Aksonal İnhibisyon ve Rejenerasyon Çalışması için Sıçan Modelinde Yüz Sinir Cerrahisi
5 Mayıs 2020
Bu protokol, sıçan modelinde yüz sinir cerrahisi için tekrarlanabilir bir yaklaşım açıklar, yaralanma çeşitli indükleyici desenlerin açıklamaları da dahil olmak üzere.
Bu protokol bilim adamları yüz sinir yaralanması ve yöntemleri birçok farklı parametreler arasında rejenerasyon geliştirmek için sonuçları çalışma yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı sıçan anatomisi yüz sinir kolay erişim sağlar, ve büyük ölçekli bize ilgili yaralanma desenleri tüm çalışma sağlar. Bu tekniğin uygulamaları yüz sinir yaralanması sonrası hastaların rehabilitasyonuna doğru uzanır.
Rejeneratif potansiyel olarak sıçan tekrarlanabilir ve özlü deneysel bir model sağlar. Ve bu yöntem yüz sinir pazesisi veya felç için cerrahi ve tıbbi tedaviler içine fikir sağlayabilir. Ve diğer baş ve boyun modellerine ya da diğer çevresel sinirlere aktarılabilir.
Her iki el kullanarak mikroskop altında çalışma zor olabilir. Ben bir yüz sinir diseksiyonu denemeden önce mikroskop altında dürbün sürümünü kullanarak pratik öneririz. Parmak sıkışmasına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, farenin gözlerine merhem uygulayın ve cerrahi bölgeyi tıraş edin.
Fare tanımlama için bir yöntem belirleyin ve boynun altına gazlı bez yerleştirin. Üç alternatif klorheksidin ve% 70 etanol scrubs ile maruz kalan cilt dezenfekte ve bir stereo mikroskop altında sıçan yerleştirin. Postauriküler derinin doğal katlanabilirliğini belirlemek için ipsilateral kulağı ön-posterior yönde manipüle edin.
Postauriküler kırışıklıkta 2-3 milimetrelik bir kesi yapmak için 15 numaralı bıçağı kullanın. Kesilerin planlanması ve yerleştirilmesi, yara boyutunu en aza indirirken yüz sinirinin güvenilir bir şekilde tanımlanmasını sağlamak için en kritik adımlardır. Bluntly ani deri altı fasya ile diseksiyon ve doku maruziyetini artırmak için bir mikro-Weitlaner retraktör yerleştirin.
Kafatası tabanı boyunca yerleştirilmesi doğru bir alt-üst yönde seyahat olarak ön digastrik kas tanımlayın. Anterior digastrik karın tendonunu ortaya çıkarmak için kas ekleme noktası boyunca kas göbeği boyunca hafifçe yayılır. Tendon kafatası tabanına sağlam bir ekleme ile kas yayılan bir filmbeyaz süreç olarak görünecektir.
Anterior digastrik kas ve tendon belirlenmesinden sonra, daha fazla kas göbek geri çekmek için Weitlaner retractor ayarlayın. Maruz kalan bölge, fasiyal sinirin ana gövdesinin yattığı üç boyutlu uzaydır. Stylomastoid foramen çıkışından distal bir alt yönde sinir boyunca diseksiyon.
Bir ezilme yaralanması paterni ikna etmek için, uygun bir ezilme yaralanması sağlamak için 30 saniye boyunca sabit ve tekrarlanabilir basınç uygulayarak sinirsıkıca kavramak ve sıkıştırmak için düzgün yüzeyli kuyumcu forseps kullanın. Basit bir transeksiyon için, ince dişli forseps ile sinir örten hemen epineurium kavramak ve temiz tek bir kesim ile istenilen noktada sinir transect için keskin mikroskasorskullanın. Bir sinir boşluğu modeli için, hayvanlar arasında benzer yaralanma desenleri sağlamak ve az önce gösterildiği gibi sinir transect sağlamak için istenilen sinir boşluğu uzunluğu ayarlamak için ayarlanabilir kaliperler kullanın.
Deneysel yaralanma teslim edildikten sonra, steril salin ile yara sulama ve steril gazlı bez ile doku kuru. kurumsal kurallara göre deri kesisini kapatmadan önce. Burada, bir ezilme yaralanması ile fasiyal sinirin ana gövdesinin canlı görüntülenmesi ile erişkin transgenik THY1-GFP sıçanDa ilk PES'in dal noktasına kadar yaklaşık 2-3 milimetre distal gösterilmektedir.
Bir, iki, üç ve dört haftalık floresan dönüşlerinin değerlendirilmesi bu transgenik hayvanlarda sinir rejenerasyonunun izlenmesi için bir belirteç olarak kullanılabilir. Histomorfometrik analiz, aksonal çapın nicelleştirilmesine, enkaz miktarına, sinir lifine, sinir yüzdesinin ve yoğunluk ölçümlerinin ölçülmesine olanak tanıyan marjinal mandibular bölünmenin kesitsel görüntülerini elde etmek için kullanılabilir. Fasiyal siniri tanımlarken ilgili anatomik sinirlerin görünür olmasını sağlamak için retraktörün yerleşimini sıklıkla ayarlamak önemlidir.
Bu prosedürü takiben ilgili sinirler ve kaslar diğer deney gruplarına göre rejenerasyon derecesini değerlendirmek için immünohistokimyasal analiz için hasat edilebilir. Gelişiminitaki bu teknik, yüz sinir hasarı sonrası fonksiyonel sonuçları inceleyen araştırmacıların önünü açmıştır. Özellikle, nasıl sinkinezis fenomeni etkisi.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, özellikle yaralanma modellerine ve rejeneratif sonuçlara odaklanarak, bir sıçan modelinde fasyal sinir cerrahisine yönelik tekrarlanabilir bir yaklaşımı detaylandırmaktadır. Bu yöntem, fasyal sinir yaralanması rehabilitasyonuna yönelik cerrahi tekniklerin ve tıbbi tedavilerin araştırılmasını kolaylaştırır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Rejeneratif Tıp
- Hayvan Modelleri
Arka Plan
- Sıçan modeli, fasiyal sinire kolay erişim sağlar.
- Bu cerrahi teknik, sinir yaralanmasını ve rejenerasyon yöntemlerini değerlendirmeye yardımcı olabilir.
- Sıçanın anatomik özellikleri, farklı yaralanma modellerinin ayrıntılı olarak çalışılmasına olanak tanır.
Çalışmanın Amacı
- Fasiyal sinir parezisi veya paralizisi için terapötik yaklaşımları değerlendirmek.
- Fasiyal sinir yaralanmalarını takiben gerçekleşen rejenerasyon konusundaki anlayışı geliştirmek.
- Çalışmalar arasında tekrarlanabilir, ayrıntılı bir cerrahi teknik geliştirmek.
Kullanılan Yöntemler
- Çalışmada, fasiyal sinir üzerindeki cerrahi müdahale için sıçan modeli kullanılmaktadır.
- Temel prosedürler, güvenilirliği sağlamak için detaylandırılmış spesifik cerrahi adımlarla birlikte ezilme yaralanması ve transversiyonu içermektedir.
- Rejenerasyon sonuçlarını izlemek için canlı görüntüleme ve histomorfometrik analizler kullanılmaktadır.
- Mikroskop altında metodik diseksiyonun önemi vurgulanmakta olup, bu işlem beceri ve hazırlık gerektirmektedir.
Ana Sonuçlar
- Fasiyal sinirin başarılı şekilde görüntülenmesi ve manipülasyonu, rejenerasyon süreçlerinin değerlendirilmesine olanak tanır.
- Floresan görüntüleme ve histomorfometrik analiz, sinir iyileşmesine dair nicel ölçümler sağlar.
- Bu teknik, sinir yaralanması sonrası ortaya çıkan sinkinezi fenomenleri hakkında önemli bilgiler sunar.
Sonuçlar
- Bu çalışma, fasyal sinir hasarı ve rejenerasyonunun analizi için temel bir protokol oluşturmaktadır.
- Araştırmacıların, nöral rehabilitasyondaki fonksiyonel sonuçları ve terapötik yaklaşımları keşfetmelerine olanak tanır.
- Metodoloji, periferik sinir çalışmalarındaki daha geniş uygulamalar için önemli çıkarımlar sunmaktadır.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Endüstriyel Uygunluğu
Sıçan yüz siniri yaralanma modeli, aksonal rejenerasyon ve inhibisyonun değerlendirilmesi için tekrarlanabilir bir platform sağlayarak nörorejeneratif terapötik geliştirmede hedef doğrulamanın desteklenmesine yardımcı olur. Ölçeklenebilirliği ve anatomik erişilebilirliği, yaralanma modellerinin ve rejeneratif yanıtların tutarlı bir şekilde değerlendirilmesine olanak tanıyarak nörotrofik veya anti-inhibitör adayların preklinik risk azaltma süreçlerini kolaylaştırır. Bu model, insan yüz siniri onarım stratejileriyle ilgili nicelenebilir histomorfometrik ve fonksiyonel veriler sunarak keşif ve translasyonel araştırmalar arasında bir köprü kurar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Belirli sinir ezilmesi, transversiyonu veya boşluk yaralanmaları sonrası aksonal inhibisyon mekanizmalarının ve rejeneratif yolların sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Hedef etkileşimini ve yol modülasyonunu değerlendirmek için nöroaktif reaktiflerin veya hücrelerin tutarlı şekilde iletilmesini destekler.
- Tahminleyici Değer: Akson çapının, fiber yoğunluğunun ve kalıntı temizliğinin histomorfometrik nicelendirmesi, hedef etkinliği ve mekanik riskten arındırma için objektif metrikler sağlar.
Tarama ve Assay Geliştirme
- Analiz Hazırlığı: Pro-rejeneratif bileşiklerin veya inhibitör antagonistlerin yüksek tekrarlanabilirlik ile taranmasına uygun standartlaştırılmış yaralanma modelleri oluşturur.
- Kantitatif Çıktılar: Florasanla işaretlenmiş aksonların canlı görüntülemesi ve histomorfometrik analiz, boylamsal ve ölçülebilir rejenerasyon takibine olanak tanır.
- Ölçeklenebilirlik: Sıçan modeli, intrakraniyalden ekstratemporal sinir segmentlerine kadar cerrahi manipülasyonlara imkan tanıyarak çok parametreli değerlendirmeyi destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel Süreklilik: Fasiyal sinir rehabilitasyonundaki klinik son noktalarla uyumlu olarak, fonksiyonel iyileşmenin ve sinkinezin azaltılmasının değerlendirilmesini kolaylaştırır.
- Preklinik Modelleme: Hastalıkla ilişkili bir periferik sinir sisteminde, santral veya uç organ manipülasyonlarının ve hücresel tedavilerin değerlendirilmesine olanak tanır.
- Riske Göre Ayarlanmış İlerleme: Güvenilir sağkalım oranları ve türler arası tutarlılık, daha yüksek mertebeli türlere geçiş öncesindeki karar süreçlerini destekler.
Süreç ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu model, kontrollü sinir hasarı yoluyla hedef doğrulamayı sağlayarak, bileşik taraması için analiz geliştirme süreçlerine geçiş yaparak ve fonksiyonel ile yapısal sonuç ölçümleri aracılığıyla rejeneratif tedavilerin preklinik değerlendirmesini destekleyerek keşif iş akışlarına entegre olur.
- Keşif Biyolojisi: Standartlaştırılmış yaralanma paradigmaları aracılığıyla aksonal büyüme inhibitörleri ve promotörleri üzerinde hipotez testlerini kolaylaştırır.
- Tarama: Bileşiklerin rejenerasyon kinetiği ve doğruluğu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için tekrarlanabilir sinir yaralanma modelleri sağlar.
- Analitikler: Histomorfometrik ve floresans tabanlı okumalar, doz-yanıt ve hedef etkileşimi analizi için ölçülebilir veriler sunar.
- Translasyonel Araştırma: Aksonal rejenerasyon metriklerini sinkinezi gibi fonksiyonel sonuçlarla ilişkilendirerek klinik ilgiyi destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Birden fazla terapötik modalite ve zaman noktası boyunca tekrarlayan testler için yeniden kullanılabilir bir cerrahi platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Ölçülebilir ve tekrarlanabilir yaralanma ile rejenerasyon metrikleri aracılığıyla aksonal rejenerasyon çalışmalarındaki mekanistik belirsizliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Standardize edilmiş cerrahi teknikler ve ameliyat sonrası değerlendirme protokolleri, laboratuvarlar arası tutarlılığı ve veri güvenilirliğini artırır.
- Stratejik Değer: Hedef biyolojisini netleştirerek ve sonraki aşamadaki nörorejeneratif programlarda başarısızlık riskini azaltarak erken evre devam/dur kararlarına temel oluşturur.
- Portföy Etkisi: Klinik olarak ilgili bir periferik sinir modelinde valide edilmiş hedef modülasyonuna dayanarak, nörorejeneratif adayların risk ayarlı önceliklendirmesine olanak tanır.
Uygulama Hususları
- Mikrocerrahi uzmanlığı ve stereomikroskobik rehberlik altında kemirgen nöroanatomisine aşinalık gerektirir.
- Standart yaralanma indüksiyonu için mikro-Weitlaner ekartörler, kuyumcu pensleri, mikro makaslar ve ayarlanabilir kumpaslar dahil olmak üzere özel aletlere bağımlıdır.
- Boylamsal aksonal takip ve histomorfometrik analiz için transgenik raporlayıcı hatlar (ör. Thy1-GFP) veya immünohistokimyasal işlem gerektirir.
- Sıçan sağkalımını sağlamak ve rejenerasyon değerlendirmesindeki karıştırıcı değişkenleri minimize etmek için ameliyat sonrası bakım protokolleri gerektirir.
- Fare modellerine kıyasla sınırlı genetik işlenebilirlik, gen nakavt veya aşırı ifade yaklaşımları aracılığıyla yapılan mekanistik incelemeleri kısıtlayabilir.
