Name: Sitogenetik teknikle Bemisia tabaci yumurta döllenme oranı belirleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 24 s
Description: Öğrenin, sitogenetik teknikle Bemisia tabaci yumurta döllenme oranını DAPI boyama ile belirleme yöntemini. Bu protokol, beyaz sinek ekolojisi ve davranışları üzerine araştırmaları hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma için M.S.H. bir NSF grant (DEB-1020460) M.S.H. için ve USDA AFRI grant (2010-03752) tarafından finanse edildi Yazarlar Brennan Zehr whitefly yumurta çok beceri ve Zen ile boyama için teşekkür ederiz. Yazar Mike Riehle onun floresan mikroskop görüntüleme için kullanımına izin için teşekkür ederiz. Yazarlar Suzanne Kelly ve Marco Gebiola yumurta görüntüler için teşekkür ederiz. Yazarlar Suzanne Kelly ve Jimmy Conway deneyler sırasında çok önemli anlarda yardım ettiğin için teşekkür ederim.

Not: Oda sıcaklığında iyi havalandırılmış bir alanda veya duman başlık altında gerçekleştirilmiş tüm işleri emin olun. Bu iletişim kuralı tüm 'damla' ın işleç tercihinize bağlı olarak 5-20 µL olarak tanımlanır.
1. ilk kurulum
<ol><li>Kadın whiteflies temiz yapraklarda Hayır izin. Küçük kafes veya agar bir petri içinde sığacak şekilde kes yaprakları örnekler oviposition arenalarda için. Coverable bir delik küçük kafes veya ekleyebilir veya kaldırabilir yetişkinler için Petri kabına kapağı açın. Alternatif olarak, hızlı bir gemi toplanan yetişkinlerin buza koymak ve sonra onları yaprak üzerinde mevduat. Yumurta baba tarafından pronucleus içine sperm geçiş gözlenmesi sağlamak için oviposition ve en fazla 60 dk, yumurta fiksasyon arasındaki süreyi sınırlayın. Not: Yumurta yaprak kaldırılmaz yetişkinliğe yetişkin seks oranları kaydetmek için yetiştirilen.</li>
	<li>Önce veya whitefly oviposition sırasında mikroskop slayt sabun ve su, kurutma ile temizleyerek iyi ve parafin film bir parça bir ucuna, (şekil 1) parafin film yüzey değil kırmak emin germe hazırlayın. Not: Parafin filmidir hidrofobik ve yarı opak, damla ve daha kolay görülmesi için yumurta sıvı formu için sağlar.</li>
</ol>2. Dechorionation
<ol><li>Bir cam Pasteur pipet, parafin filmin damla çamaşır suyu çözüm (%0,83 sodyum hipoklorit) ekleyin. Not: Yumurta 2-3 yumurta içinde her damla eğer sadece izlemek daha kolaydır. Alternatif olarak, bir büyük yumurta sayı yönetmek için 1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x damlaları içinde yumurta toplamak. Uyarı: Çamaşır suyu aşındırıcı; Ne zaman işleme çamaşır suyu ve değil nefes eldiven giymek.</li>
	<li>Yetişkin whiteflies yaprak kaldırın.</li>
	<li>Yaprak yumurta açıkça görmek ve tek başına yumurta toplamak için mikroskop altında ve ince bir sonda ile dikkatli bir şekilde yerleştirin. 45 ° veya erimiş pipet ucu (Şekil 2) bir rahat çalışma açıyla minuten nadel çiviyi yerleştirmeden bir araştırma yapmak için.</li>
	<li>Yumurta çamaşır suyu veya 1 x PBS aktarın. 1 x PBS kullanarak, PBS bir cam Pasteur pipette bir kez tüm yumurta toplanır ve çamaşır suyu yumurtalara ekleyin 1 x kaldırın. Not: Pedicel yaprak kaldırılana kadar yumurta toplarken, yavaş yavaş onun temel yumurtadan kaldır. Pedicel yapış yapış ve çamaşır suyu daldırma kadar yumurta genellikle sonda ucuna kadar sopa. Not: Bu tüm Kimyasalları Pasteur Pipetler ayrı cam kullanmak için tavsiye edilir ve Pipetler ipuçları daraltmak ve yanlışlıkla whitefly yumurta alıyorum riskini azaltmak için ısı ile değiştirilebilir. Kalıntı ve kontaminasyonu önlemek için her kullanımdan sonra Pipetler deiyonize su ile temizleyin.</li>
	<li>10 dk bekle. Embriyo yumurta 1s büyük bir ilgi ise, yumurta çamaşır suyu ilâ 15 dakika bırakın. Not: En fazla 1 saat eski olan yumurta için 10 dakika yeterlidir.</li>
</ol>3. fiksasyon
Not: Bu adımlar bir Hymenopteran protokolü17alınır.
<ol><li>(Koryon parçaları içeren) çamaşır suyu bir bardak Pasteur pipet ile kaldırmak ve o atın. Buzul Asetik asit bir cam Pasteur damlaları pipet ve 3 dakika bekleyin ekleyin. Uyarı: Bu adım bir duman başlık altında devam etmek. Buzul Asetik asit aşındırıcı; Ne zaman eldiven giymek buzul Asetik asit işleme ve, özellikle de artık çamaşır suyu ile birlikte nefes değil.</li>
	<li>Buzul Asetik asit bir cam Pasteur pipet ile kaldırın ve Clarke'nın çözüm damla ekleyin (3:1 mutlak etanol: buzul Asetik asit) ile bir bardak Pasteur pipet. Çözüm çoğu buharlaşıp kadar bekleyin (veya 10 min max).</li>
	<li>Bir cam Pasteur pipet ve etanol çoğu buharlaşıp kadar bekleyin (veya 10 min max) yumurta için % 70 etanol damla ekleyin.</li>
</ol>4. boyama
<ol><li>Bir cam Pasteur pipet ile herhangi bir kalıntı etanol kaldırmak ve bir cam pH 7,0 yakın almak için Pasteur pipet ile yumurta için 1 x PBS damla ekleyin. Mikroskop slayt kurutulma, örneğin, bir boş pipet ucu kutusunda (şekil 3) içinde ıslak kağıt havlu ile önlemek için nem odası ayarlayın. En az 30 dakika bekleyin. Not: Bir duraklama kullanılmıyorsa, nem odası kuruma engelleyebilirsiniz sürece bu en iyi noktasıdır.</li>
	<li>1 x PBS bir cam Pasteur pipet, kaldırmak ve 0,1 μg/mL DAPI, bir DNA floresan leke damla ekleyin, bir cam Pasteur pipet. Mikroskop slayt bir karanlık nem odasında ayarlayın ve en az 15 dakika bekleyin. Uyarı: DAPI tahriş edici, eldiven ile hallederim.</li>
</ol>5. çamaşır
<ol><li>Bir cam Pasteur pipet ile DAPI kaldırın.</li>
	<li>1 damla ekleyin x TBST (5 x çözüm 30 g Tris, NaCl 43.8 g, polysorbate 20 5 mL ve NaN3 [pH 7,5] 1.0 g yapılmış ve PCR sınıf su ile 1 L getirdim) yumurta bir cam Pasteur için pipet. 1 kaldırmadan önce 5 dakika bekleyin bir cam Pasteur pipet ile x TBST. Bu 2 kez tekrarlayın.</li>
</ol>6. montaj
<ol><li>Son yıkama sonra dikkatle mikroskop slayt temiz bir parçası üzerine parafin filmden tüm yumurta pipette. Fazla 1 çıkarın x TBST; daha sonra medya montaj 20 µL ekleyin (% 80 gliserol ve % 20 1 x TBST ile % 2 n-propil-gallat) ve temiz kapak slayt yumurtaları üstüne yerleştirin.</li>
	<li>Uzun süreli depolama için kapak slayt açık oje ile mühür ve, sonra slayt 2 ° C'de karanlıkta saklamak veya hemen floresan mikroskop altında görüntülemek.</li>
</ol>

<ol><li>Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCharnov%2C+EL+%22The+Theory+of+Sex+Allocation%22">The Theory of Sex Allocation</a>. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).</li>
<li>Godfray, H. C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGodfray%2C+HCJ+%22Parasitoids%3A+behavioral+and+evolutionary+ecology%22">Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology</a>. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).</li>
<li>Bourke, A. F. G., Franks, N. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBourke%2C+AFG+%22Social+Evolution+in+Ants%22">Social Evolution in Ants</a>. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1995).</li>
<li>Pascal, S., Callejas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-+and+interspecific+competition+between+biotypes+B+and+Q+of+Bemisia+tabaci+%28Hemiptera%3A+Aleyrodidae%29+from+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Intra- and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) from Spain.</a> Bulletin of Entomological Research. 94 (4), 369-375 (2004).</li>
<li>Liu, S. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+mating+interactions+drive+widespread+invasion+and+displacement+in+a+whitefly%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Asymmetric mating interactions drive widespread invasion and displacement in a whitefly.</a> Science. 318 (5857), 1769-1772 (2007).</li>
<li>Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+discrimination+in+invasive+whitefly+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mate discrimination in invasive whitefly species.</a> Journal of Insect Behavior. 23 (5), 364-380 (2010).</li>
<li>Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+in+mating+behaviour+drives+asymmetric+reproductive+interference+in+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Plasticity in mating behaviour drives asymmetric reproductive interference in whiteflies.</a> Animal Behaviour. 79 (3), 579-587 (2010).</li>
<li>Tsueda, H., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+differences+between+Q+and+B+whiteflies%2C+Bemisia+tabaci%2C+on+three+host+plants+and+negative+interactions+in+mixed+cohorts%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Reproductive differences between Q and B whiteflies, Bemisia tabaci, on three host plants and negative interactions in mixed cohorts.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 141, 197-207 (2011).</li>
<li>Wang, P., Crowder, D. W., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+mating+behavioural+interactions+and+life+history+traits+in+the+competition+between+alien+and+indigenous+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of mating behavioural interactions and life history traits in the competition between alien and indigenous whiteflies.</a> Bulletin of Entomological Research. 102 (4), 395-405 (2012).</li>
<li>Sun, D. -B., Li, J., Liu, Y. -Q., Crowder, D. W., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reproductive+interference+on+the+competitive+displacement+between+two+invasive+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Entomological+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of reproductive interference on the competitive displacement between two invasive whiteflies.</a> Bulletin of Entomological Research. 104 (3), 334-346 (2014).</li>
<li>Liu, S. -S., Colvin, J., De Barro, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species+concepts+as+applied+to+the+whitefly+Bemisia+tabaci+systematics%3A+how+many+species+are+there%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Integrative+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: how many species are there?</a> Journal of Integrative Agriculture. 11 (2), 176-186 (2012).</li>
<li>Invasive Species Specialist Group. Global Invasive Species Database. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php">http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php</a> (2018).</li>
<li>Gilbertson, R. L., Batuman, O., Webster, C. G., Adkins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+insect+supervectors+Bemisia+tabaci+and+Frankliniella+occidentalis+in+the+emergence+and+global+spread+of+plant+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Role of the insect supervectors Bemisia tabaci and Frankliniella occidentalis in the emergence and global spread of plant viruses.</a> Annual Review of Virology. 2 (1), 67-93 (2015).</li>
<li>Giorgini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rickettsia+symbionts+cause+parthenogenetic+reproduction+in+the+parasitoid+wasp+Pingala+soemius+%28Hymenoptera%3A+Eulophidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Rickettsia symbionts cause parthenogenetic reproduction in the parasitoid wasp Pingala soemius (Hymenoptera: Eulophidae).</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2589-2599 (2010).</li>
<li>Himler, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+spread+of+a+bacterial+symbiont+in+an+invasive+whitefly+is+driven+by+fitness+benefits+and+female+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias.</a> Science. 332 (6026), 254-256 (2011).</li>
<li>Cass, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+endosymbiont+Rickettsia+in+an+insect+pest%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Ecology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the endosymbiont Rickettsia in an insect pest.</a> Microbial Ecology. 70 (1), 287-297 (2015).</li>
<li>Vavre, F., de Jong, J. H., Stouthamer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytogenetic+mechanism+and+genetic+consequences+of+thelytoky+in+the+wasp+Trichogramma+cacoeciae%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Cytogenetic mechanism and genetic consequences of thelytoky in the wasp Trichogramma cacoeciae.</a> Heredity. 93 (6), 592-596 (2004).</li>
<li>Cass, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+fitness+benefits+of+the+Rickettsia+bacterial+symbiont+in+an+insect+pest%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Conditional fitness benefits of the Rickettsia bacterial symbiont in an insect pest.</a> Oecologia. 180 (1), 169-179 (2016).</li>
<li>Hunter, M. S., Asiimwe, P., Himler, A. G., Kelly, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+nuclear+genotype+influences+phenotype+of+a+conditional+mutualist+symbiont%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Host nuclear genotype influences phenotype of a conditional mutualist symbiont.</a> Journal of Evolutionary Biology. 30, 141-149 (2017).</li>
<li>Gottlieb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+intracellular+ecosystem%3A+symbiotic+bacteria+share+bacteriocytes+in+whiteflies%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Inherited intracellular ecosystem: symbiotic bacteria share bacteriocytes in whiteflies.</a> FASEB Journal. 22 (7), 2591-2599 (2008).</li>
<li>Luan, J., Sun, X., Fei, Z., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+inheritance+of+a+single+somatic+animal+cell+displayed+by+the+bacteriocyte+in+the+whitefly+Bemisia+tabaci%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Maternal inheritance of a single somatic animal cell displayed by the bacteriocyte in the whitefly Bemisia tabaci.</a> Current Biology. 28 (3), 459-465 (2018).</li>
<li>Guo, J. -Y., Cong, L., Wan, F. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+generation+effects+of+high+temperature+on+the+development+and+fecundity+of+Bemisia+tabaci+%28Gennadius%29+%28Hemiptera%3A+Aleyrodidae%29+biotype+B%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Multiple generation effects of high temperature on the development and fecundity of Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae) biotype B.</a> Insect Science. 20 (4), 541-549 (2013).</li>
<li>Cui, X., Wan, F., Xie, M., Liu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heat+shock+on+survival+and+reproduction+of+two+whitefly+species%2C+Trialeurodes+vaporariorum+and+Bemisia+tabaci+biotype+B%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of heat shock on survival and reproduction of two whitefly species, Trialeurodes vaporariorum and Bemisia tabaci biotype B.</a> Journal of Insect Science. 8 (24), (2008).</li>
<li>Boykin, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bemisia+tabaci+nomenclature%3A+Lessons+learned%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Bemisia tabaci nomenclature: Lessons learned.</a> Pest Management Science. 70 (10), 1454-1459 (2014).</li>
<li>Qin, L., Pan, L. -L., Liu, S. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+insight+into+reproductive+incompatibility+between+putative+cryptic+species+of+the+Bemisia+tabaci+whitefly+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Science%22%5BJournal%5D)">Further insight into reproductive incompatibility between putative cryptic species of the Bemisia tabaci whitefly complex.</a> Insect Science. 23 (2), 215-224 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu döllenme oranı veya B. tabacibirincil seks oranını yakalamak için ilk kuralıdır. Bu protokol bu değil daha onlar düzeltilinceye kadar yumurta oviposited beri 1 saat geçti sağlamak whitefly yumurta hızlı bir şekilde ele alınacağını öğrenmek araştırmacılar gerektirir mücadeledir. Ön deneyler sırasında 3 h ya da daha fazla postoviposition tespit edildi yumurta döllenme, syngamy meydana gelmiş ve Mitotik bölünmeler devam edildi olarak gözlemlemek için çok yaşlı idi. 1-3 h arasında pronuclei üzerinde biraz daha yu...

Seks ayırma çalışma veya göreli yatırım içinde erkek ve kadın çoluk çocuk, bir davranışsal ekoloji1,2,3temel taşıdır. Davranış adaptif modelleri sınama gücünü yanı sıra, seks ayırma stratejisi bir organizmanın bilerek onun nüfus dinamikleri modelleri iyileştirebilir. Birçok tür seks ayırma anneler tarafından kontrol edilir. Seks ayırma belirlemek için birincil seks oranı veya kadın oranı yumurta yükünün zaman belirlemek önemlidir. Yetişkin ortaya çıkması seks oranında seks ayırma ipuçları sağlayabilir rağmen diferansiyel gelişim mortalite erkek ve dişi gençler arasında yaygın olarak yetişkin seks oranı önemli ölçüde çarpık. Hymenoptera, karıncalar, arılar ve eşekarısı, içeren sipariş böceklerin bazı türleri içinde birincil seks oranı embriyolar genetik DNA görüntülemek için boyama sitogenetik deneyleri ile tespit edilmiştir. Hymenopterans haplodiploid olduğundan, yeni başlayan bir erkek yumurta haploit ve yeni başlayan kadın yumurta diploit ve hem erkek hem de dişi pronuclei (2n) içeren iken sadece kadın pronucleus (n), içerir. Aleyrodidae, true whiteflies bilinen böcek (Hemiptera) sap besleme Aile olmakla birlikte aynı zamanda haplodiploid, birincil seks oranı bu böcekler için kurulan bir tahlil olmamıştır. Bu belki de bu ailenin kaç kozmopolit ciddi zararlıları, çalışma ve cinsiyet oranları whiteflies4,5,6,7 rekabetçi etkileşimleri önemini yoğunluğu göz önüne alındığında şaşırtıcı olduğunu ,8,9,10 ve nüfus dinamikleri genellikle. Haplodiploid böcekler de seks belirlenmesi sistemleri, seçici döllenme ve çevre ile2farklı değişken seks oranları imkanı sağlayan tarafından seks oranları serbest. Burada topluca sweetpotato whitefly bilinen whiteflies türler kompleksinin birincil seks oranını belirlemek için bir teknik mevcut B. tabaci. Bu bir tür ismi birden fazla 28 tür dünya çapında11kapsar ve en zarar verici küresel invaziv zararlıları12,13bazılarını içerir. Bu tekniğin uygulanması seks ayırma şablonlarını B. tabaci ve diğer Aleyrodidae belirlemek için sıcaklık, ana bitki, endosimbiyotik bakteri veya bitki/whitefly gibi değişkenlerin daha titiz bir araştırma sağlayacak patojenler, whitefly birincil seks oranları ve whitefly nüfus dinamikleri etkileyebilir.
Biz herhangi bir karşılaştırılabilir yumurta boyama teknikleri B. tabaciiçin farkında değiller. Bir gecede fiksasyon adım atlar ve bu nedenle, içinde 3 h tamamlanmış olması gibi diğer böcek yumurta14 için kullanılan boyama yöntemleri ile karşılaştırıldığında uygun iletişim kuralıdır. Bir uygulama, bir endosimbiyotik bakteri, Rickettsia'nin sp. nr bir örnek olarak. bellii, laboratuvar hatlarımız B. tabaci Orta Doğu Asya küçük 1 (MEAM1)15,16kadın önyargı ile ilişkilidir. Bir B. tabaci MEAM1 laboratuvar satırda ("MAC1," Maricopa tarım Merkezi'nden toplanan), biz test olup olmadığını Rickettsia'nin-virüslü (R+) kadın döllemek bulaşmamış (R-) dişilerden daha çok yumurta.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x TBST</td><td>30 g Tris, 43.8 g NaCl, 5 mL Tween-20 ve 1.0 g NaN3 pH 7.5'ten yapılan ve PCR dereceli su ile 1 L'ye getirilen</td><td>herhangi bir</td><td></td> 5x solüsyon</tr><tr><td>Bleach</td><td>Clorox</td><td></td><td>Herhangi bir ev tipi çamaşır suyu, %0.83'e seyreltilebildiği sürece çalışacaktır. Sodyum hipoklorit</td></tr><tr><td>Şeffaf oje</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI Dilaktat</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc300415</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>%</td><td></td><td>70 EtOH'ye Seyreltilmiş</td></tr><tr>Herhangi Bir<td>Floresan mikroskop</td><td>Nikon</td><td></td><td>Nikon Eclipse 50i bu deneyde kullanıldı, ancak 340/380 nm uyarma filtreli ve en az 4-10x büyütmeli herhangi bir floresan mikroskop kullanılabilir</td></tr><tr><td>Buzlu asetik asit</td><td>Mallinckrodt</td><td>UN2789</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Vahşi</td><td></td><td>Bu deney için bir Vahşi M5A mikroskobu kullanıldı, ancak operatörün beyaz sinek yumurtalarını net bir şekilde görebileceği herhangi bir mikroskop kullanılabilir</td></tr><tr><td>Mikroskop slayt kapakları</td><td>Herhangi Bir</td><td></td><td>Yöntem 18 mm x 18 mm boyutlu slayt kapakları içindir. Daha büyük kayar kapaklar için daha fazla montaj ortamının eklenmesi gerekecektir.</td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minuten nadel pimi</td><td>BioQuip</td><td>1208SA</td><td>Minuten nadel pimleri, pipet uçlu problar olarak şekillendirme için isteğe bağlıdır</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>n-propyl-gallat</td><td>Sigma/Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>P3130/sc-250794</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td>Fisherbrand Tek Kullanımlık Borosilikat cam Pasteur pipetleri 5,75 inç. Operatör pipetleri uzatmak ve daraltmak isterse bir Bunsen brülörüne de ihtiyaç duyulabilir</td></tr>: <tr><td>PCR sınıfı su</td><td>Herhangi</td><td></td><td></td></tr> bir <tr><td>Pipet ucu</td><td>Herhangi</td><td></td> bir <td>Pipet ucu, minuten nadel pimli problar olarak şekillendirmek için isteğe bağlıdır</td></tr><tr><td>Küçük damlalıklı ampul</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td>Pasteur pipetine sığmalıdır</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sitogenetik teknikle bemisia tabaci yumurta döllenme oranı belirleme

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

Su emme whiteflies birkaç türün en zarar verici karasal zararlıları dünya çapında onlar yamamak ürün hasar ve onlar vektör bitki virüs nedeniyle bazılarıdır. Çok sayıda çalışma farklı ortamlarda bu türlerin biyolojinin rağmen bir anahtar yaşam öyküsü parametresi, çoluk çocuk seks oranları, az ilgi aldı, henüz nüfus dinamikleri tahmin için önemlidir. Bemisia tabaci birincil seks oranı (oviposition seks oranı) asla bildirilmiştir ama bu haplodiploid böcek yumurta döllenme oranı belirlenerek bulunabilir. Teknik çamaşır suyu, fiksasyon adımlar bir dizi ve genel DNA floresan leke, DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole, DNA'ya bağlanıcı floresan boya), kadın ve erkek pronuclei bağlamak için uygulanması ile yumurta dechorionation içerir. Burada, teknik ve endosimbiyotik bir bakteri olup olmadığını Rickettsia'nin sp. nr sınamak için kendi uygulamalarına örnek olarak mevcut. bellii, B. tabacibirincil seks oranı etkiledi. Bu yöntem, whiteflies nüfus çalışmaları veya seks ayırma ile bazı çevresel uyaranlara varsa belirlemede yardımcı.

Rickettsia'nin B. tabaci MEAM1 kadın fertilizasyon oranını etkiler olup olmadığını sınamak için biz Rickettsia'ninyetiştirilen-(R+) enfekte veya (R-) bulaşmamış B. tabaci börülce bitkilerde (Vigna unguiculata) üzerinde kafesleri 27 ° C, bağıl nem % 70 ve 16 h ışık/8 s karanlık photoperiod ayırın. R+ ve R- dördüncü INSTAR whiteflies dikkatle yapraklarından kaldırıldı ve 200 µL şerit tüplerde izole. Yet...

Biz ' 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI fertilizasyon oranını belirlemek için) ve haplodiploid invaziv haşere Bemisia tabacibirincil seks oranını kullanarak basit bir sitogenetik teknik mevcut.

Sitogenetik teknikle Bemisia tabaci yumurta döllenme oranı belirleme

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

Liz'in geliştirdiği protokol whitefly döllenme oranını belirlememizi sağlıyor. Bu tekniğiuygulamak, beyaz sineklerin davranış ve ekolojisini anlamamızı sağlayacaktır. Whiteflies haplodiploid, bu nedenle döllenme oranı oviposition seks oranına eşittir.Bu protokol, bilgimize göre, beyaz sinekler için açıklanan ilk protokoldür ve üç saat içinde tamamlanabilir. Başlamak için, eklemek ve yetişkin whiteflies kaldırmak için Petri çanak kapağında gizli bir delik yapmak. Bir nem odası ayarlayın ve ince bir sonda yapmak için erimiş pipet ucu içine rahat bir çalışma açısında ince bir iğne takarak bir sonda moda.İsteğe bağlı olarak, whitefly yumurta daha kolay kullanımı için ısı ile elongate cam pipet ipuçları. Sonra, dişi beyaz sinekler temiz bir yaprak üzerinde oviposit izin, bir Petri kabında agar sığacak şekilde kesilmiş. Whitefly oviposition sırasında, sabun ve su ile bir mikroskop slayt temizleyin.İyi kurulayın ve sıvılar daha kolay görülebilir damla ve yumurta oluşturmak için izin vermek için bir ucu üzerinde parafin film bir parça germek. Yumurta dechorionate için, yetişkin kaldırma ve yumurta toplama hemen önce parafin film% 83 sodyum hipoklorit çamaşır suyu çözeltisi damla eklemek için bir cam Pasteur pipet kullanın. Çamaşır suyu ve buzul asetik asit her ikisi de aşındırıcı.Onlar bir başlık veya iyi havalandırılan alanda eldiven ile ele alınmalıdır. DAPI de bir tahriş edici ve eldiven ile ele alınmalıdır. Daha sonra, yaprak yetişkin beyaz sinekler çıkarın ve bir mikroskop altında yaprak yerleştirin.Pedicel yaprak kaldırılır kadar dikkatle tabanından her yumurta kaldırın. Bu protokolü gerçekleştirmeden önce birçok yumurta üzerinde pratik yapın. Yumurtaların tabanından yavaşça kaldırın ve yumurta pedisel'in yapraktan çıkarıldığını görebildiğinizde tamamen yapraktan kaldırın.Çamaşır suyu her damla için 2-3 yumurta aktarın ve 10 dakika bekletin. Yumurtaları onarmak için, çamaşır suyunu atmak için cam bir pipet kullanın. Sonra, buzul asetik asit damlaları ekleyin ve üç dakika bekleyin.Sonra, buzul asetik asit kaldırmak ve Clarke çözeltisi damla ekleyin. Daha sonra, çözeltinin çoğu buharlaşana kadar 10 dakika bekleyin. % 70 etanol damla ekleyin ve 10 dakika tekrar bekleyin.Yumurtaleke için, ilk herhangi bir artık etanol çıkarın. Sonra, pH'ı yediye yakın almak için yumurtalara 1xPBS damlaları ekleyin. Kurumasını önlemek için mikroskop kaydırasını nem odasına koyun.30 dakika sonra, 1xPBS çıkarın ve mililitre DAPI başına 1 mikrogram damla ekleyin. Mikroskop kaydırasını karanlık bir nem odasına koyun ve en az 15 dakika bekleyin. Yumurtayıkamak için önce DAPI çözeltisini çıkarın.Sonra yumurta 1xTBST damla ekleyin. Beş dakika sonra, 1xTBST kaldırın. Toplam üç yıkama için bu yıkamayı iki kez daha tekrarlayın.Son yıkamadan sonra parafilmdeki tüm yumurtaları mikroskop kaydırağının temiz bir kısmına dikkatlice pipetleyin. Fazla TBST'yi çıkarın ve 20 mikrolitre montaj ortamı ekleyin. Son olarak, yumurta üstüne temiz bir kapak slayt yerleştirin, uzun süreli depolama için açık oje ile kapak slayt mühür, ve floresan mikroskop kullanarak görüntüleme devam.DAPI nükleer boyama takip yumurta dechorionation bir floresan mikroskop ile gözlendiğinde döllenme ve embriyo seks atama izin verdi. Dişi pronükleus hem döllenmiş dişi yumurtanın hem de döllenmemiş erkek yumurtanın merkezine yakındır ve sperm sadece dişi yumurtanın tepeye yakın parlak bir çizgi olarak görülebilir. Bu tekniğin bir uygulama bakteriyel endosymbionts beyaz sineklerin birincil cinsiyet oranlarını etkileyip etkilemediğini belirlemektir.Örneğin, Rickettsia enfekte ve enfekte olmamış B.tabici beyaz sinekler tarafından yatırılamış yumurtaların birincil cinsiyet oranları iki tedavide cinsiyet oranı arasında anlamlı bir fark göstermedi. Yetişkinliğe yetiştirilen yumurtalara gelince, Rickettsia'da enfekte olmuş ve enfekte olmamış yetişkinler için benzer sonuçlar görüldü, hiçbir kanıt sunmadı, en azından bu çalışmada, Rickettsia'ya bulaşmış dişiler tarafından daha fazla döllenme oranları için. Bu protokolü kullanarak, bir interspesifik sperm yumurta döllemek olup olmadığını belirleyebilirsiniz.Döllenme gözlenmezise, bir geri ve sperm kadın spermatheca bakarak emzirme sırasında transfer olup olmadığını görmek için bakabilir. Döllenme gerçekleşirse, bir melez yavru gelişiminin canlılığını belirlemek için döllenme oranı ile yetişkinlerin cinsiyet oranı karşılaştırabilirsiniz.

determining-egg-fertilization-rate-bemisia-tabaci-using-cytogenetic

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; Drosophila</em

Burada, beyaz sinek Bemisia tabaci'den endosimiviyonları diseksiyon ve filtrasyon yoluyla izole etmek için bir protokol sunuyoruz. Büyütmeden sonra DNA örnekleri, endosimbiyonlar ile beyaz sinek arasındaki karşılıklı etkileşimin izlenmesi ve izlenmesi için uygundur.

Beyaz sinekten Endosimbonların Çıkarılması İçin Yöntemler<em&gt; Bemisia tabaci</em

Yaşam tabloları miktar kaynaklarının ve mortalite oranları böcek nüfus izin ve anlama, tahmin ve agroecosystems nüfus dinamikleri işleme katkıda bulunur. İletken ve kohort dayalı yaşam tabloları sesil olgunlaşmamış yaşam evreleri ile bir böcek için alanı analiz yöntemleri sunulmaktadır.

Metodoloji geliştirme yaşam tabloları alanını kullanarak Whitefly, Bemisia tabaci, pamuk gibi bir Model sistemi içinde sesil böcekler için için

Bu kağıt için döngü-aracılı izotermal amplifikasyon (lamba) teknolojisini temel alan Bemisia tabaci hızlı kimlik tahlil için protokol bildirir. En az laboratuvar eğitim gerektirir ve bu nedenle, Tesis içi giriş bitki ithalat liman ve Havaalanı gibi noktalarda uygulanabilir iletişim kuralı.

Bir döngü-aracılı izotermal amplifikasyon (lamba) tahlil hızlı teşhis edilmesi için kullanılan Bemisia tabaci

Bu protokol için ant Vollenhovia emeryiiçin akraba evliliği haçlar iletken ve bu haçlar başarısını değerlendiren yöntemler açıklanmıştır. Bu protokoller seks belirlenmesi sistemlerinde Hymenoptera genetik temeli anlama amaçlayan deneyler için önemlidir.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Açıklanan, yumurtaları saymak ve 24 kuyu doku kültürü plakası kullanarak bireysel sivrisineklerin kuluçka oranlarını belirlemek için zaman ve yerden tasarruf sağlayan bir yöntemdir, bu da doğurganlık ve doğurganlık testlerinin ölçeğini ve hızını önemli ölçüde artırabilir.

24 Kuyu Doku Kültürü Plakası (EAgaL Plakaları) kullanılarak Aedes aegypti için Geliştirilmiş Doğurganlık ve Doğurganlık Tahlilleri

Burada, erkek Aedes aegypti'nin çiftleşme rekabet gücünün bir işaretleyici olarak floresan boyası kullanılarak incelenmesi için bir protokol sunuyoruz. Dişi sivrisinekler çiftleşme için hem işaretli hem de işaretlenmemiş erkeklere maruz kalır. Çiftleşme sonrası spermathecae'leri çiftleşme partnerlerini belirlemek için floresan mikroskop altında incelenir.

Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinde Çiftleşme Rekabet Gücünü Incelemek için Floresan Boyası Rhodamine B'yi Kullanmak

Mevcut protokol, tortricid haşere böceklerinin laboratuvarlarda yetiştirilme yöntemini açıklamaktadır. Böceklerin cinsiyetini ayırt etme ve yüksek verimli dizileme için nükleik asitleri çıkarma prosedürleri, iki tortricid zararlısı kullanılarak oluşturulmuştur.

Tortricidae Zararlı Böceklerinde Kütle Yetiştirme ve Moleküler Çalışmalar

Burada, C. elegans model organizmasını kullanarak embriyonik canlılığı ve üretilen toplam embriyo sayısını (kuluçka) belirlemek için genel bir yöntem sunuyoruz.

Caenorhabditis elegans'ta embriyonik canlılık ve yavru büyüklüğünün ölçülmesi

Mevcut protokol, Aedes aegypti sivrisineklerinde doğurganlık, kanat boyutu, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrü dahil olmak üzere ortak yaşam parametresi verilerinin nasıl ölçüleceğini açıklamaktadır. Bu ölçümler, transgenik sivrisineklerin uygunluğunu değerlendirmek için kullanılabilir.

Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi

Bu protokol, C. elegans'ta RNAi kaynaklı susturma ve ilişkili kromatin modifikasyonlarının epigenetik kalıtımını incelemek için bir RNA girişimini ve ChIP testini açıklar.

Nesiller Arası Epigenetik Kalıtımın Analizi C. elegans Floresan Raportör ve Kromatin İmmünopresipitasyon (ChIP) Kullanılarak

Öğrenin, sitogenetik teknikle Bemisia tabaci yumurta döllenme oranını DAPI boyama ile belirleme yöntemini. Bu protokol, beyaz sinek ekolojisi ve davranışları üzerine araştırmaları hızlandırır.

Sitogenetik teknikle Bemisia tabaci yumurta döllenme oranı belirleme

Daha fazla video keşfet