Name: Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Öğrenin, Danio rerio larvalarında elektroretinogram kaydı için konik sünger-uç elektrot kullanımını. Bu yöntem, görsel gelişimi ve genetik hastalık modellerini zarar vermeden tekrarlanabilir şekilde incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje için finansman bir grant tarafından Melbourne nörolojik Bilimler Enstitüsü'nden (FTG, PRJ & BVB) sağlandı.

Tüm electroretinogram (ERG) yordamlar uygulama bakım için Avustralya Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi kuralları hükümleri ve hayvanların kullanımı göre yapıldı ve kurumsal hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi Melbourne Üniversitesi.
1. arabellek hazırlık
<ol><li>Japon balığı zil'ın arabellek (1.25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, 100 mM glikoz, 100 mM HEPES) x 10 hazırlamak Ters Ozmos (RO) su kullanarak. PH 7.8 arabelleğe ayarlamak ve 0,22 mikron filtre kullanarak arabellek sterilize. 4 ° C'de 10 x arabellek çözüm stok3depolar. Not: 10 zil'ın arabellek x 3 ay içinde kullanılmalıdır.</li>
	<li>Deneme günü, 1 Japon balığı zil'ın arabellek x 10 x ters osmoz su kullanarak goldfish zil'ın arabellek sulandrarak olun. Not: 1 x goldfish zil'ın arabellek larva Zebra balığı, yerleşim için kullanılan sünger de dahil olmak üzere PVA sünger ve üzerinde kayıt elektrot uç sünger doyurmak için kullanılır.</li>
</ol>2. elektrot hazırlık
<ol><li>
Koni şeklinde sünger kayıt elektrot hazırlayın.
	<ol>
<li>Platin elektrot kurşun uzantısından erkek sonunda kesti ve sondan 10 mm bir neşter bıçak kullanarak dış politetrafloroetilen izolasyon kaplama kaldırın. İç tel elektrot kurşun zarar vermemesi için dikkat ediniz.</li>
		<li>Gümüş tel (0.3 mm çap) 40 mm boy kesme ve güvenli bir şekilde bu elektrot kurşun maruz iç tel ile gümüş tel entwining tarafından ekleyebilirsiniz. ~ 15 mm uzunluğunda gümüş tel (şekil 1A) maruz bırakarak yalıtım bant kullanarak ortak örtmek.</li>
		<li>9 V DC kaynak 60 için kullandığını klorür ile maruz gümüş tel electroplate sinyal iletim geliştirmek için s. Normal salin maruz gümüş ipucunda bırakın ve diğer ucunu bataryanın pozitif terminaline bağlayın. Pilin eksi terminali için başka bir tel bağlamak ve diğer ucunu içine tuz2tel bırakın. Not: Alternatif olarak, gümüş tel 1 saat içinde çamaşır suyu çözüm (etkin madde 42 g/L sodyum hipoklorit) için ıslatarak klorlamak.</li>
		<li>Bir ~ 20 x 20 mm PVA kare bir koni (şekil 1A) yapmak için makas kullanarak sünger kesti. 1 x zil'ın arabellek kullanarak sünger doyurmak. Mercek üzerinde bir ölçek çubuğu ile mikroskop altında bir neşter bıçak koni ~ 40 µm çapı için tepe şekil için kullanın. Hava Kuru emici kağıt doku üzerinde koni şeklindeki sünger kadar sağlamdır. Not: PVA sünger önemli ölçüde zaman doymuş genişletir, böylece sünger ilk koni apeks şekillendirme önce serum fizyolojik ile doymuş olduğunu önemlidir.</li>
		<li>Chloriding sonra hava kuru 5 dk. Ekle emici bir doku üzerinde gümüş tel koni tabanı ile kurutulmuş, katı, koni şeklinde PVA sünger içine gümüş tel. Fotovoltaik eserler (Şekil 1B-C) azaltmak için maske bant kullanarak herhangi bir aşırı maruz metal izole. Not: Deneysel her oturum sonrası sünger gümüş tel kaldırın. Ters Ozmos su ve hava kuru yeniden kullanılmak üzere kullanarak sünger yıkayın. En iyi sinyal koleksiyon emin olmak için gümüş tel tek kullanılması önerilir. PVA sünger daha--dan 5 kere yeniden değil.</li>
		<li>Deneme günü, kayıt elektrot sünger ucu içine 1 x zil'ın arabellek tam sünger doyurmak en az 15 dakika bırakın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Referans elektrotlar sünger ucu bağlama olmadan, ama yukarıda açıklandığı şekilde hazırlayın.</li>
	<li>Zemin elektrot ticari olarak elde edilir.</li>
</ol>3. Zebra balığı hazırlık
<ol><li>Karanlık gecede Zebra balığı larva uyum (> 8 h) kayıtları bir 15 mL tüp içinde Zebra balığı yerleştirerek önce (< tüp başına 20 larva) karanlık bir kuluçka alüminyum folyo sarılı. Yeterli oksijen kaynağı sağlamak için kapağı kaldırın.</li>
	<li>Kayıt günü, larva içeren folyo sarılı Şahin tüp için kapak sıkın ve tüp ışık geçirmez olduğundan emin olun. ERG laboratuarının taşıma larvaları.</li>
	<li>Balık içine Petri yemekler karanlıkta bir ışık yayan diyot (LED; 17.4 cd.m-2, λmax 600 nm) üzerinden loş kırmızı aydınlatma yardımıyla dökün. Petri yemekler ışığa maruz en aza indirmek için ışık geçirmez havlu kullanarak kapak.</li>
</ol>4. sünger Platform hazırlama
<ol><li>Bir dikdörtgen bir kuytu bir 35 mm içinde Petri kabına sığdırmak için Kuru PVA sünger kesti. Sünger kalınlığı petri kabına derinliğe kadar kabaca eşit olmalıdır emin olun.</li>
	<li>Dikey olarak referans elektrot gümüş tel karşılamak için sünger bir ucunu üzerinden küçük bir kesim yapmak.</li>
	<li>1 x doymuş kadar Japon balığı zil'ın arabellek PVA sünger emmek. O zaman, Sünger temiz 35 mm kabında yer. Sünger bir ışık parmak basın yanıt olarak gelen çözüm sızar kadar ekstra sıvı emmek için kağıt havlu kullanın.</li>
</ol>5. hayvan ve elektrot konumlandırma
<ol><li>1 Japon balığı zil'ın arabellek x seyreltilmiş %0.02 tricaine kullanarak larva anestezi.</li>
	<li>3 mL Pasteur pipet imzalat bir larva bir kare kağıt havlu (~ 3 cm2) üzerine aktarmak için kullanın.</li>
	<li>Forseps kullanarak nemli sünger platformda larva içeren kağıt havlu koyun. Zil'ın arabellekte batırılmış bir ince fırça larva konumunu ayarlamak için kullanın. Bu bir göz yukarı, yüzler yakın herhangi bir sıvı kağıt havlu altında larva meydanında dan izole emin olun.</li>
	<li>Larva ERG kayıt boyunca nemli tutmak için göz jeli nemlendirici ile başından hariç larva vücut sır.</li>
	<li>Bir platformda küçük su ısıtmalı bir Faraday kafesinde (şekil 1 d) yer alan Ganzfeld kase hafif uyarıcı önünde sünger platformu ile Petri kabına yerleştirin. Not: Sünger ve larva vücut sıcaklığını bakımından istikrarlı ERG sinyalleri sağlar.</li>
	<li>Platform sünger (şekil 1 d) yapılan kesim içine referans elektrot yerleştirin.</li>
	<li>Ticari olarak elde edilen yere elektrot Faraday kafesi bağlayın.</li>
	<li>Kayıt elektrot bir elektrot tutucu ekleyin ve bir micromanipulator (şekil 1 d) stereotaksik kol sahibine güvenli. 1 x zil'ın çözüm yeniden doygunluk için elektrot sünger ucunda bir damla damla için 3 mL Pasteur pipet kullanın.</li>
	<li>Mikroskop Faraday kafesi elektrot yerleştirme için ERG platform üzerine getirin. Not: Aydınlatma dark-adaptation muhafaza ederken bir loş kırmızı LED (17.4 cd.m-2, λmax 600 nm) larva gözlenmesi izin vermek ve aktif elektrot yerleştirme tarafından sağlanmalıdır.</li>
	<li>Mikroskop altında larva gözlenmesi izin vermek için sünger platformu konumunu ayarlamak. O zaman, emici doku aşırı sıvı elektrot sünger uç--dan kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>Larva Zebra balığı göz (şekil 1E) Merkezi Kornea yüzeyine hafifçe dokunana aktif elektrot konumlandırın.</li>
	<li>Ganzfeld kase sünger platformu doğru hareket ve larva tarafından kase kaplıdır emin olun.</li>
	<li>Yabancı elektromanyetik gürültü azaltmak için Faraday kafesi kapatın.</li>
</ol>6. Electroretinogram kayıt
<ol><li>
Belirli ERG sistem bilgisayar yazılımı kullanımını2önerilen ayarlara dayalı uyarıcı tetikler ve veri elde etmek için (malzeme tablo ayrıntılar için bakınız).
	<ol>
<li>Sistem örnekleme oranı set 4 KHz ila 650 pencere (2,560 puan) kayıt satın alma yazılımı ms üzerinde.</li>
		<li>Kazanç sistemi 1000 × için ayarlayın.</li>
		<li>1-300 Hz sisteminin bant geçiren filtre ayarlayın.</li>
		<li>60 Hz (veya bağlı olarak yerel elektrik frekansı 50 Hz) azaltmak için bir çentik filtresi kullanın gürültü. Not: İdeal gürültü seviyesi ±10 µV fazla olmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Aşağıda açıklanan yordamı kullanarak veri koleksiyon başlatın.
	<ol>
<li>Elektrotlar konumlandırma değerlendirmek için göz testi yanıtından ölçmek için tek testi flash (0,06 günlük cd.s/m2) kullanın. Not: Bu yoğunluğu testi Flash 4-dpf larva 25 µV daha büyük bir b-dalga genlik sonuçlanmalıdır. Sağlam bir yanıt ölçülemez, elektrotlar yeniden konumlandırmak ve başka yapmak test elektrotlar iyi konumlandırılmış onaylamak için flash.</li>
		<li>Test-flash, takip izin hayvan karanlık önce kayıtları tam karanlıkta 3 dakikadır uyum.</li>
		<li>Hediye dimmer daha parlak ışık yoğunluklarda için yanıp söner.</li>
		<li>Ortalama sinyalleri arasında sinyal-gürültü düzeyine göre yinelenir. Not: Genellikle, daha fazla sinyalleri dimmer ışık düzeyleri (hiç az 3 tekrarlar) ve daha parlak ışık düzeyleri (genellikle 1 tekrar) daha az ortalama. Yavaş yavaş 10 arası uyarıcı aralığı 60 uzatmak s dimmest için en parlak ışık seviyesi ile. Bir örnek protokolü Tablo 1' de gösterilen.</li>
		<li>Sonra kayıtları, insanca %0,1 tricaine kullanarak larvaları öldürmek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. analiz
<ol><li>Negatif dalga bir yalak için taban çizgisinden bir dalga genlik ve negatif dalga bir yalak üzerinden b dalgasının genliği olumlu b-dalga tepeye kadar ölçer.</li>
	<li>A ve b-dalga örtülü zamanlardan uyarıcı başlangıçlı bir dalga çukur ve b-dalga, zirve için sırasıyla ölçmek.</li>
</ol>

<ol><li>Roper, C., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoper%2C+C+%22Handbook+of+Developmental+Neurotoxicology+%28Second+Edition%29%22">Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition)</a>. Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. , Academic Press. 143-151 (2018).</li>
<li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158(2016).</li>
<li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+expriment%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li>
<li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li>
<li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinogram+%28ERG%29+Measurements+in+Larval+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, pdb prot4973 (2008).</li>
<li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiololgy%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li>
<li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiololgy%22%5BJournal%5D)">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li>
<li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li>
<li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Matters%22%5BJournal%5D)">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003(2017).</li>
<li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+models+%26+mechanisms%22%5BJournal%5D)">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models & mechanisms. , dmm. 035220 (2018).</li>
<li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+medicine+reports%22%5BJournal%5D)">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li>
<li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li>
<li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li>
<li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li>
<li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+genetics%22%5BJournal%5D)">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li>
<li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar bu çalışmaya ilgili hiçbir açıklamalar var.

ERG gibi fonksiyonel sonuçlar larva Zebra balığı8,9,12,14eğitim için kullanılan araçlar dizisi içinde giderek daha önemli hale gelmiştir. Larva Zebra balığı göz küçük boyutu nedeniyle, cam MİKROPİPETLER en yayımlanmış protokolleri3,4,5,8,9...

Zebra balığı (Danio rerio) görsel Nöroloji çalışmaları da dahil olmak üzere bir çok kullanılan genetik omurgalı modeli haline geldi. Bu tür artan popülaritesi genetik manipülasyon, son derece korunmuş omurgalı görsel sistem (nöron tipleri, anatomik morfoloji ve organizasyon ve altta yatan genetik), yüksek verimlilik kolaylığı dahil avantajları için bağlanabilir ve Hayvancılık memeli modelleri1' e göre daha az maliyeti. Non-invaziv electroretinogram (ERG) uzun klinik olarak insan görsel işlevi, değerlendirmek için kullanılmıştır ve vizyon irili ufaklı tür dahil kemirgen ve larva Zebra balığı2,3 dizi ölçmek için laboratuvar ortamında , 4 , 5. en sık analiz ERG dalga a ve b-dalga, photoreceptors ışık algılama ve bipolar interneurons, sırasıyla kaynaklanan bileşenleridir. Larva Zebra balığı, retina farklı katmanlarda 3 gün sonrası döllenme (dpf) tarafından kurulur ve terminal photoreceptor koni morfolojisi olgun önce 4 dpf6,7synapses. Larva Zebra balığı dış retina işlevi böylece 4 dpf ERG bu erken yaşlarında itibaren ölçülebilir anlamına gelir, daha önce kuruldu. Kısa deneysel döngüsü ve modelinin yüksek üretilen iş özellikleri nedeniyle, ERG hastalık modelleri, işlev değerlendirmesi larva Zebra balığı için uygulanmış olan renk vizyon ve retina geliştirme analiz, görsel sirkadiyen ritim eğitimi ve test uyuşturucu8,9,10,11,12.
Ancak, larva Zebra balığı için geçerli yaklaşımlar ERG benimsemeye zorlaştırmak bazı karmaşıklıklar var. Yayımlanmış larva Zebra balığı ERG protokolleri yaygın olarak yüksek kaliteli micropipette gerektiren kayıt elektrodu3,4,5,13, iletken sıvı ile dolu bir cam micropipette kullanın İpucu3. Özel ekipman, micropipette çekici gibi ve bir microforge, bazı durumlarda, kendi üretimi için gereklidir. Bu laboratuvarlar sınırlı kaynaklara sahip için bir meydan okuma olabilir ve ek bir ücret için bile kullanılabilir küçük hayvan ERG sistemleri larva Zebra balığı görsel işlev ölçüm için adapte ne zaman açar. Ne zaman bile düzeltti, keskin micropipette ipucu larva göz yüzeyine zarar verebilir. Ayrıca, ticari micropipette sahipleri Elektrofizyoloji için sabit bir gümüş tel ile inşa edilir. Bunlar teller sabit artan bakım ücreti için önde gelen yeni sahipleri satın gerektiren tekrarlayan kullanımdan sonra düzgünleştirilecek olmak.
Burada kurulan küçük hayvan ERG kurulumları larva Zebra balığı ERG ölçümler için uyarlamak için yararlıdır bir koni şeklindeki sünger-ipucu kayıt elektrodu, kullanarak bir ERG yöntemi açıklanmaktadır. Elektrot kolayca ortak polivinil asetat (PVA) sünger ve diğer özel ekipman olmadan ince gümüş tel kullanılarak yapılır. Bizim veri bu roman elektrot hassas ve 4 ve 7 dpf arasında larva Zebra balığı retina sinir devreleri fonksiyonel gelişimi göstermek için güvenilir olduğunu gösteriyor. Bu ekonomik ve pratik sünger-uç elektrot Yeni ERG sistemleri oluşturma veya varolan küçük hayvan sistemleri, Zebra balığı Etütler değiştirme araştırmacılar için yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>0.22 ve mikro; m filtre</td><td>Millex GP</td><td>SLGP033RS</td><td>10 kez filtreler 10 kez; sterilizasyon için akvaryum balığı zil tamponu</td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>Terumo</td><td>DVR-5175</td><td>30G ve kez; &frac12; " ERG sinyallerinde kurumayı ve artan gürültüyü önlemek için elektrot sünger ucuna tuzlu su damlaları eklemek için iğne.</td></tr><tr><td>30 G ve kez; &frac12; " iğne</td><td>Terumo</td><td>NN * 3013R</td><td>Tuzlu su toteh sopnge uç elektrodu eklemek için.</td></tr><tr><td>Biyoamplifikatör</td><td>ADInstruments</td><td>ML135</td><td>ERG sinyallerini yükseltmek için.</td></tr><tr><td>Çamaşır suyu çözeltisi&nbsp;</td><td>King White</td><td>9333441000973</td><td>Alternatif bir şerit elektrot klorlama yöntemi için. Aktif madde: 42 g/L sodyum hipoklorit.</td></tr><tr><td>Sirkülasyon su banyosu</td><td>Lauda-Ko?nigshoffen</td><td>MGW Lauda</td><td>Su ısıtmalı platform yapmak için kullanılır.</td></tr><tr>Gümüş <td>tel elektrotları amplifikatöre bağlamak için</td> <td>elektrot kurşun</td><td>Çim Telefaktör</td><td>F-E2-30</td> Platin kablolar.</tr><tr><td>Faraday Kafesi</td><td>Fotometrik Çözüm Uluslararası&nbsp;</td><td></td><td>Karanlık adaptasyonunu kolaylaştırmak ve sinyal-gürültü oranını iyileştirmek için Ganzfeld kurulumunu kapatmak için.</td></tr><tr><td>Ganzfeld Bowl</td><td>Fotometrik Çözüm Uluslararası&nbsp;</td><td></td><td>Özel tasarlanmış ışık stimülatörü: 36 mm çap, 13 cm açıklık boyutu.</td></tr><tr><td>Luxeon LED'ler</td><td>Phillips Işık A.Ş.</td><td></td><td>Işık stimülasyonu için yirmi 5W ve bir adet 1W LED.</td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Harvard Aparatı</td><td>BS4 50-2625</td><td>Deneyler sırasında kayıt elektrodunu tutar.</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel</td><td>Veri</td> analizi için Microsoft <td>sürüm 2010</td><td>Elektronik tablo yazılımı.</td></tr><tr><td>Nemlendirici göz jeli</td><td>GenTeal Jel</td><td>9319099315560</td><td>Dehidrasyonu önlemek için kayıtlar sırasında zebra balığı larvalarını örtmek için kullanılır. Aktif madde: %0.3 Hipromelloz ve %0.22 karbomer 980.</td></tr><tr><td>Pasteur pipeti</td><td>Copan</td><td>200C</td><td>Larva zebra balıklarının bakımında kullanılır.</td></tr><tr><td>Powerlab veri toplama sistemi</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td>Uyaran oluşturmak için LED'leri kontrol eder.</td></tr><tr><td>PVA sünger</td><td>MeiCheLe</td><td>R-1675</td><td>Larva zebra balığının yerleştirilmesi ve koni şeklindeki elektrotun yapılması için Tuzlu</td></tr><tr><td>su çözeltisi</td><td>Aaxis Pacific</td><td>13317002</td><td>Gümüş tel elektrotun elektrokaplanması için.</td></tr><tr><td>Scope Software</td><td>ADI Cihazları</td><td>sürüm 3.7.6</td><td>Powerlab sistemi aracılığıyla uyaranı aynı anda tetikler ve verileri toplar</td></tr><tr><td>Gümüş (ince yuvarlak tel)</td><td>A& E metal</td><td>0,3 mm</td><td>ERG elektrotlarını kaydetmek ve referans almak için kullanılır.</td></tr><tr><td>Stereo mikroskop&nbsp;</td><td>Leica</td><td>M80</td><td>Koni şeklindeki sünger tepesini şekillendirmek ve ölçmek için kullanılır (mercek üzerinde ölçek çubuğu ile). Elektrot yerleşimi için Faraday kafesine yerleştirilmiştir.</td></tr><tr><td>Trikain&nbsp;</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E10521-50G</td><td>Larva zebra balığını anaetetize etmek için.</td></tr><tr><td>Su ısıtmalı platform</td><td>özel yapım</td><td></td><td>ERG kayıtları sırasında sünger platformun ve larva gövdesinin sıcaklığını ölçmek için</td></tr></tbody></table>

larva a roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak zebra balığı electroretinogram kayıt

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Zebra balığı (Danio rerio) yaygın gelişimsel çalışmalarda omurgalı bir model olarak kullanılır ve görsel Nöroloji için özellikle uygundur. İşlevsel görsel performans ölçülerini daha yüksek omurgalı türler iyi kurulmuş oldu ideal bir non-invaziv yöntem electroretinography (ERG) dir. Bu yaklaşım giderek Zebra balığı, erken gelişimsel larva evrelerinde de dahil olmak üzere görsel işlevinde incelenmesi için kullanılıyor. Larva Zebra balığı ERG bugüne için en sık kullanılan kayıt elektrot laboratuarlar için bir meydan okuma ile sınırlı kaynakları sunan kendi üretimi için özel ekipman gerektirir cam micropipette elektrot be. Burada, bir koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanan bir larva Zebra balığı ERG Protokolü mevcut. Roman elektrot üretimi ve kolu, daha ekonomik ve daha az daha cam micropipette larva göz zarar olasılığı için daha kolay olur. Daha önce yayımlanmış ERG yöntemleri gibi geçerli protokol dış retina işlevini, photoreceptor ve bipolar hücre yanıtları, a ve b-dalga, anılan sıraya göre değerlendirebilirsiniz. Protokol açıkça Zebra balığı larva, yardımcı programı, duyarlılık ve roman elektrot güvenilirliğini destekleyen erken gelişimi boyunca görsel işlevi arıtma göstermek. Yeni ERG sistemi kurulması veya varolan küçük hayvan ERG cihazları, Zebra balığı ölçüm, araştırmacılar görsel Nöroloji içinde Zebra balığı kullanmak için yardım için değiştirme model organizma Basitleştirilmiş elektrot özellikle yararlıdır.

Bu bölüm için her gün için 7 dpf 4'ten alınan ERG ölçümlere temsilcisi sonuçları sağlar. 4 dpf ERG yanıt-e doğru photoreceptors ve iki kutuplu hücreler, sırasıyla kaynaklanan sağlam bir - ve b-dalga bileşenleri gösterir. Test her yaşta b dalgasının genliği hafif şiddette (Şekil 2; arttı. Şekil 3). Özellikle, yaşla birlikte artan dimmer yanıp söner için larva Zebra balığı retina duyarlılığını. NET sinyaller bu yoğunluklarda büyük larva (<stron...

Burada, larva Zebra balığı ışık çatışmaya electroretinogram tepkiler ölçüm kolaylaştırır bir iletişim kuralı mevcut. Bir roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot larva Zebra balığı electroretinogram ERG güvenilir sonuçlar ve daha düşük maliyet ile elde etmek için daha kolay kullanılmasını görsel geliştirme çalışma yapmak yardımcı olabilir.

Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Bu protokol, görsel gelişim ve genetik hastalık modellerinin önemli bir fonksiyonel okumasını sağlayan larva zebra balıklarında elektroretinogram veya ERG ölçümlerinin basitleştirilmesine yardımcı olur. Bu protokolde kullanılan elektrotların kayıt yumuşak sünger uçları ekonomik ve hazır malzemeler kullanılarak üretilmesi kolaydır ve larva gözlerde potansiyel hasar dan önler. Yumuşak sünger uçlu elektrot aynı gözün tekrarlanan ERG ölçümlerini kolaylaştırabilir.Bu yordamın yeni bireyleri, yordam boyunca kullanılan loş kırmızı ışık altında çalışmakta zorlanabilir. Ama karanlık adaptasyonun sürdürülmesi önemlidir. Koni şeklindeki sünger kayıt elektrodu hazırlamak için, platin elektrot kurşun uzantısı ndan ucunu kesin ve dış politetrafloroetilen yalıtım kaplamasının 10 milimetrelik kısmını uzatmanın yeni ucundan çıkarmak için neşter kullanın.0,3 milimetre çapında gümüş telden 40 milimetrelik bir parça kesin ve elektrot kurşununa teli güvenli bir şekilde takmak için gümüş teli açığa çıkan iç telle birleştirin. Yaklaşık 15 milimetre uzunluğunda gümüş tel maruz bırakarak yalıtım bandı ile ortak kaplı. Başka bir kabloyu pilin negatif terminaline bağlayın ve kablonun diğer ucunu tuzlu suya d

electroretinogram-recording-larval-zebrafish-using-novel-cone-shaped

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Biz bir emme elektrot kullanarak tek bir fare kozalakları flaş cevaplarını kaydetmek için nasıl gösterecektir.

Tek hücreli fare Koni fotoreseptörlerin Emiş Kayıtlar

Biz sağlam fare retinadan çubuk ve koni photoresponses elde etmek için transretinal elektroretinogram (ERG) kayıtları nispeten basit bir yöntem sunduk. Bu yaklaşım ışığında cevaplar ayırmak ve izole düz monte retina arasında yer alan elektrotlar kullanarak bunları kaydetmek için fotoreseptör gelen sinaptik iletim bloğu yararlanır.

Fare Retina gelen Transretinal ERG Kayıtlar: Rod ve Koni Photoresponses

Bu video, kalbin elektriksel aktivitesini ölçen bir test olan elektrokardiyografi (EKG veya EKG) ölçümlerinin bir zebra balığı üzerinde nasıl yapılacağını gösterir.

Zebra balığı elektrokardiyografisi (EKG): Kardiyak Fonksiyonu Değerlendirmek İçin Minimal İnvaziv Bir Test

Protokol, yetişkin zebra balıklarında elektrofizyoloji gerçekleştirme prosedürünü açıklar. Bu yöntem, in vivo olarak nöral aktiviteyi ölçmek için kullanılabilir.

Yetişkin Zebra Balığı Elektrofizyolojisi: İn Vivo Nöronların Hücre Dışı Elektriksel Aktivitesini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu video, felçli bir zebra balığı larvasındaki afferent nöronlardan gelen elektrik sinyallerinin, lateral hat ganglionunun yakınına bir mikropipet yerleştirerek ve sinyal yakalama için gevşek bir conta oluşturarak kaydedilmesini göstermektedir. Hücre dışı çözelti, bu işlem sırasında nöronal canlılığı korur.

İmmobilize Bir Zebra Balığı Larvasında Afferent Nöronlardan Gelen Elektrik Sinyallerinin İzlenmesi

Larva zebrafish önbeyin ekstrasellüler alanın potansiyellerini kaydetmek için basit bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem, bir sağlam...

Larva Zebra balığı olarak önbeyin Elektrofizyolojik Kaydı

Bu çalışma, bir yetişkin zebra balığı, hareketsiz entübe ve kayıtları ve bozulmamış bir hayvanda nöral faaliyet işleme izin vermek için in vivo elektrofizyolojik deneyler için nasıl kullanılabileceğini açıklar.

Sağlam Yetişkin Zebra balığı Beyin Elektrofizyolojik Kayıt

Zebra balığı larvalarının mikromanipülasyon ve elektroretinografi tekniklerini kullanarak elektroretinografik (ERG) analizi için bir yöntem sunuyoruz. Bu, zebra balığı larvalarının in vivo görsel işlevini test etmek için basit ve anlaşılır bir yöntemdir.

Zebra balığı Larva Görsel Tepki Elektroetinogram Analizi

Bu yazıda zebra balığı embriyolarının ve larva spinal nöronların elektrofizyolojik kayıtları için yöntemleri tarif eder. Hazırlık yerinde nöronları korur ve genellikle asgari diseksiyonu kapsar. Bu yöntemler, erken larva aşamalarında ilk elektrik uyarılma alımından spinal nöronların çeşitli elektrofizyolojik çalışmaları için izin verir.

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Burada, DEPDC5 geninin geçici inhibisyonundan kaynaklanan bir zebra balığı epilepsi modelinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Zebra balığı epilepsi modelinde davranışsal ve fizyolojik analiz

Model omurgalı saç hücresi sisteminde motor komutlar sırasında afferent nöron aktiviteslerindeki değişiklikleri izlemek için bir protokol açıklıyoruz.

Zebra Balıklarında Yüzme Sırasında Posterior Lateral Line Afferent Neurons'un Aktivitesi

Öğrenin, Danio rerio larvalarında elektroretinogram kaydı için konik sünger-uç elektrot kullanımını. Bu yöntem, görsel gelişimi ve genetik hastalık modellerini zarar vermeden tekrarlanabilir şekilde incelemenizi sağlar.

Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt

Daha fazla video keşfet