Name: Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Keşfedin yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik kimyasal genetik yöntemlerle nasıl düzenlendiğini. Bu protokol, sinir devrelerinin yetişkin nörogenez üzerindeki etkisini incelemek için immünohistokimya ve mikroskopi tekniklerini kullanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

L.J.Q. Ulusal Sağlık Enstitüsü Ruh Sağlığı Ulusal sağlığı Enstitüleri çeşitlilik Supplement R01MH111773 yanı sıra T32 eğitim hibe T32NS007431-20 altında tarafından desteklenmektedir. Bu proje NıH (MH111773, AG058160 ve NS104530) dan js verilen hibe desteklenmektedir.

<ol><li>Zhao, C., Deng, W., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+Functional+Implications+of+Adult+Neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and Functional Implications of Adult Neurogenesis.</a> Cell. 132 (4), 645-660 (2008).</li>
<li>Spalding, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+hippocampal+neurogenesis+in+adult+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamics of hippocampal neurogenesis in adult humans.</a> Cell. 153 (6), 1219-1227 (2013).</li>
<li>Hill, A. S., Sahay, A., Hen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+Adult+Hippocampal+Neurogenesis+is+Sufficient+to+Reduce+Anxiety+and+Depression-Like+Behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Increasing Adult Hippocampal Neurogenesis is Sufficient to Reduce Anxiety and Depression-Like Behaviors.</a> Neuropsychopharmacology. 40 (10), 2368-2378 (2015).</li>
<li>Clelland, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+role+for+adult+hippocampal+neurogenesis+in+spatial+pattern+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A functional role for adult hippocampal neurogenesis in spatial pattern separation.</a> Science. 325, (2009).</li>
<li>Sahay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+adult+hippocampal+neurogenesis+is+sufficient+to+improve+pattern+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Increasing adult hippocampal neurogenesis is sufficient to improve pattern separation.</a> Nature. 472 (7344), 466-470 (2011).</li>
<li>Anacker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+neurogenesis+confers+stress+resilience+by+inhibiting+the+ventral+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hippocampal neurogenesis confers stress resilience by inhibiting the ventral dentate gyrus.</a> Nature. , 1(2018).</li>
<li>Kuhn, H. G., Eisch, A. J., Spalding, K., Peterson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+Phenotypic+Characterization+of+Adult+Neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Detection and Phenotypic Characterization of Adult Neurogenesis.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. , (2016).</li>
<li>Ansorg, A., Bornkessel, K., Witte, O. W., Urbach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+and+Multiple+Labeling+with+Antibodies+from+the+Same+Host+Species+to+Study+Adult+Hippocampal+Neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry and Multiple Labeling with Antibodies from the Same Host Species to Study Adult Hippocampal Neurogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), 1-13 (2015).</li>
<li>Podgorny, O., Peunova, N., Park, J. H., Enikolopov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triple+S-Phase+Labeling+of+Dividing+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Triple S-Phase Labeling of Dividing Stem Cells.</a> Stem Cell Reports. 10 (2), 615-626 (2018).</li>
<li>Taupin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BrdU+immunohistochemistry+for+studying+adult+neurogenesis%3A+Paradigms%2C+pitfalls%2C+limitations%2C+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">BrdU immunohistochemistry for studying adult neurogenesis: Paradigms, pitfalls, limitations, and validation.</a> Brain Research Reviews. 53 (1), 198-214 (2007).</li>
<li>Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Millisecond-timescale%2C+genetically+targeted+optical+control+of+neural+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Millisecond-timescale, genetically targeted optical control of neural activity.</a> Nature Neuroscience. 8 (9), 1263-1268 (2005).</li>
<li>Armbruster, B. N., Li, X., Pausch, M. H., Herlitze, S., Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolving+the+lock+to+fit+the+key+to+create+a+family+of+G+protein-coupled+receptors+potently+activated+by+an+inert+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Evolving the lock to fit the key to create a family of G protein-coupled receptors potently activated by an inert ligand.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104 (12), 5163-5168 (2007).</li>
<li>Sidor, M. M., Davidson, T. J., Tye, K. M., Warden, M. R., Diesseroth, K., Mcclung, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Optogenetic+Stimulation+of+the+Rodent+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Yizhar, O., Fenno, L. E., Davidson, T. J., Mogri, M., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+Optogenetics+in+Neural+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Primer Optogenetics in Neural Systems.</a> Neuron. 71 (1), 9-34 (2011).</li>
<li>Yeh, C., Asrican, B., Moss, J., Lu, W., Toni, N., Song, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mossy+Cells+Control+Adult+Neural+Stem+Cell+Quiescence+and+Maintenance+through+a+Dynamic+Balance+between+Direct+and+Indirect+Pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mossy Cells Control Adult Neural Stem Cell Quiescence and Maintenance through a Dynamic Balance between Direct and Indirect Pathways.</a> Neuron. , 1-18 (2018).</li>
<li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+Stereotaxic+Surgery+in+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (20), 20-22 (2008).</li>
<li>Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+DREADDs+for+Neuroscientists%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Primer DREADDs for Neuroscientists.</a> Neuron. 89 (4), 683-694 (2016).</li>
<li>Zeng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+5-ethynyl-2+%E2%80%B2+-deoxyuridine+staining+as+a+sensitive+and+reliable+method+for+studying+cell+proliferation+in+the+adult+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 5-ethynyl-2 ′ -deoxyuridine staining as a sensitive and reliable method for studying cell proliferation in the adult nervous system.</a> Brain Research. 1319, 21-32 (2010).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), 1-9 (2012).</li>
<li>Hussaini, S. M. Q., Jun, H., Cho, C. H., Kim, H. J., Kim, W. R., Jang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-induced+antigen+retrieval%3A+an+effective+method+to+detect+and+identify+progenitor+cell+types+during+adult+hippocampal+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heat-induced antigen retrieval: an effective method to detect and identify progenitor cell types during adult hippocampal neurogenesis.</a> J Vis Exp. , (2013).</li>
<li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> The Anatomical Record. 231 (4), 482-497 (1991).</li>
<li>Kuhn, H., Dickinson-Anson, H., Gage, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+dentate+gyrus+of+the+adult+rat%3A+age-related+decrease+of+neuronal+progenitor+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult rat: age-related decrease of neuronal progenitor proliferation.</a> The Journal of Neuroscience. 16 (6), 2027-2033 (1996).</li>
<li>Gomez, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemogenetics+revealed%3A+DREADD+occupancy+and+activation+via+converted+clozapine%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chemogenetics revealed: DREADD occupancy and activation via converted clozapine.</a> Science. 357 (6350), 503-507 (2017).</li>
<li>Thompson, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dreadd+Agonist+21+%28C21%29+Is+an+Effective+Agonist+for+Muscarnic-Based+Dreadds+in+Vitro+and+in+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Pharmacology+%26+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Dreadd Agonist 21 (C21) Is an Effective Agonist for Muscarnic-Based Dreadds in Vitro and in Vivo.</a> ACS Pharmacology & Translational Science. 72 (3), (2018).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Bu protokolün amacı, bir dizi immünhistokimya tekniklerini kullanarak özel nöral devrelerin nasıl manipüle edildiğini değerlendirmek. Spesifik nöral devrelerle aracılık edilen yetişkin nörojenezinin aktiviteye bağımlı olarak düzenlenmesi, çeşitli nöral devrelerin incelenmesi için büyük bir potansiyele sahip değerli bir tekniktir. Bu tür deneylerin başarısı, doğru viral teslimat, istenilen manipülasyon için uygun viral seçim, bir timidin analog, hayvan yaşı, immünostasyon verimliliği, başarılı uygun teslim dahil olmak üze...

Yetişkin nörogenezi yeni nöronların bir yetişkinde doğmuş ve mevcut sinir ağları1entegre olan biyolojik bir süreçtir. İnsanlarda, bu süreç Hippocampus dentat girus (DG) oluşur, yaklaşık 1.400 yeni hücreler her gün2doğdu. Bu hücreler, subgranüler bölge (SGZ) olarak adlandırılan, bir nörojenik niş liman DG, iç bölümünde ikamet. Burada, hipokampal yetişkin sinir kök hücreleri (NSCs), öğrenme ve bellek, ruh düzenleme ve stres tepkisi dahil olmak üzere belirli beyin fonksiyonlarının düzenlenmesi için katkıda tam işlevsel nöronlar olmak için karmaşık bir gelişimsel süreç geçmesi3 ,4,5,6. Davranışları etkilemek için, Yetişkin NSCs, yerel ve distal kimyasal ipuçlarını bir dizi yanıt olarak bir aktivite bağımlı şekilde çeşitli dış uyaranlar tarafından son derece düzenlenir. Bu kimyasal ipuçları, nörotransmitter ve nöromodüller içerir ve çeşitli beyin bölgelerinden bir devre belirli bir şekilde hareket. Daha da önemlisi, NSCs üzerindeki bu kimyasal ipuçlarını devre geniş yakınsama kök hücre aktivasyonu, farklılaşma ve kader kararları benzersiz ve kesin düzenleme sağlar.
Yetişkin NSCs in vivo devre düzenlemesi için en etkili yollarından biri, devre geniş manipülasyonları ile immünofluorescence Analizi eşleştirerek olduğunu. Yetişkin NSCs 'nin immünofloresan analizi, Yetişkin NSCs 'nin gelişimsel aşamasını göstermek için spesifik moleküler işaretlere karşı antikorların kullanıldığı yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Bu işaretçiler şunlardır: bir radyal glia hücre ve erken nöral progenitör Marker olarak nestin, bir ara progenitör Marker olarak Tbr2, ve bir Nöroblast ve olgunlaşmamış nöron Marker olarak DCX7. Ayrıca, BrdU, Cidu, IDU ve edu gibi timidin analogları yöneterek, S aşaması geçiren hücre popülasyonları bağımsız olarak etiketli ve8,9,10görselleştirilebilir. Bu iki yaklaşımı birleştirerek, çeşitli ipuçlarını NSC farklılaşma ve nörojenezi nasıl etkilediğini, belirli gelişimsel aşamalarında proliferasyon nasıl düzenlendiği arasında değişen çok sayıda soru araştırılabilir.
Elektrik stimülasyon, optogenetik ve kemogenetik, her biri kendi avantajları ve dezavantajları ile dahil olmak üzere nöral devreleri etkili bir şekilde işlemek için çeşitli seçenekler var. Elektriksel stimülasyon, elektrotların daha sonra hedeflenen bir beyin bölgesini modüe etmek için elektrik sinyallerini iletmek için kullanılan spesifik bir beyin bölgesine implante edildiği kapsamlı bir ameliyatla ilgilidir. Ancak, bu yaklaşım hem hücresel ve devre özgüllüğü yoksun. Optogenetiği, implante edilmiş bir optik liften yayılan bir lazer tarafından uyarılan bir ışık aktif reseptörü kodlayan viral partiküllerin teslim edilmesini içerir, ancak geniş manipülasyon, büyük maliyet ve karmaşık ameliyatlar11gerektirir. Chemogenetics daha sonra özel ve biyolojik olarak inert ligand klozapin N-oksit (CNO)12 olarak bilinen tarafından aktive edilir tasarımcı ilaçlar veya dreadds tarafından aktive bir tasarımcı reseptörü kodlayan viral partiküllerin teslimini içerir . Yetişkin NSCs düzenleyen yerel nöral devreleri işlemek için DREADDs kullanarak avantajı CNO yönetim kolaylığı ve çeşitli yolların yatıyor. Bu da, uzun süreli çalışmalar için nöral devreleri modüe etmek için kolayca adapte olan, azaltılmış hayvan elleçleme ile daha az zaman alıcı bir yaklaşım sağlar.
Bu protokolde açıklanan yaklaşım, hem immünofluoresesans teknikleri hem de devre manipülasyonlarını birleştiren yetişkin hipokampal nörojenezinin devre yönetmeliğini başarıyla sorgulamak için gerekli çeşitli protokollerin kapsamlı bir koleksiyonudur. chemogenetics kullanarak. Aşağıdaki protokolde açıklanan yöntem, Yetişkin nörogenezi üzerinde düzenleyici fonksiyonlarını belirlemek için aynı anda bir veya birden fazla devresi uyarıcı veya inhibe etmek için uygundur. Bu yaklaşım, soru yüksek derecede geçici çözünürlük gerekmiyorsa en iyi şekilde kullanılır. Belirli bir frekans stimülasyon/inhibisyonu hassas temporal kontrol gerektiren sorular, daha iyi optogenetiği kullanarak ele alınabilir13,14. Burada açıklanan yaklaşım, özellikle stres önemli bir sorun olduğu zaman minimal hayvan kullanımı ile uzun vadeli çalışmalar için kolayca adapte edilir.

<table><tbody><tr><td>24 Kuyulu Plaka</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>07-200-84</td><td></td></tr><tr><td>48 Kuyulu Plaka</td><td>Denville Scientific</td><td>T1049</td><td></td></tr><tr><td>5-Etinil-2'-deoksiuridin (Edu)</td><td>Karbosynth</td><td>NE08701</td><td></td></tr><tr><td>Alkol %70 İzopropil</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama Pedleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-680-63</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-488 Azide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10266</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Tavuk Nestin Aves</td><td></td><td>NES; RRID: AB_2314882</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Karşıtı DCX</td><td>Santa Cruz</td><td>Kedisi # SC_8066; RRID: AB_2088494</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fare Tbr2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-4875-82; RRID: AB_11042577</td><td></td></tr><tr><td>Betadine Çözeltisi (povidon-iyot)</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sitirik Asit Stoku [.1M] Sitrik Asit (21g/L sitrik asit)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>Klozapin N-Oksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C08352-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal Yazılım (Zen Siyahı)</td><td>Zeiss Mikroskobu</td><td>Zen 2.3 SP1 FP1 (siyah)</td><td></td></tr><tr><td>Bakır (II) Sülfat Pentahidrat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AC197722500</td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu Çubuklar</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lamel</td><td>Denville Scientific</td><td>M1100-02</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Görev Mendili Kimwipes</td><td>Kimtech Science</td><td>7557</td><td></td></tr><tr><td>Matkap Ucu 0,5 mm</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>19007-05</td><td></td></tr><tr><td>Etilen Glikol</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>E178-1</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton İğne 2 inç</td><td>Hmailton Company</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Şırınga 5 & L Model 75 RN</td><td>Hmailton Şirketi</td><td>Ref: 87931</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Hızlı Matkap</td><td>Foredom</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>İnfüzyon Pompası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>70-4511</td><td></td></tr><tr><td>Enjekte Edilebilir Salin Çözeltisi</td><td>Mountainside Health Care</td><td>NDC 0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin Şırıngası</td><td>BD Ultra İnce İnsülin Şırıngaları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Henry Schein</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan İçin Stereotax</td><td>KOPF Aletleri Model</td><td>942</td><td></td></tr><tr><td>Leica M80</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica Mikrotom</td><td>Leica</td><td>SM2010 R</td><td></td></tr><tr><td>LSM 780</td><td>Zeiss Mikroskopi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nair (Epilasyon Ürünü)</td> <td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldahyde %4</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td>158127</tr><tr><td>Plus Şarjlı Slayt</td><td>Denville Scientific</td><td>M1021</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Çözelti (PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Veteriner Merhem</td><td>Puralube</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Slayt Rafı 20 slayt ünitesi</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td><td>70312-24</td><td></td></tr><tr><td>Sürgülü Raf tutucu</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td><td>70312-25</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Isıtma Yastığı</td><td>K & H</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Süper PAP Kalem 4 mm uçlu</td><td>PolySciences</td><td>24230</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Neşter</td><td>MedPride</td><td>47121</td><td></td></tr><tr><td>Tris Tamponlu Çözelti (TBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5912</td><td></td></tr><tr><td>Tri-sodyum sitrat Stoku [0.1 M] Tri-sodyum Sitrat (29.4g/L tri-sodyum sitrat)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8532</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93443</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vet Bond Doku Yapıştırıcısı</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik yönetmeliği

Assaying Circuit Specific Regulation of Adult Hippocampal Neural Precursor Cells

Yetişkin nörogenezi, dentat girus (DG) ' nin subgranüler bölgede (SGZ) yeni aktif nöral kök hücrelerinin (NCIS), mevcut bir nöron devresine entegre olan ve spesifik hipokampel işlevlerine katkı sağlayan dinamik bir süreçtir. . Önemlisi, Yetişkin nörogenezi çevresel uyaranlara son derece duyarlıdır, bu da çeşitli bilişsel işlevlerin faaliyete bağımlı olarak düzenlenmesi için izin verir. Çeşitli beyin bölgelerinden gelen sinir devreleri geniş bir yelpazede bu karmaşık bilişsel fonksiyonları düzenler. Bu nedenle, özel nöral devrelerin yetişkin nörogenezi nasıl düzenleylediğini anlamak önemlidir. Burada, sinirsel devre aktivitesini, NSCs 'Yi ve yeni doğmuş kemirgenleri düzenleyen tasarımcı ilaçlar (DREADDs) teknolojisi ile özel olarak aktive eden tasarımcı reseptörü kullanarak manipüle etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Bu kapsamlı protokol, viral partiküllerin stereotaktik enjeksiyonu, spesifik nöral devrelerin kemogenetik stimülasyon, timidin analog yönetim, doku işleme, immünofloresan etiketleme, konfoksal görüntüleme ve görüntüleme içerir. nöral öncü hücrelerin çeşitli aşamalarında analizi. Bu protokol, nscs ve onların kendi kendi kendi onların kendi ve onların onların onların onların onların onların görselleştirmek için kullanılan antijen alma teknikleri hakkında ayrıntılı talimatlar sağlar ve klozapin N-oksit (CNO) veya CNO içeren içme suyu kullanarak beyin devreleri modüle basit, ama etkili bir yol DREADDs-virüs ifade. Bu protokolün gücü, NSCs 'den elde edilen yetişkin nörogenezi etkileyen çok çeşitli nöral devrelerin incelenmesi için uyum içinde yatıyor.

Yukarıda açıklanan deneysel prosedürleri takiben (Şekil 1a,B), Hippocampus içinde nörojenik niş üzerinde kontralateral yosunlu hücre projeksiyonları uyarıcı etkilerini belirlemek başardık. Bir CRE bağımlı GQ kullanarak-bir yosunlu hücre 5-HT2A CRE-Line etiketleme ile eşleştirilir uyarıcı dreadd virüs eşleşen, biz seçmeli olarak kontralateral DG üzerine yosunlu hücrelerden uyarıcı projeksiyonları etkinleştirmek başardık ve bu güçlü yosunlu hücre tespit stimülasyon teşvik kök ...

Bu protokolün amacı, belirli bir lokal nöral devrenin kemogenetik manipülasyonuna yanıt olarak yetişkin nöral kök/progenitor hücrelerin davranışını analiz etmek için bir yaklaşım tanımlamakta.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

Adult neurogenesis is a dynamic process by which newly activated neural stem cells (NSCs) in the subgranular zone (SGZ) of the dentate gyrus (DG) generate ...

Bu protokol, beyindeki çeşitli devrelerin yetişkin nörogenezini nasıl düzenlediğini ve özellikle sinir seli uyarıcı veya inhibe edici sinir sellerinin yetişkin nöral kök hücrelerinin çoğalmasını nasıl etkilediğini cevaplayabilir. Bu tekniğin avantajı, özellikle istenilen sinir devrelerini hedef leyabildiği gibi hayvanlara getirilen stres miktarını da azaltabilmesidir. Bu yöntem, farklı beyin devrelerinin yetişkin nörogenezini nasıl düzenlediğine dair içgörü sağlayabilir, özellikle de bazı nörotransmitterleri serbest eden belirli hücre tiplerinin yetişkin nöral kök hücre proliferasyonlarını nasıl düzenlediğini.Bu yordamı başlatmak için, PBS doku bölümleri yerleştirin ve arka için ön seri sırada olumlu yüklü slayt üzerine beş ila sekiz bölüm monte. Doku bölümleri oda sıcaklığında 2-5 dakika kurumaya bırakın ve tamamen slaytlar yapışır. Ardından, bir kapta sitrat arabelleği hazırlayın.Sitrat tamponu mikrodalga fırında çözelti kaynayana kadar beş dakika ısıtın. Bu arada, monte edilmiş bölümleri cam bir kaydırak tutucuya yerleştirin. Beş dakika sonra, dikkatlice bir pipet kutusuna bölümleri ile slayt tutucu yerleştirin.Mikrodalga fırın gücünü %50'ye, pişirme süresini ise 7 dakikaya ayar

assaying-circuit-specific-regulation-adult-hippocampal-neural

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sinir kök hücreleri, yetişkin olmayan kış uykusuna toklu Arctic zemin sincap (AGS) hipokampus hazırlanmıştır. Bu sinir kök hücreleri, sayısız kanallar sayesinde genişletilmiş, farklılaşmış ve glial kültürü neredeyse 50:50 nöron olarak muhafaza edilebilir.

Yetişkin Hipokampal Arctic Zemin Sincap Nöral Kök Hücre Büyüme ve Farklılaşma

Bu video, EdU dahil edilmesi kullanılarak beyin dokusu kesitlerinde yeni çoğalan nöral kök hücrelerin boyanması prosedürünü ve ardından spesifik proteinleri görselleştirmek için immünofloresan ile hücre dinamiklerinin ve proliferasyonunun anlaşılmasını geliştirme prosedürünü göstermektedir.

Fare Beyin Bölümlerinde Prolifere Nöral Kök Hücreleri Görselleştirmek için İmmünofloresan Boyama

Erişkin hipokampal nörogenez sırasında, hareketsiz bir nöral kök hücre sırayla ilerlediğinde ve devrede işlevsel olarak entegre bir nörona dönüştüğünde farklı bir genetik belirteç seti ifade edilir. Isı kaynaklı antijen alımı kullanılarak, aksi takdirde tespit edilmesi zor olan progenitör hücre tipleri, geliştirilmiş etkinlik ile tanımlanır.

Isı Kaynaklı Antijen Alımı: Yetişkin Hipokampal Nörojenez Sırasında Progenitör Hücre Tiplerini Tespit Etmek ve Tanımlamak İçin Etkili Bir Yöntem

Burada subventricular bölgesi ve bireysel yetişkin farelerin kıvrımlarının gelen yapışkan tek katman veya neurospheres ya gibi, sinir öncü hücre kültürlerinin eş zamanlı üretimi için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

Burada, hipokampal gelişim sırasında belirli genlerin düzenleyici mekanizmalarını incelemek için bir araç sağlayan bir protokol sunuyoruz. Ex utero elektroporasyon ve organotipik dilim kültürünün kullanılması, tek hücrelerde ilgilenilen genlerin ekspresyonunun yukarı ve aşağı regülasyonuna izin verir ve gelişim sırasında kaderlerini takip eder.

Fare Hipokampal Doku Ex Utero Elektroporasyon ve Organotipik Dilim Kültür

Bu video makale, aynı doku kesitinde yetişkin hipokampal nörogenezin tüm aşamalarını tespit etmek ve ölçmek için kapsamlı bir protokolü göstermektedir. Farklı konakçı türlerden uygun antikorlar mevcut olmadığında ortaya çıkan dolaylı çoklu immünofloresan sınırlamalarının üstesinden gelmek için bir yöntem geliştirdik.

Aynı Sunucu Türlerin Antikorlar ile İmmünohistokimya ve Çoklu Etiketleme Yetişkin hipokampal nöron Eğitim için

Nöral kök hücreleri (NSC'ler) ve soylarını yetişkin fare beyninin subventriküler bölgesinden (SVZ) izole etmek için Floresan Aktif Hücre Sıralama (FACS) tabanlı bir yöntem bildiriyoruz. Floresan Ubikitinasyon Hücre Döngüsü Göstergesi (FUCCI) transgenik farelere uygulandığında, canlı görüntüleme ile hücre döngüsü ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

köpek beyin yetişkin nörogenezi incelemek için değerli bir modeldir. izole ve primer beyin dokusundan yetişkin köpek hipokampal nöral prekürsör hücrelerin genişletilmesi için protokoller burada sundu.

İzolasyon ve Yetişkin Köpek Hipokampal Sinir Öncüleri genişletilmesi

Kriyo-kesit diseksiyonu, derin nicel proteom analizi için murine beynindeki en büyük nörojenik nişin taze ve donmuş hazırlanmasını sağlar. Yöntem kesin, verimlidir ve minimum doku pertürbasyonuna neden olur. Bu nedenle, bu nişin moleküler mikroçevriminin yanı sıra diğer organların, bölgelerin ve türlerin incelenmesi için idealdir.

Doğru ve Derin Nicel Proteom Analizi için Yetişkin Subependymal Bölgesinin Kriyo-kesit Diseksiyonu

Burada, floresan ile aktive olmuş çekirdekler (FAN) sıralama yoluyla çoğu nöronu dışlayan fare dentat girusundan izole edilen tek çekirdekleri sıralamak için bir yöntem sunulmaktadır. Bu yaklaşım, yüksek kaliteli ekspresyon profilleri oluşturur ve nöral kök hücreler gibi kıt popülasyonlar da dahil olmak üzere niş içinde temsil edilen diğer hücre tiplerinin çoğunun incelenmesini kolaylaştırır.

Hipokampal Nörojenik Nişi İncelemek için Tek Çekirdekli RNA Dizilimi ile Birleştirilmiş Floresan Aktive Edilmiş Çekirdekler Negatif Nöronik Sıralama

Burada, bu hücreleri dopaminerjik öncü hücrelere farklılaştırarak, bunları Parkinson hastalığının fare modellerine naklederek ve nakledilen hücrelerin başarılı entegrasyonunu ve fonksiyonel etkinliğini doğrulamak için davranışsal ve elektrofizyolojik sonuçları değerlendirerek hassas nöronal modülasyon elde etmek için kimyasal olarak yeniden programlanmış kök hücrelerin mühendisliği için bir protokol açıklıyoruz.

Nörodejeneratif Hastalıkların Tedavisinde Yeniden Programlanmış Kök Hücre Kaynaklı Öncü Hücrelerde Kemogenetik Düzenleme

Keşfedin yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik kimyasal genetik yöntemlerle nasıl düzenlendiğini. Bu protokol, sinir devrelerinin yetişkin nörogenez üzerindeki etkisini incelemek için immünohistokimya ve mikroskopi tekniklerini kullanır.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

Daha fazla video keşfet