Name: Küçük Hint firavunları (Herpestes Auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik Marker olarak kullanım Için Iophenoxic asit analogları Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: Keşfedin, küçük Hint firavunlarında oral kuduz aşısı yem alımını doğrulamak için iophenoksik asit analizini. Bu LC-MS/MS yöntemi, serumda biyolojik belirteçleri part per milyar düzeyinde hassasiyetle tespit eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, ABD Tarım Bakanlığı, hayvan ve bitki sağlığı gözetim hizmeti, yaban hayatı Hizmetleri, Ulusal Rabies yönetim programı ve ıDT Biologika (DESSAU-ROSSLAU, Almanya) ' nın intramural araştırma programı tarafından kısmen destekleniyordu.

Tüm prosedürler onaylı araştırma Protokolü QA-2597 altında USDA Ulusal Yaban hayatı araştırma merkezi 'nin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
Not: aşağıdaki protokol, Mongoose serumda metil-iophenoxik asit tespit etmek için analiz prosedürü açıklanmaktadır. Bu yöntem, Mongoose serumda etil-iophenoxik asit analiziyle başlayan yinelemeli bir sürecin son sürümüdür. Etil-iophenoxik asidin ilk değerlendirilmesi sırasında yöntemlere küçük değişiklikler yapılmıştır, aşağıda sunulan son protokol ile sonuçlanır. Temsili sonuçlar her iki yineleme sırasında elde edilen içerir.
1. çözüm ve standartların hazırlanması
<ol><li>Satın Me-ıPA ve et-ıPA.</li>
	<li>Mobil faz A, hazırlamak 1 l 0,1% (v/v) formülik asit su ile birleştirerek 1 ml formik asit 1 L ultra saf su (≥ 18 MΩ). Mobil faz B için hazırlamak 1 l 0,1% (v/v) Asetonitril içinde formik asit (ACN) 1 ml formik asit ile birleştirerek 1 l ACN.</li>
	<li>Seyreltilme için, 200 mL% 0,5 (v/v) trifluoasetik asit (TFA), 1 mL TFA ile 200 mL ACN birleştirerek ACN 'de hazırlayın.</li>
	<li>Yaklaşık 1.000 μg/mL konsantrasyonlarda ACN 'de Me-IPA ve et-ıPA 'nın konsantre ıPA stok çözümlerini hazırlayın.<ol>
<li>Bir mikrodenge yaklaşık 10 mg Me-ıPA ağırlığında ve ± 0,0001 mg kütle kayıt. nicel Me-ıPA 'yı 10 mL sınıf A Volumetrik Flask 45 mL ACN kullanarak transfer. Tüm katılar çözülür ve sonra ACN ile hacim getirmek için 1 dakika sonikat.</li>
		<li>Poli-tetrafloroetilen (PTFE)-astarlı kapaklar ile kehribar 8 mL Cam şişeler her stok ~ 8 mL transfer. Oda sıcaklığında saklayın (RT). Kalan stokları tehlikeli atıklarla aktarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>25x-7 Me-ıPA hisse senedi (Tablo 1) için, yaklaşık 200 μg/ml 'de ACN 'de Me-IPA stokları hazırlayın. Örnek: Me-ıPA ' d a k i 1 mL 'ye, 1.000 μL cam şırıngayı kullanan 5 mL sınıf A Volumetrik Flask ile adım 1.4.2 'den transfer edilir. ACN ile hacmine seyreltin. Stok bir Amber 8 mL Cam şişe PTFE-astarlı kap ile aktarın. RT 'de saklayın.</li>
	<li>Tablo 1' de açıklanan altı ek 25x Me-IPA stoklarını hazırlayın. Her hisse senedi için, bir tekrar pipetör kullanılarak belirtilen hacimleri bir kehribar 8 ml Sarı cam şişede PTFE astarlı kap ile birleştirin. Her stokları RT 'de saklayın.</li>
	<li>25x vekil stok için, adım 1.4.2 ' de hazırlanan konsantre stoktaki yaklaşık 10 μg/mL 'de ACN 'de Me-ıPA 'nın vekil stokları hazırlayın. 0,100 mL 'ye yoğunlaşmış Me-ıPA stokunun 100 μL cam Şırıngayı kullanarak 10 mL sınıf A Volumetrik Flask 'a transferini ve ardından ACN ile hacmine kadar seyreltilmeli.<ol>
<li>Bir Amber 8 ml cam şişe PTFE astarlı kapağı ile ~ 8 mL aktarın. RT 'de saklayın. kalan stokları tehlikeli atıklarla aktarın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tablo 2' de açıklandığı gibi 2 ml vidalı cam otomatik çözünürlüler şişeleri içinde hem analitleri içeren 4X stokları hazırlayın.<ol>
<li>Örneğin, stok 4X-7, 2 ml şişeye hazırlamak için, 0,20 ml 25x-7 Me-IPA stok adım 1,5 ile bir Repeat pipetör 0,5 ml kapasiteli ucu kullanarak ekleyin. 0,5 ml kapasite ucu ile bir tekrar pipetör kullanarak adım 1,7 25x vekil et-IPA stok 0,20 ml ekleyin.</li>
		<li>1 ml kapasiteli uç ile Repeat pipetör kullanarak 0,85 ml ACN ekleyin. Şişeyi güvenli bir şekilde kap ve karıştırmak için 5x 'i ters çevir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Standart eğrisi, Tablo 3' te açıklandığı gibi 2 ml vida-top Otomatik Örnekleyici şişeleri içinde hazırlayın.<ol>
<li>Örneğin, 2 ml 'lik bir şişeye standart 7 (STD 7) hazırlamak için, 0,5 ml kapasiteli uç ile Repeat pipetör kullanarak, adım 1.8.2 ' den 4X-7 stokta 0,20 ml ekleyin. 1 ml kapasiteli uç ile tekrar pipetör kullanarak 0,60 ml Ultra saf dı suyu ekleyin. Şişeyi güvenli bir şekilde kap ve karıştırmak için 5x 'i ters çevir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. numune hazırlama
Dikkat: Bu prosedürü gerçekleştiren personel kuduz öncesi pozlama profilaksisi tam serisi almış ve Federal iş sağlığı belirtilen tıbbi tesis 0,5 IU üzerinde belgelenmiş bir Kuduz antikor titresi var olmalıdır. Personel, ekstraksiyon yaparken her zaman laboratuar kat ve göz koruması takmalıdır. DIKKAT: Sınıf II Biyogüvenlik kabininde 2.3 − 2.6 adımlarını gerçekleştirin.
<ol><li>Her örnek için, 200 − 300 mg NaCl içeren bir 1,5 mL mikrosantrifüjü tüpü hazırlayın. tüpleri 80 pozisyonlu plastik rafa yerleştirin. 2,6 adımda kullanmak için kenara koyun. Not: çok sayıda numune için mikro Kepçe (veya diğer küçük ölçüm cihazı) önerilir.</li>
	<li>Her örnek için, etiket iki 1,5 mL mikrosantrifüjü tüpler: biri "A" ve diğeri "B" olarak. Bir 80-pozisyon plastik raf tüpler düzenleyin.</li>
	<li>Bir sınıf II Biyogüvenlik kabininde serum ekstraksiyonu için gerekli olan aşağıdaki malzemeleri ve ekipmanları yerleştirin: 2,1 ve 2,2 adımda hazırlanan mikrosantrifüjler (raflar içinde), bir Vortex karıştırıcı, 0,5 mL ve 5 mL kapasiteli tekrar pipettör, 100 − 1000 μL hava deplasmanlı 1.000 μL uçları ile pipet, yaklaşık 100 ml 'lik her biri seyreltilmeli ve ultra saf dı suyu ve biyotehlike Atık kabı ile kaplar.</li>
	<li>Biyolojik Güvenlik kabininde serum örneklerini dondurulmuş depodan ve RT 'ye sıcak olarak çıkarın. Vortex, numune almadan önce her serum örneğini karıştırın.</li>
	<li>0,5 ml kapasite ucu ile bir tekrarlama pipetör kullanarak, "a" tüp içine Mongoose serum 0,050 ml dağıtmak ve 25x vekil stok 0,050 ml ekleyin. Sonra 5 ml kapasiteli ucu ile bir tekrar pipetör kullanarak tüp "a" seyreltici 0,950 ml ekleyin. 10 − 15 s için kapak güvenli ve Vortex karışımı.</li>
	<li>8 − 12 s için "A" ve Vortex Mix 3x içine adım 2,1 öncesi tartılmış NaCl dağıtmak. tüp içeren şişe raf dış yüzeyleri silin "A" kullanarak 70% (v/v) isopropanol. Not: numunelerin raf artık Sınıf II biyoemniyet kabininden kaldırılabilir.</li>
	<li>Santrifüjlü tüp "A" at 12.000 x g 1 dak için sulu ve ACN aşamalarını ayırmak için. 100 − 1000 μL hava deplasman pipeti kullanılarak "B" tüpüne üst ACN fazı 0,80 mL pipet. "A" tüpünde kalan solüsyonu tehlikeli atıklarla aktarın ve biyotehlikeli atık kabında boş tüpü atın.</li>
	<li>ACN ve TFA 'dan, 45 °C ' lik su banyosunda N2 gazının nazik akışına sahip "B" den çıkarın.</li>
	<li>Bir tekrar pipettor, 4 − 5 s için Vortex karışımı kullanarak "B" tüpüne ACN 0,250 mL ekleyin ve sonra, tüpün alt kısmındaki sıvıyı toplamak için 12.000 x g 'de kısa (2 − 4 s) santrifüj yapın.</li>
	<li>5 ml kapasite ucu, 4 − 5 s için Vortex karışımı ile bir tekrar pipetör kullanarak "B" tüpüne 0,750 ml Ultra saf dı suyu ekleyin ve ardından numuneyi açıklığa kavuşturmak için 12.000 x g 'de 1 dakika santrifüjün.</li>
	<li>Bir 1.000 μL hava deplasman pipet kullanarak bir Otomatik Örnekleyici şişe süpernatant 0,75 ml aktarın. Biyotehlike atık kabında pipet uçları atın.</li>
	<li>Cap Otomatik Örnekleyici şişeler güvenli ve LC-MS/MS (Bölüm 4) tarafından analiz. "B" tüpünün kalan çözümünü tehlikeli atıklarla aktarın ve boş tüpü biyolojik olarak tehlikeli bir atık kabına atın. Tüm biyotehlikeli atıkların otoklavlama veya yakma ile bertaraf edilmesi.</li>
</ol>3. kalite kontrol örnekleri
DIKKAT: Bölüm 2 ' de açıklanan uyarlanabilir ifadeleri Izleyin.
Not: aşağıdaki yordamda, analiz için gereken minimum kalite kontrolü (QC) örnekleri açıklanmaktadır. Yeterli kontrol Mongoose serum varsa her seviyede çoğaltır önerilir.
<ol><li>200 − 300 mg NaCl içeren dört 1,5 mL mikrosantrifüjü tüpleri hazırlayın. Bir 80-pozisyon plastik raf tüpler düzenleyin.</li>
	<li>Her QC örneği için, etiket iki 1,5 mL mikrosantrifüjü tüpler: biri "A" ve diğeri "B" olarak. Bir 80-pozisyon plastik raf tüpler düzenleyin.</li>
	<li>2,3 adımı yineleyin.</li>
	<li>Dondurulmuş depodan kontrol Mongoose serumu çıkarın ve biyogüvenlik kabine RT sıcak. Vortex, numune almadan önce kontrol serumu karıştırın.</li>
	<li>0,050 ml kontrol Mongoose serumu, 0,5 ml kapasiteli ucu ile tekrar pipetör kullanan dört 1,5-ml "A" tüplerine dağıtır.</li>
	<li>0,5 ml kapasite ucu ile Repeat pipetör kullanarak Tablo 4 ' te belirtildiği gibi dört QC örneğinin her birini güçlendirin. Her QC örneği güvenli ve Vortex karışımı 10 − 15 s için kap.</li>
	<li>Ayıklama yordamını 2.6 − 2.12 adımda açıklandığı şekilde gerçekleştirin.</li>
</ol>4. LC-MS/MS Analizi
<ol><li>LC-MS/MS ' i Tablo 5' te açıklanan tüm parametrelerle yapılandırın. LC-MS/MS 'ye güç verin ve akış hızını 0,800 mL/dak 'a ayarlamadan önce sütunun 70 °C ' ye ulaşmasını sağlar.</li>
	<li>Kalite kontrol örneklerinden ve bilinmeyen örneklerden oluşan her bir toplu iş öncesi ve sonrası standart eğrisi enjekte etmek için veri edinme yazılımında (malzeme tablosu) bir dizi ayarlayın.</li>
	<li>Tablo 5' te listelenen parametreleri kullanarak tüm standartları ve örnekleri enjekte edip MRM iyon kromatogramları kazanın.</li>
	<li>Sıralı tamamlama işleminden sonra LC-MS/MS ' i kapatın ve tüm Otomatik Örnekleyici şişeleri tehlikeli atık olarak atın.</li>
</ol>5. miktar ölçümü
<ol><li>İç standart olarak et-ıPA kullanarak Me-IPA için bağıl konsantrasyonlara karşı göreli yanıtların kalibrasyon eğrisi oluşturmak için veri çözümleme yazılımını kullanın. Me-ıPA (556,6 → 428,7) için nicelik belirteci MRM geçiş gelen göreli yanıtları hesaplamak et-ıPA için MRM geçişi (570,7 → 442,7) bölünmüştür. 1/x ağırlıklı ve orijini yoksayar ikinci sipariş dört derece işlev kullanarak 7 düzeyli kalibrasyon eğrisi oluşturun.</li>
	<li>Aşağıdaki denklemi kullanarak Me-ıPA Serum konsantrasyonu (Cserum) hesaplayın: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59373/59373eq1.jpg" style="opacity: 0.9;"> censtrüman μg/ml ünitelerinde kalibrasyon eğrisinden enstrüman tarafından belirlenen konsantrasyon olduğu, 1,25 seyreltme faktörü <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59373/59373eq2.jpg" style="opacity: 0.9;"> , vfinal son numune hacmi (1,0 mL), ve vserum ml serum hacmi ( 0,050 mL nominal).</li>
</ol>

<ol><li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mongoose+rabies+in+southern+Africa%3A+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Research%22%5BJournal%5D)">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li>
<li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada%2C+West+Indies%2C+and+implications+for+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251(2004).</li>
<li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Veterinary+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li>
<li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Research%22%5BJournal%5D)">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li>
<li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+of+small+Asian+mongoose+%28Herpestes+javanicus%29+against+rabies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li>
<li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29+against+rabies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li>
<li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+ONRAB%C2%AE+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29+in+Puerto+Rico%3A+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Caribbean+Journal+of+Science%22%5BJournal%5D)">Evaluation of ONRAB® bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li>
<li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90(2018).</li>
<li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+%28Procyon+lotor%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li>
<li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Wildlife+Interactions%22%5BJournal%5D)">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li>
<li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+%28Mustela+erminea%29+visiting+control+or+monitoring+stations%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li>
<li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Vertebrate+Pest+Management%22%5BJournal%5D)">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li>
<li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+%28Meles+meles%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li>
<li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li>
<li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua%2C+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li>
<li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li>
<li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li>
<li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li>
<li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li>
<li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li>
<li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Society+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li>
<li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J. Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnowlton%2C+FK+%22Vertebrate+Pest+Control+and+Management+Materials%22">Vertebrate Pest Control and Management Materials</a>. Shumake, S. A., Bullard, R. W. , American Society for Testing and Materials. Philadelphia. 5th Volume. STP 974 141-147 (1987).</li>
<li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li>
<li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li>
<li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li>
<li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+%28Cervus+elaphus+scoticus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li>
<li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+%28Mustela+furo%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li>
<li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li>
<li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+%28Wallabia+bicolor%29%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li>
<li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li>
<li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+%28Mustela+ermine%29+and+weasels+%28Mustela+nivalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li>
<li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li>
<li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Sciences+and+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li>
<li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li>
<li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+by+LC%2FESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li>
<li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+%28Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid%29+in+small+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li>
<li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li>
<li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Avian+and+Exotic+Pet+Medicine%22%5BJournal%5D)">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li>
<li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Xenobiotica%22%5BJournal%5D)">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li>
<li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHilton%2C+HE+%22Mongooses%3A+their+natural+history%22">Mongooses: their natural history</a>. , Oliver and Boyd. Edinburgh and London. (1967).</li>
<li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStevens%2C+CE+%22Comparative+physiology+of+the+vertebrate+digestive+system.+Second+edition%22">Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (1995).</li>
<li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Oral+rabies+vaccination+draft+operations+manual%22">Oral rabies vaccination draft operations manual</a>. , USDA APHIS Wildlife Services. (2009).</li>
</ol>

Yazarlar AV ve SO oral kuduz aşı yem üreticisi fulltime çalışanları vardır.

LC-MS/MS yöntemi, Mongoose serumda Me-IPA ve et-ıPA doğru ölçmek için birden fazla reaksiyon izleme seçicilik kullanılan çalışmalar için geliştirilmiştir. MS/MS algılamanın seçiciliği Ayrıca, analizinden önce serum proteinleri çökeltmek için sadece Asetonitril bağlı basit bir temizleme protokolü için izin.
İophenoxic asitleri ACN içinde çözünür ama neredeyse suda çözünmez. ACN ekstraksiyon su dışlamak için, sodyum klorür açık bir su zorlamak için eklendi: sulu (serum) faz iyonik gücünü artırar...

Kuduz virüsü (RABV) bir negatif anlamda tek telli Lyssavirus, ve siparişler Carnivora ve Chiroptera içinde çeşitli yaban hayatı rezervuar türler arasında dolaşır. Firavun birden çok türü RABV rezervuar ve küçük Hint Firavun (Herpestes auropunctatus) Porto Riko ve Batı yarımküredeki diğer Karayip Adaları tek rezervuar1,2,3 . Yaban hayatı rezervuarında RABV sirkülasyonunun kontrolü genellikle oral kuduz aşısı (ORV) stratejisiyle gerçekleştirilir. ABD 'de (ABD), bu yönetim etkinliği USDA/APHIS/yaban hayatı Hizmetleri Ulusal Rabies yönetim programı (NRMP)4tarafından koordine edilir. Şu anda hiçbir yaban hayatı ORV programı Porto Riko bulunmaktadır. Kuduz aşıları ve Mongooses için çeşitli yem türleri içine araştırma Mongooses için bir ORV programı düşündürmektedir umut verici sonuçlar ile gerçekleştirilmiştir mümkündür5,6,7,8.
ORV etkisini izleme genellikle RV antikor seroprevalasyonu bir değişiklik değerlendirmek içerir hedef türler tarafından yem alımı tahmin dayanır. Ancak, bu strateji aktif bir yaban hayatı ORV programları veya RV enzootik ve arka plan seviyeleri rabv nötralize antikorlar (rvna) rezervuar türlerinde mevcut olan alanlarda zorlu olabilir. Bu gibi durumlarda, yem veya dış yem matrisinde yer alan bir biyomarker yararlı olabilir.
Çeşitli biyolojik belirteçleri rakunlar (Procyon rakun)9,10, stoats (Mustela Ermin)11,12, Avrupa porsuk (dahil olmak üzere çok sayıda türler, yem alımı izlemek için kullanılmıştır Meles meles) 13, Wild yaban domuzu (sus Scrofa)14, küçük Hint Mongooses15 ve çayır köpekleri (cynomysludovicianus)16,17, diğerleri arasında. ABD 'de, operasyonel ORV yemler genellikle yem Matrix üzerinde% 1 tetrasiklin biyomarker içerir, Bait alımını izlemek için18,19. Ancak, tetrasiklin kullanımı dezavantajları çevreye antibiyotik dağılımı üzerinde büyüyen bir endişe ve tetrasiklin tespiti genellikle invazif olduğunu, diş çıkarma veya hayvan imha gerektiren kemik elde etmek için örnekleri20. Rhodamine B çeşitli dokularda bir marker olarak değerlendirildi ve saç ve bıyık,10,21ultraviyole (UV) ışık ve floresans kullanılarak tespit edilebilir.
Iophenoxic asit (IPA), Coyotes (Canis Latrans)22, Arctic Fox (Vulpes Kar kekliği)23, Red Fox (Vulpes vulpes)24, rakunlar yem tüketimi değerlendirmek için kullanılan bir beyaz, kristalin tozu 9 , 25, yaban domuzu14, kırmızı geyik (Cervus elaphus scoticus)26, Avrupa porsuk12 ve yaban gelinciği (M. furosu)27, diğer birçok memeli türler arasında. IPA saklama süreleri bazı Keseliler28,29, en az 26 hafta içinde toynaklı26 ve üzerinde 52 hafta içi köpekler (Canis lupus familiaris)30daha az iki haftadan türler tarafından değişir. Bekletme süreleri de doza bağımlı31olabilir. İophenoxic asit serum albümin güçlü bağlar ve tarihsel kan iyot seviyeleri32ölçümü ile tespit edildi. Bu dolaylı yaklaşım yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) yöntemleri ile UV algılama33ile iophenoxic asit konsantrasyonlarını doğrudan ölçmek için, ve sonunda sıvı kromatografi ve kütle spektrometresi (LCMS) ile tespit edildi 34,35. Bu çalışmada, iophenoxic asidin iki analogunu ölçmek için birden fazla reaksiyon izleme (MRM) kullanan, tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi ile son derece hassas ve seçici bir sıvı kromatografi geliştirilmiştir. Amacımız bu LC-MS/MS yöntemini 2-(3-hidroksi-2 ' nin işaretleme yeteneğini değerlendirmek için kullanmak 4, 6-triiodobenzyl) propanoik asit (metil-IPA veya Me-ıPA) ve 2-(3-hidroksi-2, 4, 6-triiodobenzyl) butanoik asit (etil-IPA veya et-ıPA) ve bir ORV içinde teslim edildiğinde esir Mongooses için yem.
Mongooses, ticari olarak kullanılabilir füme sosis ve balık yağı ile kaplandı kafes tuzakları yakalanan canlı. Mongooses bireysel 60 cm x 60 cm x 40 cm paslanmaz çelik kafeslerde yer aldı ve bir günlük rasyon besleniyor ~ 50 g ticari kuru kedi maması, ticari olarak kullanılabilir Tavuk uyluk ile haftada iki kez tamamlayıcı. Su mevcut reklam Isteğe bağlıoldu. Biz iki türevleri IPA, etil-ipa ve metil-IPA, plasebo ORV baits içinde esir Mongooses teslim. Tüm yemler, toz tavuk yumurtası ve jelatin (malzeme tablosu) içeren bir dış kaplama (bundan sonra "yem matris") ile bir 28 mm x 20 mm x 9 mm folyo blister paketinden oluşmuştur. Baits içeren 0,7 mL su veya ıPA türevi ve ağırlığı yaklaşık 3 g, hangi ~ 2 g dış yem matris oldu.
Biz üç konsantrasyonda 16 esir Mongooses et-IPA teklif:% 0,14 (2,8 mg et-ıPA ~ 2 gr yem matrisinde; 3 erkek [m], 3 kadın [f]),% 0,4 (2,8 mg et-ıPA, 0,7 mL blister paket hacminde; 3M, 3F) ve% 1,0 (7,0 mL blister paket hacminde 0,7 mg etil-ıPA; 2m , 2F). Toplam doz 2,8 mg bir doz oranına karşılık gelir 5 mg/kg27,36 ve bir ortalama Firavun ağırlığı dayanmaktadır 560 g Porto Riko. Biz seçilmiş 1% en yüksek konsantrasyon olarak araştırma bazı Biyomarkörler için tat kaçınma ortaya çıkabilir konsantrasyonlarda > 1% bazı türler37. Biz sadece% 1 doz blister paketi olarak flokülasyon yeterli çözücü içinde çözünmesi çözünen engelledi eşit yem matrisine dahil edilecek. Bir kontrol grubu (2m, 1F) steril su ve hiçbir ıPA ile dolu yemler aldı. Günlük bakım rasyonlarının beslenmesini sırasında veya öncesinde sabah (~ 8 a.m.) Mongooses için yemler teklif ettik. Yem kalıntıları yaklaşık 24 saat sonra çıkarıldı. Biz tedavi öncesi kan örnekleri toplanan, bir gün sonrası tedavi ve daha sonra haftalık 8 hafta sonrası tedavi. Biz Isoflurane gaz inhalasyon tarafından anestezize Mongooses ve kadar toplanan 1,0 tüm kan ml kranial Vena Cava damara tarafından, yaban gelinciği38için açıklandığı gibi. Tüm kan örneklerini santrifüvlüyor, sera 'yı kriyovilere aktardık ve analiz olana kadar-80 °C ' de saklıyoruz. Tüm hayvanlar, tekrarlanan kanın etkilerini en aza indirmek için tüm zaman dilimlerinde örneklenmiş hayvanların sağlığını çeker. Kontrol hayvanları 0 gün, daha sonra haftada 8 hafta sonrası tedavi için örneklenen.
Bana-IPA üç konsantrasyonda teslim: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) ve 0,14% (2,8 mg), tüm yem matrisine dahil, 2 erkek ve 2 kadın tedavi grubu başına. İki erkek ve iki kadın steril su ve hiçbir ıPA dolu yemler aldı. Yem teklif süreleri ve Firavun anestezi yukarıda açıklanmıştır. Biz 1 gün tedavi öncesi kan örnekleri toplanan ve sonra haftalık 4 hafta sonrası tedavi.
Serum ıPA konsantrasyonlarının farklı tedavi grupları için normallik ve tahmini araçlar için test ettik. Bir doğrusal karma modeli, bireyler arasında havuza alınan ortalama serum et-ıPA konsantrasyonlarını karşılaştırmak için kullandık. Yem türü (matris/blister paketi) deneysel gün ek olarak sabit bir etkiye sahip, hayvan KIMLIĞI rastgele bir etkisi iken. Tüm prosedürler ortak istatistiksel yazılım (malzeme tablosu) kullanılarak çalıştırılmıştı ve önemi α = 0,05 olarak değerlendirildi.

<table><tbody><tr><td>Asetonitril, Optima sınıfı</td><td>Fisher</td><td>A996</td><td></td></tr><tr><td>Analitik terazi</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS204</td><td></td></tr><tr><td>C18 kolonu, 2,1 x 50 mm, 2,5-&mikro; m parçacık boyutu</td><td>Waters Corp.</td><td></td><td></td>186003085</tr><tr><td>ESI Kaynak</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>G1958-65138</td><td></td></tr><tr><td>Etil-iyofenoksik asit, %97</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>N/A</td><td>Lot MKBP5399V</td></tr><tr><td>Formik asit, LC/MS sınıfı</td><td>Fisher</td><td>A117</td><td></td></tr><tr><td>LCMS yazılımı</td><td>Agilent</td><td>MassHunter Veri Toplama ve Kantitatif Analiz</td><td></td></tr><tr><td>Metil-iyofenoksik asit, %97 (a/a)</td><td>PR EuroChem Ltd.</td><td>N/A</td><td>Lot PR0709514717</td></tr><tr><td>Mikroanalitik terazi</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP6U Mikrosantrifüj</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>5415C</td><td></td></tr><tr><td>MS/MS</td><td>Agilent</td><td>G6470A</td><td></td></tr><tr><td>N-EVAP</td><td>Organomation</td><td>115</td><td></td></tr><tr><td>Oral Kuduz Aşısı Yemleri</td><td>IDT Biologika, Dessau Rossleau, Almanya</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Propil-iyofenoksik asit, %99 (a/a)</td><td>PR EuroChem Ltd.</td><td>N/A</td><td>Çok PR100612108RR</td></tr><tr><td>Tekrarlama pipetleyicisi</td><td>Eppendorf</td><td>M4</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı otomatik numune alma cihazı flakon kapakları, PTFE astarlı</td><td>Agilent</td><td>5190-7024</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür, Sertifikalı ACS sınıfı</td><td>Fisher</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>İstatistiksel Yazılım Paketi</td><td>SAS Enstitüsü, Cary, Kuzey Karolina, ABD</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit, %</td><td>99Alfa Aesar</td><td>L06374</td><td></td></tr><tr><td>UPLC</td><td>Agilent</td><td>1290 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>Glas-Col</td><td>099A PV6</td><td></td></tr><tr><td>0,2 mL pipetleyici uçları</td><td>Eppendorf</td><td>30089.413</td><td></td></tr><tr><td>0,5 mL pipetleyici uçları</td><td>Eppendorf</td><td>30089.421</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Fisher</td><td>14-666-325</td><td></td></tr><tr><td>1250-& mikro; L kapasiteli pipet uçları</td><td>GeneMate</td><td>P-1233-1250</td><td></td></tr><tr><td>1 mL pipet uçları</td><td>Eppendorf</td><td>30089.43</td><td></td></tr><tr><td>2 mL amber vidalı otomatik numune alma cihazı şişeleri</td><td>Agilent</td><td>5182-0716</td><td></td></tr><tr><td>5 mL pipet uçları</td><td>Eppendorf</td><td>30089.456</td><td></td></tr><tr><td>80 konumlu mikrosantrifüj tüp rafı</td><td>Fisher</td><td>05-541-2</td><td></td></tr><tr><td>8 mL amber şişeler ile PTFE kaplı kapaklar</td><td>Wheaton</td><td>224754</td><td></td></tr><tr><td>%70 (h/h) izopropanol</td><td>Fisher</td><td>A459</td><td></td></tr><tr><td>100-1000 & mikro; L hava deplasmanlı pipet</td><td>Eppendorf</td><td>ES-100</td><td></td></tr></tbody></table>

küçük hint firavunları (herpestes auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik marker olarak kullanım için iophenoxic asit analogları analizi

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

Küçük Hint firavunkaz (Herpestes auropunctatus) Porto Riko kuduz VIRÜSÜ (rabv) bir rezervuar ve hayvan kuduz olguların% 70 üzerinde oluşur yıllık bildirdi. Yaban hayatı rezervuarında RABV sirkülasyonunun kontrolü genellikle oral kuduz aşısı (ORV) stratejisiyle gerçekleştirilir. Şu anda hiçbir yaban hayatı ORV programı Porto Riko bulunmaktadır. Sözlü kuduz aşıları ve Mongooses için çeşitli yem türleri içine araştırma umut verici sonuçlar ile yapılmıştır. ORV başarısı izleme genellikle RABV nötralize antikorlar (RVNA) sonrası aşılama bir değişiklik değerlendirmek içerir hedef türler tarafından yem alımı tahmin dayanır. Bu strateji aktif bir yaban hayatı ORV programı veya rabv enzootik ve rvna arka plan seviyeleri rezervuar türlerinde mevcut olan alanlarda yorumlamak zor olabilir. Bu gibi durumlarda, aşıyla veya yem matrisine dahil edilen bir biyomarker yararlı olabilir. Biz 16 esir Mongooses plasebo ORV yemler içeren etil-iophenoxic asit (et-IPA) konsantrasyonlarda 0,4% ve 1% yem içinde ve 0,14% dış yem matrisinde. Ayrıca, dış yem matrisinde% 0,035,% 0,07 ve% 0,14 konsantrasyonlarda metil-iophenoxik asit (Me-IPA) içeren 12 esir Mongooses ORV yemler teklif ettik. Biz yem teklif önce bir serum örnek toplanan ve daha sonra haftada sekiz hafta sonrası teklif için. Sera 'dan Asetonitril içine ve sıvı kromatografi/kütle spektrometresi kullanılarak ölçülmüş ıophenoxic asitleri ayıklandık. Et-IPA veya Me-ıPA için sera sıvı kromatografi-kütle spektrometresi ile incelendi. Sırasıyla et ve Me-IPA için en az sekiz ve dört hafta yeterli işaretleme yeteneği bulduk. Her iki ıPA türevleri Mongooses ORV yem alımı alan değerlendirilmesi için uygun olabilir. Mongoose serumunda işaretçinin uzun ömürlü olması nedeniyle, ardışık değerlendirmeler sırasında aynı ıPA türevlerini kullanarak dikkat çekmelidir.

Me-ıPA analizinden temsil iyon kromatogram Şekil 1' de sunulmaktadır. Kontrol Mongoose serum (Şekil 1a) et-IPA (vekil analit) ve Me-IPA yokluğunda belirtilen bekletme süresi tutma süresini gösterir. Kalite kontrol örneği (Şekil 1B), Me-IPA ' l e l i-ipa temel ayrımı ve Me-IPA için nicelik belirteci ve niteleyici geçişleri gösterir. Şekil 1C , 33,5 μg/ml Me-IPA olarak göz...

Biz bir biyomarker olarak etil veya metil iophenoxic asit ile esir Mongooses plasebo oral kuduz aşı yemleri teklif ve tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi ile yeni bir sıvı kromatografi kullanılarak doğrulanmış yem alım.

Küçük Hint firavunları (Herpestes Auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik Marker olarak kullanım Için Iophenoxic asit analogları Analizi

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

Firavun serumundaki iofenoksik asidi tespit etmek ve ölçmek için bir prosedür belirledik. Sonuçlar, iofenoksik asit in türlerde beta alımını doğrulamak için biyolojik bir belirteç olarak kullanılabilir öneririz. Bu yöntemin en büyük avantajı, protein çökeltme tekniğini basit bir şekilde kullanarak, milyar seviyelerinde iofenoksik asit analoglarının ölçülmesine olanak sağlamasıdır.Mobil faz A için, bir mililitre formik asidi bir litre ultra saf su yla birleştirin. Mobil faz B için, bir mililitre formik asidi bir litre asetonitril ile birleştirin. Dilüent için, bir mililitre trifloroasetik asidi 200 mililitre asetonitril ile birleştirin.Daha sonra, mikro denge üzerinde yaklaşık 10 miligram metil-IPA tartın ve kütleyi artı veya eksi 0001 miligrama kaydedin. Metil-IPA'yı 4-5 mililitre asetonitril kullanarak 10 mililitrelik a volumetrik bir şişeye nakledin. Sonicate bir dakika için tüm katı çözünür ve daha sonra asetonitril ile hacim getirmek.Ptfe kaplı kapaklı sekiz mililitrelik kehribar cam şişelere her stoğun yaklaşık sekiz mililitresini aktarın ve numuneleri oda sıcaklığında saklayın. Daha sonra, kalan stoktehlikeli atık aktarın. 25X stok için yedi metil-IPA stok mililitre başına ya

analysis-iophenoxic-acid-analogues-small-indian-mongoose-herpestes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, enfekte fare beyin dokusunda kuduz virüsü antijeni tespiti için immünohistokimya boyamayı göstermektedir. Süreç, deparafinizasyon ve alkol tedavisini, ardından antijen erişilebilirliğini artırmak için proteolitik tedaviyi içerir. İmmünohistokimya boyama, doku bölümünde kuduz antijenlerinin varlığını doğrulayan kırmızı çökeltileri ortaya çıkarır.

Kuduz Virüsü Antijenlerinin Saptanmasına Yönelik Bir İmmünohistokimya Boyaması

Doğrudan hızlı immünhistokimyasal test (DRIT), kuduz tanısı için doğrudan floresan antikor (DFA) testine alternatif olarak tanınan hayvan sağlığı ve Dünya Sağlık Örgütü (OIS/WHO) için bir dünya organizasyonu sunmaktadır. Bu test, ışık mikroskobu kullanarak beyin gösterimleri üzerine yaklaşık 1 saat içinde gerçekleştirilebilecek alan tabanlı uygulamalar için izin verir.

Doğrudan hızlı Immünhistokimyasal testi kullanarak gelişmiş kuduz gözetimi

Bir Pan-Lyssavirus iç içe Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu özellikle tüm bilinen lyssaviruses algılamak için geliştirilmiştir. Farklı hayvan türlerinin kuduz beyin örneklerini kullanarak doğrulama Bu yöntemin altın standart floresan antikor testi için bir duyarlılık ve özgüllük eşdeğer olduğunu gösterdi ve rutin kuduz tanısı için kullanılabilir.

Lyssaviruses tespiti için evrensel Iç Içe Ters transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu değerlendirilmesi

Bu protokolün amacı, kuduz testi için tatmin edici doku örnekleri elde etmek için küçük ve büyük hayvanlarda güvenli Otopsi teknikleri göstermektir.

Büyük ve küçük hayvanlarda kuduz Necropsy teknikleri

Burada kuduz aşılarında immünojenik glikoprotein içeriğini belirlemek için dolaylı bir ELISA sandviç immünoyakalama açıklar. Bu test glikoprotein düzelticileri tanıyan nötralize monoklonal antikor (mAb-D1) kullanır. Üretim sırasında aşı potens tutarlılığını takip etmek için in vivo NIH testine alternatiftir.

In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için

Beyin biyopsisi örneklemesinden son yoruma kadar hızlı immünokromattografik tanı testi (RIDT) ile alan koşullarında hayvan kuduzlarının postmortem tanısı için tam bir protokol salıyoruz. Ayrıca moleküler analiz ve viral genotipleme için cihazı kullanarak daha fazla uygulama açıklar.

Field Postmortem Kuduz Hızlı İmmünromatografik Tanı Testi Kaynak Sınırlı Ayarlar için Diğer Moleküler Uygulamalar ile

Bu protokol, in vitro transkripsiyon kullanarak çeşitli sığır beyin anatomik yapıları içindeki kuduz virüsü nükleoprotein (N) gen kopya numarasını belirlemek için qRT-PCR tabanlı bir yaklaşım sunar.

Çeşitli Sığır Beyin Yapılarında Kuduz Virüsünün Nicelliği

Bu yöntem, kuduz antijeninin, önceden belirlenmiş bir gecikmeden sonra pulsatil salınımı sağlayan yapısal ve malzeme özelliklerine sahip biyolojik olarak parçalanabilir polimerik mikropartiküllere kapsüllenmesini açıklar. Partikül çekirdeğinden alınan antijenin enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) değerlendirmesi, partikül üretimi yoluyla bozulmamış trimerik kuduz virüsü glikoproteininin varlığını doğrulamaktadır.

Kuduz Antijenini Kapsülleyen Pulsatil Polimerik Mikropartiküllerin İmalatı

Burada, nanopor teknolojisini kullanarak kuduz virüsü (RABV) genomlarını karakterize etmek için hızlı ve uygun maliyetli bir iş akışı sunuyoruz. İş akışı, kuduz kontrol önlemlerine rehberlik etmek için dolaşımdaki RABV soyları ve bunların bölgesel filogeniler içindeki yerleşimleri hakkında bilgi sağlayarak yerel düzeyde genomik bilgili sürveyansı desteklemeyi amaçlamaktadır.

Nanopor Teknolojisi Kullanılarak Kuduz Virüsünün Hızlı Karakterizasyonu için Tüm Genom Dizilimi

Bu makalenin amacı, kuduza özgü IgG ve IgM antikorlarının saptanmasında kuduz indirekt floresan antikor testinin kullanımını incelemektir.

Kuduz IgG ve IgM Antikorlarının Kuduz İndirekt Floresan Antikor Testi Kullanılarak Saptanması

Bu protokol, bazı kuduz olmayan lizavirüsler ve lagomorflar için test performansını iyileştirmek için primer dizileri ve formülasyonlardaki güncellemeler de dahil olmak üzere, doku toplamadan sonuç yorumlamaya kadar pan-lizavirüs LN34 gerçek zamanlı ters transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) testini gösterir. Ayrıca, tek kuyulu LN34 çoğullanmış (LN34M) formatı için tahlil kurulumunu da gösteriyoruz.

Güncellenmiş, Çoğullanmış LN34 Gerçek Zamanlı Ters Transkripsiyon-Polimeraz Zincir Reaksiyonu Testi ile Hayvanlarda Kuduz Postmortem Tanısı

Keşfedin, küçük Hint firavunlarında oral kuduz aşısı yem alımını doğrulamak için iophenoksik asit analizini. Bu LC-MS/MS yöntemi, serumda biyolojik belirteçleri part per milyar düzeyinde hassasiyetle tespit eder.

Küçük Hint firavunları (Herpestes Auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik Marker olarak kullanım Için Iophenoxic asit analogları Analizi (Video) | JoVE Journal

Küçük Hint firavunları (Herpestes Auropunctatus) sera bir oral kuduz aşılama biyolojik Marker olarak kullanım Için Iophenoxic asit analogları Analizi

Daha fazla video keşfet