Name: Farelerde Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Caecum Mikrobiyotasında Ki Değişikliklerin Araştırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Öğrenin, farelerde travmatik beyin hasarı sonrası caecum mikrobiyotasındaki değişiklikleri incelemek için lateral sıvı perküzyon yöntemini. Bu protokol, bağırsak-beyin ekseni etkileşimlerini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Yapılan tüm işlemler Zhejiang Üniversitesi Deneysel Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Cerrahide kullanılan tüm alet ve malzemeler sterildir. TBI proceudre yaklaşık 20 dakika sürer.
1. Hayvan bakımı
<ol><li>Bu deneyde 5-6 haftalık erkek C57BL/6J fareler (20-25 g ağırlık) kullanın.</li>
	<li>Fareleri 12 saat açık/karanlık bir döngüde koruyun ve yiyecek ve su reklamı libitum aldıklarından emin olun. Çalışma boyunca hem sham hem de TBI gruplarına aynı miktarda yiyecek ve su sağlayın.</li>
	<li>Hayvan ağrı ve rahatsızlık en aza indirmek için tüm çabayı gösterin.</li>
</ol>2. Travmatik beyin hasarıin indüksiyonu
<ol><li>Anestezi için Ketamin (80-100 mg/kg)/Xylazine (10 mg/kg) IP enjekte edin. Bir göz refleksi veya ağrı refleksi kullanarak anestezi derinliğini test edin. Gözlerin kurumasını engellemek için yapay gözyaşı veya yağlayıcı göz merhemi kullanın.</li>
	<li>Anesteziden sonra fareyi yatkın bir konuma getirin. Ameliyat sırasında ve TBI'den sonra 30 dakika boyunca sıcaklığı 37 °C'de tutmak için sıcaklık kontrollü bir ısıtma yastığı kullanın.</li>
	<li>Kesi bölgesinin saçını tıraş edin.</li>
	<li>Üç alternatif scrubs kullanarak% 70 etanol ile kafa derisi dezenfekte, sonra bir sagital düzlemde kafa derisi eğim.</li>
	<li>Her iki taraftaki kesiği geri çekmek ve periostu biraz ayırmak için forseps kullanın.</li>
	<li>Kafatasının sağ parietal bölgesinde, orta hattan 2 mm uzaklıkta bir daire (3 mm çapında) çizmek için bir işaretleyici kullanın.</li>
	<li>Kafatasını elektrikli matkapla delin. Durayı hasar görmemesi için bu adımın dikkatle çalıştırıldığından emin olun.</li>
	<li>Kemik kapağını çıkarın ve küçük bir kemik penceresini (3 mm çapında) ortaya çıkarın.</li>
	<li>Kraniyotomi üzerine plastik bir yaralanma kanül (iç çap = 2,5 mm, uzunluk = 8 mm) yerleştirin ve bir diş akrilik kullanarak kafatasına kanül çimento.</li>
	<li>Kanülde kabarcık olmadığından emin olmak için bir şırınga (5 mL) kullanarak kanülünü steril %0,9 NaCl (normal tuzlu) ile doldurun.</li>
	<li>Osiloskopve amplifikatör açın ve yanal sıvı perküsyon yaralanması (LFPI) cihazın yüksek basınç tüpü hava kabarcıkları ücretsiz olduğundan emin olun. Sabit bir sinyal verene kadar yaklaşık 10 darbe vererek cihazı test edin. Yaklaşık 2,0 atm darbe yoğunluğuna ulaşmak için sarkaç başlangıç konumunun açısını ayarlayın.</li>
	<li>Yaralanma kanülünü LFPI cihazına bağlayın. Tetiği çekerek ve sarkaç bırakarak beyin hasarına neden olur. Daha sonra, bir darbe almak ve tüm kapalı sıvı dolu tüp sistemi ile dura iletin.</li>
	<li>Aynı cerrahi işlem ile sahte grupta fareler çalıştırın. LFPI'yi gerçekleştirmeyin.</li>
</ol>3. Ameliyat sonrası tedavi
<ol><li>Beyin hasarı na neden olduktan sonra, plastik kanül kaldırmak ve kesi dikiş. Ameliyat sırasında buprenorfin (2mg/kg) SQ veya IP ve bundan sonra her 6-12 saat üç gün boyunca uygulayın.</li>
	<li>Fareyi bir ısıtma yastığının üzerine ambulatuar olana kadar yerleştirin. Anestezik resüsitasyonu hızlandırmak için ısıtma yastığının sıcaklığını 37 °C'ye ayarlayın.</li>
	<li>Fareyi kafese geri koyun ve yiyecek ve su reklamı libitumuygulayın.</li>
</ol>4. Laparotomi ve caecum dan örnek toplama
<ol><li>Fareleri CO2 ile ötenazi ve ardından ilgili zaman noktalarında servikal çıkış. NOT: Bu deneyde, seçilen zaman noktaları bağırsak mikrobiyotasının dinamik evrimini analiz etmek için 1 saat, 6 saat, 1 d, 3 d ve 7 d travma sonrası beyin hasarıidi.</li>
	<li>Karın yüzeyinden saç çıkarın. Karın bölgesini %70 etanol ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Farenin üzerine steril bir perde yerleştirin. Alt karın orta hattından bir kesi yapın, erkek farelerde prepuce hemen üzerinde.</li>
	<li>Bağırsaklar maruz kaldıktan sonra, çekum bulmak ve yavaşça diğer bağırsak yollarından ayırdı. Dişli veya keskin forceps ile çekum kavramakaçının. Serasyonlu Adson forceps gibi atravmatik forceps kullanın.</li>
	<li>Keskin makas ile caecum kesin.</li>
	<li>Caecum içeriğini steril pansuman üzerine elle ayıklayın ve içindekileri 1,5 mL mikrosantrifüj tüpte saklayın.</li>
	<li>Mikrobiyom analizine kadar caecum içeriğini -80 °C'de saklayın.</li>
</ol>5. DNA çıkarma ve 16S-rDNA dizilemesi ve veri analizi
<ol><li>
DNA'nın dışkıdan izolasyonu NOT: Bu deney için ticari olarak kullanılabilen BIR DNA izolasyon kiti(Malzeme Tablosu)kullanılmıştır.<ol>
<li>2 mL mikrosantrifüj tüp içinde dışkı 300 mg kazımak ve buz üzerinde tüp yerleştirmek için bir neşter kullanın.</li>
		<li>Her numuneye 1 mL inhibe arabelleği ekleyin. Girdap sürekli olarak 1 dk veya dışkı numunesi iyice homojenleşene kadar.</li>
		<li>Dışkı parçacıklarını peletlemek için numuneyi maksimum hızda 1 dakika santrifüj edin.</li>
		<li>Yeni bir 2 mL mikrosantrifüj tüp içine proteinaz K Pipet 2 μL. 5.1.3 adımdan proteinaz K içeren 2 mL mikrosantrifüj tüpüne süpernatantın 600 μL'si. Daha sonra, 15 s için Tampon 1 ve girdap 600 μL ekleyin.</li>
		<li>Numuneyi 70 °C'de 10 dk kuluçkaya yatırın.</li>
		<li>Lysate'ye %100 etanol (1:1 oran) ekleyin ve girdap ile karıştırın. Tüp kapağının içinden damlaları çıkarmak için kısa bir süre maksimum hızda santrifüj.</li>
		<li>Spin sütununa 600 μL lysate uygulayın. 1 dk. Maksimum hızda santrifüj. Bu adımı bir kez daha tekrarlayın. Ardından, sütunu yeni bir 2 mL toplama tüpüne aktarın.</li>
		<li>Dönüş sütununa açın ve 500 μL Arabellek 2 ekleyin. 1 dk. Maksimum hızda santrifüj sütunu çıkarın ve yeni bir 2 mL toplama tüpüne yerleştirin.</li>
		<li>Sütuna 500 μL Arabellek 3 ekleyin. 3 dk. Akış-through atın maksimum hızda santrifüj. Arabellek 3'ün tamamen eluted olduğundan emin olmak için santrifüj işlemini bir kez tekrarlayın.</li>
		<li>Spin kolonu yeni bir tüp 2 mL toplama tüpüne ve pipet 200 μL Tampon 4'ü doğrudan membrana yerleştirin. Oda sıcaklığında 1 dakika (RT) için kuluçka, sonra DNA'yı ejeketmek için 1 dakika maksimum hızda santrifüj.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
16S-rDNA dizilimi ve veri analizi
	<ol>
<li>Amplikonoluşturmak için 20-30 ng DNA kullanın.</li>
		<li>Bakteri 16S rDNA V3 ve V4 hiperdeğişken bölgeleri sınırsınırları nispeten korunmuş bölgeler için tasarlanmış ticari olarak kullanılabilir astar kullanın. Bu çalışmada "CCTACGGRRBGBGCACaGKVRVGAAT" dizisini içeren ileri astarlar ve "GGACTACNVGGGTWTCTAATCC" dizisini içeren ters astarlar kullanılmıştır.</li>
		<li>Bir tüpe 2,5 μL Tampon 1, 2 μL dNTPs, her astar1 μL, 0,5 μL DNA polimeraz ve 20 ng şablon DNA ekleyerek PCR reaksiyonları karışımını yapın. Reaksiyon sistemini 25 μL'ye ayarlamak için ddH2O'yu kullanın.</li>
		<li>PCR reaksiyon parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: 94 °C'de ön denatürasyonu bir kez 3 dk gerçekleştirin. Denatürasyon 5 s için 94 °C'de, 57 °C'de 90 s için anneal yapın, 72°C'de 10 s'de uzatın ve bu 24x'i tekrarlayın.</li>
		<li>Pe250/300 eşleştirilmiş uçlu sıralamayı üreticinin talimatına göre gerçekleştirin ve 16S rRNA veri analizi için QIIME veri analizi paketini kullanın. NOT: Bu deneyde DNA dizilimi ve veri analizi öncelikle profesyonel bir sıralama şirketi tarafından yapılmıştır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cheng, P., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCheng%2C+P+%22Trends+in+traumatic+brain+injury+mortality+in+China%2C+2006-2013%3A+A+population-based+longitudinal+study%22">Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study</a>. 14, e1002332(2017).</li>
<li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+integrated+approaches+to+improve+prevention%2C+clinical+care%2C+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li>
<li>Gaddam, S. S., Buell, T., Robertson, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+manifestations+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Systemic manifestations of traumatic brain injury.</a> Handbook of Clinical Neurology. 127, 205-218 (2015).</li>
<li>Kabadi, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li>
<li>Fung, T. C., Olson, C. A., Hsiao, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+microbiota%2C+immune+and+nervous+systems+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Interactions between the microbiota, immune and nervous systems in health and disease.</a> Nature Neuroscience. 20, 145-155 (2017).</li>
<li>Collins, S. M., Surette, M., Bercik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+the+intestinal+microbiota+and+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The interplay between the intestinal microbiota and the brain.</a> Nature Reviews Microbiology. 10, 735-742 (2012).</li>
<li>Cryan, J. F., Dinan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind-altering+microorganisms%3A+the+impact+of+the+gut+microbiota+on+brain+and+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mind-altering microorganisms: the impact of the gut microbiota on brain and behaviour.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13, 701-712 (2012).</li>
<li>Nicholson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+Traumatic+Brain+Injury+Alters+the+Gastrointestinal+Microbiome+in+a+Time-Dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Moderate Traumatic Brain Injury Alters the Gastrointestinal Microbiome in a Time-Dependent.</a> Shock. , (2018).</li>
<li>Houlden, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+injury+induces+specific+changes+in+the+caecal+microbiota+of+mice+via+altered+autonomic+activity+and+mucoprotein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Brain injury induces specific changes in the caecal microbiota of mice via altered autonomic activity and mucoprotein production.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 57, 10-20 (2016).</li>
<li>Treangen, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Brain+Injury+in+Mice+Induces+Acute+Bacterial+Dysbiosis+Within+the+Fecal+Microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Traumatic Brain Injury in Mice Induces Acute Bacterial Dysbiosis Within the Fecal Microbiome.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2757(2018).</li>
<li>Alder, J., Fujioka, W., Lifshitz, J., Crockett, D. P., Thakker-Varia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion%3A+model+of+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion: model of traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2011).</li>
<li>Thompson, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion+brain+injury%3A+a+15-year+review+and+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion brain injury: a 15-year review and evaluation.</a> Journal of Neurotrauma. 22, 42-75 (2005).</li>
<li>Pang, W., Vogensen, F. K., Nielsen, D. S., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+and+caecal+microbiota+profiles+of+mice+do+not+cluster+in+the+same+way%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Faecal and caecal microbiota profiles of mice do not cluster in the same way.</a> Laboratory Animals. 46, 231-236 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar içtenlikle onun teknik rehberlik için Baohong Wang teşekkür ederim.

Burada sunulan farelerde TBI sonra cekal mikrobiyota değişiklikleri belirlemek için basit ve verimli bir protokoldür. Beyin hasarının indüksiyonu ve caecum içerik örneklerinin toplanması protokolün kritik parçalarıdır.
Araştırmacılar TBI aşağıdaki bağırsak mikrobiyota değişiklikleri incelediolmasına rağmen, Bu çalışmalarda kullanılan beyin hasarı CCI-8 ve kilo damla / darbe kaynaklı modeller9. Ancak, CCI modeli çoğunlukla beyin kontüzyonu çoğaltı...

Travmatik beyin hasarı (TBI) küresel bir halk sağlığı sorunu ve genç erişkinlerde ölüm ve sakatlık önde gelen nedeni1,2. TBI her yıl birçok ölüme neden olur ve hayatta kalanlar çeşitli fiziksel, psikiyatrik, duygusal ve bilişsel engellerle karşılaşır. Bu nedenle, TBI bir hastanın aile ve toplumsal kaynaklar için ağır bir yüktür. TBI travma sırasında meydana gelen birincil beyin hasarı ve ilk yaralanma dan sonra ay saat geliştirmek herhangi bir ikincil beyin yaralanmaları içerir. İkincil beyin hasarı birkaç biyokimyasal basamaklar tarafından aracılık edilir, hangi sadece beyne zararlı değil, aynı zamanda çeşitli organ sistemleri üzerinde önemli olumsuz etkileri vardır, gastrointestinal sistem de dahil olmak üzere3.
Şu anda, hayvan deneylerinde TBI ikna etmek için üç model vardır: sıvı perküsyon yaralanması, kontrol kortikal etkisi (CCI), ve ağırlık düşme ivme. Lateral sıvı perküsyon hasarı (LFPI) yaygın beyin hasarı kurmak için en sık kullanılan modeldir (DAI)4. Cihaz bozulmamış dura kısa bir sıvı basıncı darbe uygulayarak bir kraniektomi yoluyla beyin hasarı üretir. Bu nabız sarkaç darbe tarafından oluşturulur. LFPI, TBI araştırmaları için tekrarlanabilir ve kontrol edilebilir bir modelleme yöntemidir.
Mikrobiyom, insan vücudunda bulunan tüm mikroorganizmaların kolektif genomları olarak tanımlanır. Özellikle bağırsak mikropları sadece bağırsak homeostazve fonksiyonu önemli bir rol oynamak değil, aynı zamanda konak fizyolojisi ve diğer organların işleyişi birçok yönünü düzenleyen5. Son yıllarda, bağırsak mikrobiyota beyin-bağırsakeksenleri6 ile beyin gelişimi ve fonksiyonu düzenleyen gösteren kanıtlar artmaktadır. Bağırsak mikrobiyota bozulması Parkinson hastalığı, duygudurum bozuklukları da dahil olmak üzere çeşitli beyin fonksiyon bozuklukları ile bağlantılı olmuştur, ve otizm7. Son zamanlarda, preklinik çalışmalar da akut beyin hasarı bağırsak mikrobiyota değişiklikleri neden olabilir bildirdin8,9.
Treangen ve ark.10 tarafından yapılan bir çalışmada, CCI'ye bağlı TBI'den sonra üç mikrobiyal türde önemli azalmalar ve iki mikrobiyal türde artış saptandı. Bu kanıt bağırsak mikrobiyota modülasyonu TBI yönetiminde tedavi yöntemi olabileceğini göstermektedir. Ancak, beyin hasarına bağlı bağırsak mikrobiyota değişiklikleri altında yatan mekanizmalar bilinmemektedir. Bu nedenle, TBI sonra bağırsak mikrobiyota değişiklikleri çalışma nispeten basit ve verimli bir model gereklidir. Bu nedenle, bu çalışma farelerde TBI sonra bağırsak mikrobiyota değişiklikleri incelemek için bir protokol sunuyor.

<table><tbody><tr><td>DNA izolasyon kiti&nbsp;</td><td>QIAGEN</td><td>51604</td><td>Dışkı örneklerinden genomik DNA'nın hızlı saflaştırılması için</td></tr><tr><td>Gen analiz hizmeti</td><td>GENEWIZ</td><td></td><td>Gen analiz hizmeti</td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Şangay SAFE Biotech Co.</td><td>TR-200</td><td>ısıtma yastığı</td></tr><tr><td>Enjektör</td><td>İlk Bağlı Hastane, Tıp Fakültesi, Zhejiang Üniversitesi</td><td></td><td>enjektör</td></tr><tr><td>LFPI cihazı</td><td>Virginia Commonwealth Üniversitesi</td><td>FP302</td><td>LFPI cihazı</td></tr><tr><td>Mikro kraniyal matkap</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>78061</td><td>Mikro kraniyal matkap</td></tr><tr><td>Povidone İyot</td><td>İlk Bağlı Hastane, Tıp Fakültesi, Zhejiang Üniversitesi</td><td></td><td>Povidon İyot</td></tr></tbody></table>

farelerde travmatik beyin hasarı sonrası caecum mikrobiyotasında ki değişikliklerin araştırılması

Investigating Alterations in Caecum Microbiota After Traumatic Brain Injury in Mice

Artan kanıtlar mikrobiyota-bağırsak-beyin ekseninin beyin hastalıklarının patogenezinde önemli bir rol oynadığını göstermektedir. Çeşitli çalışmalar da travmatik beyin yaralanmaları bağırsak mikrobiyota değişikliklere neden olduğunu göstermektedir. Ancak beyin-bağırsak ekseninin çift yönlü düzenlenmesinin altında yatan mekanizmalar bilinmemektedir. Şu anda, birkaç model travmatik beyin hasarı sonrası bağırsak mikrobiyota değişiklikleri incelemek için var. Bu nedenle, sunulan çalışma, bir lateral sıvı perküsyon cihazı ve bağırsak mikrobiyom değişiklikleri araştırmak için yaralanma aşağıdaki kaecum örneklerinin analizi kullanarak travmatik beyin hasarı indükleyen protokolleri birleştirir. Travmatik beyin hasarı sonrası bağırsak mikrobiyota bileşiminde yapılan değişiklikler 16S-rDNA dizilimi kullanılarak belirlenir. Bu protokol enterik mikroorganizmalar ve travmatik beyin hasarı arasındaki ilişkileri incelemek için etkili bir yöntem sağlar.

TBI'nin kuruluşu Şekil 1'degösterilmiştir. Anestezi ve dezenfeksiyondan sonra kafa derisi sagittally kesilirdi (Şekil 1A). Bir kraniotomi (3 mm çapında) bir elektrikli matkap ile sağ parietal korteks üzerinde kafatası içine trephined, dura bozulmadan tutuldu(Şekil 1B,C). Plastik bir yaralanma kanül kemik penceresi üzerine yerleştirildi ve diş akrilik kullanılarak kafatası çimentolanm...

Burada sunulan bir protokol bağırsak mikrobiyom analizi için caecum içeriğinin toplanması takip bir lateral sıvı perküsyon cihazı kullanarak diffüz travmatik beyin hasarı neden olur.

Farelerde Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Caecum Mikrobiyotasında Ki Değişikliklerin Araştırılması

Increasing evidence shows that the microbiota-gut-brain axis plays an important role in the pathogenesis of brain diseases. Several studies also ...

Eşzamanlılık ve beyin ve bağırsak mikrobiyota arasındaki çizgiler etkileşimleri bilinmemektedir. Bu tekniği kullanarak, farelerde travmatik beyin hasarı sonrası bağırsak mikrobiyotasındaki değişiklikler incelenebilir. Bu tekniğin en büyük avantajı nispeten basit ve verimli olmasıdır.Prosedürü gösteren Wendong You, benim laboratuvarımdan bir yüksek lisans öğrencisi olacak. Travmatik beyin hasarı indüksiyonu için, anestezili bir farede ayak sıkışmasına yanıt eksikliğini onaylayın ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Tıraştan sonra, sagital düzlemde kafa derisi kesici önce% 70 etanol ile maruz kafa derisi cilt dezenfekte.Forseps kullanarak, her iki taraftaki kesiği geri çekin ve periostu biraz ayırın. Kafatasının sağ parietal bölgesine orta hattan iki milimetre uzakta üç milimetre çapında bir daire çizmek için bir işaret kullanın. Dura zarar vermeden dikkatle kafatası nüfuz etmek için bir elektrikli matkap kullanın.Üç milimetrelik bir kemik penceresini ortaya çıkarmak için kemik kapağını çıkarın ve kraniyotomi üzerine plastik bir yaralanma kanüli yerleştirin. Diş akrilik ile kafatasına kanül çimentolama sonra, steril% 0.9 normal tuzlu kanül doldurmak için beş mililitrelik şırınga kullanın, kabarcıklar önlemek için özen. Osiloskopu ve amplifikatörü açın.Yanal sıvı perküsyon yaralanma cihazının yüksek basınçlı tüp hava kabarcıkları ücretsiz olduğunu onaylayın, ve yaklaşık 10 test darbeleri teslim, cihaz sabit bir sinyal verene kadar. Sarkaç başlangıç pozisyonunun açısını ayarlayarak yaklaşık iki standart atmosferin nabzı yoğunluğuna ulaşın ve yaralanma kanülünü lateral sıvı perküsyon yaralanma cihazına bağlayın. Sarkaç serbest bırakmak için tetiği çekin, beyin hasarına neden.Daha sonra tüm kapalı, sıvı dolu boru sistemi üzerinden dura bir darbe elde etmek ve iletmek. Beyin hasarı indüksiyonsonra, kanül kaldırmak ve kesi dikiş. Daha sonra fareyi ambulatuar olana kadar izleyerek bir ısıtma yastığına yerleştirin, hayvanı yiyecek ve suya reklam libitum erişimi ile ev kafesine geri döndürmeden önce.Belirtilen deneysel zaman noktalarında, standart protokollere göre bağırsakları ortaya çıkarın ve caecum'u diğer bağırsak lardan nazikçe ayırmak için atravmatik enifler kullanın. Doku bulunduğunda, keskin makas ile caecum kesilmiş ve el ile steril bir pansuman üzerine caecum içeriğini ayıklayın. Sonra mikrobiyom analizi kadar eksi 80 derece santigrat depolama için, 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüp içeriğini aktarın.16S rekombinant DNA dizilemesi, travmatik beyin hasarından üç gün sonra farelerde kaecum mikrobiyotasında azalmış bir çeşitlilik olduğunu ve şemal ve travmatik beyin hasarı gruplarının kaecum içeriğinde en bol taksonun figüründe gösterildiğini göstermektedir. Ayrıca, non-metrik, çok boyutlu ölçekleme travmatik beyin hasarı sonrası kaecum mikrobiyota bileşiminde değişiklikler ortaya koymaktadır. Kafatası delme dura bozulmadan tutmak için unutmayın, ve bulmak ve diğer bağırsak yollarından caecum ayırırken nazik olmak.Bu işlemden sonra travmatik beyin hasarı sonrası bağırsaklarda histolojik değişim ve inflamatuar yanıtı incelemek için hematoksilin ve eozin boyama ve analiz yapılabilir.

investigating-alterations-caecum-microbiota-after-traumatic-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Hipokampal devresinde fonksiyonel değişikliklerin araştırıldığı A çok yönlü bir yaklaşım açıklanmıştır. Elektrofizyolojik teknikler hasar protokol, davranışsal testleri ve bölgesel diseksiyon yöntem ile birlikte tarif edilmiştir. Bu tekniklerin kombinasyonu diğer beyin bölgeleri ve bilimsel sorular için benzer bir şekilde uygulanabilir.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı takiben Hipokampal Devre İşlev değişimler üzerine araştırmalar

Videoda, yanal sıvı perküsyon cihazı (LFPI) kullanarak travmatik beyin hasarının (TBI) bir fare modelini oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Fareye anestezi uygulandıktan sonra, kafatası üzerinde bir pencere oluşturularak beyin açığa çıkarılır. Pencereye tuzlu su dolu bir kanül takılır ve daha sonra LFPI'ye bağlanır. Cihazın sarkacı, travmatik bir beyin hasarına neden olan bir basınç darbesi oluşturmak için serbest bırakılır.

Lateral Sıvı Perküsyon Cihazı Kullanarak Travmatik Beyin Hasarının Bir Fare Modelinin Oluşturulması

Kaynak: Macheda, T., et. al. Farelerde Hafif Travmatik Beyin Hasarının Elektromanyetik Kontrollü Kapalı Kafa Modeli. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, stereotaksik çerçeve kullanan bir fare modelinde kapalı kafa yaralanmasına neden olma prosedürünü göstermektedir. Kontrollü etki, hafif travmatik beyin hasarını taklit ederek, araştırmacıların yaralanma sonrası refleksleri ve davranışları ölçerek nörolojik etkileri ve iyileşmeyi incelemelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Hafif Travmatik Beyin Hasarının İndüksiyonu

Kaynak: Braeckman, K., et. al. Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Sıçanların Hipokampusunda İleri Difüzyon Görüntüleme. J. Uzm. Uzm.  (2019)Bu video, değerlendirmek için difüzyon ağırlıklı görüntülemenin kullanımını göstermektedir. Hafif travmatik beyin hasarını (mTBI) takiben sıçan hipokampusundaki mikroyapısal değişiklikler, hassas MRI taraması ve difüzyon analizi yoluyla aksonal yaralanmayı vurgular.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Sıçan Hipokampusunun Difüzyon Ağırlıklı Görüntülenmesi

Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Travmatik beyin yaralanmaları (TBH'ler) ciddi bir sağlık sorunu olmaya devam etmektedir. Kontrollü kortikal darbe cerrahisi modeli kullanılarak, TBH'nin etkileri ve olası tedavi yöntemleri üzerine araştırmalar yapılabilir.

Travmatik Beyin Hasarı için Kontrollü Kortikal Etki Modeli

Bu işlemin genel amacı hafif travmatik beyin hasarı olan bir sıçanda hipokampus kantitatif mikroyapısal bilgi elde etmektir. Bu gelişmiş difüzyon ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme protokolü ve parametrik difüzyon haritalarının ilgi alanı tabanlı analizi kullanılarak yapılır.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Sıçanların Hipokampuslarında İleri Difüzyon Görüntüleme

Burada, Bacillus cereus'un kolit üzerindeki olumlu etkilerini düzenlemede bağırsak mikrobiyotasının rolünü araştırmak için antibiyotik kaynaklı yalancı mikrop içermeyen dekstran sülfat sodyum kaynaklı kolit fare modelini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Bacillus cereus Uygulamasının Kolit Üzerindeki Hafifletici Etkilerinin Bağırsak Mikrobiyota Modülasyonu ile Araştırılması

Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitler, hayvanlarda karmaşık davranışlara yol açan çok yönlü etkilere sahiptir. Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin beyindeki etkilerini bir rehber kanül aracılığıyla intraserebroventriküler yolla tanımlamak için adım adım bir yöntem sunmayı amaçlıyoruz.

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi

Protokol, bir fare modelinde hafif travmatik beyin hasarını tanımlar. Özellikle, hafif bir orta hat kapalı kafa travmasını indüklemek için adım adım bir protokol ve hayvan modelinin karakterizasyonu tam olarak açıklanmaktadır.

Farelerde Hafif Travmatik Beyin Hasarının Elektromanyetik Kontrollü Kapalı Kafa Modeli

Bu protokol, kapalı kafa travması (CHI) yöntemiyle indüklenen tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının (rmTBI) modifiye edilmiş bir fare modelini sunar. Yaklaşım, meninkslere maruz kalmanın yaygın olarak neden olduğu iltihabı azaltmak için inceltilmiş bir kafatası penceresi ve sıvı perküsyonunun yanı sıra kemirgenlerde rmTBI modellemesinde gelişmiş tekrarlanabilirlik ve doğruluk içerir.

İnceltilmiş kafatası penceresi ve sıvı perküsyonu içeren tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının modifiye edilmiş fare modeli

Öğrenin, farelerde travmatik beyin hasarı sonrası caecum mikrobiyotasındaki değişiklikleri incelemek için lateral sıvı perküzyon yöntemini. Bu protokol, bağırsak-beyin ekseni etkileşimlerini anlamaya yardımcı olur.

Farelerde Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Caecum Mikrobiyotasında Ki Değişikliklerin Araştırılması

Daha fazla video keşfet