Name: Radikal Prostatektomi Sonrası Erektil Disfonksiyon Tedavisinde Yağ Kaynaklı Rejeneratif Hücrelerin İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Öğrenin radikal prostatektomi sonrası erektil disfonksiyon tedavisinde yağ kaynaklı rejeneratif hücre izolasyonunu. Bu yöntem liposuction, enzimatik sindirim ve santrifüjasyon içerir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Odense Üniversitesi Hastanesi (11/31936), Danimarka Rejeneratif Tıp Merkezi (14/50427) ve Danimarka Kanser Derneği tarafından kurulmuştur.

Protokolde açıklanan tüm yöntemler Danimarka Ulusal Etik Komitesi (No. 37054), Danimarka Sağlık ve İlaç Kurumu (EUDRA-CT numarası 2013-004220-11) ve Danimarka Veri Koruma Ajansı (2008-58-0035) tarafından onaylanmıştır. Çalışma ClinicalTrials.gov'de (NCT02240823) kaydedildi. Çalışma, Odense Üniversitesi Hastanesi'ndeki İyi Klinik Uygulamaları (GCP) birimi tarafından izlenen Helsinki Deklarasyonu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir. ADRC hazırlığı, Odense Üniversitesi Hastanesi'nde insan dokularının ve hücrelerinin taşınması için yetkili bir doku kuruluşunda gerçekleştirilmiştir (Danimarka Sağlık ve İlaç Kurumu, Yetkilendirme no. 29035).
1. Hasta/katılımcı alımı
<ol><li>Çalışmaya katılmak, aşağıdaki dahil etme kriterlerini yerine getiren hastaları işe almak.<ol>
<li>18 yaşın üzerinde, RP'den önce cinsel olarak aktif olan ve cinsel yolla bulaşan hastalıklarla enfekte olmayan hastaları işe alın, örneğin insan immün yetmezlik virüsü enfeksiyonu, sifiliz veya hepatit.</li>
		<li>Prostat kanseri nedeniyle yapılan bir RP'den sonra erektil disfonksiyondan muzdarip olduklarından emin olun. NOT: Bu çalışmada, hastalar RP'den 5-18 ay sonra çalışmaya dahil edildi ve cerrahi yöntemden bağımsız olarak dahil edildi: açık / robotik yardımlı veya sinir bozucu / sinir dışı.</li>
		<li>Prostat spesifik antijenin (PSA) değerinin RP sonrası klinik takipte saptanamadığından emin olun.</li>
		<li>Hastaların RP'den önce cinsel olarak aktif olduklarından ve RP'den sonra cinsel olarak aktif kalma isteğini ifade ettiklerinden emin olun. Katılmadan önce fosfodiesteraz tip 5 inhibitörü (PDE5 inhibitörü) veya sentetik bir prostaglandin E1 analoğu (PGE1) ile farmakolojik müdahalenin denendiğinden ve yetersiz kabul edildiğinden emin olun.</li>
		<li>Ayrıca, hastaların karın veya uyluk üzerinde yeterli deri altı yağına sahip olduklarından emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>RP sırasında anestezi altında ciddi olaylar varsa veya antikoagülanlarla tedavi edilmişlerse, hastaları denemeden hariç tutun.</li>
</ol>2. Liposuction
NOT: Liposuction, deri altı bölgesinden yağ veya lipositlerin uzaklaştırıldığı bir operasyondur. Protokolün bu kısmı standart bir liposuction olarak gerçekleştirilir ve prosedür steril koşullar altında bir ameliyathanede gerçekleştirilir. İşlem kapsamında kullanılan tüm aletler steril olmalı ve cerrah kese, steril cerrahi elbise, steril eldiven, cerrahi maske ve şapka giymelidir.
<ol><li>Hastayı uyuşturun.<ol>
<li>İşlem sırasında hastanın genel anestezi altında olduğundan ve bu bölümün bir anestezi uzmanı tarafından yapıldığından emin olun.</li>
		<li>Karın ve skrotum derisini% 0.5 klorheksidin ile dezenfekte edin (kloreksidin ruhu,% 96 etanol ilaçlı klorheksidin diglukonat% 77 W / W =% 83 v / v). Karın üzerindeki bölgeleri çizmek için cerrahi bir belirteç kullanın, liposuction yapılacaksa. Alan genellikle simfiz ve göbek arasındaki alan olacaktır.</li>
	</ol></li>
	<li>Bir neşter ile karın derisinde 6 mm genişliğinde iki kesi yapın (11 numara). Kesileri liposuction'ın yukarı çekilmiş bölgesinden simetrik ve lateral olarak yerleştirin.<ol>
<li>İnfiltrasyon kanülünün liposuction sırasında insizyonların içine ve dışına kolayca kaydığından emin olmak için insizyonlara petrol jölesi gibi bir miktar yağlayıcı koyun.</li>
	</ol></li>
	<li>Ciltteki kesilerden 14 G boyutunda bir infiltrasyon kanülü sürün. Modifiye Kleins solüsyonunu deri yüzeyine paralel işaretli bölgelere deri altından enjekte edin. Çözeltinin o kadar çoğunu enjekte edin ki, hedeflenen doku şişmiş ve sertleşmiş veya tümörlü hale gelir. NOT: Modifiye Kleins çözeltisi, 1.000 mL Ringers laktat ve 1 mg adrenalin (epinefrin (1:1.000.000)) çözeltisinden oluşur. ADRC'ler üzerinde olumsuz bir etkisi olabileceğinden, lokal anesteziyi çözeltiye bağlamayın.<ol>
<li>Yağ dokusuna 1: 1 oranına karşılık gelen bir miktar modifiye Kleins çözeltisi enjekte edin.</li>
		<li>Adrenalinin etkisini en üst düzeye çıkarmak ve hasat edilen yağ dokusundaki kan miktarını azaltmak için 10 dakika bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>200-300 mL yağ dokusunu toplamak için jet infüzyon liposuction kullanarak standart bir liposuction yapın. Bir infüzyon tüpü ve bir nozulun entegre edildiği içi boş künt kanüller kullanın. Liposuction için kanülü bir emme cihazına takın. NOT: Sürekli fan şeklindeki su infüzyonu, yağ dokusunu kanüldeki açıklıktan kolayca emilebilen parçalara gevşetir.<ol>
<li>Karın üzerindeki kesilerden künt uçlu 3 mm'lik bir şırınga sokun.</li>
	</ol></li>
	<li>Lipoaspiratı steril bir ortamda korumak için yağ dokusunu bir lipo-toplayıcıda toplayın. Lipoaspirat su fazından ayrılmaya başlayacaktır.</li>
	<li>Lipoaspiratı lipo-kollektörden emmek için 50 mL steril şırıngalar kullanın.<ol>
<li>Şırıngalarda emilen suyun hacmini en aza indirin ve yağ dokusunu steril tutmak için şırıngaların ucundaki bir fişe vidalayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Lipoaspiratın su fazından ayrılmasını başlatmak için ucu aşağı doğru olan şırıngaları steril bir plastik torbaya yerleştirin. Ayırmaya devam etmek için torbayı steril bir kaba koyun, uçları aşağı bakacak şekilde yerleştirin.<ol>
<li>Taşıma sırasında steril ortamı güvence altına almak için kabı steril örtü ile örtün. NOT: İzolasyon için kullanılan makinenin kullanım kılavuzuna göre, lipoaspirat, ADRC'lerin izolasyonundan önce maksimum 4 saate kadar saklanabilir, ancak her zaman hemen işleriz.</li>
	</ol></li>
	<li>Cilt kesilerini cerrahların tercih ettiği dikiş materyali ile kapatın. Postoperatif ödemi azaltmak için karın çevresine bir kompresyon giysisi, bir karın bağlayıcı yerleştirin.</li>
	<li>5 μg adrenalin içeren 20 mL bupivakain 5 mg / mL enjekte ederek bir penis bloğu yapın.<ol>
<li>20 mL'lik bir şırınga kullanın ve 1 1/4 inç uzunluğunda 23 G iğne ile uygulayın.</li>
		<li>Subkutisteki her kadrana 5 mL bupivakain uygulayın.</li>
		<li>Bupivakaini iki bölgeye enjekte edin, biri ventral, diğeri dorsal olarak yerleştirilir. İğneyi boyunun tamamında, iğneyi yanal olarak sağa doğru işaret eden deri altı dokusuna sokun ve iğne geri çekilirken anesteziyi enjekte edin. İğneyi sola işaret eden enjeksiyonu tekrarlayın. NOT: Hasta artık anestezi uzmanı tarafından genel anesteziden uyandırılabilir.</li>
	</ol></li>
</ol>3. ADRC'lerin izolasyonu
NOT: ADRC'lerin izolasyon işlemi, cihazı takip eden kullanım kılavuzunda ayrıntılı olarak açıklandığı gibi gerçekleştirilir (bkz. ADRC'lerin saflaştırılması sırasında lipoaspiratın herhangi bir kirleticiye maruz kalmamasını sağlamak için prosedürün steril koşullar altında yapılması önemlidir. ADRC'lerin izolasyonu için geçen süre, lipoaspiratın hacmine bağlıdır, ancak burada açıklandığı gibi yarı otomatik cihaz kullanılarak tüm prosedür yaklaşık 2.5 saat sürecektir.
<ol><li>Tüm sarf malzemelerini ve enzimleri aseptik olarak steril tek kullanımlık cerrahi havlu ile kaplı bir masaya yerleştirin. NOT: Bir prosedür kiti, ADRC'lerin bir hastadan izole edilmesi için gerekli tüm sarf malzemelerini ve enzimleri içerir. Bunun yanı sıra, üç adet 37-39 °C, bir litrelik Laktasyonlu Zil infüzyon torbası, steril giysiler, eldivenler ve havlular ve dezenfeksiyon için etanol ile birlikte mevcut olmalıdır. Tüm sarf malzemesi ve enzim lot numaralarını ve ayrıca sisteme bağlandığında Laktasyonlu Zillerin sıcaklığını not edin.<ol>
<li>Cihazı etanol ile silin ve üreticinin talimatlarını izleyin</li>
		<li>Sarf malzemesi setini cihaza yükleyin ve sisteme bir torba Laktasyonlu Zil bağlayın.</li>
		<li>Lipoaspiratı eklemeden önce bir dizi yarı otomatik testi (sistem kontrolü ve sızıntı testi) gerçekleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3.1'deki adımlar gerçekleştirilirken lipoaspiratın 50 mL tüplerde durmasına izin verin. Bu, yağın sıvı fazdan ayrılmasını sağlayacaktır. Toplam yağ dokusu miktarını (mL cinsinden) not edin ve yüklenen yağ miktarının cihaz kapasitesi aralığında olmasını sağlamak için bunu kullanın.</li>
	<li>Cihaz tarafından istendiğinde dokuyu yükleyin. Makine artık fazla sıvıyı boşaltacak ve Laktasyonlu Halkalar ile yıkanmadan önce yüklenen yağ dokusu miktarını tartacaktır.<ol>
<li>Doku tekrar yıkanıp boşaltıldığında, makine tarafından istendiğinde 37-39 °C Laktasyonlu Zillerle yeni bir infüzyon torbası bağlayın.</li>
		<li>5 mL Laktasyonlu Halkalarda kollajenaz ve proteaz karışımı içeren ticari olarak temin edilebilen enzimi yeniden oluşturur (270 mL'ye kadar yağ miktarları için bir şişe enzim yeterlidir).</li>
		<li>Cihazın, yağ dokusu ile teneke kutuya enjekte edilecek enzim miktarını (doku ağırlığına bağlı olarak) gösterdiğinden emin olun. Enjekte edildikten sonra, ajitasyon altında gerçekleştirilen enzimatik sindirim yaklaşık 20 dakika sürecektir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Doku sindiriminden sonra, karıştırıcının durmasına izin verin ve içeriğin iki faza ayrıldığını kontrol edin: üst lipit içeren, sarı faz ve ADRC'leri içeren alt pembe bir tabaka. İkinci katmanın, lipit tabakasını geride bırakırken, sarf malzemesi setinin hücre işleme odasına (cihazın yerleşik santrifüjüne giden) boşaltılmasına izin verin.</li>
	<li>ADRC'lerin birden fazla santrifüjleme turu sırasında hücre işleme odasında yoğunlaşmasına izin verin. Şimdi Laktasyonlu Halkalarda yeniden oluşturulmuş 10 mL Intravaz (DNaz içerir, bu da son ADRC süspansiyonunda kümelenmeyi önlemeye yardımcı olur) ekleyin. Enzimatik reaksiyon 10 dakika sürer ve ardından ADRC'ler yıkanır. NOT: Bu adım tamamen otomatiktir ve işlem tamamlandığında makine bilgilendirilir.</li>
	<li>ADRC'lerin izolasyonu tamamlandığında, hücreleri 5 mL Ringer Laktat içinde yeniden askıya alın. Çözeltiyi 5 mL'lik bir şırıngaya aspire edin.</li>
	<li>ADRC'leri içeren 5 mL şırıngaya 3 yönlü bir stopcock dişi Luer-lock takın ve 4 mL ADRC'yi başka bir 5 mL steril şırıngaya aspire edin.</li>
	<li>Son 1 mL'yi 1 mL'lik bir şırıngaya aktarın. Bu 1 mL'yi ADRC karakterizasyonu için kullanın, örneğin hücre sayısı, hücre canlılığı, yüzey belirteçlerinin akış sitometrisi ile analizi ve ADRC farklılaşma yeteneği.</li>
	<li>Steril bir örtü içinde paketlenmeden önce 4 mL'lik ADRC'yi içeren 5 mL şırıngaya 25 G'lik bir iğne koyun. Alıcıya enjeksiyon için ADRC'leri kullanın. Bu durumda, ADRC'lerin çözeltisi ortalama olarak 8.4-32.7 milyon hücre içerecektir.</li>
</ol>4. ADRC'lerin corpora cavernosum içine implantasyonu
NOT: Bu steril bir prosedürdür. Tüm aletler steril olmalı ve kök hücreleri içeren çözeltiyi corpora cavernosum'a enjekte eden kişi steril eldiven giymelidir. Bu işlem sırasında hasta uyanıktır ve kendi kök hücrelerini alacaktır. ADRC'ler, enjeksiyondan önce hücreleri saymadan enjekte edilir.
<ol><li>ADRC'lerin çözeltisini, şırıngayı corpora cavernosum'a enjekte edilene kadar hafifçe eğerek homojen tutun.</li>
	<li>Penis üzerine bir diyafram örtüsü yerleştirin. Silikon damar halkası kullanarak penisin köküne bir turnike yerleştirin. Döngüyü sıkın ve forseps kavisli bezelye ile sabitleyin. Turniketi penisten kan akışını durduracak kadar sıkı yapın.</li>
	<li>Penis derisini enjeksiyon bölgesinde (corpora cavernosum'un lateral bölgesi) dezenfekte etmek için iki antiseptik takas kullanın. ADRC'leri içeren çözeltinin 1 mL'sini, iki farklı yerde sağ taraftaki corpora cavernosum'a doğrudan bir açıyla enjekte edin, bu adımı daha sonra sol corpora cavernosum'da tekrarlayın. Enjekte edilen ADRC'lerin toplam hacmi 4 mL'dir.</li>
	<li>30 dakika bekleyin ve ardından turnikeyi çıkarın.</li>
	<li>ADRC'lerin enjeksiyonundan sonra 2 saatlik gözlemden sonra hastayı taburcu edin, böylece anesteziyi takiben hastanın iyi iyileşmesini sağlayın.</li>
</ol>5. Postoperatif bakım
<ol><li>Hematom gelişimini önlemek için hastaya ilk hafta içinde kan basıncını yükseltebilecek herhangi bir fiziksel performans yapmamasını tavsiye edin.</li>
	<li>Hastaya karın bağlayıcısını ameliyattan sonraki ilk 14 gün 24 saat ve bundan sonra gündüz 14 gün boyunca takmasını tavsiye edin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası ağrıyı oral asetaminofen (örneğin, parasetamol; 1.000 mg, günde 4 kez) ve oral anti-enflamatuar (örneğin, ibuprofen; günde 3 kez 400 mg) ile tedavi edin.</li>
</ol>

<ol><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li>
<li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1%2C+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Andrology%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li>
<li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Systematic+Review+Issue+10%22%5BJournal%5D)">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li>
<li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Back+to+baseline%3A+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients%27+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sex+Medicine%22%5BJournal%5D)">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li>
<li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy%3A+what+the+evidence+really+says%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Urology+International%22%5BJournal%5D)">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li>
<li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting%3A+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), Pt 1 1391-1400 (2010).</li>
<li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), Pt 1 89-98 (2010).</li>
<li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Biological+Therapy%22%5BJournal%5D)">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li>
<li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy%3A+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li>
<li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li>
<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li>
<li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Sexual+Medicine%22%5BJournal%5D)">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li>
<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li>
<li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Urology+Reports%22%5BJournal%5D)">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14(2016).</li>
<li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal%2Fstem+cells%3A+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+%28IFATS%29+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+%28ISCT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherpy%22%5BJournal%5D)">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li>
<li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy%3A+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203(2018).</li>
<li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical & Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li>
<li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells%3A+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13(2013).</li>
<li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Research%22%5BJournal%5D)">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li>
</ol>

Yazar Søren P. Sheikh, Blue Cell Therapeutics, Kopenhag, Danimarka'da CEO'dur.

ADRC'leri izole etmek için sunulan prosedür sadece ED tedavisi için kullanılmak üzere sınırlı değildir, ancak diğer birçok tedavi ve deney biçiminde kullanılabilir. Çalışmamız, otolog, taze izole edilmiş ADRC'lerin kullanımının güvenli olduğunu ve tedavinin 12 aylık bir takipte iyi tolere edilebilir olduğunu göstermiştir.
Prosedür kullanılmadan önce yapılması gereken bazı hususlar vardır. Bu işlemin bir dezavantajı, liposuction sırasında hastanın genel anestezi altında olması gerektiğidir. Liposuction'ın lokal anestezi altında yapılması mümkündür, ancak önceki bir çalışma, lokal anesteziklerin ve adrenalinin bir kombinasyonunun fibroblastların hücre büyümesi üzerinde olumsuz bir etkisi olabileceğini göstermiştir20. Genel anestezi altında olma riski genellikle düşüktür, ancak olumsuz bir sonuç hala görülmektedir. Tedavi için hastalar seçildiğinde bu risk göz önünde bulundurulmalıdır. Liposuction cerrahi bir prosedürdür ve bu nedenle her zaman komplikasyon riski taşır. Diğer tüm cerrahi işlemlerde olduğu gibi, postoperatif kanama riski hematom oluşumu ve enfeksiyon riski ile sonuçlanır. Bazı hastalarımız ayrıca karın derisinde geçici olarak azalmış bir duyarlılık bildirmiştir. Liposuction'ın acil bir komplikasyonu kanamadır. Hastaların büyük miktarlarda doku çıkarıldığında sistemik komplikasyon alma riski taşıdığı bilinmektedir. Bu prosedürdeki liposuction nispeten küçüktü ve bu nedenle bir risk faktörü olarak kabul edilmedi.
Hücre enjeksiyonundaki komplikasyonlar geçici kızarıklık, hassasiyet ve hematomlar olarak bildirilmektedir.
ADRC'lerin izolasyonu için kullanılan cihaz, sistem CE onaylı olduğu için seçilmiştir. Danimarka'da, CE onaylı ekipmanın kullanılması zorunludur, çünkü yetkililer, ADRC insanlarda enjeksiyon için kullanıldığında, kök hücrelerle tedaviyi bir ilaç testi denemesi olarak sınıflandırır.
Cihaz, tüm prosedürün standartlaştırılması ve yüksek derecede sınıflandırılmış bir laboratuvara ihtiyaç duymadan kapalı steril bir ortamda gerçekleştirilmesi gibi avantajlara sahiptir. Bu nedenle kontaminasyon riski azalır. Bu, prosedürün düzgün ve tekrarlanabilir olmasını ve son ürünün kalitesinin her seferinde aynı olmasını sağlar (ancak, aynı zamanda giriş dokusunun kalitesine de bağlıdır). Cihazda izolasyonu gerçekleştirmek kolaydır ve özel eğitimli operatörler gerektirmez.
Cihazın bir sınırlaması, makineye minimum girişin 100 g boşaltılmış lipoaspirat olmasıdır. Deneyimlerimize göre, hücre işleme başlamadan önce liposuction tamamen bittiğinden (ve bizim durumumuzda, ameliyathanede değil, farklı bir yerde), bu, 50 mL şırıngaların kaba ölçüsünü kullanarak lipoaspirat miktarının en az 125 mL olmasını gerektirecektir. Aksi takdirde, makinenin ilerlemesi için yeterli malzeme bulunmama riski vardır. Ayrıca, üst uç sınırını kullanmak (maksimum giriş 425 mL'dir) çok uzun bir izolasyon prosedürüne neden olur.
Hem yağ dokusundan hem de kemik iliğinden elde edilen yetişkin kök hücreler, embriyonik kök hücreler gibi kendini yenileme ve farklılaşma kapasitesine sahip gibi görünmektedir. ADRC'lerin hemopoietik kök hücrelere göre avantajlarından biri, kemik iliği 21,22'ye kıyasla doku hacmi başına 100-500 kat daha yüksek verimdir ve bu nedenle ADRC'lerin kültürlenmesine gerek yoktur. Ayrıca, hemopoetik kök hücrelerin hastadan toplanması yağ dokusundan daha zor ve daha acı vericidir. Birçok durumda, yağ dokusu ameliyattan sonra sadece atık bir üründür. Kök hücrelerin anjiyogenez için uygun daha yüksek bir verim vermesi için kültürlenmesi mümkündür, ancak yeni izole edilmiş ADRC'ler kültürlenmiş23'ten daha yüksek anjiyojenik potansiyele sahip olabilir.

Kök hücreler farklı hücre tiplerine farklılaşma yeteneğine sahiptir ve hasarlı dokudaki iyileşme sürecini desteklediği düşünülen parakrin faktörleri salgılarlar 1,2,3,4. Bu nedenle, rejeneratif tıp alanında çekicidirler, çünkü olası bir iyileştirici tedaviyi temsil edebilirler.
Radikal prostatektomi (RP), düşük/orta riskli lokalize prostat kanseri ve yaşam beklentisi 10 yıl > olan hastalarda altın küratif tedavidir. Ameliyatın amacı kanserin eradikasyonudur, ancak çeşitli yan etkileri vardır. Prostatektomi sonrası inkontinans prevalansı %2-60 arasında değişmekte ve hastaların %20-90'ında erektil disfonksiyon (ED) görülmektedir5. Sinir koruyucu teknik bazı hastalarda bir seçenektir (Gleason skoru < 7, düşük ekstrakapsüler hastalık riski)5. Bu teknik, ereksiyondan sorumlu olan sinirleri korur, ancak bu mümkün olsa da, birçok hasta hala ameliyat sonrası ED'yi rapor eder.
RP sonrası penis rehabilitasyonu için tedavi seçenekleri öncelikle PDE-5 inhibitörleri ile tedavi, enjeksiyon veya damlatma tedavisi ve vakum pompalarından oluşmaktadır. Penis rehabilitasyonu için kullanılan ilaçlar farmakolojik olarak farklılık gösterir, ancak etki mekanizmaları korpus kavernozumdaki düz kas hücrelerinin gevşemesini içerir. Bununla birlikte, birçok hasta tedavi başarısızlığı yaşar ve ilacın cinsel ilişkiye olanak sağlayan bir etkisini asla elde edemez6.
RP'den sonra ortaya çıkan ED'nin yapısal olarak geri dönüşümsüz değişikliklerden kaynaklandığı düşünülmektedir7. Bu değişiklikler kavernöz dokuda meydana gelir ve düz kas ve endotel hücrelerinin apoptozunu ve fibrozisi içerir. Ereksiyonun merkezi bir kısmından sorumlu olan veno-tıkayıcı mekanizma, değişikliklerden dolayı bozulur ve penisin daha zayıf dolgusu ve sertliği ile sonuçlanır7.
Hastaların çoğu, yaşadıkları ED'nin yaşam kaliteleri üzerinde olumsuz bir etkisi olduğunu bildirmektedir8. Ameliyattan sonra cinsel aktivitelerinden vazgeçmeye hazır değillerdir ve bu nedenle, penis rehabilitasyonu için mevcut diğer tedaviler başarısız olduğunda, ED için iyileştirici bir tedavi çekicidir.
İnsanlar üzerinde yapılan hayvan ve küçük faz 1 denemeleri de dahil olmak üzere önceki çalışmalarda, kök hücreler ED 2,9,10,11,12 için alternatif bir tedavi olarak umut verici sonuçlar göstermiştir. Sonuçlar, ADRC'lerin kullanılmasının güvenli olduğunu ve corpora cavernosum 2,9,10,11,12'ye tek bir enjeksiyondan sonra erektil fonksiyonun önemli ölçüde iyileştiğini göstermektedir. Adipoz kaynaklı rejeneratif hücrelerin (ADRC'ler), çoklu hormonların, nörotrofik ve diğer büyüme faktörlerinin, sitokinlerin ve muhtemelen mikro-RNA'ların serbest bırakılması yoluyla parakrin mekanizmalarla doku rejenerasyonunu desteklediği düşünülmektedir13. Ek olarak, ADRC'ler endotel ve vasküler kas hücreleri, kıkırdak hücreleri, osteositler ve nöronlar dahil olmak üzere çeşitli olgun hücre tiplerine farklılaşabilir14,15. Bu özellikler, kök hücreleri ED için kalıcı yeni bir tedavi geliştirmek için ilginç kılar.
Kök hücreler, temel olarak erken embriyodan (embriyonik kök hücreler) ve yetişkin dokudan (yetişkin kök hücreler) türetilenler olmak üzere birkaç gruba ayrılır. Yetişkin kök hücreler, multipotent olan ve kemik iliği, yağ dokusu, göbek kordonu kanı, plasenta ve diş pulpasında bulunabilen mezenkimal kök hücreleri (MSC) içerir17.
Yağ dokusundan elde edilen kök hücrelere, kemik iliğinden elde edilen kök hücrelerin aksine, erişmek kolaydır. Kemik iliğinden kök hücrelerin toplanması liposuction'a göre riskli ve ağrılı bir işlemdir. Kemik iliğinden toplanması mümkün olan hücre sayısı sınırlı olurken, sadece hastanın yağ dokusu depoları hasat edilebilecek hücre sayısı için sınırı belirler. Bu nedenle, yağ dokusundan büyük miktarda kök hücreyi izole etmek, daha sonra tatmin edici bir miktar elde etmek için hücreleri kültürlemeye gerek kalmadan mümkündür. Genellikle stromal vasküler fraksiyon (SFV) olarak da adlandırılan adipoz kaynaklı rejeneratif hücreler, MSC'ler, endotel hücreleri, perisitler, bağışıklık hücreleri ve progenitörler dahil olmak üzere birçok hücre tipinden oluşur18. Bunların hepsi rejeneratif süreçte rol oynayabilir.
Bu çalışmanın amacı, corpora cavernosum'a enjeksiyon sonrası taze hasat edilmiş yağ dokusundan izole edilen 4 mL otolog ADRC'ler kullanılarak kök hücrelerin RP sonrası ED üzerindeki etkisini araştırmaktır.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Liposuction</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Abdominal Bağlayıcı</td><td>Dale</td><td></td><td>Hastaya özel boyut</td></tr><tr><td>Yapışkan OP-havlu</td><td>M&ouml; lnlycke Sağlık Bakım</td><td>906677</td><td>90x75 cm</td></tr><tr><td>Adrenalin 1 mg/ml</td><td>Amgros I/s</td><td>74 44 23</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Temel OP malzemeleri</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>97010873-07</td><td></td></tr><tr><td>Karbon Çelik bıçak 11</td><td>Swann-Morton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klorhiksidin Etanol</td><td>Faarborg Pharma</td><td>%5 renkli</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık set Lipocollector 3</td><td>Human Med</td><td>670200</td><td></td></tr><tr><td>Uzatma hortumları</td><td>Ekstrudan</td><td></td><td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M uzunluğunda</td></tr><tr><td>Bakış Paçavrası</td><td>Bariyer</td><td>175201</td><td>30x45 cm</td></tr> boyutlarında<tr><td>Jelonet</td><td>Smith ve Yeğen Medikal Ltd</td><td>90509225</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Marcaine 5 mg / ml + Adrenalin 5 micrigram</td><td>Astra Zeneca</td><td></td><td>20 mL</td></tr><tr><td>Mesorb Bandaj</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>677001</td><td>10x13 cm</td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson</td><td>304622</td><td>18 G + 23 G</td></tr><tr><td>Monocryl sütür</td><td>Ethicon</td><td></td><td>04:00</td></tr><tr><td>Ringer-lactat</td><td>Fresinus Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril eldiven</td><td>Gammex</td><td>330052065</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Önlük</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>690103-01</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Marker</td><td>Richard-Allan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Maske</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>Codan Medical</td><td>6,28,402</td><td>50/60 ml kateter</td></tr><tr><td>ucu Şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>700016181</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>WAL- Kanüller için aplikatör 25/30 cm</td><td>Human Med</td><td>REF 500001</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>ADRC'lerin izolasyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml Şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>REF 303172</td><td></td></tr><tr><td>3 musluk</td><td>One Med</td><td>REF 10554-01</td><td></td></tr><tr><td>Yapıştırıcı OP-havlu</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care AB</td><td>REF 906677</td><td>90x75 cm</td></tr><tr><td>Cytori Celution 800IV cihazı</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dezenfeksiyon takasları</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Microlance</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td>25G (0,5*25 mm)</td></tr><tr><td>Nitril Eldiven</td><td>Abena</td><td></td><td>Pudrasız</td></tr><tr><td>VEYA örtü Levha, 2 kat</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>REF 33005</td><td></td></tr><tr><td>Ringers Lactate</td><td>Fresinus Kabi</td><td>06756 (DK)</td><td></td></tr><tr><td>Steril eldivenler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril önlük</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytori Celution 800IV için ek kit</td><td>Cytori</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Termometre</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td>izlenebilir</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>ADRC'lerin enjeksiyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diyafram örtüsü</td><td>One Med</td><td>REF1565-01</td><td>75*90 cm</td></tr><tr><td>Dedezenfeksiyon takası</td><td>Mediq Danmark</td><td>3340010</td><td></td></tr><tr><td>Pean</td><td>Leibinger</td><td>32-01257</td><td></td></tr><tr><td>Silikon Damar Halkası</td><td>Mor Cerrahi</td><td>REF PS3203</td><td></td></tr><tr><td>Steril eldivenler</td><td>Sempermed</td><td></td><td>Veya favorinizi kullanın</td></tr></tbody></table>

radikal prostatektomi sonrası erektil disfonksiyon tedavisinde yağ kaynaklı rejeneratif hücrelerin İzolasyonu

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Kök hücreler kısmen rejeneratif tıpta birçok araştırma alanında kullanılmaktadır, çünkü bu tedaviler semptomatik olmaktan ziyade iyileştirici olabilir. Kök hücreler farklı dokulardan elde edilebilir ve izolasyon için çeşitli yöntemler tanımlanmıştır. Adipoz kaynaklı rejeneratif hücrelerin (ADRC'ler) izolasyonu için sunulan yöntem, birçok terapötik alanda kullanılabilir, çünkü yöntem genel bir prosedürdür ve bu nedenle erektil disfonksiyon (ED) tedavisi ile sınırlı değildir. ED, radikal prostatektominin (RP) yaygın ve ciddi bir yan etkisidir, çünkü ED genellikle geleneksel tedavi ile iyi tedavi edilmez. ADRC'lerin ED tedavisi olarak kullanılması, corpora cavernosum'a tek bir hücre enjeksiyonundan sonra ilk olumlu sonuçlar nedeniyle büyük ilgi görmüştür. ADRC'lerin izolasyonu için kullanılan yöntem, tekrarlanabilir ve tek tip bir ürün sağlayan basit, otomatik bir işlemdir. Ayrıca, izole edilen ürünün sterilitesi sağlanır, çünkü tüm süreç kapalı bir sistemde gerçekleşir. Kök hücreler insanlarda enjeksiyon için kullanıldığından kontaminasyon ve enfeksiyon riskini en aza indirmek önemlidir. Tüm prosedür 2,5-3,5 saat içinde yapılabilir ve doku nakliyesi ihtiyacını ortadan kaldıran sınıflandırılmış bir laboratuvar gerektirmez. Bununla birlikte, izolasyon cihazının çalışması için minimum drene lipoaspirat miktarı 100 g olduğu için prosedürün bazı sınırlamaları vardır.

Sunulan prosedür, 21 hasta19'u içeren açık etiketli bir Faz 1 klinik çalışması için kullanılmıştır. Çalışmanın birincil sonlanım noktası, ADRC'lerin insanlarda kullanımının güvenliğiydi ve ikincil sonlanım noktası, ADRC'lerin erektil fonksiyon üzerindeki etkisiydi.
Yirmi bir erkek, prostat kanserine bağlı olarak RP'den önce ortalama yaşı 60 (dağılım 46-69) ve normal ereksiyon ve aktif cinsel yaşamı olan çalışmalara dahil edildi. Hepsi RP'den sonra ED'den muzdaripti, penis rehabilitasyonu için mevcut olan ilaçlardan iyileşme belirtisi yoktu. Altı erkek, RP'nin bir yan etkisi olarak idrar kaçırmadan muzdaripti. Tüm erkeklere, sunulan yöntemle izole edilmiş tek bir intrakavarn ADRC enjeksiyonu yapıldı.
21 erkeğin tamamı enjeksiyondan 1,3,6 ve 12 ay sonra poliklinikte 4 ziyaret ile takip edildi. Cinsel fonksiyon doğrulanmış anketlerle değerlendirildi - Uluslararası Erektil Fonksiyon İndeksi-5 (IIEF-5) ve Ereksiyon Sertlik Skoru (EHS) (Ek olarak eklenmiştir).
Gözlem sırasında ciddi bir olay meydana gelmedi. Sekiz erkek, enjeksiyon bölgelerinde geçici kızarıklık ve şişlik bildirdi, üçü penis bölgesinde reaksiyon bildirdi. Hafif karın rahatsızlığı ve minör abdominal hematomlar gibi liposuction ile ilgili sekiz geri dönüşümlü minör olay bildirilmiştir. 1 aylık takipte hiçbir hasta rahatsızlık bildirmedi. Kıta grubundaki on beş kişiden sekizi (% 53), erektil fonksiyonun 12 ayda cinsel ilişki için yeterli olduğunu bildirmiştir. 6 inkontinans erkek grubu erektil fonksiyonda herhangi bir iyileşme göstermedi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kıta</td>
			<td>İnkontinans</td>
		</tr>
<tr>
<td>Dahil olan hastalar</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Önemli etki</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Tablo, kıta ve inkontinans hastaları arasındaki tedavinin anlamlı etkisindeki farklılıkları göstermektedir.

Yöntemlerin ve protokollerin kesin olarak açıklanması, kök hücre tedavilerinin büyük ölçekli alımı için çok önemlidir. Burada, radikal prostatektomi (RP) sonrası erektil disfonksiyon (ED) tedavisi olarak tek bir intrakavernöz enjeksiyon için kullanılan adipoz kaynaklı rejeneratif hücreleri izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Radikal Prostatektomi Sonrası Erektil Disfonksiyon Tedavisinde Yağ Kaynaklı Rejeneratif Hücrelerin İzolasyonu

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Bu izolasyon tekniği, yağ kök hücrelerinin radikal prostatektomi sonrası hastaların erektil fonksiyonu yenilemesine yardımcı olup olamayacağını araştırmak için kullanılabilir. Bu yöntem belirli bir hastalık için sınırlı değildir. Yağ kök hücre araştırmalarının tüm alanlarında kullanılabilir.İzole kök hücreler erektil disfonksiyonu tedavi etmek için kullanılır, ancak izolasyon tekniği genel bir prosedürdür ve kök hücreler kök hücre araştırmasındaki diğer alanlarda yararlı olabilir. Karın ve skrotum derisini% 0.5 klorheksidin ile dezenfekte ederek başlayın. Karın üzerinde liposuction'ın yapılacağı bölgeleri, genellikle sentez ve göbek arasındaki alanı çizmek için cerrahi bir belirteç kullanın.Karın derisinde 11 numaralı neşter ile altı milimetre genişliğinde iki kesi yapın. Kesileri liposuction'ın yukarı çekilen bölgesinden simetrik ve yanal olarak yerleştirin. Liposuction sırasında infiltrasyon kanülünün insizyonların içine ve dışına kolayca kaydığından emin olmak için insizyonlara biraz kayganlaştırıcı yerleştirin.Daha sonra ciltteki kesilerden 14 metrelik bir infiltrasyon kanülü ekleyin. Modifiye Klein solüsyonunu, hedeflenen doku şişmiş ve sert veya tümörlü hale gelene kadar cilt yüzeyine paralel olarak işaretlenmiş bölgelere deri altından enjekte edin. Yağ dokusuna bire bir oranda bir miktar modifiye Klein çözeltisi enjekte edin.Adrenalinin etkilerini en üst düzeye çıkarmak ve hasat edilen yağ dokusundaki kan miktarını azaltmak için 10 dakika bekleyin. 200 ila 300 milimetre yağ dokusu toplamak için standart bir jet infüzyon liposuction yapın. Entegre bir infüzyon tüpü ve nozulu ile içi boş olan künt kanüller kullanın.Liposuction için kanülü bir emme cihazına takın. Karın üzerindeki kesilerden künt uçlu üç milimetrelik bir şırınga sürün ve lipoaspiratı steril bir ortamda korumak için yağ dokusunu Lipo Collector'da toplayın. Lipoaspirat su fazından ayrılmaya başlayacaktır.Lipoaspiratı LipoCollector'dan emmek için 50 mililitrelik steril şırıngalar kullanın, şırıngalarda emilen suyun hacmini en aza indirin. Yağ dokusunu steril tutmak için şırıngaların ucuna bir tıkaç vidalayın. Lipoaspiratın su fazından ayrılmasını başlatmak için ucu aşağı doğru olan şırıngaları steril bir plastik torbaya yerleştirin.Ardından torbayı steril bir kaba koyun. Taşıma sırasında steril ortamı güvence altına almak için kabı steril bir örtü ile örtün. Cilt kesilerini cerrahın tercih ettiği dikiş materyali ile kapatın.Postoperatif ödemi azaltmak için karın çevresine bir kompresyon giysisi yerleştirin. Bir penis bloğu yapmak için, bupivakaini biri ventral, diğeri dorsal olarak yerleştirilmiş iki bölgeye enjekte edin. Tüm iğneyi deri altı dokusuna sokun, yanal olarak sağa doğru işaret edin ve iğne geri çekilirken anesteziyi enjekte edin.İğneyi sola doğrultarak enjeksiyonu tekrarlayın. Tüm sarf malzemelerini ve enzimleri steril tek kullanımlık cerrahi havlu ile kaplı masaya aseptik olarak yerleştirin. Cihazı etanol ile silin ve sarf malzemesi setini yükleyin.Ardından sisteme bir torba laktasyonlu zil bağlayın. Lipoaspiratı eklemeden önce bir dizi yarı otomatik test yapın. Cihaz hazırlanırken, yağın sıvı fazdan ayrılmasını sağlamak için lipoaspiratın 50 mililitrelik bir tüp içinde durmasına izin verin.Toplam yağ dokusu miktarına dikkat edin ve yüklenen toplam yağ miktarının cihaz kapasitesi aralığında olmasını sağlamak için bunu kullanın. Cihaz tarafından istendiğinde dokuyu yükleyin. Makine fazla sıvıyı boşaltacaktır.Yağ dokusu miktarını tartın ve emzirilmiş halkalarla yıkayın. Doku yıkanıp boşaltıldığında, 37 ila 39 santigrat derece emzirilmiş halkalarla yeni bir infüzyon torbası bağlayın. Beş mililitre laktasyonlu halkalarda kollajenaz ve proteaz karışımı içeren ticari olarak temin edilebilen enzimi yeniden oluşturur.Cihazın, yağ dokusu ile teneke kutuya enjekte edilecek enzim miktarını gösterdiğinden emin olun. Enjekte edildikten sonra enzimatik sindirim yaklaşık 20 dakika sürecektir. Doku sindiriminden sonra, içeriğin sarı faz içeren bir üst lipit ve yağ türevi rejeneratif hücreleri veya ADRC'leri içeren alt pembe bir tabakaya ayrıldığını kontrol edin.Pembe tabakanın sarf malzemesi setinin hücre işleme odasına akmasına izin verin ve lipit tabakasını geride bırakın. ADRC'lerin çoklu santrifüjleme turları sırasında hücre işleme odasında yoğunlaşmasına izin verin. Daha sonra laktasyonlu halkalarda yeniden oluşturulmuş 10 mililitre intrabaz ekleyin.Enzimatik reaksiyon 10 dakika sürer ve ADRC'ler daha sonra yıkanır. ADRC'lerin izolasyonu tamamlandığında, hücreleri beş mililitre Ringer laktatında yeniden askıya alın ve çözeltiyi beş mililitrelik bir şırıngaya aspire edin. Şırıngaya üç yönlü bir stopcock dişi Luer kilidi takın ve dört mililitre ADRC'yi başka bir beş mililitrelik steril şırıngaya aspire edin.Son bir mililitre ADRC'yi bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın. Bu aliquot'u, hücre sayısı, hücre canlılığı, yüzey belirteçlerinin akış sitometrisi ile analizi ve ADRC farklılaşma yeteneği gibi ADRC karakterizasyon analizleri için kullanın. Dört mililitre ADRC içeren beş mililitrelik şırıngaya 25 gauge iğne koyun.Sonra steril bir örtüye koyun. ADRC'lerin bu çözeltisi alıcıya enjekte edilecek ve ortalama olarak 8.4 ila 32.7 milyon hücre içermelidir. ADRC'lerin çözeltisinin, şırıngayı corpora cavernosum'a enjekte edilene kadar hafifçe eğerek homojen kaldığından emin olun.Penis üzerine bir diyafram örtüsü yerleştirin. Ve penisin kökünde silikon damar halkalı bir turnike. Döngüyü sıkın ve forsepslerle sabitleyin, turnikeyi penisten kan akışını durduracak kadar sıkı hale getirin.Penis derisini enjeksiyon bölgesinde dezenfekte etmek için iki antiseptik çubuk kullanın. Daha sonra ADRC çözeltisinin bir mililitresini corpora cavernosum'a iki farklı yerde, sağ tarafta doğrudan bir açıyla enjekte edin. Bu adımı sol corpora cavernosum'da tekrarlayın ve toplam dört mililitre hacim enjekte edin.Bu yöntem, radikal prostatektomi öncesi yaş ortalaması 60 olan ve normal ereksiyon ve aktif cinsel yaşamı olan 21 erkek üzerinde yapılan açık etiketli birinci faz klinik çalışmada test edilmiştir. Erkeklerden altısı da idrar kaçırmadan muzdaripti. Tüm erkeklere izole ADRC'lerin tek bir kavernöz enjeksiyonu yapıldı ve enjeksiyondan 1, 3, 6 ve 12 ay sonra poliklinikte dört ziyaretle takip edildi.Gözlem sırasında ciddi bir olay meydana gelmedi. Sekiz erkek, enjeksiyon bölgelerinde geçici kızarıklık ve şişlik bildirdi ve üçü penis bölgesinde reaksiyon bildirdi. Sekiz erkek, hafif karın rahatsızlığı ve minör abdominal hematomlar gibi liposuction ile ilgili geri dönüşümlü küçük olaylar yaşadı.Hiçbir hasta bir aylık takipte rahatsızlık bildirmedi. Cinsel işlevleri Uluslararası Erektil Fonksiyon İndeksi Beş ve Ereksiyon Sertliği Skoru ile değerlendirildi. Kıta grubundaki 15 erkekten sekizi, erektil fonksiyonlarının 12 ayda cinsel ilişki için yeterli olduğunu bildirmiştir.Altı inkontinans erkeğinden oluşan grup, erektil fonksiyonda herhangi bir iyileşme göstermedi Bu protokolü denerken, izolasyon prosedürü sırasında kullanılan enzimlerin, prosedür başlamadan iki saat önce dondurucudan veya buzdolabından çıkarılması gerektiğini unutmayın. Bu teknikten elde edilen sonuçlar, yağ kök hücrelerinin etkilerinin daha büyük ölçekte araştırıldığı bir RCT'nin yolunu açmıştır.

isolation-adipose-derived-regenerative-cells-for-treatment-erectile

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, murin periaortik ark yağ dokusundan floresan etiketli nöral krestten türetilmiş adipoz türevli kök hücrelerin (ADSC'ler) izole edilmesi ve kültürlenmesi için bir teknik gösterilmektedir. İzolasyonu takiben, NCADSC'ler tespit edilir, floresanla aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak sıralanır ve daha sonra hücre proliferasyonunu teşvik ederek bir plaka üzerinde kültürlenir.

Murin Periaortik Yağ Dokusundan Yağ Kaynaklı Kök Hücrelerin İzole Edilmesi

2001 yılında, UCLA araştırmacılar erişkin kök hücrelerin bir nüfus izolasyon, adipoz dokudan, Yağ elde edilen kök hücreler veya TSK adlandırılan nitelendirdi. Bu makale kolajenazı kullanarak manuel, enzimatik sindirim protokolü kullanılarak lipoaspirates gelen TSK izolasyonunu özetliyor.

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

İnsan adipoz kaynaklı stromal hücrelerindeki transkripsiyonel heterojenlik, hücre yüzeyi belirteçleri ve osteojenik genler kullanılarak tek hücre düzeyinde tanımlanabilir.  Bu çalışmada, kraniyofasiyal iskelet rekonstrüksiyonunu arttırmak için kullanılabilecek artmış osteojenik potansiyele sahip hücre alt popülasyonlarının izolasyonu için akış sitometrisi kullanan bir protokol tanımlanmıştır.

İzolasyon ve İnsan zenginleştirilmesi Gelişmiş Osteogenezi için Stromal Hücreleri adipoz-türevi

Hazırlık ve nakli Yağ dokusundan elde edilen kök hücre (ASC) yaprak bir sıçan modelinde yeterince dikilmiş kolorektal anastomoses üzerine sunulur. Bu yeni uygulama ASC sayfaları kolorektal anastomoz kaçağı azaltmak gösterir.

Bir sıçan modelinde kısmi kolektomi sonra kaçağı azaltmak için Yağ dokusundan elde edilen kök hücre sayfasının nakli

Bu protokol, adipojenik ve fibro-inflamatuar stromal hücre alt popülasyonlarını murin karın içi beyaz yağ dokusu (WAT) depolarından floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması veya immünmanyetik boncuk ayırma yoluyla izole etmek için teknik yaklaşımı açıklar.

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Mevcut protokol, literatüre kıyasla zaman kazanımı ile muazzam bir hücresel verim ile sonuçlanan ADSC izolasyonu için geliştirilmiş bir metodolojiyi açıklamaktadır. Bu çalışma aynı zamanda uzun süreli kriyoprezervasyondan sonra nispeten çok sayıda canlı hücre elde etmek için basit bir yöntem sunmaktadır.

Uzun Süreli Kriyoprezervasyonda Yağ Dokusundan Mezenkimal Kök Hücre Elde Etme Tekniği ve Stromal Vasküler Fraksiyon Karakterizasyonu

İğnesiz su jeti teknolojisi ile hücre enjeksiyonu yöntemini, hücresel canlılık, proliferasyon ve elastikiyet ölçümleri açısından doğum sonrası araştırmaların bir sekeli ile birlikte sunuyoruz.

Domuz Yağ Dokusundan Türemiş Stroma Hücrelerinin Su Jeti Teknolojisi ile Enjeksiyonu

Hücre tedavisi hazırlığı/manipülasyon aşamalarında kullanılmaya başlanan ksenojenik (kimyasal veya hayvansal türevli) ürünler, konakçı hastalarda immün reaktivite ve patojenik bulaşma riskinin artmasıyla ilişkilidir. Burada, insan adipoz türevi kök hücrelerin izolasyonu ve in vitro genişlemesi için tam bir ksenojenik içermeyen yöntem açıklanmaktadır.

İnsan Tedavisi için Yenilikçi Bir Ksenojenik İçermeyen Yöntemle İnsan Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürü

Bu protokol, Sprague Dawley sıçanlarından yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) izole edilmesi ve tanımlanması için bir metodoloji açıklamaktadır.

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Burada, &gt;90% işlem süresi azalması, yüksek hücre canlılığı ve geniş uyumlulukla karakterize edilen yağ kaynaklı kök hücreleri ve adipositleri verimli şekilde izole etmek için standart bir yöntem sunuyoruz.

Domuz yağ dokusundan yağ kök hücrelerinin ve adipositlerin etkili izolasyonu

Öğrenin radikal prostatektomi sonrası erektil disfonksiyon tedavisinde yağ kaynaklı rejeneratif hücre izolasyonunu. Bu yöntem liposuction, enzimatik sindirim ve santrifüjasyon içerir.

Radikal Prostatektomi Sonrası Erektil Disfonksiyon Tedavisinde Yağ Kaynaklı Rejeneratif Hücrelerin İzolasyonu

Daha fazla video keşfet