihazı ters çevirin ve cihazın rostral yöne bakan arka kısmı yla cihazdaki delikleri başlıktaki deliklerle hizalayın.

Cihazın iyi güvenlikli olduğunu ve hayvan tarafından çıkarılamayacağını ve cihazın doğrudan burunüzerine basınç uygulamadığını ve bu da ağrıya, solunum güçlüğüne veya cilt yaralanmasına neden olabileceğini doğrulayın. Fareler cihazı taktıklarının ilk 48 saatinde bazı davranışsal anormallikler sergileyebileceklerinden, bu süre zarfında hayvanları yakından izler ve hayvanlar alışana kadar yiyecek ve suya kolay erişim sağlarlar. İmplantasyondan hemen sonra fareleri tartın ve bundan sonra her 24 saatte bir deney sonuna kadar, çizgili cihazı takan farelere özel önem verin.

Cihaza uyarlanmış hayvanların duyusal tepkisini kaydetmek için, ilk fareyi başlık direğine yerleştirilen vidalarla pikap üzerine sabitlayın ve hayvanın etrafına bir ekran kubbe yerleştirin. Optokinetik projektör dışında odadaki tüm ışıkları kapatın ve saat yönünde ve saat yönünün tersine birkaç farklı hızlarda optokinetik refleks tam alan stimülasyon kaydına başlayın. Kayıtlar biter bitmez kubbeyi çıkarın ve ışıkları açın.

Zifiri karanlıkta vestibulo-oküler refleks kaydetmek için, hayvanın gözlerine% 2 pilokarpin bir damla uygulayın ve hafifçe bir pamuk lu bez ile merhem çıkarmadan önce en az beş dakika bekleyin. Tüm ışıkları tekrar kapatın ve hayvanı zifiri karanlıkta tutmak için pikap üzerine bir kutu yerleştirin. Farklı frekanslarda ve/veya farklı hızlarda dikey eksen etrafında sinüzoidal açısal dönüşler kullanarak yatay vestibulo-oküler refleks testine başlamadan önce.

İkinci kayıt oturumu bittiğinde, fareyi bir kızılötesi lamba altında kafesine geri döndürün ve hayvan pilokarpinin ikincil vazodilatör etkilerinden tamamen iyileşene kadar izleyin. Bir sahte ya da çizgili bir cihaz giyen iki hafta sonra, sahte farelerin vestibulo-oküler refleks tepkileradaptasyon sonra değişmeden kalır, çizgili cihaz uyarlanmış hayvanlar büyük ölçüde tehlikeye refleks yanıtı gösterirken. Ortalama vestibülo-oküler refleks kazançlarının 0.5 hertz sabit frekansta ve görsel-vestibüler uyumsuzluk protokolünden önce ve sonra saniyede 40 derece olarak elde edilmesi, düz leştirilmiş cihazı takan farelerde güçlü bir kazanç düşüşü ortaya çıkarırken, sahte farelerönemli kazanım değişiklikleri sergilemez.

Ancak, çizgili cihaz giyen farelerin optokinetik refleksi, görsel-vestibüler protokolden önceki dönem için gözlenen ve sahte hayvanlar tarafından gösterilen ile karşılaştırılabilir. Fareleri günlük olarak izlediğinden ve cihazın farelerüzerinde doğru bir şekilde konumlandırDığından ve rutinlerini engellemediğinden emin olun. Bu işlemin ardından seller adaptasyon mekanizmalarının belirlenmesi için in vitro elektrofizyoloji veya nöronal görüntüleme veya farklı refleks çıkışlarının incelenmesi için davranışsal tahliller yapılabilir.