Name: Fırça hücrelerinin Mouse tracheas tan izolasyon ve nicel değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 25 s
Description: Keşfedin fare trakeasından fırça hücrelerinin izolasyon yöntemini; papain ve dispase kullanılarak yüksek verimli canlı hücre elde edilir. Bu teknik RNA dizileme ve üst hava yolu biyolojisi araştırmaları için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Brigham ve kadın ınsan Immünoloji merkezi Flow Core akış cytometrik sıralama ile onun yardımı için adam Chicoine teşekkür ederiz. Bu çalışma, Ulusal Sağlık bağışları R01 HL120952 (N.A.B.), R01 AI134989 (N. A. B), U19 AI095219 (N.A.B., L. G. B) ve K08 AI132723 (L. G. B) ve Amerikan alerji, astım ve Immünoloji (AAAAI)/Amerikan Akciğer alerjisi tarafından destekleniyordu Solunum hastalığı Ödülü (N.A.B.), AAAAI Vakfı fakülte geliştirme Ödülü (L.G.B.) tarafından, Steven ve Judy Kaye genç yenilikçiler Ödülü (N.A.B.) tarafından, JoYcElYn C. Austen Fonu kadın hekim bilim adamları kariyer gelişimi için (L.G.B.), ve bir vinik ailesi (L.G.B.) tarafından cömert bağış.

Aşağıdaki denemeleri yapmadan önce, tüm hayvan bakım kullanımı ve protokollerinin kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (IAUC) tarafından onaylanması ve Ulusal Araştırma Konseyi 'nin "bakım ve Kullanım Kılavuzu "ile uyumlu olarak gerçekleştirildiğinden emin olun. Lab Animals " (8 . sürüm, 2011) ve gelmesi yönergeleri. Aşağıda açıklanan tüm prosedürler Brigham ve kadın Hastanesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından incelenip onaylanmıştır.
1. Reaktiflerin hazırlanması
<ol><li>16 U/mL dispaz ve 20 μg/mL DNase ı içeren bir PBS çözeltisi olan Dispase sindirim çözümünü hazırlayın. 37 °C ' de bir su banyosundan solüsyonu ısınmadan önce dispaz tozunun tamamen çözünmesini sağlayın.</li>
	<li>Bir durdurma çözüm yapmak için Dulbecco modifiye kartal Orta (DMEM) için% 5 ısı inaktive fetal sığır serumu (FBS) ekleyin.</li>
	<li>Tyrode ı tamponunu hazırlayın: 26 U/mL papain (20 μL/mL 48 U/mg papain çözeltisi) ve 10 μL/mL L-sistein ile HEPES-Tyrode ' n e s tamponunu kalsiyum olmadan ekleyin.</li>
	<li>Tyrode II tamponunu hazırlayın: 2 μL/mL leupeptin (5 mg/mL) ile HEPES-Tyrode ' l e m tamponunu kalsiyum ile ekleyin.</li>
	<li>FACS buffer hazırlayın: Hanks ' dengeli tuz çözeltisi (HBSS) kalsiyum olmadan kullanın, magnezyum & fenol kırmızı, 2 mM Etilen ile tamamlayıcı diaminetetraasetic asit (EDTA) ve ekleyin 2% FBS.</li>
</ol>2. fare trakea diseksiyon
Not: Bu protokolde kullanılan fareler sohbet(BAC)-EGFP (B6. CG-TG (RP23-268L19-EGFP) 2Mik/J), 3-6 ay yaş her iki cinsiyeler. EGFP fotobleaching azaltmak için doğrudan ışık doku pozlama minimize.
<ol><li>100 mg/kg pentobarbital ötenazi çözeltisi intraperitoneal enjekte veya ıasuc tarafından onaylanan standart protokolleri kullanarak fareyi ötenize.</li>
	<li>Genişletilmiş üst ve alt ekstremite ile 21 G iğneler ile fitil pozisyonunda bir cerrahi tahta üzerinde fareyi düzeltin. Alanı sterilize etmek için% 70 EtOH ile kürk sprey.</li>
	<li>Düz forseps kullanarak, karın cilt ve kürk kaldırın ve Diseksiyon makas (düz makas, 3 cm) ile merkezinde bir kesi yapmak. Makası kullanarak, cildin subkutan dokusundan mandibula için karından ayırın. Subkutan dokusu forseps ile tutarak, karın duvarının merkezinde makas ile küçük bir kesi yapın.</li>
	<li>Peritonumu V şeklinde bir kesi ile açın. Forseps kullanarak, yavaşça kenara ince bağırsak hareket, abdominal aort ve Vena Cava bulmak ve hızlı Exsanguination için izin Diseksiyon makas ile bir kesi yapmak.</li>
	<li>Diyaframı bulun. 18 G iğne kullanarak, akciğerleri saptırmak için sternum hemen altında diyaframda bir açılış yapın. Kaburgaların tabanı boyunca kesim yapmak için keskin sivri düz kesimli makas kullanarak diyaframı dikkatli bir şekilde kaburga kafesinden ayırın.</li>
	<li>Forseps kullanarak, sternum maruz sonu kaldırın ve boynunda kaburga kafesi tabanına boyuna sternum kesti. Kısa düz makas (2 cm) ile merkezi bir servikal kesi yapın ve submandibular bezin iki lobları ayırın.</li>
	<li>Dikkatle çevreleyen bağ dokusu ve ince nokta yüksek hassasiyetli forseps bir çift ile Carina üzerinde timus çıkarın.</li>
	<li>İlk olarak epiglot seviyesinde proksimal ucunu ayırarak ve sonra distal ucunu trakea bifurkasyonu seviyesinde keserek trakea 'yı serbest bırakmak.</li>
	<li>Epiglot 'i bulun ve epiglot 'ten Carina 'ya kadar uzunlamasına trakea 'ya kesin.</li>
</ol>3. trakeal epitelyal sindirim
<ol><li>Trakea 'yi 750 μL ön ısıtılmış (37 °C) dispaz sindirim solüsyonu içeren 1,5 mL 'Lik bir tüpe yerleştirin. Oda sıcaklığında 40 dakika için 200 rpm de bir shaker üzerinde inkübe. Doğrudan ışığa maruz kalma azaltmak için alüminyum folyo ile tüp kapak.</li>
	<li>Reaksiyon durdurmak için% 5 FBS ile soğuk DMEM 750 μL ekleyin. Buzun üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Trakea 'ya bir petri tabağı (100 mm x 15 mm) aktarın ve Diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Epitel tarafı yukarı bakacak şekilde trakea yönlendirmek. Uzunlamasına disseke trakea, kıkırdak halkalar tarafından tutulan yarı silindirik bir şekle sahiptir. Epitelyum konkav yüzeyinde.</li>
	<li>Epiglot alan trakea düz forseps ile Petri tabak ve bir boyutu 22 tek kullanımlık neşter kullanarak, trakea dan epitelyum kazımak. Epitelyal tabaka yarı saydam bir sac olarak ayrılır.</li>
	<li>Epitel, neşter ile Mince. Epitelyal tabakası 2 mL tüpüne aktarın.</li>
	<li>Petri tabağı ile durulayın 750 μL Tyrode ı tampon ve Transfer 2 mL tüp içeren epitelyal tabaka.</li>
	<li>Tyrode ı tamponunda trakeal epitel tabakasını 37 °C ' de 200 rpm 'de bir shaker üzerinde 30 dakika boyunca inküd. Doğrudan ışığa maruz kalma azaltmak için alüminyum folyo ile tüp kapak.</li>
	<li>750 μL soğuk Tyrode II tampon ekleyin. 20-30 için şiddetle sindirilmiş doku Vortex s. 18 G iğne 10 kez bağlı bir şırınga ile Homojenat Triturate.  21 G Gauge iğne ve triturate 10-20 daha fazla kez geçin.</li>
	<li>100 μm süzgeciyle hücreleri 50 mL konik tüpüne filtreleyin. Soğuk FACS tampon 30:1 vol/Vol ekleyin.</li>
	<li>4 °C ' de 10 dakika için 350 x g 'de spin ve supernatant atın. Soğuk FACS tampon içinde Pelet resuspend ve 12 mm x 75 mm (5 mL) polistiren tüp süspansiyon transfer. 4 °C ' de 10 dakika için 350 x g 'de tekrar Döndür ve supernatant atın.</li>
	<li>100 μL FACS arabelleğinde Pelet yeniden askıya alın.</li>
	<li>Özel olmayan bağlayıcılığı engellemek için 1 μL Anti-fare CD16/32 engelleme antikor ekleyin ve buzda 15 dakika boyunca inküye yapın. Yıkanmayın.</li>
	<li>Aşağıdaki antikorları ve ilgili izotype denetimlerini ekleyin: Pasifik mavisi Anti-fare CD45 veya sıçan IgG2a, k (0,25 μg/106 hücreler 100 μL hacimde) ve allofikosiyanin (APC) fare karşıtı EpCAM veya sıçan IgG2b, k (0,5 μg/106 hücreler, 100 μL hacminde) monoklonal antikorlar. Doğrudan ışıkta korunan buz üzerinde 45 dk için inküye yapın. 350 x g 'de 4 °c ' de 10 dakika soğuk FACS tampon, mix ve spin 4,5 ml ekleyin. FACS arabelleği atın ve 300 μL soğuk FACS tampon içinde Pelet yeniden askıya.</li>
	<li>Akış cytometrik sıralamadan hemen önce propidium iyodür (PI) (5 μg/ml) ekleyin. Not: Fırça hücrelerinin, filtrelere uyumu artırabilir (Şekil 3C) çeşitli süreçlerle düzensiz bir şekli vardır. 30 mm ile 70 mm ve 100 mm filtrelere kıyasla daha büyük gözenek filtreleri daha iyi verim sağladı. Buna ek olarak, papain sindirimi sonrasında hücre süspansiyonunun kapsamlı triturasyonu fırça hücresi verimleri önemli ölçüde geliştirir. Hücrelerin daha ince bir şekilde dağılması için daha küçük bir delik (21 veya 23 G iğne) tarafından izlenen ilk triturasyon için 18G iğne kullanmanızı öneririz.</li>
</ol>4. akış cytometry gating stratejisi
<ol><li>İleri ve yan dağılım açısı ile enkaz hücreleri tanımlayın. İleri dağılım yüksekliği ve genişliği ve yan dağılım yüksekliği ve genişliğini kullanarak ceketleri hariç. Ceketleri yüksek genişlik değerlerine sahip hücreler olacaktır.</li>
	<li>Tek hücreler içinde, canlı hücreleri PI negatif olan nüfus olarak tanımlayın.</li>
	<li>Canlı tek hücreler içinde CD45 düşük negatif hücrelere izotype denetimine göre tanımlayın.</li>
	<li>CD45 düşük/negatif hücreler içinde de eGFP pozitif olan EpCAM pozitif hücreleri tanımlayın (FITC kanalında). Bu fırça hücrelerinin nüfusu (Şekil 2A).</li>
</ol>

<ol><li>Tizzano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+chemosensory+cells+use+bitter+taste+signaling+to+detect+irritants+and+bacterial+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Nasal chemosensory cells use bitter taste signaling to detect irritants and bacterial signals.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (7), 3210-3215 (2010).</li>
<li>Genovese, F., Tizzano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvillous+cells+in+the+olfactory+epithelium+express+elements+of+the+solitary+chemosensory+cell+transduction+signaling+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Microvillous cells in the olfactory epithelium express elements of the solitary chemosensory cell transduction signaling cascade.</a> PLoS One. 13 (9), 0202754(2018).</li>
<li>Bankova, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cysteinyl+leukotriene+3+receptor+regulates+expansion+of+IL-25-producing+airway+brush+cells+leading+to+type+2+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Immunology%22%5BJournal%5D)">The cysteinyl leukotriene 3 receptor regulates expansion of IL-25-producing airway brush cells leading to type 2 inflammation.</a> Science Immunology. 3 (28), (2018).</li>
<li>Krasteva, G., Canning, B. J., Papadakis, T., Kummer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+brush+cells+in+the+trachea+mediate+respiratory+responses+to+quorum+sensing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cholinergic brush cells in the trachea mediate respiratory responses to quorum sensing molecules.</a> Life Sciences. 91 (21-22), 992-996 (2012).</li>
<li>Nadjsombati, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Succinate+by+Intestinal+Tuft+Cells+Triggers+a+Type+2+Innate+Immune+Circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Detection of Succinate by Intestinal Tuft Cells Triggers a Type 2 Innate Immune Circuit.</a> Immunity. 49 (1), 33-41 (2018).</li>
<li>von Moltke, J., Ji, M., Liang, H. E., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuft-cell-derived+IL-25+regulates+an+intestinal+ILC2-epithelial+response+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tuft-cell-derived IL-25 regulates an intestinal ILC2-epithelial response circuit.</a> Nature. 529 (7585), 221-225 (2016).</li>
<li>Deckmann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bitter+triggers+acetylcholine+release+from+polymodal+urethral+chemosensory+cells+and+bladder+reflexes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Bitter triggers acetylcholine release from polymodal urethral chemosensory cells and bladder reflexes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (22), 8287-8292 (2014).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Members+of+Bitter+Taste+Receptor+Cluster+Tas2r143%2FTas2r135%2FTas2r126+Are+Expressed+in+the+Epithelium+of+Murine+Airways+and+Other+Non-gustatory+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Members of Bitter Taste Receptor Cluster Tas2r143/Tas2r135/Tas2r126 Are Expressed in the Epithelium of Murine Airways and Other Non-gustatory Tissues.</a> Frontiers in Physiology. 8, 849(2017).</li>
<li>Krasteva, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+chemosensory+cells+in+the+auditory+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cholinergic chemosensory cells in the auditory tube.</a> Histochemistry and Cell Biology. 137 (4), 483-497 (2012).</li>
<li>Krasteva, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+chemosensory+cells+in+the+trachea+regulate+breathing%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Cholinergic chemosensory cells in the trachea regulate breathing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (23), 9478-9483 (2011).</li>
<li>Montoro, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revised+airway+epithelial+hierarchy+includes+CFTR-expressing+ionocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A revised airway epithelial hierarchy includes CFTR-expressing ionocytes.</a> Nature. 560 (7718), 319-324 (2018).</li>
<li>Plasschaert, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+atlas+of+the+airway+epithelium+reveals+the+CFTR-rich+pulmonary+ionocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A single-cell atlas of the airway epithelium reveals the CFTR-rich pulmonary ionocyte.</a> Nature. 560 (7718), 377-381 (2018).</li>
<li>Dwyer, D. F., Barrett, N. A., Austen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Genome+Project%2C+C.+Expression+profiling+of+constitutive+mast+cells+reveals+a+unique+identity+within+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunological Genome Project, C. Expression profiling of constitutive mast cells reveals a unique identity within the immune system.</a> Nature Immunology. 17 (7), 878-887 (2016).</li>
<li>Howitt, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuft+cells%2C+taste-chemosensory+cells%2C+orchestrate+parasite+type+2+immunity+in+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tuft cells, taste-chemosensory cells, orchestrate parasite type 2 immunity in the gut.</a> Science. 351 (6279), 1329-1333 (2016).</li>
<li>Bankova, L. G., Dwyer, D. F., Liu, A. Y., Austen, K. F., Gurish, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+of+mast+cell+progenitors+to+mucosal+mast+cells+during+allergic+pulmonary+inflammation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Maturation of mast cell progenitors to mucosal mast cells during allergic pulmonary inflammation in mice.</a> Mucosal Immunology. 8 (3), 596-606 (2015).</li>
<li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cells+as+stem+cells+of+the+mouse+trachea+and+human+airway+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (31), 12771-12775 (2009).</li>
<li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+stromal+populations+contribute+to+pulmonary+fibrosis+without+evidence+for+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Multiple stromal populations contribute to pulmonary fibrosis without evidence for epithelial to mesenchymal transition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (52), 1475-1483 (2011).</li>
<li>Gerbe, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+tuft+cells+initiate+type+2+mucosal+immunity+to+helminth+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial tuft cells initiate type 2 mucosal immunity to helminth parasites.</a> Nature. 529 (7585), 226-230 (2016).</li>
<li>Rock, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmembrane+protein+16A+%28TMEM16A%29+is+a+Ca2%2B-regulated+Cl-+secretory+channel+in+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Transmembrane protein 16A (TMEM16A) is a Ca2+-regulated Cl- secretory channel in mouse airways.</a> Journal of Biological Chemistry. 284 (22), 14875-14880 (2009).</li>
<li>Olsen, J. V., Ong, S. E., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+cleaves+exclusively+C-terminal+to+arginine+and+lysine+residues%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Trypsin cleaves exclusively C-terminal to arginine and lysine residues.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 3 (6), 608-614 (2004).</li>
<li>Verma, S., Dixit, R., Pandey, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cysteine+Proteases%3A+Modes+of+Activation+and+Future+Prospects+as+Pharmacological+Targets%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cysteine Proteases: Modes of Activation and Future Prospects as Pharmacological Targets.</a> Frontiers in Pharmacology. 7, 107(2016).</li>
<li>Huettner, J. E., Baughman, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+identified+neurons+from+the+visual+cortex+of+postnatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Primary culture of identified neurons from the visual cortex of postnatal rats.</a> Journal of Neuroscience. 6 (10), 3044-3060 (1986).</li>
<li>Kaiser, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociated+neurons+and+glial+cells+derived+from+rat+inferior+colliculi+after+digestion+with+papain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dissociated neurons and glial cells derived from rat inferior colliculi after digestion with papain.</a> PLoS One. 8 (12), 80490(2013).</li>
<li>Aoyagi, T., Takeuchi, T., Matsuzaki, A., Kawamura, K., Kondo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leupeptins%2C+new+protease+inhibitors+from+Actinomycetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antibiotics+%28Tokyo%29%22%5BJournal%5D)">Leupeptins, new protease inhibitors from Actinomycetes.</a> Journal of Antibiotics (Tokyo). 22 (6), 283-286 (1969).</li>
<li>Kohanski, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solitary+chemosensory+cells+are+a+primary+epithelial+source+of+IL-25+in+patients+with+chronic+rhinosinusitis+with+nasal+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Solitary chemosensory cells are a primary epithelial source of IL-25 in patients with chronic rhinosinusitis with nasal polyps.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 142 (2), 460-469 (2018).</li>
<li>Patel, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solitary+chemosensory+cells+producing+interleukin-25+and+group-2+innate+lymphoid+cells+are+enriched+in+chronic+rhinosinusitis+with+nasal+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22International+Forum+of+Allergy+%26+Rhinology%22%5BJournal%5D)">Solitary chemosensory cells producing interleukin-25 and group-2 innate lymphoid cells are enriched in chronic rhinosinusitis with nasal polyps.</a> International Forum of Allergy & Rhinology. , (2018).</li>
<li>Kouzaki, H., O'Grady, S. M., Lawrence, C. B., Kita, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteases+induce+production+of+thymic+stromal+lymphopoietin+by+airway+epithelial+cells+through+protease-activated+receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Proteases induce production of thymic stromal lymphopoietin by airway epithelial cells through protease-activated receptor-2.</a> The Journal of Immunology. 183 (2), 1427-1434 (2009).</li>
<li>Cambier, J. C., Vitetta, E. S., Kettman, J. R., Wetzel, G. M., Uhr, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-cell+tolerance.+III.+Effect+of+papain-mediated+cleavage+of+cell+surface+IgD+on+tolerance+susceptibility+of+murine+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">B-cell tolerance. III. Effect of papain-mediated cleavage of cell surface IgD on tolerance susceptibility of murine B cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 146 (1), 107-117 (1977).</li>
<li>Nishikado, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cysteine+protease+antigens+cleave+CD123%2C+the+alpha+subunit+of+murine+IL-3+receptor%2C+on+basophils+and+suppress+IL-3-mediated+basophil+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Cysteine protease antigens cleave CD123, the alpha subunit of murine IL-3 receptor, on basophils and suppress IL-3-mediated basophil expansion.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 460 (2), 261-266 (2015).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Biz 40 dakika için yüksek doz dispaz tedavisi bir arada kısa papain tedavisi (30 dk) takip, trakeal sindirim ve fırça hücre yalıtımı için optimum bir protokol sağlar bulundu. Bu kombinasyon hem geniş sindirim önler ve fırça hücrelerinin en yüksek verim üretir, alternatif protokollere kıyasla.
Hematopoetik hücreler ayıklamak için akciğer sindirimi klasik kolajenaz IV15gibi hafif sindirim enzimleri üzerinde dayanırken, epitelyal hücrelerin yalıtım daha karmaşık protokolle...

Fırça hücreleri, acı tat reseptörlerinin ifadesi ve tat tomurcuğu hücrelerinde bulunan tat reseptörü dönüştürücü makinelerinin karakterize olduğu kemoduyusal epitelyal hücreler sınıfına aittir. Tat tomurcuk hücrelerinin aksine, kemoduyu epitelyal hücreler epitelyal yüzeylerde dağılmış ve burun epiteli hücreler (SCCS) ve microvillous hücreleri olarak adlandırılır1,2, trakea fırça hücreleri 3,4, ve tüft hücreler bağırsak5,6. Acı tat reseptörleri ve acı tat dönüştürücü makine ifade epitelyal hücreler de üretra7,8 ve işitsel tüp9bulunur. Hava yolu fırça hücreleri nörojenik ve bağışıklık havayolu yanıtlarında benzersiz işlevlere sahiptir. Onlar asetilkolin üreten kemoduyusal hücreler, acı bileşikler ve çekirdek algılama maddeleri gibi bakteriyel metabolitler ile aktivasyon üzerine koruyucu solunum refleksleri uyandıran10. Havayolu fırça hücreleri de Il-25 baskın hava yolu epitelyal kaynağıdır, hangi hava yolları3aeroallerjen-elicited tip 2 inflamasyon düzenler.
Alt hava yolu fırça hücrelerinin tam transkriptom karakterizasyonu ve çevresel uyaranlara yanıt onların düşük sayılar trakeal epitelyum ve büyük bronşi10ötesinde çok sınırlı sayıda ile sınırlıdır. Bağırsak epitelinin kemoduyusal hücrelerin izolasyonunda kullanılan teknikler, trakea 'dan orantılı olarak yüksek sayılar vermedi, muhtemelen sinir uçları ile trakeal fırça hücrelerinin samimi temasları nedeniyle10 veya diğer yapışkanslar ve sıkı kavşak proteinlerinin bileşimi gibi solunum mukozasında dokuya özgü faktörler. Tek hücreli RNA sıralama analizi için daha yüksek sayılarda trakeal fırça hücrelerinin başarılı bir şekilde yalıtılmasının son raporları, papain ile 2 h inkübasyon ya da pronase11,12ile 18 h inkübasyon kullanılmıştır. Sindirim enzimleri ile uzun kuluzlar hücre canlılığı azaltabilir ve sindirilmiş dokulardan hücrelerin transkripsiyonel profilini değiştirmek beri13, bu diğer chemosensory epitelyal nüfusu ile önyargı karşılaştırmalı analiz olabilir.
Burada, RNA sıralaması3için trakeal fırça hücrelerinin yalıtımına yönelik bir yöntem bildiriyoruz. Yüksek doz dispaz ile trakea tedavisi submukoza epitel ayırır. Papain ile epitelyal sac sonraki sindirim Bu yapısal hücrenin mükemmel iyileşme sağlar.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Antikorlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Anti-GFP (Poliklonal keçi Ig)</td> <td>Abcam</td><td>kedi # ab5450</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-fare CD326 (EpCAM)&nbsp; (G8.8)</td><td>Biyoefsane</td><td>kedi#118214</td><td></td></tr><tr><td>APC Sıçan IgG2a, k izotip kontrolü</td><td>Biyoefsane</td><td>kedi#400511</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Biyoefsane</td><td>kedi#422801</td><td></td></tr><tr><td>Eşek anti-keçi IgG (H+L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 488</td><td>Yaşam Teknolojileri/Moleküler Problar</td><td>kedi#A-11055</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi IgG</td><td>R& D Sistemleri</td><td>kedi # AB-108-C</td><td></td></tr><tr><td>Pasifik Mavisi anti-fare CD45 (30F-11)</td> <td>Biolegend</td><td>kedi # 103126</td><td></td></tr><tr><td>Pasifik Mavi Sıçan IgG2b, k izotip kontrolü</td><td>Biolegend</td><td>kedi # 400627</td><td></td></tr><tr><td>TruStain FcX (anti-fare CD16 / 32) Antikor</td><td>Biolegend</td><td>kedi # 101320</td><td></td></tr><tr><td>Kimyasallar, Peptitler ve Rekombinant Proteinler Dispase</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>kedi# 17105041&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>kedi# 10104159001</td><td></td></tr><tr><td>HEPES-Tyrode' s Kalsiyumsuz Tampon (10 mM HEPES, 135 mM NaCl, 2.8 mM KCl, 1 mM MgCl2, 12 mM NaHCO3, 0.4 mM NaH2PO4,% 0.25 BSA, 5.5 mM Glikoz. 18.2 megaohm suda hazırlanır ve 0.22 & ile süzülür; m filtre</td><td>Boston BioProducts</td><td>kedi # PY-912</td><td></td></tr><tr><td>Tyrode ' s Çözeltisi (HEPES Tamponlu) 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 25 mM HEPES, 2 mM CaCl2, 2 mM MgCl2 ve 10 mM glikoz. 18.2 megaohm suda hazırlanır ve 0.22 & ile süzülür; m filtresi. )</td><td>Boston BioProducts</td><td>cat# BSS-355</td><td></td></tr><tr><td>L-Sisteine</td><td>Sigma</td><td>cat# C7352</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin trifloroasetat tuzu</td><td>Sigma</td><td>cat# L2023</td><td></td></tr><tr><td>Papaya lateks</td><td>Sigma</td><td>cat# P3125</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iyodür&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>cat# P4170</td><td></td></tr><tr><td>Deneysel Modeller: Organizmalar/Suşlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ChATBAC<>-eGFP (B6. Cg-Tg (RP23-268L19-EGFP) 2Mik / J)</td> <td>Jackson Laboratuvarı</td><td>7902</td><td></td></tr> <tr><td><güçlü > Ekipman< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Airyscan konfokal sistemli LSM 800 & nbsp; a&nbsp üzerinde; Zeiss Axio Observer Z1 Ters Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRFortessa</td><td>BD</td><td>647465</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>tek kullanımlık ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL steril tüpler</td><td>Thomas Scientific</td><td>1157C86</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Poysterene Yuvarlak Tabanlı Tüp, 12 mm x 75 mm stil</td><td>Falcon</td><td>14-959-1A</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Polipropilen konik boru, 30 mm x 115 mm stil</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Tüy Tek Kullanımlık Neşter no.12</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9999403</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı, 100 mm x 15 mm Style</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Steril hücre süzgeci, 100 &mu; m</td><td>Balıkçı markası</td><td>kedi#22363549</td><td></td></tr></tbody></table>

fırça hücrelerinin mouse tracheas 'tan izolasyon ve nicel değerlendirilmesi

Isolation and Quantitative Evaluation of Brush Cells from Mouse Tracheas

Trakeal fırça hücreleri, hava yolu lümeninden bağışıklık ve sinir sistemlerine sinyal iletimi için uygulanan kolinerjik kemoduyusal epitelyal hücrelerdir. Onlar bağırsak mukozasında tutam hücreleri, trakea fırça hücreleri ve burun mukozasında soliter kemoduyusal ve mikrovillöz hücreler içeren kemoduyusal epitelyal hücreler ailesinin bir parçasıdır. Farklı epitelyal bölmeler içindeki kemoduyusal hücreler anahtar hücre içi işaretçileri ve çekirdek transkripsiyonel imzayı paylaşır, aynı zamanda önemli transkripsiyonel heterojenliği de gösterir, muhtemelen yerel doku ortamını yansıtırlar. Tek hücreli süspansiyonların trakeal fırça hücrelerinin yalıtımı ayrıntılı olarak bu nadir epitelyal hücrelerin fonksiyonunu tanımlamak için gereklidir, ama onların yalıtım zorlu, potansiyel trakeal fırça hücreleri ve sinir uçları arasındaki yakın etkileşimi nedeniyle veya sıkı ve yapışır kavşak hava yolu özgü bileşimi nedeniyle. Burada, fare trakeal epitelyumdan fırça hücrelerinin yalıtımına yönelik bir prosedür açıklanmaktadır. Yöntem, submukoza gelen trakeal epitel ilk ayrımı dayanmaktadır, papain ile epitelyal levha bir sonraki kısa kuluçarı için izin. Bu prosedür, akış cytometrik sıralama ve uygulanabilir trakeal fırça hücrelerinin fonksiyonel analizi için hızlı ve kullanışlı bir çözüm sunar.

Bu yordam, RNA sıralama3için trakeal fırça hücrelerini yalıtmak için başarıyla uygulandı. 2 adımlı protokol (Şekil 1) ile doku trakea ve sindirim yalıtım sonra, hücreler toplanan ve PI ile ölü hücrelerin dışlama sonra floresan etiketli CD45 ve EpCAM ile lekelenmiş. İleri ve yan dağılım özelliklerine dayanarak ceketleri dışarı gating sonra, biz CD45 için düşük/negatif olarak fırça hücreleri tanımlanan, EpCAM için pozitif ve EGFP için pozitif (Şekil...

Fırça hücreleri naif fare trakea bulunan nadir kolinerjik kemoduyusal epitelyal hücrelerdir. Sınırlı sayılar nedeniyle, havayolu bağışıklık ve remodeling fonksiyonel rolünün ex vivo değerlendirilmesi zordur. Trakeal fırça hücrelerinin Akış sitometrisi ile yalıtımına yönelik bir yöntem tarif ediyoruz.

Fırça hücrelerinin Mouse tracheas 'tan izolasyon ve nicel değerlendirilmesi

Tracheal brush cells are cholinergic chemosensory epithelial cells poised to transmit signals from the airway lumen to the immune and nervous systems. ...

Biz trakeal fırça hücrelerinin izolasyon u için bir prosedür geliştirdi, kolin asetiltransferaz floresan muhabir farelerden nadir özel kemosensory epitel hücreleri. Bu yöntem, trakeal epitelin submukozadan ilk olarak ayrılmasına dayanır ve epitel tabakasının papain ile daha kısa sürede inkübasasına olanak sağlar. Bu, trakeal fırça hücrelerinin sağlam bir şekilde kurtarılmasını sağlar ve Fırça hücrelerinin RNA dizilimi ile izolasyon ve transkripsiyonel analizi için başarıyla kullanılmıştır.Sindirim enzimleri ile uzun kuluçka hücre canlılığını azaltabilir ve dokulardan izole hücrelerin transkripsiyonprofilini değiştirebilir. Burada trakeal epiteli dispase ile ayırıyoruz ve daha sonra kısa bir süre için papain ile kuluçkaya yatıyoruz ve uygun fırça hücrelerinin yüksek verimi elde ediyoruz. Yöntemimiz üst hava yolu epitel çalışmalarına katkıda bulunabilir.Aynı protokol, burun dokusu gibi diğer mukozal bölgelerden fırça hücrelerinin izole edilmesi için de uygulanabilir. Son derece tekrarlanabilir tekniğimizin gösterilmesi, akran bilim adamlarının trakeal fırça hücrelerini izole edip daha fazla araştırmalarına olanak sağlayacaktır. Bu prosedüre başlamak için, dispase sindirim çözeltisini hazırlamak için burada gösterilen son konsantrasyonlarda PBS'ye dispase ve DNase I ekleyin.Dispase tozu tamamen 37 santigrat derece bir su banyosunda çözelti ısınmadan önce çözülmüş olduğundan emin olun. Ardından, durdurma çözümü hazırlamak için DMEM'e %5 ısı yla inaktive EDILMIŞ FBS ekleyin. Tyrode I tampon hazırlamak için, kalsiyum olmadan HEPES Tyrode tampon papain ve L-sistein ekleyin.Tyrode II tampon hazırlamak için, mililitre başına iki mikrolitre konsantrasyonunda kalsiyum olmadan HEPES Tyrode tampon löpeptin ekleyin. FACS tampon hazırlamak için, kalsiyum olmadan Hank Dengeli Tuz Çözeltisi kullanın, magnezyum ve fenol kırmızı iki milimolar EDTA ve% 2 FBS ile takviye. Fare ötenazi sonra, genişletilmiş üst ve alt ekstremiteler ile supine pozisyonda bir cerrahi tahta üzerinde düzeltmek için 21 gauge iğneler kullanın.Bölgeyi dezenfekte etmek için kürkü %70 etanolle püskürtün. Düz forseps kullanarak, karın deri ve kürk kaldırın ve merkezinde bir kesi yapmak için kesme makas kullanın. Makas kullanarak, mandibula karın deri altı dokudan cilt ayırın.Forceps ile deri altı doku tutarken, karın duvarının merkezinde makas ile küçük bir kesi yapmak. Sonra V şeklinde bir kesi ile periton açın. Forceps kullanarak, yavaşça yan ince bağırsak hareket ettirin.Abdominal aort ve vena kava sını bulun ve hızlı eksanguiasyon alabilmek için diseksiyon makası ile bir kesi yapın. Diyaframı bul. 18 gauge iğne kullanarak, akciğerleri söndürmek için göğüs hemen altında diyafram bir açıklık yapmak.Keskin sivri düz diseksiyon makası kullanarak, dikkatle göğüs kafesi diyafram ayırmak için kaburga tabanı boyunca kesilmiş. Sternumun açıktaki ucunu kaldırmak için forsepsleri kullanın ve göğüs kafesinin tabanından boynuna kadar göğüs kafesini uzunlamasına kesin. Merkezi bir servikal kesi yapmak ve submandibular bezin iki lobları ayırmak için kısa düz makas kullanın.Bundan sonra, dikkatle çevreleyen bağ dokusu ve karina örten timus kaldırmak için ince nokta yüksek hassasiyetli forceps bir çift kullanın. Önce proksimal ucunu epiglottis seviyesinde ayırarak ve daha sonra trakeanın çatallanma düzeyinde distal ucunu keserek trakeayı serbest çesitsiz olarak ayırın. Epiglottis'i bulun ve epiglottan karinaya kadar trakeayı uzunlamasına kesin.Başlamak için, 37 santigrat derece önceden ısıtılmış dispase sindirim çözeltisi 750 mikrolitre içeren 1.5 mililitrelik bir tüp içine trakea yerleştirin. 200 RPM'de ve 40 dakika oda sıcaklığında bir çalkalayıcıda doğrudan ışığa ve kuluçkaya maruz kalmamayı azaltmak için tüpü alüminyum folyo ile kapatın. Daha sonra reaksiyonu durdurmak ve tüpü buza yerleştirmek için %5 FBS ile 750 mikrolitre DMEM ekleyin.Nefes borusunu Petri kabına aktar. Nefes borusunu epitel tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin. Uzunlamasına olarak incelenmiş trakea, kıkırdak halkalar tarafından korunan yarı silindirik bir şekle sahiptir.Epitel içbükey yüzeyde. Düz forceps kullanarak, Petri kabına trakea epiglottis alanı tether ve trakea epitel kazımak için bir boyut 22 bertaraf neşter kullanın. Epitel tabakası yarı saydam bir tabaka olarak ayrılır.Epitel kıyma ve iki mililitrelik tüp epitel tabakası aktarmak için neşter kullanın. Petri kabını 750 mikrolitre Tyrode I tamponuyla durulayın ve bunu epitel tabakasını içeren tüpe aktarın. 30 dakika boyunca 200 RPM bir shaker üzerinde 37 santigrat derece doğrudan ışığa ve kuluçka yada maruz kalma azaltmak için alüminyum folyo ile tüp kapağı.Sonra soğuk Tyrode II tampon 750 mikrolitre ekleyin. Girdap 20-30 saniye boyunca şiddetle sindirilmiş doku. 18 kalibrelik bir iğneye bağlı bir şırınga kullanarak homojeni 10 kez triturate edin.Bundan sonra, 21 gauge iğne ye geçin ve 10 ila 20 kez daha triturate. Hücreleri 100 mikrometrelik bir süzgeçten 50 mililitrelik konik bir tüpe süzün. 30'a bir hacimsel oranda soğuk FACS tampon ekleyin.Santrifüj 350 kez g ve 10 dakika boyunca dört santigrat derecede. Supernatant atın ve soğuk FACS tampon pelet resuspend. Bu süspansiyonu 12'ye 75 milimetrelik polistiren tüpe aktarın.Santrifüj tekrar 350 kez g ve 10 dakika boyunca dört derece santigrat. Supernatant atın ve FACS tampon 100 mikrolitre pelet resuspend. Daha sonra, spesifik olmayan bağlanmayı engellemek ve 15 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatmak için bir mikrolitre anti-fare CD1632 bloke edici antikor ekleyin.Daha sonra metin protokolünde belirtildiği gibi ilgili isotip kontrollerine antikor ekleyin. Doğrudan ışıktan korunurken 45 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatın. Bundan sonra, soğuk FACS tampon 4,5 mililitre ekleyin ve karıştırın.Santrifüj 350 kez g ve dört santigrat derecede. Supernatant atın ve soğuk FACS tampon 300 mikrolitre pelet resuspend. Akış sitometrik sıralama hemen önce propidium iyodür ekleyin.Bu çalışmada, ChAT eGFP eGFP asetilkolin floresan muhabiri farelerin trakeal fırça hücreleri başarıyla RNA dizileme için izole edilmiştir. Hücreler enkazdan ileri ve yan dağılım açısıile tanımlanır. Doublets ileri dağılım yüksekliği ve genişliği ve yan dağılım yüksekliği ve genişliği kullanılarak dışlanır.Doublets yüksek genişlik değerlerine sahip hücrelerdir. Tek hücreler içinde, canlı hücreler propidium iyodür negatif popülasyon olarak tanımlanır. Canlı tek hücrelerde, CD45 düşük negatif hücreler iyotip kontrolüne göre tanımlanır.CD45 düşük negatif hücreler içinde, FITC kanalında da eGFP pozitif olan EpCAM pozitif hücreler fırça hücrelerinin popülasyonudur. Fırça hücre numaraları mikrobiyal metabolitlere ve protozoamaruz bırakılarak değiştirilir ve bu nedenle kurumsal mikrobiyotanın değişkenliğini yansıtır. Bu nedenle, akış sitometrik sıralama ile izole fırça hücrelerinin beklenen sayısını ölçmek için floresan mikroskobu ile fırça hücrelerinin sayısını tahmin öneririz.İzole edilmiş fırça hücrelerinin verimini belirlerken trakeanın epitel tabakasını düzgün bir şekilde ayırdığından emin olun. İzole trakeal fırça hücreleri RNA sıralama, hücre kültürü ve fonksiyonel analiz gibi tahliller geniş bir dizi kullanılabilir.

isolation-quantitative-evaluation-brush-cells-from-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Pulmoner farelerin solunum yolu epitel hücreleri izole ve farklılaşmış bir solunum yolu epitel bir model olarak hava-sıvı arayüzü kültüre olabilir. Bu çevresel toksin moleküler yanıtların incelemek üzere bir protokol, tecrit, kültür ve bu hücreler ana sigara dumanına maruz için tarif edilir.

Hava Sıvı Arabirimi Fare Solunum Epitel Hücreleri ve Deneysel sigara dumanına maruz kalma izolasyonu

Fare akciğer dendritik hücreler yüksek oranda saflaştırılmış açıklanmıştır. Özgül ağırlık, geleneksel dendritik hücre alt izolasyon verilir.

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Transgenik farelerin genleriyle fizyolojik fonksiyonu atfedilmesi de son derece yararlı olmuştur. Genel olarak böyle, araştırma ve hava yolunun fonksiyonel çalışmalar gibi, özellikle, sıçan modellerinde doğru dikkate değer bir değişim geçirmiş. Burada protokolleri...

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Burada fare tracheas bazal ve submukozal bez kanal hücrelerinin izolasyonu için bizim protokol göstermektedir. Ayrıca, bir oluşturmak için dorsal fare yağ yastığı içine kök hücreleri enjekte yöntem...

Fare Trakea gelen Bazal Hücre ve Submukozal Bezi Kanal Hücre İzolasyonu

Biz flow sitometrik negatif seçimin birincil fare tip II alveol epitel hücrelerinde (AECII) hızlı izolasyonu tarif. Bu AECII yüksek canlılığı ve saflık göstermektedir ve bu gibi otoimmün veya bulaşıcı hastalıklar gibi solunum koşullar altında rolü ile ilgili işlevsel ve klinik çalışmalar, geniş bir aralığı için uygundur.

Fonksiyonel ve Moleküler Çalışmalar Birincil murin Tip II alveol epitel hücrelerinde akım sitometri İzolasyonu

Havayolu kirpikler hareketliliği ve kirpikler oluşturulan akış fare trakea kullanarak görselleştirme ve ölçülmesi için kolay ve güvenilir bir tekniktir açıklanmıştır. Bu teknik faktörler çok çeşitli farmakolojik ajanlar, genetik faktörler, çevresel maruziyet, ve / veya mukus yük gibi mekanik faktörler de dahil olmak üzere, kirpikler hareketliliği nasıl etkilediğini belirlemek için değiştirilebilir.

Kemirgen Havayolu Epiteli içinde Cilia Motilite Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için ex vivo Yöntemi

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Laringotracheal stenoz, trakeal hava yolunu kritik derecede daraltan ve etkili tıbbi tedavilerden yoksun patolojik skar birikiminden kaynaklanır. PlLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve %30 polikaprolakon) stent kullanılarak lokal ilaç dağıtım sistemi olarak, trakeada skar proliferünü azaltmaya yönelik potansiyel tedaviler incelenebilir.

Laringotracheal Stenozlu Farelerde Biyouyumlu İlaç Eluting Trakeal Stent Tasarımı

Burada, murin hava yolu epitel hücrelerini izole etmek ve farklılaştırmak için, kronik sigara dumanı ekstraktına (CSE) alışmalarına odaklanan bir in vitro model açıklıyoruz. Model, CSE'nin multi-omik etkisini kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için kullanılabilir, bu da muhtemelen kronik duman maruziyeti altındaki hücresel tepkiler hakkında bilgi sağlar.

Sigara Dumanı Ekstraktı ile Uyarılan Murin Hava Yolu Epitel Hücrelerinde Multi-Omiklerin Farklılaşması ve Değişikliklerinin İncelenmesi için İn Vitro Model

Burada, noninvaziv ve gerçek zamanlı bir tüm vücut pletismografi (WBP) sistemi kullanılarak öksürük ölçümünü ve farelerin doku örneklerinin toplanması için normatif prosedürleri açıklıyoruz ve hava yolu iltihabını değerlendirmek için bazı yöntemler sunuyoruz.

Farelerde öksürük ve hava yolu iltihabını tespit etme yöntemleri

Bu protokol, hava-sıvı arayüzünde (ALI) farklılaşan hava yolu epitel kültürlerinde nitrit üretimini triyodid bazlı kemimilüminesans testi kullanılarak apikal sekresiyalarda nitrit ölçümünü sağlayan bir yöntemi tanımlar.

Hava sıvı arayüzünde farklılaşmış fare trakeal epitel hücre kültürlerinde nitrik oksit üretiminin ölçümü

Keşfedin fare trakeasından fırça hücrelerinin izolasyon yöntemini; papain ve dispase kullanılarak yüksek verimli canlı hücre elde edilir. Bu teknik RNA dizileme ve üst hava yolu biyolojisi araştırmaları için uygundur.

Fırça hücrelerinin Mouse tracheas 'tan izolasyon ve nicel değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet