Name: Online MRG görüntüleri rehberlik altında Rhesus Macaque korteks için optogenetik Adeno-ilişkili Viral vektör konveksiyon geliştirilmiş teslim (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Öğrenin, Rhesus makak korteksinde optogenetik viral vektörlerin MR rehberli konveksiyon artırılmış teslimat yöntemini. Bu teknik, geniş ölçekli sinir aktivitesi manipülasyonu ve karmaşık nöral devrelerin incelenmesi için etkili bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği doktora sonrası Bursu (AY), Savunma Gelişmiş Araştırma Projeleri Ajansı (DARPA) yeniden yapılanma ve plastisite yaralanma kurtarma hızlandırmak için (onarım; N66001-10-C-2010), R01. NS073940, ve UCSF Nörobilim görüntüleme Merkezi tarafından. Bu çalışma da Eunice Kennedy Shiver Ulusal Enstitüsü Çocuk Sağlığı & ınsan gelişimi Sağlık Ulusal Enstitüleri ödül numarası K12HD073945, Washington Ulusal Primate Araştırma Merkezi (WaNPCR, P51 OD010425) altında tarafından desteklenmektedir ve Neuroteknoloji Merkezi (CNT, Grant EEC altında bir Ulusal Bilim Vakfı Mühendisliği Araştırma Merkezi-1028725). Biz, deneme ve Nan Tian, Jiwei he, Peter Ledochowitsch, Michel Maharbiz ve Toni haun teknik yardım için onların yardım için Camilo Diaz-Botia, Tim Hanson, Viktor Kharazia, Daniel Silversmith, Karen J. MacLeod, Juliana Milani ve Blakely Andrews teşekkür ederiz.

Tüm prosedürler Kaliforniya Üniversitesi, San Francisco kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıABUC) tarafından onaylanmıştır ve laboratuar hayvanlarının bakımı ve kullanımı kılavuzu ile uyumludur. Aşağıdaki prosedür, sırasıyla 17,5 kg ve 16,5 kg (maymun G ve maymun J) ağırlığında, 8 ve 7 yaş arası iki yetişkin erkek Rhesus Makaklar kullanılarak yapılmıştır.
Not: tüm cerrahi prosedürler için standart aseptik teknikler kullanın.
1. temel görüntüleme
<ol><li>Hayvan sedate ve entübe ve Isoflurane altında genel anestezi korumak (konsantrasyon değişti 0 için 5% gerektiğinde, solunum hızı ve kalp hızı gibi hayati belirtileri bağlı olarak). Hayvan sıcaklığı, kalp hızı, oksijen doygunluğu, elektrokardiyografik tepkiler ve CO2 bitiş-Tidal kısmi basıncı izleme prosedürü boyunca.</li>
	<li>Hayvanı Bay uyumlu stereotaktik çerçeveye yerleştirin ( malzeme tablosunabakın), prosedür boyunca kalacaktır. Hayvanı taşınabilir Mr uyumlu izofluran makinesine bağlayın ve MRI tarayıcına (3 T) taşıma.</li>
	<li>Elde standart T1 (Flip açı = 9 °, tekrarlama süresi/yankı süresi = 668,6, matris boyutu = 192 x 192 x 80, dilim kalınlığı = 1 mm) ve T2 (Flip Angle = 130 °, tekrarlama süresi/yankı süresi = 52,5, matris boyutu = 256 x 256 x 45, dilim kalınlığı = 1 mm) temel olarak anatomik MR görüntüleri Başvuru ve cerrahi planlama için.</li>
	<li>Anestezi hayvan kurtarmak ve hayvan konut alanına taşımak.</li>
	<li>Kraniyotominin yerleşimini belirlemek için elde edilen T1 ve T2 görüntülerini kullanın. Kraniyotominin konumu, Bay 'den gelen kortikal alan ile makak beyin Atlası (Paxinos, Huang, petride, toga 2ND Edition) ile eşleştirilerek kesin olarak belirlenir. Buna ek olarak, bu temel görüntüler viral infüzyon konumları için bir tahmin sağlayabilir. Burada gösterilen ilgi kortikal bölgeler M1 ve S1 vardır.</li>
</ol>2. MR-uyumlu Oda Implantasyonu
<ol><li>Hayvan sedate ve entübe ve 1,1 yılında olduğu gibi standart anestezik izleme ile genel anestezi korumak.</li>
	<li>Hayvanı, Oda implantasyonu ve viral vektör teslimi boyunca kalacağı MR uyumlu stereotaktik çerçeveye yerleştirin. Hayvanı taşınabilir Bay uyumlu izofluran makinesine bağlayın.</li>
	<li>Bir neşter ile yaklaşık 5 cm uzunluğuna sahip orta çizgiden neredeyse 2 cm sagittal kesi oluşturun.</li>
	<li>Asansörleri kullanarak kafatası temel yumuşak doku çıkarın ( malzeme tablosunabakın).</li>
	<li>Bir trefin (bkz. malzeme tablosu) kullanarak enjeksiyonlar için önceden planlanmış yörüngeleri kapsayacak şekilde dairesel kraniyotomi (2,5 cm çap) oluşturun.<ol>
<li>Trephinin kenarını geçmenin merkezleme noktasını aşağı indirin. Trephin ayarlanabilir merkezleme noktası kullanarak trefin çapa kafatası yeterince derin planlanan kraniyotomi merkezinde bir girinti oluşturun. Bu altta yatan nöral dokuya zarar verebilir gibi kafatası derinliği tamamen penetran önlemek için dikkatli olun.</li>
		<li>Kraniyotomi boyunca doku nemi korumak için gerektiğinde periyodik olarak tuz ile alanı yıkayın.</li>
		<li>Merkezi yapıldıktan sonra, kafatası üzerine trefin düşük ve kemik kapağı forseps ile kaldırılabilir kadar aşağı basınç uygularken saat yönünde ve saat yönünün tersine trefin döndürün. Trephine ile temel doku zarar görmesini önlemek için dikkatli olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Diş ince bir sütür (Boyut 6-0) kraniyotomi merkezinde dura ile ve yavaşça kraniyotomi merkezinde bir çadır oluşturarak beynin yüzeyinden sütür çekerek dura kaldırın.</li>
	<li>Sonra, beynin zarar görmesini önlemek için ince oftalmik makas kullanarak çadırda merkezine dura yakın delinme. Daha sonra kraniyotominin kenarına merkezden dura kesmek ve ince optalik makas ile kenar boyunca devam.</li>
	<li>Dairesel özel yapılan CED MR uyumlu odası monte edin (Şekil 1; üretim talimatları için Bölüm 4 ' e bakın), Ced infüzyon sırasında kanül desteği sağlamak için kraniyotominin üstündeki kafatasına, Oda flanşı eğriliği hizalar kafatası eğriliği ile iyi.</li>
	<li>Plastik vida ve diş akrilik ya da birkaç titanyum vida kullanarak kafatası implantları güvenli.</li>
</ol>3. Viral vektör teslim
<ol><li>Bay uyumlu odası implantasyonundan ve kanül enjeksiyon ızgarasını (Şekil 1a-B, tamamlayıcı Şekil 1) odasına yerleştirdikten hemen sonra, enjeksıyon konumlarını Mr anatomik görüntüleri ile görselleştirerek ızgarayı (0,9% NaCl) tuz ile doldurun ve beyin nemi korumak için ıslak steril absorblenebilir jelatin ile Oda boşlukları doldurun (Şekil 1F).</li>
	<li>Taşıma ve Mr infüzyon sırasında silindirlerin sterilitesi korumak için steril bir antimikrobiyal yakma asmak ile cilt ve silindir kapak. Pozitif kimlik için enjeksiyon ızgarasının üst işaretlemek için bir vitamin E kapsül yerleştirin.</li>
	<li>Hayvan intübik kalırken, endotrakeal tüpü anestezi devresinde ayırın ve taşınabilir Bay uyumlu izofluran makineye yeniden takın ve hayvanı MRI tarayıcılarına taşıma.</li>
	<li>Elde T1 görüntüleri (Flip açı = 9 °, tekrarlama süresi/Echo zaman = 668,6, matris boyutu = 192 x 192, dilim kalınlığı = 1 mm, 80 dilim) enjeksiyon ızgarasının üst ve kortikal yüzey uzaklığı hesaplamak için. E vitamini kapsülü T1 görüntülerde açıkça görülebilir ve enjeksiyon ızgarasının üst kısmında bir marker olarak kullanılmalıdır (Şekil 2a). Enjeksiyon ızgarasının üst ve kortikal yüzey arasındaki mesafeyi ölçmek için MR görüntüleme yazılımının cetvel aracını kullanın.</li>
	<li>T2 görüntüleri elde (Flip açı = 130 °, tekrarlama süresi/Echo zaman = 52,5, matris boyutu = 256 x 256, dilim kalınlığı = 1 mm, 45 dilim) her site için optimum kanül kılavuzları belirlemek için infüzyon hedeflenen siteye dayalı (Şekil 2B-C). Daha önce belirtildiği gibi, kanül ızgarası T2 görüntülerde en iyi görünür olan tuzlu ile doldurulur. MR görüntüleme yazılımını kullanarak, infüzyon hedef konumunu bulmak için koronal ve sagittal düzlemleri ilerleyin.</li>
	<li>Oda sıcaklığında birkaç saat için viral vektörünün çözülme sonra, Bay kontrast Ajan gadoteridol ile viral vektör Mix (250:1 oranı; 2mM GD-DTPA, bkz: malzeme tablosu) pipet veya Vortex karıştırma ile. Not: Sunulan tekniği bir camkiia Organizatör sürüş ifadesi ile AAV vektörler için test edildi C1V1 EYFP için erimiş (AAV 2.5-camkii-C1V1-EYFP, titer: 2,5 x 1012 virüs molekülleri/ml; malzeme tablosunabakın).</li>
	<li>Karışık virüsü bir 0,2 mL yüksek basınçlı IV tüpüne yükleyin (bkz. malzeme tablosu).</li>
	<li>Viral infüzyon hattını hazırlamak için MR tarayıcısının dışında steril bir alan kurun.</li>
	<li>Yüksek basınçlı IV boru kullanarak, uzun bir uzatma hattı bağlayın (yaklaşık 3-5 metre, Bay delik ile ilgili İnfüzyon Pompası konumuna bağlı olarak) bir MR-uyumlu 3 mL şırınga ve tuz ile Prime.</li>
	<li>Uzun uzatma hattının distal ucunu virüs ile yüklenen 0,2 mL IV boruların proksimal ucuna bağlayın ve reflü-dirençli kanülünü 1 mm kademeli ucu ile takın (Şekil 2D; kanül üretim talimatları için Bölüm 5 ' e bakınız) distal ucunu Bu montaj bir kelepçe tarzı kateter konektörü ile (bkz. malzeme tablosu) (Şekil 2e).</li>
	<li>Son olarak, Bay uyumlu bir pompanın içinde şırıngayı ayarlayın (bkz. malzeme tablosu). Pompa kumandasını MR uyumlu olmadığı için tarayıcı kontrol odasına yerleştirin.</li>
	<li>Daha önce elde edilen temel anatomik MR görüntülerini kullanarak, hedef infüzyon sitesine ulaşmak için gerekli kanül enjeksiyon ızgarası konumunu ve ekleme derinliğini seçin. Steril teyp kullanarak kanula üzerinde ekleme derinliği işaretleyin.</li>
	<li>İnfüzyon 1 μL/dak hızında başlayın ve kanül ucundan sıvının ejeksiyonu gözlemleyerek infüzyon hattında sıvının akışını görsel olarak doğrulayın.</li>
	<li>Bu ekleme sırasında kanül tıkanma nüfuz doku önleyecek gibi infüzyon hattında akış korurken, enjeksiyon ızgarası aracılığıyla hedef derinliğe kanül takın.</li>
	<li>Elde hızlı (2 dakika) flaş T1 ağırlıklı görüntüler (Flip açı = 30 °, tekrarlama süresi/Echo Time = 3,05, matris boyutu = 128 x 128, dilim kalınlığı = 1 mm, 64 dilim) Viral vektör infüzyon online izleme için.</li>
	<li>~ 10 μL vektörünün, MR tarayıcısını tespit etmek için yeterince virüs bulaşmasının ardından, virüsün gözlenen yayılması tarafından belirgin olarak doğru kanül yerleşimi doğrulamak için MR görüntüleri elde edin. Eklenen kanülün derinliği yanlıştır, derinliği buna göre ayarlayın veya kanül yavaşça kaldırın ve 3,12 olarak ekleme yeniden deneyin.</li>
	<li>Çevrimiçi MR görüntülerinin rehberlik yoluyla infüzyon izleyin (flaş T1 ağırlıklı) ve birkaç dakikada 5 μL/dak ile infüzyon hızını artırmak 1 μL/dak adımları (Şekil 3A).</li>
	<li>Viral vektörden yaklaşık 40 μL 'ye bulaştıktan sonra, infüzyon hızını 1 μL/dak adımında azaltmaya başlar ve ~ 50 μL enjekte edildikten sonra infüzyonu durdurur ve kanulayı 10 dakika boyunca yerine bırakın.</li>
	<li>Yavaşça beyinden kanül çıkarın ve bir sonraki konuma taşıyın. 3,9 her konum için 3,19 için adımları yineleyin.</li>
	<li>Enjeksiyon sonunda steril bir örtü ile silindir kapak, hayvan taşımacılığı önce. Sonra hayvanı ameliyathane geri taşıma.</li>
	<li>Ya Mr uyumlu odası eksplant ve kemik flep ve aşırı kas değiştirerek ve standart aseptik teknikleri kullanarak cilt dikiş veya titanyum silindir ve yapay dura ile Oda yerine cerrahi kesi kapatın (bkz. Yazdan-Shahmorad ve ark. 20169) nöral kayıt ve stimülasyon için.</li>
</ol>4. MR uyumlu Oda üretimi
<ol><li>Naylon kanül enjeksiyon ızgarasını (Şekil 1a-B) belirtilen boyutlara göre işleme yoluyla imal ederler (Tamamlayıcı Şekil 1).</li>
	<li>3B, Bay uyumlu silindiri Akrilonitril bütadien stiren (ABS0 plastik (Şekil 1C-E) (bkz. ek dosya 1 – 3; 3B yazıcı ve materyaller için malzeme tablosuna bakın). Not: Bir tasarım, MR uyumlu silindir içinde sabit bir kanül enjeksiyon ızgarası tutar (Şekil 1C), diğeri ızgaranın dönüşü için izin verirken, enjeksiyon bölgesini genişletiyor (Şekil 1D-E).</li>
	<li>Kanül enjeksiyon ızgarasını iplik ve Bay uyumlu odasının karşılık gelen boşluğuna dokunun, her iki parça da aynı iş parçacığını sergiler. Not: Her iki bileşen de aynı iş parçacığına sahip olması koşuluyla, her tür iş parçacığı kullanılabilir.</li>
	<li>MR uyumlu silindirin delikli deliğe vidalayarak naylon kanül enjeksiyon ızgarasını takın.</li>
</ol>5. reflü-dirençli kanül üretimi13
<ol><li>0,32 mm ID ve 0,43 mm OD ile 30 cm uzunluğundaki silika tüpü, iç silika borusu için (bkz. malzeme tablosu) bir jilet kullanarak kes.</li>
	<li>0,45 mm ID ve 0,76 mm OD ile dış silika borusu için 7,5 cm uzunluğunda ve 5 cm uzunluğunda silika tüpünü kesiniz (bkz. malzeme tablosu).</li>
	<li>7,5 cm dış tüpüne siyanoakrilat ile 30 cm iç tüpüne, iç tüpün dış tüpün 1 mm ötesinde, reflü-dirençli basamaklarla (Şekil 2D) uzanmasını sağlayan şekilde uyur. Siyanoakrilgeç iç tüpün içine girmez emin olmak için, kanül ucu uzak iç tüp dışında siyanoakrilat yerleştirin.</li>
	<li>5 cm uzunluğunda silika tüpünü, kelepçe stili kateter konektörüne iliştirmek için iç tüpün diğer ucuna yapıştırın (bkz. Adım 3,10).</li>
</ol>

<ol><li>Ruiz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetics+through+windows+on+the+brain+in+the+nonhuman+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Optogenetics through windows on the brain in the nonhuman primate.</a> Journal of Neurophysiology. 110 (6), 1455-1467 (2013).</li>
<li>Diester, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optogenetic+toolbox+designed+for+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An optogenetic toolbox designed for primates.</a> Nature Neuroscience. 14 (3), 387-397 (2011).</li>
<li>Ohayon, S., Grimaldi, P., Schweers, N., Tsao, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saccade+modulation+by+optical+and+electrical+stimulation+in+the+macaque+frontal+eye+field%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Saccade modulation by optical and electrical stimulation in the macaque frontal eye field.</a> Journal of Neuroscience. 33 (42), 16684-16697 (2013).</li>
<li>Gerits, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetically+induced+behavioral+and+functional+network+changes+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Optogenetically induced behavioral and functional network changes in primates.</a> Current Biology. 22 (18), 1722-1726 (2012).</li>
<li>Jazayeri, M., Lindbloom-Brown, Z., Horwitz, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saccadic+eye+movements+evoked+by+optogenetic+activation+of+primate+V1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Saccadic eye movements evoked by optogenetic activation of primate V1.</a> Nature Neuroscience. 15 (10), 1368-1370 (2012).</li>
<li>Dai, J., Brooks, D. I., Sheinberg, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+and+electrical+microstimulation+systematically+bias+visuospatial+choice+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Optogenetic and electrical microstimulation systematically bias visuospatial choice in primates.</a> Current Biology. 24 (1), 63-69 (2014).</li>
<li>Afraz, A., Boyden, E. S., DiCarlo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+and+pharmacological+suppression+of+spatial+clusters+of+face+neurons+reveal+their+causal+role+in+face+gender+discrimination%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Optogenetic and pharmacological suppression of spatial clusters of face neurons reveal their causal role in face gender discrimination.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (21), 6730-6735 (2015).</li>
<li>Ledochowitsch, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+optical+control+and+simultaneous+electrical+readout+of+extended+cortical+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Strategies for optical control and simultaneous electrical readout of extended cortical circuits.</a> Journal of Neuroscience Methods. 256, 220-231 (2015).</li>
<li>Yazdan-Shahmorad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Large-Scale+Interface+for+Optogenetic+Stimulation+and+Recording+in+Nonhuman+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A Large-Scale Interface for Optogenetic Stimulation and Recording in Nonhuman Primates.</a> Neuron. 89 (5), 927-939 (2016).</li>
<li>Ju, N., Jiang, R., Macknik, S. L., Martinez-Conde, S., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+all-optical+interrogation+of+cortical+neurons+in+awake-behaving+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Long-term all-optical interrogation of cortical neurons in awake-behaving nonhuman primates.</a> PLoS Biology. 16 (8), e2005839(2018).</li>
<li>Bankiewicz, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+AAV+vector+in+parkinsonian+monkeys%3B+in+vivo+detection+of+gene+expression+and+restoration+of+dopaminergic+function+using+pro-drug+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of AAV vector in parkinsonian monkeys; in vivo detection of gene expression and restoration of dopaminergic function using pro-drug approach.</a> Experimental Neurology. 164 (1), 2-14 (2000).</li>
<li>Kells, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+therapy-based+method+for+the+delivery+of+therapeutics+to+primate+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Efficient gene therapy-based method for the delivery of therapeutics to primate cortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (7), 2407-2411 (2009).</li>
<li>Krauze, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflux-free+cannula+for+convection-enhanced+high-speed+delivery+of+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Reflux-free cannula for convection-enhanced high-speed delivery of therapeutic agents.</a> Journal of Neurosurgery. 103 (5), 923-929 (2005).</li>
<li>Yazdan-Shahmorad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+optogenetic+expression+in+macaque+cortex+obtained+with+MR-guided%2C+convection+enhanced+delivery+%28CED%29+of+AAV+vector+to+the+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Widespread optogenetic expression in macaque cortex obtained with MR-guided, convection enhanced delivery (CED) of AAV vector to the thalamus.</a> Journal of Neuroscience Methods. 293, 347-358 (2018).</li>
<li>Yazdan-Shahmorad, A., Silversmith, D. B., Kharazia, V., Sabes, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+cortical+reorganization+using+optogenetics+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Targeted cortical reorganization using optogenetics in non-human primates.</a> Elife. 7, (2018).</li>
<li>Yazdan-Shahmorad, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+a+setup+for+chronic+optogenetic+stimulation+and+recording+across+cortical+areas+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22SPIE+BiOS%22%5BJournal%5D)">Demonstration of a setup for chronic optogenetic stimulation and recording across cortical areas in non-human primates.</a> SPIE BiOS. , (2015).</li>
<li>Lerchner, W., Corgiat, B., Der Minassian, V., Saunders, R. C., Richmond, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+parameters+and+virus+dependent+choice+of+promoters+to+improve+neuron+targeting+in+the+nonhuman+primate+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Injection parameters and virus dependent choice of promoters to improve neuron targeting in the nonhuman primate brain.</a> Gene Therapy. 21 (3), 233-241 (2014).</li>
<li>Acker, L., Pino, E. N., Boyden, E. S., Desimone, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FEF+inactivation+with+improved+optogenetic+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">FEF inactivation with improved optogenetic methods.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (46), E7297-E7306 (2016).</li>
<li>Bobo, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+macromolecules+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (6), 2076-2080 (1994).</li>
<li>Lieberman, D. M., Laske, D. W., Morrison, P. F., Bankiewicz, K. S., Oldfield, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+distribution+of+large+molecules+in+gray+matter+during+interstitial+drug+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced distribution of large molecules in gray matter during interstitial drug infusion.</a> Journal of Neurosurgery. 82 (6), 1021-1029 (1995).</li>
<li>Lonser, R. R., Gogate, N., Morrison, P. F., Wood, J. D., Oldfield, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+convective+delivery+of+macromolecules+to+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct convective delivery of macromolecules to the spinal cord.</a> Journal of Neurosurgery. 89 (4), 616-622 (1998).</li>
<li>Szerlip, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+convection-enhanced+delivery+of+viruses+and+virus-sized+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of convection-enhanced delivery of viruses and virus-sized particles.</a> Journal of Neurosurgery. 107 (3), 560-567 (2007).</li>
</ol>

PNS Nöralink Corp, beyin stimülasyon kullanarak klinik tedaviler gelişmekte olan bir şirket mali ilgi vardır.

Burada, Bay güdümlü CED tarafından NHP primer somatoduyusal ve motor korteks büyük ölçekli optogenetik ifade elde etmek için uygulanabilir ve verimli bir tekniği özetlemektedir. MR-güdümlü CED kullanımı NHP beynin geleneksel viral infüzyon yöntemleri üzerinde önemli avantajlar sunar. Böyle bir avantaj, daha az gerekli infüzyon ile büyük alanlarda ifade elde etme yeteneğidir. Örneğin, geleneksel yöntemlerle, 2-3 mm çap bölge1,2,5...

Optogenetiği nöral aktivite manipülasyon ve beyindeki ağ bağlantılarının çalışması için izin veren güçlü bir araçtır. İnsan dışı primatlar (NHPs) Bu tekniğin uygulanması büyük ölçekli nöral hesaplama, biliş ve primat beynin davranış anlayışımızı geliştirmek için potansiyele sahiptir. Optogenetiği son yıllarda nhps 'de başarıyla uygulanmasına rağmen1,2,3,4,5,6,7, Araştırmacılar yüz bu hayvanların büyük beyin alanları arasında ifade yüksek düzeylerde elde etmektir. Burada, macakların korteksinin büyük alanlarında yüksek düzeyde optogenetik ifade elde etmek için verimli ve basitleştirilmiş bir yaklaşım sağlıyoruz. Bu tekniğin, bu hayvanların son teknoloji kayıt8,9 ve optik stimülasyon10 teknolojileri ile birlikte mevcut optogenetik çalışmalarını iyileştirmek için büyük bir potansiyeli vardır.
Konveksiyon gelişmiş teslimat (Ced) farmakolojik ajanlar ve diğer büyük moleküllerin, viral vektörler de dahil olmak üzere, merkezi sinir sistemi11,12,13için kurulan bir yöntemdir. Geleneksel Teslimat yöntemleri beyin küçük bölgeler arasında dağıtılan birden düşük hacimli infüzyon içerir ise, CED daha az infüzyon ile daha geniş ve daha bile Ajan dağıtımı elde edebilirsiniz. İnfüzyon sırasında basınç odaklı toplu sıvı akışı (Konveksiyon) CED ile viral vektörler teslim ederken hedef doku daha yaygın ve eşit şekilde dağıtılmış dönüştürücü sağlar. Son çalışmalar, biz temel motor (M1) ve somatoduyusal (S1) korteks9 ve talamus14 manyetik rezonans (Mr) destekli Ced kullanarak büyük alanların transksiyon ve sonraki optogenetik ifade göstermiştir.
Burada, sadece birkaç kortikal enjeksiyon ile büyük kortikal alanlarda optogenetik ifade elde etmek için CED kullanımını özetlemektedir.

<table><tbody><tr><td>0,2 mL Yüksek Basınçlı IV Boru</td><td>Smiths Medical Inc., Dublin, OH, ABD</td><td>533640</td><td></td></tr><tr><td>0,32 mm İç Çap, 0,43 mm Dış Çap Silika Boru</td><td>Polymicro Technologies</td><td>1068150027</td><td></td></tr><tr><td>0,45 mm İç Çap, 0,76 mm Dış Çap Silika Boru</td><td>Polymicro Teknolojileri</td><td>1068150625</td><td></td></tr><tr><td>AAV2.5-CamKII-C1V1-EYFP</td><td>Penn Vektör Çekirdeği, Pennsylvania</td><td></td><td></td>ABS Üniversitesi</tr><tr><td> plastik</td><td>Stratasys, MN, ABD</td><td>ABSplus-P430</td><td></td></tr><tr><td>Antimikrobiyal kesi örtüsü</td><td>3M</td><td>6650EZ</td><td>Ioban Örtüsü</td></tr><tr><td>Diş Akrilik</td><td>Henry Schein, Inc.</td><td>1013117</td><td>Akrilik Yapıştırma Maddesi</td></tr><tr><td>Asansörleri</td><td>VWR International, LLC.</td><td>10196-564</td><td>Langenbeck Asansör, Geniş</td></tr><tr><td>Uçlu İnce sütür</td><td>McKesson Medikal-Cerrahi A.Ş.</td><td></td><td></td>1034505</tr><tr><td>Gadoteridol</td><td>Prohance, Bracco Diagnostics, Princeton, NJ</td><td>0270-1111-04</td><td></td></tr><tr><td>Işık stimülasyonu için lazer</td><td>Omicron-Laserage, Almanya</td><td>PhoxX 488-60</td><td></td></tr><tr><td>MR uyumlu 3 cc şırınga</td><td>Harvard cihazı, Holliston, MA, ABD</td><td>59-8377</td><td></td></tr><tr><td>MR Görüntüleme Yazılımı</td><td>Pixmeo</td><td>OsiriX MD 10.0</td><td></td></tr><tr><td>MR Uyumlu Pompa</td><td>Harvard cihazı, Holliston, MA, ABD</td><td>Harvard PHD 2000</td><td></td></tr><tr><td>MR uyumlu stereotaksik çerçeve</td><td>KOPF</td><td>1430M MRI</td><td></td></tr><tr><td>Perifix Kelepçe Stili Kateter Konektörü</td><td>B-Braun, Bethlehem, PA, ABD</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Plastik Vidalar</td><td>Plastik 1</td><td>0-80 x 1/8N</td><td>Naylon vidalar</td></tr><tr><td>Titanyum vidalar</td><td>Crist Instrument Co., Inc.</td><td>6-YCX-0312</td><td>Kendinden kılavuzlu kemik vidaları</td></tr><tr><td>Trephine</td><td>GerMedUSA Inc,</td> <td>SKU: GV70-42</td><td></td></tr><tr><td>uPrinter SE 3D yazıcı</td><td>Stratasys, MN, ABD</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>E Vitamini Kapsül</td><td>Saf Kapsüller, LLC.</td><td>DE1</td><td></td></tr><tr><td>Islak steril emilebilir jelatin</td><td>Pfizer Inc.</td><td>AZL0009034201</td><td>Jel Köpük</td></tr></tbody></table>

online mrg görüntüleri rehberlik altında rhesus macaque korteks için optogenetik adeno-ilişkili viral vektör konveksiyon geliştirilmiş teslim

Convection Enhanced Delivery of Optogenetic Adeno-associated Viral Vector to the Cortex of Rhesus Macaque Under Guidance of Online MRI Images

İnsan dışı primat (NHP) optogenetik olarak, viral vektörler ile büyük kortikal alanları enfekte genellikle zor ve zaman alıcı bir iştir. Burada, optogenetik viral vektörler için manyetik rezonans (MR) destekli konveksiyon gelişmiş teslimat (CED) ' nin primer somatoduyusal (S1) ve motor (M1) korüslerinin etkili, yaygın kortikal ifadesi elde etmek için kullanılması gösterilmektedir. ışık duyarlı iyon kanalları. Adeno-ilişkili viral (AAV) vektörler, Sarı floresan protein (EYFP) için kırmızı-kaydırılmış opsin C1V1 erimiş kodlama Bay güdümlü Ced altında Rhesus Makaklar korteks içine enjekte edildi. Üç ay sonrası infüzyon, epifloresan görüntüleme iki Macaques M1 ve S1 optogenetik ifade (> 130 mm2) büyük bölgeler doğruladı. Ayrıca, mikro-electrocorticographic dizileri kullanarak ifade alanlarından güvenilir ışık uyarılmış Elektrofizyoloji yanıtlarını kayıt edebildik. Daha sonra histolojik analiz ve gazeteciye karşı immünostan, M1 ve S1 'de epifloresan görüntüleme ile gösterilen dağılıma karşılık gelen yaygın ve yoğun optogenetik ifade gösterdi. Bu teknik, geleneksel tekniklere kıyasla minimal hasar ile daha kısa bir süre içinde korteks büyük alanlarda ifade elde etmek için bize sağlar ve NHPs gibi büyük hayvanların optogenetik viral teslim için optimum bir yaklaşım olabilir. Bu yaklaşım, insan evrime yakın hayvan modellerinde hücre tipi özgüllüğü ile sinir devrelerinin ağ düzeyinde manipülasyon için büyük bir potansiyel göstermektedir.

MRG rehberlik altında konveksiyon gelişmiş teslimat (CED)
Viral vektörünün yayılmasını, CED infüzyon sırasında online MR görüntüleri (Şekil 3A) rehberlik altında izleniyor. Bu çalışmada iki maymun S1 ve M1 hedeflenmiştir (Şekil 3B). Üç boyutlu dağıtım hacimleri MR görüntüleri bir post-hoc analiz tahmin edildi (Şekil 3c) tar...

Burada, biz manyetik rezonans göstermektedir (Mr)-güdümlü konveksiyon gelişmiş teslim (Ced) viral vektörler içinde korteks içine etkili ve basitleştirilmiş bir yaklaşım olarak makak beynin büyük kortikal alanlarda arasında optogenetik ifade elde etmek.

Online MRG görüntüleri rehberlik altında Rhesus Macaque korteks için optogenetik Adeno-ilişkili Viral vektör konveksiyon geliştirilmiş teslim

In non-human primate (NHP) optogenetics, infecting large cortical areas with viral vectors is often a difficult and time-consuming task. Here, we ...

Konveksiyon gelişmiş teslimat, ya da CED, insan olmayan primatlar optogenetik viral vektörler, araştırmacılar karmaşık nöral hesaplamalar ve davranışları anlamak için büyük bir ölçekte nöral aktivite işlemek için sağlayacaktır. CED ile primat beyninin büyük bölgelerinde geleneksel yöntemlere göre kısa sürede sadece birkaç enjeksiyon la yüksek optogenetik ekspresyon elde edebiliriz. Manyetik rezonans veya MR uyumlu oda implantasyonu insan olmayan primat ameliyatlarında standart uygulama kullanılarak gerçekleştirilir, prosedür metin protokolünde ayrıntılı olarak anlatılır ve bu videoda kısaca özetlenmiştir.Metin protokolünde açıklandığı gibi hayvan sedasyonu, konumlandırma ve ilk kesiden sonra, trephine kullanarak enjeksiyonlar için önceden planlanmış yörüngeleri kapsayacak şekilde dairesel bir kraniyotomi oluşturur. Trephine ayarlanabilir merkezleme noktası kullanarak trephine çapa kafatası yeterince derin planlanan kraniyotomi merkezinde bir girintin oluşturun. Merkez yapıldıktan sonra, trephine'i kafatasının üzerine indirin ve kemik kapağı forceps ile çıkarılAna kadar aşağı doğru basınç uygularken trephine'i saat yönünde ve saat yönünün tersine döndürün.Metin protokolünde ayrıntılı olarak dura kaldırdıktan sonra, kraniyotomi kenarına merkezinden dura kesti ve ince oftalmik makas ile kenar boyunca devam edin. Konveksiyon özel yapılan konveksiyon gelişmiş teslimat MR uyumlu oda kraniotomi üstüne kafatası için bu tür oda flanş eğriliği kafatası eğriliği ile iyi hizalar infüzyon sırasında kanül desteği sağlamak için. İmplantları plastik vidalar ve diş akrilik veya birkaç titanyum vida kullanarak kafatasına sabitleyin.MR uyumlu haznesini yerleştirdikten ve kanül enjeksiyon ızgarasını odaya yerleştirdikten kısa bir süre sonra, MR anatomik görüntüler aracılığıyla enjeksiyon yerlerini görselleştirmek için ızgarayı %0,9 tuzlu suyla doldurun. Ayrıca beynin nemini korumak için ıslak steril emilebilir jel köpük ile oda boşlukları doldurun. Taşıma ve MR infüzyonu sırasında silindirlerin sterilliğini korumak için cildi ve silindiri steril bir antimikrobiyal eğim perdeile kaplayın.Pozitif tanımlama için enjeksiyon ızgarasının üst ünü işaretlemek için Bir E vitamini kapsülü yerleştirin. Hayvan entübe kalırken, anestezi devresinden endotrakeal tüp ayırmak ve taşınabilir bir MR uyumlu isoflurane makineye yeniden takın. Hayvanı MR Tarayıcısına götürün.Enjeksiyon ızgarasının üst kısmından ve kortikal yüzeyden uzaklığı hesaplamak için T1 görüntüleri edinin. E vitamini kapsülaçıkça T1 görüntülerde görülebilir ve enjeksiyon ızgara üst için bir belirteç olarak kullanılmalıdır. Hedeflenen infüzyon bölgesine göre her site için en uygun kanül kılavuzlarını belirlemek için T2 görüntüleri edinin.Kanül ızgarası, T2 görüntülerinde en iyi görünen tuzlu suyla doldurulur. MR görüntüleme yazılımını kullanarak, infüzyonun hedef konumunu bulmak için koronal ve sagital düzlemlerde ilerleyin. Oda sıcaklığında birkaç saat viral vektör eritme sonra, pipet veya girdap karıştırma ile MR kontrast ajan gadoteridol ile viral vektör karıştırın.Karışık virüsü 0.2 mililitreyüksek basınçlı IV tüpe yükleyin. Yüksek basınçlı IV tüp kullanarak, uzun bir uzatma hattını MR uyumlu üç mililitreşile şırınga ve salin ile asal olarak bağlayın. Uzun uzatma borularının diğer ucunu virüs yüklü 0.2 mililitrelik IV boruya bağlayın.Daha sonra bir mililitre adımlı ucu ile reflüye dayanıklı kanül bir kelepçe tarzı kateter konektörü ile bu montaj distal ucuna takın. Son olarak şırıngayı MR uyumlu bir pompaya ayarlayın. Elde edilen temel anatomik MR görüntülerini kullanarak, hedef infüzyon bölgesine ulaşmak için gerekli kanül enjeksiyon ızgara sıyrık konumunu ve ekleme derinliğini seçin.Steril bant kullanarak kanülün üzerine ekleme derinliğini işaretleyin. Dakikada bir mikrolitre hızında infüzyon alabilirsiniz ve kanül ucundan sıvı nın ejeksiyon gözlemleyerek infüzyon hattında sıvı akışını görsel olarak doğrulayın. Bu ekleme sırasında kanül tıkanmasını nüfuz doku engelleyecek gibi infüzyon hattında akış korurken hedef derinliğine enjeksiyon ızgara sıaracılığıyla kanül elle yerleştirin.Şimdi viral vektör infüzyon online izleme için hızlı flaş T1 ağırlıklı görüntüler elde. Vektörün yaklaşık 10 mikrolitresini, MR tarayıcısında tespit etmek için yeterli virüs aşılanmış şekilde aşıladıktan sonra, virüsün gözlenen yayılmasında belirgin olarak doğru kanül yerleşimini doğrulamak için MR görüntüleri elde edin. Eklenen kanülün derinliği yanlışsa, derinliği buna göre veya yavaşça kanülü çıkarın ve eklemeyi yeniden dene.Çevrimiçi MR görüntülerinin rehberliğinde infüzyonu izleyin. Dakikada bir mikrolitre dakikada bir mikrolitre ile dakikada beş mikrolitre infüzyon oranını artırın. Yüksek infüzyon oranları doku hasarına neden olabilir gibi yavaş yavaş infüzyon oranını artırmak ve dakikada beş mikrolitre aşmamak önemlidir.Viral vektörün yaklaşık 40 mikrolitresini aşıladıktan sonra, infüzyon hızını dakikada bir mikrolitre azaltmaya başlar. Yaklaşık 50 mikrolitre enjekte edildikten sonra infüzyonu durdurun. Kanülleri on dakika bekletin.Yavaşça beyinden kanül çıkarın ve bir sonraki konuma taşımak. Hayvan taşımadan önce enjeksiyonların sonunda silindiri steril bir perdeile kapatın, ardından hayvanı ameliyathaneye geri götürün. Seri koronal kesitler üzerinde yapılan histolojik analizler infüzyon bölgeleri etrafında büyük ölçekli optogenetik ekspresyon ortaya koymaktadır.Burada gösterilen temel koronal MR görüntü ve aynı MR koronal dilim için infüzyon sonra kontrast madde nin yayılması. Bir koronal doku bölümü yaklaşık aynı gösterilir. Peroksidaz boyama sarı floresan protein veya EYFP muhabiri nin ifadesini yansıtır.Yüzey epifluorescense ve histolojik boyama ile ölçülen EYFP ekspresyonu alanı arasında iyi bir uyum gözlenir. Bunlar, MR görüntülerinden tahmin edilen vektör yayılımı bölgesini içerir. Beyaz noktalar enjeksiyon bölgelerini gösterir ve tüm siyah bölge kraniyotominin maruz kaçtığı bölgeyi temsil eder.Burada gösterilen somatosensoriyel kortekste YFP ekspresyonunun medial lateral yönünü gösteren anti GFP antikor ile boyanmış koronal kesitlerin düşük büyütme görüntüsüdür. Siyah ok ucu kanül yolunun konumunu gösterir. YFP pozitif hücrelerin laminar dağılımını göstermek için bitişik doku daha büyük büyütme gösterilir.YFP pozitif hücrelerin yoğun nüfuslu bölgeleri ağırlıklı olarak katmanlar iki ile üç ve beş ile altı arasında yer almaktadır. Daha fazla genişleme katmanları iki ile üç, katman beş ve katman altı tipik piramidal hücreleri ortaya koymaktadır. Akış durduktan sonra kanülden 10 dakika boyunca yerinde bırakmak önemlidir.Bu, virüsün çevredeki hedefli sinir dokusuna nüfuz edilmesini sağlayacaktır. CED memelilerde büyük beyin bölgeleri arasında düzgün yüksek ifade düzeyleri elde etmek için etkili bir yaklaşımdır. Nöral devreler ve bağlantı anlayışımızı genişletme potansiyeline sahiptir.CED ile viral transdüksiyon sonra, sonraki optogenetik stimülasyon deneyleri beyin içinde karmaşık devre dinamikleri ortaya çıkarmak için elektrik kayıt ve davranışsal denemeler ile eşleştirilmiş olabilir. Bu teknik daha önce Yazdan-Shahmorad ve meslektaşları tarafından 2018 yılında, duyusal motor kortekste ağ geniş bağlantı değişikliklerini tetiklemek için optogenetik nöral modülasyon kullanılmıştır.

convection-enhanced-delivery-optogenetic-adeno-associated-viral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada görsel korteks nöronlar ve glia floresan etiketlenmesi için AAV vektörleri intrakranial enjeksiyon sunuyoruz.

Adeno-ilişkili Viral Vektörler İntrakranial Enjeksiyon

Genetik ve optik birleştirmek nörobilim araçlarının son gelişmeler, mekansal ve zamansal çözünürlük görülmemiş bir düzeye ile nöral devre faaliyet üzerinde kontrol sağlayan, "optogenetics" olarak adlandırılır. Burada prefrontal korteks ve subicular piramidal nöronların genetik tanımlanmış alt kümelerinin optogenetic manipülasyon ile vivo kayıtta entegre etmek için bir protokol sağlar.

Bireysel piramidal nöronlar High Fidelity optogenetic Kontrolü için Bir Yöntem<em&gt; In vivo</em

Bu protokol, optogenetik fonksiyonel manyetik rezonans görüntülemeyi (ofMRI) başarılı bir şekilde gerçekleştirmek için gereken adımları ve veri analizini açıklar. ofMRI, yüksek alanlı fMRI okumasını optogenetik stimülasyonla birleştiren, fonksiyonel nöral devrelerin ve bunların tüm canlı beyindeki dinamiklerinin hücre tipine özgü haritalanmasına izin veren yeni bir tekniktir.

Optogenetic Fonksiyonel MRI

Bu video, Thy1-GFP transgenik hattında in vivo iki foton mikroskobu kullanılarak fare retrosplenial korteksindeki nöronların kronik olarak görüntülenmesine izin veren kraniyotomi prosedürünü göstermektedir. Bu yaklaşım, mCherry eksprese eden adeno ilişkili virüsün dorsal hipokampusa enjeksiyonu ile birleştirilir. Bu teknikler, RSC'de deneyime bağlı yapısal plastisitenin uzun süreli izlenmesine izin verir.

Eşzamanlı İki foton<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Retrosplenial kortekste sinaptik Girişlerin Görüntüleme ve postsinaptik Hedefler

Şu anda uygulandığı gibi, insan olmayan primatlarda optogenetik, viral vektörlerin beyne enjekte edilmesini gerektirir. Optimal bir enjeksiyon yöntemi güvenilir olmalı ve birçok uygulama için, postmortem histolojide kolayca ve açık bir şekilde tanımlanan keyfi derinlikteki bireysel bölgeleri hedefleyebilmelidir. Bu özelliklere sahip bir enjeksiyon yöntemi sunulmaktadır.

Anestezi Uygulanmış ve İnsan Dışı Primat Beyne Uyanan Optogenetik için AAV Vektörlerinin Enjeksiyonları

Burada, akut kemirgen beyin dilimlerinde sinapsa özgü elektrofizyolojik karakterizasyona izin vermek için optogenetik yapılara sahip ayrık beyin bölgelerinin viral transdüksiyonunu tanımlayan bir protokol sunuyoruz.

Eski Vivo Medial Prefrontal Korteksten Lateral Entorinal Kortekse Uzun Menzilli Sinaptik İletim ve Plastisitenin Optogenetik Sorgulanması

Burada, uyanık farelerde mikroglial dinamiklerin ve nöronal aktivitenin eşzamanlı görüntülenmesi için adeno ilişkili virüs enjeksiyonunu kraniyal pencere implantasyonu ile birleştiren bir protokolü tanımladık.

Uyanık Farelerde Mikroglial Dinamiğin ve Nöronal Aktivitenin Eşzamanlı Görüntülenmesi

Subaraknoid virüs infüzyonu kullanan adeno ilişkili virüsün yaygın olarak verilmesi için yeni bir teknik tanımlanmıştır. Bu yöntem sadece fare neokortikal nöronlarının yüzeysel katmanlarda yaygın olarak transdüksiyonunu sağlamakla kalmaz, aynı zamanda seçici olmayan bir promotör kullanıldığında bile beşinci katman piramidal nöronlarında transgenin seçici ekspresyonu ile sonuçlanır.

AAV2'nin Subaraknoid Enjeksiyonu ile Fare Neokortikal Nöronlarının Yaygın Transdüksiyonu

Bu protokol, viral teslimat, optrod implantasyonu, fototrombotik indüksiyon, astrosit ve nöron aktivitesinin eşzamanlı kaydı ve astrositlerin optogenetik uyarılmasını içeren entegre bir yöntem sağlar. Bu entegre yöntem, iskemik incinin akut ve kronik evreleri arasında astrosit-nöron ilişkisinin eşzamanlı incelenmesini sağlamayı amaçlamaktadır.

Fototrombotik İnme Modelleme ve Davranış Eden Farelerde Nöronal ve Astrositik Aktivitenin In Vivo Optrode Kaydı İçin Entegre Bir Yöntem

Bir prosedür elektroansefalogram, elektromiyogram ve serebral laktat konsantrasyon takip edilir iken optogenetically kortikal piramidal nöronların etkinlik işlenmesi için tarif edilmektedir. Onlar kendiliğinden uyku / uyanıklık döngüsü geçmesi ise Deneysel kayıtları kablo-tethered fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Optogenetic cihaz laboratuar monte edilmiştir; kayıt ekipman ticari olarak temin edilebilmektedir.

Eşzamanlı Elektroensefalografi, Kemirgen Serebral Korteks Laktat Konsantrasyonu ve Nöronal Faaliyet Optogenetic Manipülasyon Gerçek zamanlı ölçüm

Öğrenin, Rhesus makak korteksinde optogenetik viral vektörlerin MR rehberli konveksiyon artırılmış teslimat yöntemini. Bu teknik, geniş ölçekli sinir aktivitesi manipülasyonu ve karmaşık nöral devrelerin incelenmesi için etkili bir yaklaşım sunar.

Online MRG görüntüleri rehberlik altında Rhesus Macaque korteks için optogenetik Adeno-ilişkili Viral vektör konveksiyon geliştirilmiş teslim (Video) | JoVE Journal

Online MRG görüntüleri rehberlik altında Rhesus Macaque korteks için optogenetik Adeno-ilişkili Viral vektör konveksiyon geliştirilmiş teslim

Daha fazla video keşfet