Name: Koalakda Kortizol Ölçümü (Phascolarctos cinereus) Kürk (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 s
Description: Öğrenin, koala kürkünden kortizol ekstraksiyonu için optimal çözücüyü belirleyerek kronik stres değerlendirmesi yapmayı. Bu hassas ve tekrarlanabilir yöntem, Phascolarctos cinereus için koruma stratejilerini geliştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Edward Narayan için Western Sydney Üniversitesi, Bilim ve Sağlık Okulu aracılığıyla start-up araştırma fonu ile desteklenmiştir. Yazarlar örnek işleme ile yardım için Jack Nakhoul teşekkür ederim.

Bu proje sıkı hayvan ve insan bakım yönergeleri altında gerçekleştirilmiştir. Hayvan etiği Western Sydney Üniversitesi (A12373) tarafından verildi. Buna ek olarak, bu araştırmayı güvenli bir şekilde üstlenmek üzere Western Sydney Üniversitesi tarafından bir laboratuvar risk değerlendirmesi ve biyogüvenlik ve radyasyon formu sunulmuş ve kabul edilmiştir (B12366).
NOT: Bu proje için koala kürk örnekleri Adelaide Koala ve Yaban Hayatı Hastanesi, 282 Anzak Karayolu, Plympton Güney Avustralya bulunan elde edilmiştir. Kürk, hastaneye kaldırılan ve ağır yaraları nedeniyle ötenazi yapılan bir koaladan alındı. Ölen koala, ölümden kısa bir süre sonra bir ceset torbasının içinde bir dondurucuda saklanmış. Ölen koala ceset torbasından alındıktan sonra, standart hayvan makası kullanılarak boyun ensesinden 1,2 g kürk tıraş edildi. Kürk cilde mümkün olduğunca yakın tıraş edildi, böylece cilt kesilmedi emin olmak için. Tıraş edildikten sonra, ölen koala ceset torbasına geri konuldu ve dondurucuya konuldu. Kürk daha sonra alüminyum folyodan yapılmış bir kese içine yerleştirildi ve -20 °C'nin altında saklandı. Geçiş sırasında kürk ortam sıcaklığında tutuldu ve laboratuvara vardıklarında kürk -80 °C'de saklandı.
1. Koala kürk kortizol çıkarma
<ol><li>Kürkü -80 °C'deki depodan çıkarın ve çözülme süresine izin verin.</li>
	<li>Kürkü laboratuvar analitik hassas dengesinde tartın.</li>
	<li>Kürkün 60 mg'ını önceden tartılmış ve 1,5 mL santrifüj tüpüne yerleştirin ve 18 tüp dolana kadar tekrarlayın. NOT: Bu doğrulama çalışması için 18 kürk alt örneği kullanılmıştır.</li>
	<li>Bir pipet kullanarak her tüpe %100 yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) sınıfı isopropanol 1 mL ekleyin.</li>
	<li>30 s için girdap örnekleri.</li>
	<li>Sıvı ve kürk ayrımıelde etmek için her numuneyi 0,5 mm mikro hassasiyetli elek kullanarak süzün.</li>
	<li>Sıvıyı bir atık kabına atın.</li>
	<li>Etiketli plastik tartım tekne içine her kürk örnek yerleştirin, sonra bir vakum desiccator içine yerleştirin, 3 gün boyunca kurumaya kürk bırakın.</li>
	<li>Tamamen kurutuldıktan sonra, her numuneyi 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin.</li>
	<li>Her numuneyi 3 krom çelik boncuklu (3,2 mm) bir boncuk değirmenine yerleştirin ve saniyede 30 sarsıntıda 2 dakika toz haline getirin.</li>
	<li>İlk ekstraksiyon tekniğinin 1,5 mL'si (%100 analitik sınıf etanol) kürk numunesini içeren 6 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne dönüştürülür.</li>
	<li>18 1,5 mL mikrosantrifüj tüpler imal edilene kadar %100 analitik sınıf metanol ve %100 analitik sınıf izopropanol için aynı şeyi yapın.</li>
	<li>Kapak her 1.5 mL mikrosantrifüj tüp ve oda sıcaklığında kuluçka (RT) sabit zonklayan bir shaker kullanarak 3 saat.</li>
	<li>0,5 mm mikro hassasiyetli elek kullanarak numuneleri çıkarın ve gerin.</li>
	<li>Kürkün uygun şekilde atılmasını sağlarken sıvıyı pipetle 1,5 mL mikrosantrifüj tüpe aktarın.</li>
	<li>Bir duman dolabı altında N2 buharı akışı altında tamamen kuru çözücü ekstresi.</li>
	<li>400 μL'lik test tamponu (ticari kortizol kitinde sağlanan kompozisyon; bkz. MalzemelerTablosu) ve 100 μL%100 analitik sınıf etanol kullanarak kurutulmuş numune ekstresini yeniden oluşturun. NOT: Örnek ekstreler -80'de saklanabilir.</li>
</ol>2. İç kontroller
<ol><li>Kontrolleri yapmak için, yüksek hormon düzeyleri ile ayıklanmış örneklerin bir havuz yapmak. Bu havuzu yapmak için, strese maruz kalma bilinen hayvanlardan örnekler seçin. Örneğin, genellikle yüksek kortizol hormon düzeyleri6gösterecektir gibi çevresel travma kurtarıldı koalalar örnekleri seçin.<ol>
<li>Ayıklama havuzunu yapmak için, toplam 200 μL hacim elde edilene kadar her numuneden 20 μL (n = 10) özü alın. Ayıklama havuzu tahlil edilene kadar -80 C'de saklanabilir. Havuzu her tetkikteki düşük veya yüksek iç denetimler olarak çalıştırın (bkz. adım 2.2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tararmak için, sırasıyla %70 (C1) ve %30 (C2) ile bağlanan düşük ve yüksek kontroller için stok yapmak için havuzu kullanın. Kortizol standardına karşı ekstre için paralellik grafiğinden %30 ve %70 bağlamanoktaları için seyreltme faktörünü elde edin (Şekil 1). Numune havuzunun seyreltilmesi için test tamponu kullanın. Örneğin, 1:2 seyreltme için 60 μL havuz ekstresi ve 60 μL'lik bir araştırma arabelleği kullanın. NOT: Metanol özü için %30 bağlama noktası düzgün, %70 bağlama noktası ise Şekil1'e göre yaklaşık 1:2 idi. Böylece, bu iç kontroller için seyreltme faktörü sağlanan (C1 ve C2 sırasıyla) tsay içinde çalışan için.</li>
</ol>3. Koala kürközlerinde kortizol analizi
<ol><li>Ticari bir kortizolkiti (Malzeme Tablosu) kullanın ve numuneler, kontroller, kortizol standartları, spesifik olmayan bağlayıcı kuyular ve tedarikçinin talimatlarına uygun maksimum bağlayıcı kuyular dahil olmak üzere 96 kuyu plakasını kurun. Plaka haritasındaki numunelerin, denetimlerin ve standartların konumlarını listelemek için kit kitapçıkta sağlanan plaka düzeni sayfasını kullanın. NOT: Sonuçların doğruluğuna izin vermek için tüm örneklerin, denetimlerin ve standartların yinelenen olarak çalıştırılması önerilir.</li>
	<li>Örnekler hazırlayın. % 100 metanol çıkarılan koala kürk elde etmek için kürk hormonu ekstraksiyon (bölüm 1) izleyin.</li>
	<li>Reaktifleri hazırlayın. (1) istinat arabelleği, (2) yıkama Tamponu ve (3) standartları (kortizol kitinde sağlanan kompozisyonlar, MalzemeTablosu) dahil olmak üzere reaktifleri hazırlamak için ticari kortizol kitinde açıklanan prosedürü izleyin.</li>
	<li>Kortizol kitinde verilen talimatlara göre, 50°L numune veya standarttan oluşan borular plakadaki kuyulara yerleştirin. Pipet 75 μL ve 50 μL'lik test tamponu spesifik olmayan bağlayıcı (NSB) kuyularına ve maksimum bağlama (B0 veya sıfır standart) kuyularına sırasıyla.</li>
	<li>Tekrarlayıcı bir pipet kullanarak her kuyuya 25 μL kortizol konjuge ekleyin. Daha sonra NSB kuyuları hariç, kortizol antikorlarının 25°L'lik kısmını her kuyuya yerleştirin. Reaktiflerin iyice karıştırıldığından emin olmak için plakanın kenarlarına hafifçe dokunun.</li>
	<li>Plakayı plaka lı ucubenle kapatın ve oda sıcaklığında 1 saat (yavaş hızda) orbital shaker kullanarak sallayın.</li>
	<li>Plaka lı iniliği çıkarın ve her kuyuyu 300 μL yıkama tamponu ile 4 kez yıkayarak kuyu plakasını aspire edin.</li>
	<li>Temiz emici havlular üzerinde plaka dokunarak plaka kuru.</li>
	<li>Pipet 100 μL tetrametilbenzadin (TMB) substrat (kortizol kitinde sağlanan kompozisyon, MalzemeTablosu) her kuyuya.</li>
	<li>Plakalı inisini kuyu plakası üzerine yerleştirin ve 30 dakika boyunca RT'de kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Pipet 50 μL stop çözeltisi her kuyuiçin.</li>
	<li>450 nm okuma yeteneğine sahip bir plaka okuyucu kuyu plaka yerleştirin.</li>
	<li>Son hormon konsantrasyonu hesaplamak için, pg/mL hormon konsantrasyonunun son ekstre hacmi (0,5 mL) ile çarpılması ve kürk numunesi kütlesine (60 mg) bölünmesi ile numunenin ng/mg'ındaki son kürk kortizol konsantrasyonu elde edin.</li>
</ol>

<ol><li>Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecosystem+services+and+Australian+agricultural+enterprises%5BTitle%5D)+AND+%22Ecological+Economics%22%5BJournal%5D)">Ecosystem services and Australian agricultural enterprises.</a> Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).</li>
<li>Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthropogenic+disturbances+jeopardize+biodiversity+conservation+within+tropical+rainforest+reserves%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anthropogenic disturbances jeopardize biodiversity conservation within tropical rainforest reserves.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), 5323-5328 (2016).</li>
<li>Aukema, J. E., Pricope, N. G., Husak, G. J., Lopez-Carr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodiversity+Areas+under+Threat%3A+Overlap+of+Climate+Change+and+Population+Pressures+on+the+World%27s+Biodiversity+Priorities%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Biodiversity Areas under Threat: Overlap of Climate Change and Population Pressures on the World's Biodiversity Priorities.</a> PLoS ONE. 12 (1), 0170615(2017).</li>
<li>MacDougall, A. S., McCann, K. S., Gellner, G., Turkington, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+loss+with+persistent+human+disturbance+increases+vulnerability+to+ecosystem+collapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Diversity loss with persistent human disturbance increases vulnerability to ecosystem collapse.</a> Nature. 494 (7435), 86-89 (2013).</li>
<li>Hrdina, F., Gordon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Koala+and+Possum+Trade+in+Queensland%2C+1906-1936%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Zoologist%22%5BJournal%5D)">The Koala and Possum Trade in Queensland, 1906-1936.</a> Australian Zoologist. 32 (4), 543-585 (2004).</li>
<li>Narayan, E. J., Williams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+dynamics+of+physiological+impacts+of+environmental+stressors+on+Australian+marsupials%2C+focus+on+the+koala+%28Phascolarctos+cinereus%29%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Zoology%22%5BJournal%5D)">Understanding the dynamics of physiological impacts of environmental stressors on Australian marsupials, focus on the koala (Phascolarctos cinereus).</a> BMC Zoology. 1 (1), (2016).</li>
<li>Woinarski, J., Burbidge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phascolarctos+cinereus%5BTitle%5D)+AND+%22The+IUCN+Red+List+of+Threatened+Species+2016%22%5BJournal%5D)">Phascolarctos cinereus.</a> The IUCN Red List of Threatened Species 2016. , (2016).</li>
<li>Gonzalez-Astudillo, V., Allavena, R., McKinnon, A., Larkin, R., Henning, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decline+causes+of+Koalas+in+South+East+Queensland%2C+Australia%3A+a+17-year+retrospective+study+of+mortality+and+morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Decline causes of Koalas in South East Queensland, Australia: a 17-year retrospective study of mortality and morbidity.</a> Scientific Reports. 7, 42587(2017).</li>
<li>Hing, S., Narayan, E. J., Thompson, R. C. A., Godfrey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+physiological+stress+and+wildlife+disease%3A+consequences+for+health+and+conservation%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">The relationship between physiological stress and wildlife disease: consequences for health and conservation.</a> Wildlife Research. 43 (1), 51-60 (2016).</li>
<li>Whirledge, S., Cidlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoids%2C+stree%2C+and+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22Minerva+Endocrinologica%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoids, stree, and fertility.</a> Minerva Endocrinologica. 35 (2), 109(2010).</li>
<li>Romero, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+stress+in+ecology%3A+lessons+from+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">Physiological stress in ecology: lessons from biomedical research.</a> Trends in Ecology & Evolution. 19 (5), 249-255 (2004).</li>
<li>McEwen, B. S., Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+in+a+name%3F+Integrating+homeostasis%2C+allostasis+and+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">What is in a name? Integrating homeostasis, allostasis and stress.</a> Hormones and Behavior. 57 (2), 105-111 (2010).</li>
<li>Wingfield, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparative+biology+of+environmental+stress%3A+behavioural+endocrinology+and+in+ability+to+cope+with+novel%2C+changing+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">The comparative biology of environmental stress: behavioural endocrinology and in ability to cope with novel, changing environments.</a> Animal Behaviour. 85 (5), 1127-1133 (2013).</li>
<li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+disorders+of+the+stress+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Stress and disorders of the stress system.</a> Nature Reviews Endocrinology. 5 (1), 374-381 (2009).</li>
<li>Narayan, E. J., Webster, K., Nicolson, V., Mucci, A., Hero, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+physiological+stress+in+an+iconic+Australian+marsupial%3A+the+Koala+%28Phascolarctos+cinereus%29%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of physiological stress in an iconic Australian marsupial: the Koala (Phascolarctos cinereus).</a> General and Comparative Endocrinology. 187, 39-47 (2013).</li>
<li>Mastromonaco, G. F., Gunn, K., McCurdy-Adams, H., Edwards, D. B., Schulte-Hostedde, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+use+of+hair+cortisol+as+a+measure+of+chronic+stress+in+eastern+chipmunks+%28Tamias+striatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Validation and use of hair cortisol as a measure of chronic stress in eastern chipmunks (Tamias striatus).</a> Conservation Physiology. 2 (1), 055(2014).</li>
<li>Ashley, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticosteroid+concentrations+in+feces+and+hair+of+captive+caribou+and+reindeer+following+adrenocorticotropic+hormone+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Glucocorticosteroid concentrations in feces and hair of captive caribou and reindeer following adrenocorticotropic hormone challenge.</a> General and Comparative Endocrinology. 172 (3), 382-391 (2011).</li>
<li>Macbeth, B. J., Cattet, M. R. L., Stenhouse, G. B., Gibeau, M. L., Janz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+cortisol+concentration+as+a+noninvasive+measure+of+long-term+stress+in+free-ranging+grizzly+bears+%28Ursus+arctos%29%3A+considerations+with+implications+for+other+wildlife%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Hair cortisol concentration as a noninvasive measure of long-term stress in free-ranging grizzly bears (Ursus arctos): considerations with implications for other wildlife.</a> Canadian Journal of Zoology. 88 (10), 935-949 (2010).</li>
<li>Dettmer, A. M., Novak, M. A., Suomi, S. J., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+and+behavioral+adaptation+to+relocation+stress+in+differentially+reared+rhesus+monkeys%3A+hair+cortisol+as+a+biomarker+for+anxiety-related+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Physiological and behavioral adaptation to relocation stress in differentially reared rhesus monkeys: hair cortisol as a biomarker for anxiety-related responses.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (2), 191-199 (2012).</li>
<li>Di Francesco, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qiviut+cortisol+in+muskoxen+as+a+potential+tool+for+informing+conservation+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Qiviut cortisol in muskoxen as a potential tool for informing conservation strategies.</a> Conservation Physiology. 5 (1), 052(2017).</li>
<li>Cattet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+long-term+stress+in+brown+bears+with+the+hair+cortisol+concentration%3A+a+biomarker+that+may+be+confounded+by+rapid+changes+in+response+to+capture+and+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Quantifying long-term stress in brown bears with the hair cortisol concentration: a biomarker that may be confounded by rapid changes in response to capture and handling.</a> Conservation Physiology. 2 (1), 026(2014).</li>
<li>Meyer, J., Novak, M., Hamel, A., Rosenberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+analysis+of+cortisol+from+human+and+monkey+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Extraction and analysis of cortisol from human and monkey hair.</a> Journal of Visualized Experiments. (83), e50882(2014).</li>
<li>Carlitz, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Hair+Cortisol+Concentrations+to+Assess+the+Effect+of+Anthropogenic+Impacts+on+Wild+Chimpanzees+%28Pan+troglodytes%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Measuring Hair Cortisol Concentrations to Assess the Effect of Anthropogenic Impacts on Wild Chimpanzees (Pan troglodytes).</a> PLoS ONE. 11 (4), 0151870(2016).</li>
<li>Aderjan, R., Rauh, W., Vecsei, P., Lorenz, U., Ruttgers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cortisol%2C+tetrahydrocortisol%2C+tetrahydrocortisone%2C+corticosterone%2C+and+aldosterone+in+human+amniotic+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Steroid+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Determination of cortisol, tetrahydrocortisol, tetrahydrocortisone, corticosterone, and aldosterone in human amniotic fluid.</a> Journal of Steroid Biochemistry. 8 (1), 525-528 (1977).</li>
<li>Nejad, J. G., Ghaseminezhad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Cortisol+Study%3B+Facial+Hair+and+Nails%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Steroids+%26+Hormonal+Science%22%5BJournal%5D)">A Cortisol Study; Facial Hair and Nails.</a> Journal of Steroids & Hormonal Science. 7 (2), 177(2016).</li>
<li>Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M., Lepschy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+extraction%3A+get+the+best+out+of+faecal+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Medicine+Australia%22%5BJournal%5D)">Steroid extraction: get the best out of faecal samples.</a> Veterinary Medicine Australia. 7 (2), 1-5 (2013).</li>
<li>Davenport, M. D., Tiefenbacher, S., Lutz, C. K., Novak, M. A., Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+endogenous+cortisol+concentrations+in+the+hair+of+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22General+and+Comparative+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Analysis of endogenous cortisol concentrations in the hair of rhesus macaques.</a> General and Comparative Endocrinology. 147 (3), 255-261 (2006).</li>
<li>Kanse, K. S., Joshi, Y. S., Kumbharkhane, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+interaction+study+of+ethanol+in+non-polar+solute+using+hydrogen-bonded+model%5BTitle%5D)+AND+%22Physics+and+Chemistry+of+Liquids%22%5BJournal%5D)">Molecular interaction study of ethanol in non-polar solute using hydrogen-bonded model.</a> Physics and Chemistry of Liquids. 52 (6), 710-716 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Memeli kürkkortizol tespit etmek için teknikler bir dizi kullanmak çalışmalar vardır. Bu çalışma, mevcut antropojenik strese maruz kalan yabani bir koaladan toplanan kürkkortizol tespiti için sonuçlar sunmaktadır. Bu çığır açan çalışmada koala kürk kronik stres bir ölçüsü olan kortizol ayıklama en iyi üç yaygın olarak kullanılan çözücüler hangi test etmek için kürk kullanılır. Sonuçlar% 100 metanol memeli kürk bu tür kortizol ekstraksiyon için önerilen çözücü olduğunu gösterdi.
Etanol, metanol...

Avustralya ekosistemleri diğer birçok dinamik etkileşimlerarasındagıda ve lif dahil olmak üzere hizmetlerin sağlanması yoluyla insan hayatını sürdürmek 1. İronik olarak, biyolojik çeşitlilik değişimi ile ekosistem bozulmasının baskınitici gücü olarak çalışan insan aktivitesidir 2. Habitat parçalanma, arazi küçük yamalar halinde büyük sürekli habitatlar bölme süreci olarak bilinen, birbirinden izole, Avustralya ekosistemleri tehdit eden büyük antropojenik biyoçeşitlilik değişimi2. Habitat parçalanması herhangi bir alandaki türlerin bileşiminin yapısını ve çeşitliliğini değiştirerek, bu türlerin canlı popülasyonları korumak için gerekli olan habitat alanını azaltır2. Bunun sonucu gıda, yakıt, lif vesu3 dahil olmak üzere kaynaklar için türler arasındaki rekabet artmaktadır. Biyolojik çeşitlilik değişimi ile Avustralya ekosistemlerinin imha birçok Avustralya yerlitürler üzerinde felaket sonuçlara sahip 1.
Avustralya'nın en ikonik keseli türler, koala(Phascolarctos cinereus),Avustralya ekosistemleri hayatta kalmak için sağlıklı kalan bağlıdır4. Avrupa Yerleşimi'nin başlatılması koalaavustralya popülasyonlarında hızlı bir düşüşe neden oldu, onlar büyük bir ihracat ticaretikar peşinde kendi pelts için katledildi 5. Bu uygulama 1980'lerde yasaklandı ve koala popülasyonları daha sonra5stabilize başardık. Ancak, insan nüfusunun üstel büyüme bu türün yaşam alanlarının büyük bir kısmı için rekabetsonuçlandı ve hayatta kalmaları yine tehdit altında 6. Uluslararası Doğayı Koruma Birliği'ne (IUCN) göre, Avustralya koalalarının tüm popülasyonları azalan nüfuseğilimi7 ile yok olmaya karşı savunmasız olarak listelenmiştir. Bu liste, ilgili nüfus parametreleri etrafındaki belirsizliğe atfedilirve bu tür için popülasyon eğilimlerinde belirgin bir değişim 7. En ikonik ve endemik hayvanlar olan koalalar, turizm yoluyla Avustralya ekonomisine büyük ölçüde fayda sağlamaktadır (NSW Çevre ve Miras Ofisi 2018). Yapılan tahminlere göre koala turizmi yaklaşık 9.000 kişiye iş sağladı ve ekonomiye 1.1 ila 2.5 milyar dolar arasında katkıda bulundu (NSW Çevre ve Miras Ofisi 2018). Herhangi bir türün kaldırılması felaket olma potansiyeline sahiptir, ve yerli Avustralya yaban hayatı sürekli düşüş görülebilir6. Ayrıca, Avustralya koalalarının popülasyonları6oranında azalmaya devam ederse Avustralya ekonomisi nin sonuçları hissedilecektir.
Habitat parçalanmasına yanıt olarak ölüm ve hastalık prevalansının kronik stresin sonucu olduğu ileri sürülmaktadır8. Zaten, yirmi dört keseli türler avustralya'da habitat parçalanma nedeniyle soyu tükenmiş ilan edilmiştir, koalalar benzer bir eğilim aşağıdaki8. Habitat parçalanma ve biyolojik sistemlerin karmaşıklığı sinerjik ama stres yanıtı analizi ile çözülebilir6. Genellikle, bir hayvan doğal ortamda herhangi bir rahatsızlık nörohormonal olayların karmaşık bir çağlayan aktive, bir 'mücadele veya uçuş' yanıtı olarak bilinen9,10. Strese verilen bu yanıt, hipotalamik-hipofiz-adrenal (HPA) ekseninin aktive edildiği beyinde başlayan bir süreçtir11. Hipotalamus denilen beynin bir bileşeni kortikotrofin salgılayan hormon bültenleri (CRH), daha sonra adrenokortikotrofik hormon serbest bırakmak için ön hipofiz sinyalleri (ACTH)11. Bu da adrenal medulla gelen glukokortikoid salgısını uyarır. Vücut glikoz depolarını glikojenden uzaklaştıran ve glikozu depolanan glikojen11'denharekete geçirerek kan yoluyla glukokortikoidler dolaşır. Nörohormonal olayların Bu çağlayan öngörülemeyen uyaranlar ile başa çıkmak için hayvan tarafından kullanılan tepkidir11. Ancak, glukokortikoidler serbest bırakılır ve uzun bir süre için yüksek kalır, hayvan kronik stres yaşıyor olarak kabul edilir12,13. Bu süreç, devam eden glukokortikoid üretimi için gerekli olduğu gibi, enerjiyi diğer onbaşı bedensel işlevlerden uzaklaştırmayı içerir13. Sonuç olarak, kronik stres büyüme, üreme ve bağışıklık yasaklayabilir, tüm önemli fitness özellikleri hayatta kalmak için gerekli olan14.
Bir hayvanın glukokortikoid üretiminin ölçülmesi, hayvanın fizyolojik stres yaşanıp yaşamadığını belirlemek için kullanılan yaygın bir göstergedir15. Bunu yapmak için, glukokortikoidler kan plazması, serum, tükürük, idrar veya dışkı16ölçülebilir. Ancak, kanıtlar saç kronik stres çok daha etkili bir göstergesi olduğunu göstermektedir, yukarıda belirtilen aksine16. Saç büyüme aşamasında kan yoluyla gelen hormonlar dahil düşünülmektedir olmasıdır; nispeten kararlıdır; ve saçta tespit edilen herhangi bir kortizol, saç büyüme döneminde yaşanan fizyolojikstresi yansıtır, bu da haftalar ile 16 ay arasında olabilir. Ayrıca, kortizol herhangi bir koleksiyon yakalama ve 16 işleme ile ilişkilistresi en aza indirmek için non-invaziv olmalıdır. Ancak, bu olay sırasında yaşanan herhangi bir stres saç glukokortikoid düzeylerini etkilemez16. Hayvanların bir dizi uzun vadeli stres ölçmek için saç kullanma yeterliliğini keşfetmek birçok çalışma olmuştur, ve ren geyiği üzerinde çalışmalar dahil, boz ayılar, rhesus maymunlar, muskoxen, ve kahverengi ayılar17,18, 19.09.20 , 20.000 , 21. Saç kortizol genellikle saç yüzeyinde biriken ter ve sebum türetilmiş kortizol sağlamak için ilk örnek yıkanarak ayıklanır co-kortizol ile ayıklanırve daha sonra bir boncuk-beater 22 örnek pulverizing değildir. Yıkandıktan sonra, numunenin tam buharlaşma sağlamak için kurutulması gerekir22. Son olarak, bir çözücü kullanılarak, numune ayıklanabilir ve kortizol 22tsay kolaylaştırmak için yeniden oluşturulabilir. Kürk kortizol ayıklamak için kullanılan en yaygın çözücü metanol21,23; ancak, kortizol çıkarma tekniklerinde etanol ve izopropanol kullanan bazı çalışmalar vardır. Örneğin, etanol kullanılan bir çalışma insan amniyotik sıvı24kortizol ayıklamak için başarılı oldu. Ayrıca, kullanılan izopropanol kullanılan bir çalışma insan saç ve tırnak25,26kortizol ayıklamak için başarılı oldu. Bu nedenle, bu çalışmada koala kürkü örneklerinden kortizol çıkarılması için en başarılı olduğunu belirlemek için her üç çözücüler (metanol, etanol ve izopropanol) test edilmiştir.
Bu çalışmanın temel amacı, koala kürkünden kortizolün non-invaziv bir ölçütü olarak kullanılmak üzere optimal hormon ekstraksiyon tekniğini doğrulamak için mevcut teknikleri kullanmaktır. Bu üç ekstraksiyon çözücüler test edilerek elde edildi (metanol, etanol, ve isopropanol). Biz metanol koala kürk kortizol ayıklamak için kullanılan optimal çözücü olacağını varsayılmış çünkü Arbor tsay kortizol kitleri tarafından ekstraksiyon önerilen çözücü27.

<table><tbody><tr><td>Santrifüj Tüpleri</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>1.5 mL</td></tr><tr><td>Krom Çelik Boncuk</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>3.2 mm x 3</td></tr><tr><td>Kortizol Kiti</td><td>Arbor Testleri</td><td>K003-H1W</td><td>Michigan ABD'de üretilmiştir</td></tr><tr><td>DetectX Kortizol Enzim İmmünoassay Kiti</td><td>Arbor Testleri</td><td>K003-H5</td><td>Koala kürkünde kortizol testi için ilk kez kullanılır</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>HPLC Sınıfı</td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>HPLC Sınıfı</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>n/a</td><td>n/a HPLC</td><td>Sınıfı Mikro</td></tr><tr><td>Pipet</td><td>n/a</td><td>n/</td><td>a n/a</td></tr><tr><td>Mikro Hassas Elek</td><td>n/a</td><td>n/a 0,5</td><td>mm</td></tr><tr><td>Mikroplaka Okuyucu</td><td>Bio Radi</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Mikroplaka Yıkayıcı</td><td>Bio Radi</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Orbital Shaker</td><td>Bio Line</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Plastik Tartı Teknesi</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Plaka Kapatıcı</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a Hassas</td></tr><tr>Terazi <td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>Eppendorf</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr></tbody></table>

koalak'da kortizol Ölçümü (phascolarctos cinereus) kürk

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Örnek türleri arasında hayvanlarda stresi ölçmek için kullanılan hormon ekstraksiyon optimal yöntemler her zaman aynı değildir. Avustralya'nın ikonik keseli türleri, koala(Phascolarctos cinereus),antropojenik kaynaklı stres ve yabani popülasyonlarda kronik stres indeğerlendirilmesi uzun süreli maruz kalma karşı karşıya acilen garanti edilir. Kronik stresi ölçmenin en etkili yollarından biri, fizyolojik ve davranışsal tepkileri desteklediği için saç veya kürkteki glukokortikoid hormon kortizolünün analizidir. Bu laboratuvar doğrulama çalışması, koala kürkünde kortizolün non-invaziv bir ölçütü olarak kullanılacak optimal hormon ekstraksiyon yöntemini doğrulamak için mevcut teknikleri test etmeyi amaçlamaktadır. Stres hormonlarını ölçmek için non-invaziv teknikler kullanmanın, ideal pratik ve etik bakış açıları nedeniyle geleneksel, invaziv tekniklere tercih olduğu kabul edilmektedir. Ayrıca koalalardan kürk elde etmek kan örneklerinden elde etmekten nispeten daha kolaydır. Bu çalışmada, optimal kortizol ekstraksiyon yöntemini doğrulamak amacıyla bir dizi hormon çıkarma tekniğini çalıştırmak için Adelaide Koala ve Vahşi Yaşam Hastanesi'nden alınan koala kürkü örnekleri kullanılmıştır. Sonuçlar, %100 metanolün paralellik sonuçlarına göre %100 etanol veya %100 izopropanol ile karşılaştırıldığında en uygun çözücü ekstraksiyonu sağladığını göstermiştir. Sonuç olarak, koala kürkkortizol ekstraksiyon bu yöntem koalalarda kronik stres çalışma için kullanılabilecek güvenilir bir non-invaziv bir titret sağladı.

İlgi hormon metabolitlerinin asa saptanması paralellik kullanılarak belirlenir. Paralellik eğrisi kullanılarak, P bağlama noktası standart eğrideki örnek seyreltmefaktörünü de belirler (Şekil 1). Paralellik grafiğinde gösterildiğigibi (Şekil 1), 0 etanol ve 0 İzopropanol ekstreleri kortizol standardına paralel yer değiştirme sağlamamıştır. Ancak, % 100 metanol ekstresi kortizol standardına paralel deplasman sağladı. Kurutulmuş ekstreler, istibak tamponunda seyreltme yoluyla düzgün çalışt...

Koala kürkünden kortizol ölçümü için en uygun ekstraksiyon çözücüsünü belirlemek için bir protokol sayılacağız. Bu protokolde kullanılan çözücüler metanol, etanol ve isopropanol'dür. Optimal bir ekstraksiyon çözücü belirlenmesi koalalar üzerinde kronik stresin etkisini belirlemek için güvenilir ölçüm kürk yardımcı olacaktır.

Koalak'da Kortizol Ölçümü (Phascolarctos cinereus) Kürk

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Bu koala kürk gelen glukokortikoid hormonu, kortizol, değerlendirilmesi için yeni bir yöntemdir. Koalalarda kronik stresin değerlendirilmesi için yeni bir biyomarker sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, numune hazırlama ve hormon telbette arasında oldukça hızlı bir dönüş süresi ile son derece hassas ve tekrarlanabilir bir yöntem olmasıdır.Bu teknik koalalarda kronik stresin kantitatif değerlendirmesine olanak sağlar, bu da son derece yararlı bir klinik yönetim aracıdır. Bu prosedürde bana yardım dylan Fox, laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi. Bu işlem başlamak için eksi 80 santigrat derece de depolama kürk almak ve oda sıcaklığında çözülme izin.Daha sonra, bir laboratuvar analitik hassas denge üzerinde kürk tartın. Kürkün 60 miligramını önceden tartılmış ve etiketli 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne yerleştirin ve 18 tüp dolana kadar bunu tekrarlayın. Bir pipet kullanarak, her tüp için% 100 HPLC sınıf isopropanol bir mililitre ekleyin.30 saniye boyunca örnekleri girdap. Sıvı ve kürk ayrımını sağlamak için her numuneyi 0,5 mililitrelik mikro hassasiyetli bir elek ile süzün ve sıvıyı bir atık kabına atın. Her kürk örneğini etiketli plastik bir tartı teknesine yerleştirin.Sonra

cortisol-measurement-in-koala-phascolarctos-cinereus-fur

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Kortizol (CORT) insanlarda ve primatlarda artan saç gövdesine birikir. Biz yüksek hassasiyet ve duyarlılığı ile saç Cort çıkarma ve analiz yöntemleri açıklanmaktadır. Saç CORT ölçülmesi özellikle aya haftalık dönemler boyunca kronik stres değerlendirmek için çok uygundur.

Ekstraksiyon ve İnsan ve Maymun Saç gelen Kortizol Analizi

Stres invazif olmayan bir değerlendirme için bir ihtiyaç vardır. Bu yazıda hafif akut stres yaban mavi göğüsleri göz bölge sıcaklığında önemli bir cevap algılamak için termal görüntüleme kullanarak basit bir protokol açıklar.

Termal Görüntüleme olmayan invaziv Yarı Kuşlar Stres Çalışması için

At türlerinde adrenal aktivite, kortikosteron metabolitleri için dışkı analizi ile değerlendirilebilir. Yöntem, hem evcil hem de serbest dolaşan atlarda uzun vadeli kalıpları değerlendirmek için invaziv olmayan bir seçenek sunar. Bu protokol, ilgili enzime bağlı immünolojik testi ve ilişkili biyokimyasal doğrulamayı tanımlar.

Fekal Glukokortikoid Analizi: Tek tırnaklılarda in Non-invaziv Adrenal İzleme

Saç kortizol konsantrasyon Analizi kortizol geleneksel önlemler bir alternatif sağlar; Ancak, saç örnekleri Afrikalı Amerikalılardan toplamak, bilim adamlarının kültürel bilgili ve yetkili olmak gerekir. Afrikalı Amerikalılardan kortizol analiz için saç örnekleri toplamak için kültürel bilinçli bir tekniği göstermek için bu protokolü amacı budur.

Saç örnekleri saç kortizol analizde Afrikalı Amerikalılar için toplama

Bu makalenin amacı, üç farklı ayarlara ziyaretten sonra stres düzeylerinde yapılan değişiklikleri belirlemektir ve tükürük kortizol, α-amilaz ve psikolojik kendi kendine rapor önlemleri temelinde stres düzeylerini tanımlamada kullanılan yöntemleri açıklamak Enstrüman.

Doğanın farklı seviyeleri ile üç yerlere ziyaretten sonra biyofizik ve psikolojik stres seviyeleri ölçme

Bu çalışmada mersin balığı türlerinin yüzgeci nden ve çene kemiğinden kortizol çıkarılması için bir protokol sunmuz. Fin ve çene kemiği kortizol düzeyleri, ELISA tahlilleri ile takip eden iki yıkama çözücüsi karşılaştırılarak daha fazla incelendi. Bu çalışma, yeni bir stres göstergesi olarak çene kemiği kortizol fizibilite pilot.

Mersin Balığı Fin ve Çene Kemiği Matrislerinden Kortizol Ekstraksiyonu

Bu protokol, hayatlarının farklı aşamalarında slatted döşeme üzerinde barındırılan domuzlar için pratik anlamlı çevresel zenginleştirme sağlamak için nasıl gösterir ve nasıl ölçüm için non-invaziv bir şekilde tükürük örnekleri toplamak için kortizol konsantrasyonları, akut stres için bir biyomarker olarak.

Slatted Döşeme de Housed Domuzlarda Anlamlı Çevresel Zenginleştirme ve Ölçüm Tükürük Kortizol Sağlanması

Bu protokol, normal yem diyetinden (NCD) veya yüksek yağlı diyetten (HFD) ± kapsaisin ile beslenen vahşi tipli farelerde elde edilen kasık yağ tabletlerinde bazal ve forkolinin uyardığı lipoliz belirleme metodunu açıklamaktadır. Lipoliz için bir indeks olarak, inguinal yağlı yağ pedlerinden gliserol salınımı ölçülmüştür.

İnguinal Yağ Yastıklarında Basal ve Forskolin ile uyarılmış Lipoliz Ölçümleri

Protokol tarafından enzimatik alkalin hidroliz keratin hidrolizat tavuk tüyleri üzerinden hazırlamak için ve keratin hidrolizat içine bir kozmetik merhem temel cilt bariyer fonksiyonunu artırır ekleme olup olmadığını sınamak için hedeftir (hidrasyon heightening ve «««azalan) transepidermal su kaybı. Erkek ve kadın üzerinde testler yapılır gönüllüler.

Keratin hidrolizat tavuk tüyleri ve kozmetik kendi uygulamasında hazırlanması

Mitokondri Reaktif oksijen türleri (ROS) üretebilir birkaç flavin bağımlı enzim içerir. ROS izleme mitokondri içinde tek tek siteleri istenmeyen yan tepkiler nedeniyle zorlu sürümüdür. Biz saf flavoenzymes ve Mikroplaka fluorometry kullanarak ROS yayımı için yerel oranları doğrudan değerlendirilmesi için bir kolay, ucuz yöntemi mevcut.

Süperoksit/hidrojen peroksit ve NADH üretim mitokondriyal Dehydrogenases Flavin içeren tarafından eş zamanlı ölçüm

Öğrenin, koala kürkünden kortizol ekstraksiyonu için optimal çözücüyü belirleyerek kronik stres değerlendirmesi yapmayı. Bu hassas ve tekrarlanabilir yöntem, Phascolarctos cinereus için koruma stratejilerini geliştirir.

Koalak'da Kortizol Ölçümü (Phascolarctos cinereus) Kürk

Daha fazla video keşfet