PDMS kullanarak yüksek verim çekiş kuvveti mikroskobu dönüşüm büyüme faktörü-β epitelyal-mezenkimal geçiş üzerinde doz bağımlı etkileri ortaya çıkarır

Laboratuvarım, hücrelerin mekanik kuvvetlerden nasıl etkilendiğini inceleyen mekanobiyoloji ile ilgileniyor. Mekanobiyolojiyi ölçebildiğimiz bir yol hücre kontraktilliğini ölçmektir. Yapışık hücrelerde, hücre substratına uygulanan çekiş kuvvetlerinde kontraktilite tezahür eder. Bu kuvvetleri genellikle çekiş kuvveti mikroskobu veya TFM olarak adlandırılan bir metodoloji kullanarak ölçeriz. Ve TFM farklı yöntemlergeniş bir yelpazede uygulanan, ama ortak bir yönü oldukça seri ve yavaş laboratuvar tekniği genellikle burada bu gibi tek bir çanak yapılır olmasıdır. Bu, aynı anda bir popülasyonu veya durumu değerlendirmemizi kısıtlar. Hücre kültürü boyunca bir süre önce geliştirilmiş ama çok iyi yemekler oluşturma ve biz düşündüm, biz aynı artan verim ve zaman ve reaktifler aynı verimlilik ile TFM olabilir harika olmaz mıydı? Ve bu bizim çözümümüzdü. Biz de 96 iyi çekiş gücü yemeği yarattık. Ve çok geleneksel 96 iyi doku kültürü çanak benzer görünüyor, ancak bu yemek ile sadece 96 farklı hücre kültürü koşulları incelemek değil, aynı zamanda hücre kontraktility ölçmek. Bu bize farklı hücre koşulları ve kontraktil yanıtları incelemek için izin, tek çanak yaklaşımlar çok daha yüksek bir iş hacmi çözümü sunar. Kanser metastazı sırasında, kanser hücreleri birincil siteden ikincil bölgelere seyahat, vücudumuzda hastalık yayılıyor. Kanser hücrelerinin bu metastatik davranışı kansere bağlı ölümün %90'ını oluşturur. Epitel kanseri hücrelerinin daha göçmen ve invaziv fenotip edinmeleri için önerilen mekanizmalardan biri epitel-mezenkimal geçiş, EMT'dir. EMT sırasında, fiziksel davranışlarını değiştirerek, daha göçmen ve invaziv hale gelir. Fiziksel davranıştaki bu değişiklikleri daha iyi anlamak için, tgf-tgf-etkilenen hücrelerin fiziksel davranışfarklı konsantrasyonları ve kuluçka süresi nasıl araştırıldı, biz TGF tarafından EMT indüksiyon ile fare meme bezi hücrelerinin kontraktilite değişiklikleri ölçmek için yumuşak silikon substrat kullanın. Polidimethylsiloxane yaklaşık 0.6 kilopascal en düşük Young modülü ile çok uyumlu bir kauçuk. Bu malzemenin sertliği de sylgard 184.To bir reometre kullandığımız PDMS mekanik özelliklerini ölçmek dahil crosslink ajan farklı konsantrasyonlarda kullanılarak mümkün olabilir. PDMS'nin A ve B parçasını bire bir ağırlık oranında karıştırdıktan ve kür maddesini belirtilen ağırlık yüzdesi ile ekledikten sonra, hazırlanan toplu eti reometre plakasına yükleyin. Mil alanını tamamen kapsayacak şekilde numunenin yeterince yüklenirolduğundan emin olun. Milin, kenarında boş alan kalmadan numuneye tamamen dokunduğundan emin olmak önemlidir. Herhangi bir ekstra örnek dikkatlice kesilmiş ve plaka silinmiş olmalıdır. Her numunenin viskoelastiyetinin son depolama modülünü ve zaman bağımlılığını %0,5 Newsha salınımlı bir shears zorlanmada zaman ve frekans taramaları yaparak ölçün]Bu grafik, polidimetilsiloksanın %0,5'lik uygulanan salınım lı makası ve 100 sıcaklıkla reolojik davranışını ölçmek için yapılan zaman seq testinin bir örneğidir